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[成果] gkls118422
R87 应用技术 公布年份:2010
成果简介:北京奥运反核化生恐怖应急医学救援(以下简称“三防救援”)技术体系的构建与应用是为保障2008年北京奥运会而建立的系统化、工程化社会公益类项目。 该成果我国首次建立的应对重大活动反核化生恐怖医学救援技术体系,也是针对奥运安保专有特点、满足奥运三防救援需求的专用方案,是奥运安保科技支撑的重要组成部分。它以三防救援的关键技术为主体,以“强调针对性、提高机动性、突出精准性、注重时效性”为设计理念,主要研究构建了奥运三防救援的组织指挥体系、技术装备体系、救治方案体系并予以实战应用。其主要创新点为:①创建了救援力量编成的新理论,提出了救援力量的建设与使用标准,形成了全谱系(核、化、生)、全过程(侦、检、消、防、治)、全方位(现场处置、机动支援、后方检定)的一体化整体解决方案。②在人员派出、装备配备有限的条件下,首次建立了指挥体系、处置流程及行动规范,创立了力量混合编成原则、功能模块组合模式和军地协同处置机制,实现了军地、防化部队与医学救援力量之间的科学运筹,破解了应对奥运恐怖“多点、连环突发”特点快速实施救援的难题。③针对奥运三防救援“规模更大、难度更高”的特点,系统研发和完善了模拟推演、侦察预警、检测评估、洗消处置、损伤防护和综合救治等六大技术群,实现了各技术环节现场处置与实验室支撑的无缝衔接。④工程化集成了一整套应对奥运的适宜技术装备系统,自主研发了预警用空气气溶胶实时监测装备,现场侦检用大剂量辐射损伤生物剂量检测、未知粉末筛查、空气微生物采样、媒介生物采样等装备、机动洗消平台、生物防护装具、救治用综合药品箱组和救援伤票等一系列关键技术装备,使该系统具备防护全谱化、组合模块化、使用机动化、处置专业化功能。项目共获得国家药品注册证书1项,获得专利10项,申请5项,获得软件著作权2项,公开发表论文14篇,出版专著5部、出版培训教材5部,举办技术培训班30次。研究成果已被编入奥运遗产目录。 结果证明,该体系是北京市利用国家反核化生恐怖应急医学救援技术体系加强奥运指向性的一次成功应用实践。圆满完成了“人体放射超标”、“白色粉末事件”、“不明原因发热”、“死鱼投毒事件”等数十次核化生应急处置任务,发挥了“定音锤、定心丸”的作用,直接保障运动员和观众5000万人。充分展示了我国科技实力和创新水平,为实现平安奥运、展示我国形象提供了必要的技术支持,其主要做法还被一些国家吸收借鉴用于本国重大活动的安保之中。此外,该体系还用于2009年国家“长城6号”反恐演习、国庆60周年安保、2010年上海世博会和第十六届广州亚运会,产生了巨大的政治和社会效益。
[成果] gkls122956
R91 应用技术 公布年份:2010
成果简介:由中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所郭宁教授主持完成。本研究通过对功能性抗体Herceptin及Her2天然抑制分子Herceptin与Her2蛋白相互作用表位进行定位,发现了Her2受体尚在两个新的功能性表位,分别位于S1和S2结构域。基于Her2 S1结构域,设计了一个靶向Her2 的拮抗肽,为提高短肽的稳定性,通过基因工程技术将其与软骨基质蛋白多聚化结构域融合,在原核细胞中获得可溶性表达及纯化。