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[成果] 0900010087 湖南
[Q78, R36] 应用技术 医学研究与试验发展 公布年份:2008
成果简介:随着人类基因组研究的深入,已有大量的序列、图谱、功能研究等数据积累。人类新基因的克隆,尤其是遗传病致病基因的克隆成为国际竞争的热点。生物信息学技术在基因克隆的研究中扮演着越来越重要的角色。通过对国际人类基因组研究信息资源的分析,结合遗传性致病基因克隆的需要,课题组建立了一套信息分析体系,并应用于遗传病相关基因的克隆研究。将已知致病基因对EST数据库作同源搜寻,获得了代表相关新基因的同源EST。EST间的比较分析构建起EST重叠群,优化了基因克隆策略,进而通过实验克隆了atrophin-1样基因、ataxin-2样基因、M6ba、二甲基甘氨酸脱氢酶样基因、间隙连接蛋白beta-3和间隙连接蛋白beta-5等六个人类新基因。该论文重点介绍了atrophin-1样基因、M6ba、间隙连接蛋白beta-3的克隆情况:将齿状核红苍白路易氏体退行性病变(DRPLA)致病基因(Atrophin-1)cDNA序列对EST数据库进行同源性比较,得到与Atrophin-1显著相似的EST 25个,构建5个EST重叠群。根据其中的3个EST重叠群设计引物,对cDNA文库扩增,PCR法制备探针,筛选人cDNA和gDNA文库。cDNA克隆经测序,拼接,获得含完整编码区的cDNA序列4.6kb(命名为Atrophin-1样基因,Atrophin-1 like gene),其中有一个303bp的阅读框架。基因编码区由9个外显子构成。基因组DNA克隆经荧光原位杂交定位于1p36。人、鼠Atrophin-1基因家族各成员的比较分析显示,均为亲水性较强的蛋白质,其C端保守性较强,有两个酸性与碱性氨基酸交替区。DRPLA、Haw River综合症与Atrophin-1中CAG的过度重复相关,而人类Atrophin-1样蛋白中不含长的多聚谷氨酰胺残基(其基因中只有三次CAG的重复)。蛋白脂蛋白(PLP)基因突变导致Pelizaeus-Merzbacher病(PMD)和部分X-连锁的痉挛性截瘫。Olinsky等克隆了M6ba的部分序列(U45955),该基因认为是PLP基因家族成员之一。课题组以巢式PCR得到一约300bp的片段,测序为与U45955的5’端局部重叠的新序列,拼接后得到1.642kb的序列,其中含有可编码265个氨基酸的开放阅读框。该阅读框经对脑cDNA文库PCR产物的测序确证(命名为M6ba)。M6ba的cDNA序列及其编码氨基酸序列与小鼠中M6b基因和蛋白质序列显著相似(分别为91.2%和93.4%一致)。Northern杂交的结果及cDNA文库PCR扩增、EST数据库分析的结果提示M6b基因至少存在三种剪接形式。M6ba基因与PLP基因显著相似,并且两蛋白质在所有疏水区高度保守。M6ba基因结构的分析,显示此基因编码区由7个外显子构成。间隙连接蛋白以六聚体方式构成相邻细胞间的通道,在细胞的生长、分化、增殖调控中都发挥着重要作用。已有研究显示间隙连接蛋白基因家族成员的突变常与遗传性疾病相关。该工艺通过同源EST分析克隆了人类间隙连接蛋白beta-3基因(GJB3),并通过荧光原位杂交将此基因定位在人类染色体1p34。而有一型常染色体显性遗传的神经性耳聋也定位于同一区带。两个双侧对称性高频听力减退家系的突变分析显示,该基因分别有错义和无义突变的杂合子存在,并且突变与疾病的发生明显相关。该发现表明GJB3基因的突变可能是导致以双侧对称性高频听力减退为主要特征的神经性耳聋的病因。通过单纯的信息综合分析课题组还鉴定了人类auxilin基因的部分cDNA序列,并将该基因定位到人类染色体1p31。Auxilin蛋白诱导Hsp70c蛋白与笼形蛋白的结合,在真核细胞衣被小泡脱衣被的过程中扮演了重要的角色。Auxilin基因的EST分析,显示此基因在多种组织中表达而非以往研究认为的只在脑组织中表达。说明在计算机上克隆、分析基因已具备了比较成熟的条件。通过以上基因的克隆,以及对已克隆基因与遗传病关系的分析,课题组提出了“基因家族-候选疾病克隆策