进一步通过体内外实验证实该融合蛋白具有良好的特异性,体外抗肿瘤活性较线形肽提高了约75倍,体内实验亦证实融合蛋白能有效抑制移植瘤的体内生长,此外,通过对短肽的改造,融合蛋白的稳定性得到极大的提高。该融合蛋白由于靶点明确,达到了预先设计的要求,即靶向性能好,功能特异,良好的活性,极好的稳定性,小型化,易于生产及低毒。该融合蛋白具有原创性,已申报国家发明专利。Her2 自身抑制分子与Her2 相互作用的位点在国内外均未见报道,该靶点亦已申报国家发明专利。该项目共发表SCI收录论文13篇,申请国家发明专利2项,培养博士生5名,硕士生2名,其中4名博士生获优秀博士论文。
[成果] gkls121979
R28 应用技术 公布年份:2009
成果简介:免疫调节作用是中药多糖的共性,但因多糖分离纯化和结构分析困难,使其构效关系及作用受体研究受到极大的限制。本项目在化学研究方面,成功分离得到组份均一、结构明确的枸杞糖链LbGp4-OL,累积了足量的糖链LbGp4-OL样品;经过大量的文献调研和标记方法的比较,建立了对LbGP4-OL进行位点选择性FITC荧光标记的方法,并获得了与未标记的LbGp4-OL活性一致的FITC-LbGp4-OL。药理学研究方面,我们确证了B淋巴细胞是其免疫作用的靶细胞,在B细胞膜上存在其结合位点,并进一步发现LbGP4-OL作用的B淋巴细胞主要为活化的B淋巴细胞,对静息的B淋巴细胞无明显影响。同时,用CD19等抗体封闭FITC- LbGp4-OL与B细胞的结合,初步确定D19分子可能是LbGp4-OL作用的靶分子之一。后续的工作中,将裂解糖链LbGp4-OL,获得不同长度的多糖片段,探讨该多糖是否存在“活性中心”,并采用CD19Cre突变小鼠B淋巴细胞进一步确定CD19分子是否为其作用的靶分子。本研究表明,多糖作用的靶分子并不局限于Tool样受体一类的模式识别受体,这将为多糖作用靶分子的研究提供一条新思路。
[成果] gkls122384
R54 应用技术 公布年份:2009
成果简介:心肌肥大既是心肌细胞对各种刺激的适应性反应,也是心力衰竭、心肌缺血、心律失常的病理生理基础,因此对心肌肥大信号转导通路的深入认识,可为防治心肌疾病开拓新的思路。近期研究表明,MDM2可同时抑制心肌肥大和凋亡,提示MDM2可能作为心肌肥大相关性疾病的治疗靶点,但MDM2抑制心肌肥大的机制仍不清楚。我们通过酵母双杂交筛选到一个与MDM2相互作用的新的蛋白质,TCAP。MDM2可与肌小节蛋白TCAP相互作用,深入分析显示MDM2过表达可改变TCAP的定位,且剂量依赖性下调TCAP表达,并且这种下调性表达被p14ARF所抑制。此外,我们实验表明MDM2对TCAP的下调是通过泛素非依赖途径实现的。已知TCAP是心肌机械牵拉感受器的重要成分,与多种心肌肥大相关蛋白相互作用。进一步分析MDM2是否及如何通过与TCAP的相互作用,实现对心肌细胞的生长和凋亡调控,对临床治疗心肌肥大相关性疾病具有重要的理论和现实意义。
[成果] gkls122392
R55 应用技术 公布年份:2009
成果简介:Wnt家族蛋白及其受体、调节蛋白等一起组成了复杂的信号通路,在动物的发育与干细胞命运的调控方面都起着重要作用。其成员之一Wnt3a是造血干细胞细胞增殖分化重要的调控分子。由于纯化过程易发生去酰化而失活所以很难得到得到活性Wnt3a蛋白,我们在前期实验建立了可以分泌活性Wnt3a蛋白的转基因基质细胞,初步研究了其对CD34+造血干/祖细胞的扩增作用。本研究通过体外集落培养、建立红系和巨核系诱导分化培养体系等方法深入研究Wnt3a对CD34+造血干/祖细胞红系和巨核系分化潜能的影响;实验结果显示Wnt3a可以体外扩增造血干/祖细胞数量并且提高CD34+造血干/祖细胞红系分化潜能;在此基础上通过慢病毒干涉技术下调红系和巨核系共祖细胞MegE关键调控分子EKLF的表达水平,研究Wnt3a提高CD34+造血干/祖细胞红系分化潜能的机制,检测了分化过程中EKLF,GATA-1等基因的变化。本研究有助于今后实现人工制备红细胞以及相关血液系统疾病的治疗,具有深远的应用前景和巨大的社会价值。
[成果] gkls122502
R25 应用技术 公布年份:2009
成果简介:本课题应用临床研究和动物实验结合、病理生理学研究与药理学研究结合的方法,将肾阴虚证与神经内分泌免疫调节(NIM)网络平衡失调相联系,从整体宏观和分子微观两个角度研究肾阴虚证的现代生物学基础。临床研究应用蛋白质组学和代谢组学技术,以糖尿病和更年期综合征伴肾阴虚证病人为研究对象,寻找“肾阴虚证相关蛋白和代谢产物”。结果表明,肾阴虚病人的一些蛋白质和代谢物的水平出现了明显变化,如肾阴虚证病人存在氨基酸代谢的显著下降等,这些结果是应用传统研究方法没有发现的。动物实验则应用经典的滋补肾阴方剂-六味地黄汤(LW),研究其对两种肾阴虚证动物模型(快速老化小鼠和醋酸可的松致肾阴虚证模型小鼠)的作用。结果表明,LW能够调节肾阴虚模型小鼠NIM网络的失衡及多种代谢物和细胞因子的水平,其作用的代谢物与临床发现的肾阴虚证相关的代谢物相一致。本研究结果提示,临床和实验研究发现的多种蛋白质和代谢物的变化及NIM网络功能的失衡可能与肾阴虚证密切相关,为深入研究“肾阴虚证”的生物学基础和临床诊断提供了较为可靠的实验依据,并提示应用蛋白质组学和代谢组学技术研究“证”的生物学基础,能够得到更为系统和全面的研究结果。
[成果] gkls122624
R28 应用技术 公布年份:2009
成果简介:通过活性追踪地锦草抗HBV化学成分研究,分离并鉴定38个单体化合物,包括7个新化合物,25个化合物为首次从该植物中分得;发现11个活性单体化合物,其中10个化合物的抗HBV活性为首次报道;进而阐释了黄酮类、酚类及萜类化合物的构效关系,为研制开发新型抗HBV新药奠定基础。
[成果] gkls122628
R28 应用技术 公布年份:2009
成果简介:黄精为一常用中药,临床主要应用其炮制饮片,传统认为炮制可消除黄精刺激性,增强补脾润肺益肾的功效。本课题拟以贵州凤冈黄精规范化种植(GAP)基地所产滇黄精(Polygonatum kingianun)药材为原料,采用高效液相色谱(HPLC)和超高压液相色谱/离子迁移谱(UPLC/Synapt HDMS)技术,建立了滇黄精炮制前后的指纹图谱,对比分析贵州产滇黄精炮制前后化学成分的变化;利用多种色谱和波谱技术,从炮制前(鲜黄精)和炮制后(酒黄精)中共分离鉴定37个化合物,其中13个为新化合物;对比分析变化前后单体化合物结构,其中新鲜滇黄精中分离得到的化合物以呋甾皂苷为主,而炮制后酒黄精中分离得到的化合物以螺甾皂苷为主,且其为鲜药材中呋甾皂苷相对应的螺甾皂苷,推测黄精药材在炮制过程中,其特征成分-皂苷可能发生了脱糖基反应;对其中炮制前后明显变化的甾体皂苷类成分进行抗血小板聚集药理活性筛选,结果显示炮制后明显增加螺甾皂苷成分具有抑制血小板聚集活性,该研究结果为制订科学合理的制黄精质量控制指标奠定了基础。
[成果] gkls122742
R28 应用技术 公布年份:2009
成果简介:运用核磁共振波谱学技术获得60Co γ射线、环磷酰胺(CTX)和综合放血法三种方法致血虚证小鼠及四物汤给药前后体液和组织的代谢指纹图谱,通过生物信息学方法分析血虚证相关分子标志物,为四物汤的作用机理研究提供科学的实验依据。三种血虚证模型组以及四物汤反证组动物的血清代谢物、胸腺、脾脏及骨髓水溶性提取物和脂溶性提取物的核磁共振图谱有明显的不同,主成分分析的结果显示正常组、血虚证模型组以及四物汤反证组能够明显的区分。对区分贡献最大的代谢物主要是血清中的乳酸、肌酸、葡萄糖、酒精、胆碱、磷酸胆碱、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白等;胸腺提取物中的乳酸、牛磺酸、胆碱、磷酸胆碱、丙三醇、不饱和脂肪酸、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白以及组氨酸等;脾脏提取物中的乳酸、胆碱、磷酸胆碱、牛磺酸、异亮氨酸、不饱和脂肪酸、低密度脂蛋白等;骨髓提取物中的乳酸、酒精、牛磺酸、葡萄糖、肌酐等。血虚证的可能机制是导致机体脂肪酸β氧化功能紊乱、细胞内外渗透压平衡破坏以及糖酵解功能失调。四物汤治疗血虚证的机理可能与改善线粒体功能,纠正脂肪酸β氧化功能紊乱;稳定细胞膜,维持细胞内外正常渗透压;调节糖酵解,促进机体正常能量代谢有关。
[成果] gkls122743
R28 应用技术 公布年份:2009
成果简介:甾体皂苷因其结构的多样性和重要的生物活性长期以来一直备受关注。例如从植物重楼根茎中提取的总皂苷成分(TSSPs)可以有效地治疗异常的子宫出血。然而,到目前为止我们对其中的有效活性成分以及止血作用机制还不了解,因此本研究主要是追踪了TSSPs中的有效活性成分,并对其止血作用的机制展开研究。实验结果显示,TSSPs体内能发挥止血作用,并在体外剂量依赖性地诱导了大鼠和人的血小板聚集。进一步活性追中发现,几个具有螺甾结构的偏诺甾体皂苷化合物是TSSPs的有效活性成分。构效关系分析显示苷元结构以及相连接糖链结构都是是其主要的功能基团。与已知血小板激动剂间的协同作用提示偏诺甾体皂苷是一类新型的血小板聚集激动剂,其诱导血小板聚集依赖于αⅡbβ3的激活,受cAMP的调节,依赖于细胞外的钙离子,与ADP的分泌和TXA2的合成有关,并参与到PI3K信号途径中。总的来说,我们阐明具有螺甾结构的偏诺甾体皂苷化合物是TSSPs中有效的活性成分,其诱导血小板聚集涉及多条复杂的信号通路。
[成果] gkls122327
R733 应用技术 公布年份:2009
成果简介:造血生长因子通过不同的信号转导途径调节造血干细胞的增殖和分化。Spred-2是新近发现的细胞增殖信号抑制分子。但是,其在造血调控中的作用并不清楚。本项目检测了各类造血细胞表达Spred-2 的情况;克隆了Spred2编码基因并构建了表达载体;构建了携带Spred2干涉序列的慢病毒载体及靶向腺病毒载体。利用上述基因转移策略,将Spred2基因、RNA干扰序列导入人造血细胞,以RFP、GFP为标记,通过细胞分选、细胞信号途径检测、造血细胞体外性能分析等手段。确定了高表达和基因沉默Spred2对造血干细胞增殖、分化、凋亡特性的影响。初步阐明了高表达Spred2通过抑制MAPK信号途径发挥对造血细胞的增殖抑制作用;Spred2上调造血细胞凋亡相关分子的表达,促进血液肿瘤细胞的凋亡;Spred2还可以通过调控核转录因子的表达水平影响造血细胞的分化。研究结果表明Spred2是重要的造血细胞调控分子,并参与白血病细胞凋亡调节。该项目将丰富造血调控内容并为血液肿瘤治疗提供理论基础。
[成果] gkls122343
R730 应用技术 公布年份:2009
成果简介:NK细胞是人体细胞免疫的第一道屏障,在识别和清除体内衰老、突变或癌变细胞、维持内环境稳定及恶性肿瘤免疫治疗中起重要作用。KIRs基因家族是NK细胞活化的开关,决定NK细胞活化状态,通过选择性干扰不同个体特征性KIRs家族成员的表达,定向改变NK 细胞KIRs 受体与其配体的相容性,提高NK 细胞杀伤功能,对于研究NK 细胞通过KIRs 受体多态性的活性调控机制具有非常重要的意义。本研究分析了恶性疾病患者NK 细胞抑制性免疫球蛋白受体(KIRs)的基因型、分布特征;筛选了3 种KIR受体特异性的干扰RNA;利用基因表达干扰技术(siRNA)成功地对不同的抑制性KIRs 受体表达进行了干扰或沉默;体外细胞学研究,观察了KIRs 表达选择性干扰后NK 细胞对白血病细胞的杀伤活性的影响,结果显示,NK细胞KIRs 受体选择性沉默后,NK 细胞杀伤活性分别在干扰后24小时、36小时、48小时有明显增高;KIR受体干扰技术稳定,方法可行,可成为NK 细胞体外活化的又一选择。
[成果] gkls108083
R735 应用技术 公布年份:2006
成果简介:肝细胞生成素(HPO)是我们自行发现并克隆的一种能特异刺激肝源细胞增殖的细胞活性因子,其特性为具有相对作用器官特异性即特异刺激肝源细胞增殖,与肝损伤后修复关系密切。本研究以编码23KD的HPO205为研究对象,发现HPO和肝癌的侵袭性有密切的联系,它可能通过上调c-met基因的表达而增加肝癌细胞对HGF的反应性,而增加其侵袭性;也可能同时上调uPA基因的表达而直接增加其侵袭性。此外,在SMMC7721肝癌细胞高表达HPO205,对细胞的增殖没有明显影响,但能显著提高细胞低抗γ-射线和H2O2致损的能力,减少凋亡的发生,提高细胞存活率。对线粒体的功能评价发现,过表达HPO205提高了线粒体产生ATP的能力,减少了线粒体活性氧自由基的产生,并稳定了氧化应激情况下的线粒体膜电位,减少致损条件下线粒体细胞色素C的释放。提示HPO205提高细胞存活能力可能与增强或保护线粒体功能相关。
[成果] gkls109988
R730 应用技术 公布年份:2006
成果简介:据统计,在约80-90%的肿瘤细胞中可以检测到端粒酶活性,端粒酶的重新激活是肿瘤细胞维持端粒结构的主要机制,而凋亡抑制蛋白survivin在几乎所有的肿瘤细胞中高表达。本课题研究结果表明:1)抑制端粒酶催化亚基(hTERT)的表达可以促进凋亡抑制蛋白survivin 通过泛素蛋白酶体途径降解,同时在活化的外周血淋巴细胞中,hTERT的活性及表达和survivin的表达呈正相关;2)通过构建针对survivin的反义寡核苷酸和siRNA,抑制HeLa细胞中survivin的表达后能诱导HeLa细胞凋亡的发生;3)在由PHA和IL-2刺激的外周血淋巴细胞模型中,survivin基因的转录激活和蛋白表达与淋巴细胞活化相关联,代表细胞处在增殖状态,同时survivin的表达表现为明显的细胞周期和周期时相的依赖性。同时,JAK-STAT信号通路是淋巴细胞活化,survivin蛋白表达必需和最重要的信号通路,活化的STAT5通过上调下游分子cyclinD3和cyclinE的蛋白水平,启动细胞周期,诱导周期依赖的survivin的表达;4)HeLa细胞中活化的AKT能增加survivin的稳定性。
[成果] gkls109989
R97 应用技术 公布年份:2006
成果简介:恶性肿瘤的治疗至今仍然是医学上的难题,主要是因为恶性肿瘤术后常出现微转移,不能完全通过手术治疗来解决。发展靶向性强、毒性低的生物药物来治疗、预防微转移一直是肿瘤药物的研究热点。超抗原是指一类能直接与抗原递呈细胞MHC-Ⅱ及T细胞TCR结合并激活T细胞的逆转录病毒蛋白和细菌外毒素。我们早期研究表明EGFR配体与金黄色葡萄球菌肠毒素A组成的融合蛋白能以超抗原依赖的细胞毒作用的形式杀伤肿瘤。有研究表明超抗原还可以免疫佐剂的形式特异性增强体液免疫,这提示用融合蛋白免疫可以产生EGF疫苗的作用。本项目设计是将EGFR配体与SEA融合,所得融合蛋白既保留超抗原靶向抗癌药物的特性,杀死残留肿瘤细胞,同时在多次使用或辅以免疫刺激后还可以肿瘤疫苗的形式预防微转移的发生,从而在肿瘤手术清除后构建防止复发的双重屏障。本项目研究结果初步证实了上述设计。实验证明,本项目所设计EGF样靶向分子能与EGFR结合,同时保留了EGF和TGFalpha两配体的抗原表位。用该靶向分子与SEA组成融合蛋白制备的抗体可以在体外显著抑制肿瘤生长,在体内也体现出延缓实体瘤的生长。该融合蛋白有可能发展成为一种预防肿瘤微转移的药物。
[成果] gkls109789
R737 应用技术 公布年份:2005
成果简介:人spindlin1基因是本研究室克隆得到的在卵巢癌组织高表达(GenBank:AF317228)、与鼠spindlin基因高度同源的新基因。我们的研究结果显示:spindlin1蛋白定位于细胞核;过表达spindlin1蛋白的NIH3T3细胞具有致瘤性;制备了抗Spindlin1的多克隆抗体;获得了spindlin1蛋白的晶体结构;发现Spindlin1能非特异地与DNA结合;获得并用Co-precipetitation方法证实了3个与Spindlin1相互作用的蛋白分子(Hsp70、ZNF202和Spindlin1自身)。构建了用于转染细胞分选的双顺反子载体p3.1-IRES-CD34。我们的研究表明,spindlin1基因肿瘤发生中发挥了重要作用。
[成果] gkls109840
R73-3 应用技术 公布年份:2005
成果简介:确定调控肿瘤转移的关键基因对深入研究肿瘤转移的机制以及寻找肿瘤治疗新策略具有重要意义。抑制消减杂交和基因芯片技术的联合应用是克隆差异表型相关基因的有效途径。我们利用该技术从人肺巨细胞癌高低转移株(PLA801D、PLA801C)中筛选出41条与低转移细胞株(PLA801C)表型相关的序列。对其中的64号序列进行生物信息学分析,发现其与14-3-3ζ高度同源。RNA和蛋白质水平对14-3-3ζ在人肺巨细胞癌高低转移株中的表达检测发现在低转移株的表达水平明显高于高转移株。以转染正反义真核表达载体的两株细胞进行的细胞生物学功能实验发现14-3-3ζ的过表达可以抑制肿瘤细胞的增殖,抑制其集落形成,促进细胞的黏附,抑制其迁移能力。利用RNA干扰使细胞14-3-3ζ表达水平明显降低,黏附能力明显下降,而集落形成、迁移和侵袭能力则明显提高。肺癌标本的免疫组化分析发现在大多数标本原发灶比转移灶14-3-3ζ表达水平高。结论:14-3-3ζ可能与肿瘤的转移表型密切相关。14-3-3ζ可能成为临床肺癌预后判断的辅助指标。
[成果] gkls109845
R730 应用技术 公布年份:2005
成果简介:寻找能够特异识别肿瘤血管的抗体对于肿瘤的诊断和治疗都具有重要意义。首先利用噬菌体展示技术用食道癌、胃癌、脑癌和肺癌患者肿瘤组织构建了一个库容为1.6×106的肿瘤组织单链抗体库。同时,用七株不同的肿瘤细胞系(包括前列腺癌、乳腺癌及宫颈癌)进行裸鼠致瘤实验,建立了裸鼠致瘤模型,并建立了肿瘤特异性抗体的体内筛选模型。 其后以HeLa细胞致瘤裸鼠为实验模型,用所构建的单链抗体库进行了四轮特异抗体的体内筛选。肿瘤血管特异单链抗体获得了富集。然后在PCR阳性的基础上,挑取了36个第四轮富集的单链抗体做免疫组化,将对在HeLa致瘤的肿瘤组织切片上呈阳性染色,而在对照的肾组织切片上没有阳性染色的单链抗体进行序列测定。获得一株单链抗体scFv (VH-linker-VL),其重链区由121个氨基酸组成,轻链区由107个氨基酸组成。经Blast比对,尚未发现有与此完全相同的单链抗体。最后用原核表达系统对该单链抗体进行表达和纯化,对其肿瘤血管靶向性及肿瘤生长抑制性进行了测定。结果显示此单链抗体具有较好的肿瘤血管靶向性,但裸抗体的抑瘤性不明显。本方法的建立将为肿瘤诊疗药物的研制奠定良好的基础。
[成果] gkls109862
R735 应用技术 公布年份:2005
成果简介:针对肝癌导向治疗的缺陷,构建了抗肝癌单链抗体导向超抗原双功能分子,运用了新型分子伴侣的概念,实现了可溶性表达,分析了该分子的肝癌细胞结合活性,超抗原活性以及融合分子的稳定性,发现超抗原稳定的结构促进了单链抗体和整个融合分子的稳定,对该分子进行纯化后,建立了体外细胞评价模型和体内肝癌模型,对该融合蛋白的体内外抗肝癌活性进行了全面评价,体外主要以SMMC-7721肝癌细胞为靶细胞,以人外周血淋巴细胞为效应细胞,MTS法测定了重组蛋白的导向杀伤活性,在10E-7mg/ml对肝癌细胞即可有效杀伤。体外免疫化学染色发现,该融合蛋白可以特异结合肝癌细胞。体内实验证实了较单纯超抗原更高的抗肿瘤活性。另外我们还构建了二硫键稳定的单链抗体(dsFv)靶向超抗原,对其活性进行了评价,发现重组蛋白能在37℃ PBS中9天结合活性不受影响,在尿素等变性剂存在的条件下可较长时间保持活性。
[成果] gkls109863
R730 应用技术 公布年份:2005
成果简介:本研究利用分子文库高通量筛选与血管新生中具有核转位现象的一类细胞因子的相互作用蛋白,用免疫共沉淀等方法进行相互作用验证,以反义核酸技术分析它们的生物学功能。研究发现,Ang、FGF2、FGF7、FGF10和FGF22等具有典型的核转位现象,可由胞外进入细胞内并定位于细胞核中,能明显地促进COS7和ECV304细胞的增殖,Ang可显著地提高细胞的贴壁速度。利用缺失突变技术分别构建了N端和C端不同大小的Ang缺失突变体,分析了其结构与功能关系。分别构建pAS2-1-FGFs 和pAS2-1- Ang利用酵母双杂交系统分析了它们的转录激活活性,结果表明单独的Ang、FGF2、FGF7、FGF10和FGF22均没有转录激活活性。通过高通量筛选我们获得了与4个Ang具有相互作用的蛋白;2个与FGF10具有相互作用的蛋白,并通过免疫共沉淀和哺乳动物细胞双杂交进行了验证。通过反义核酸技术分析了阻断这些基因的表达对Ang生物功能的影响。模建了Ang等的三维结构,构建系列突变体,通过双杂交方法确定了它们分子结合域。为阐明Ang等细胞因子的核转位途径和作用机制奠定了基础,为新的抗肿瘤靶标的发现创造了条件。
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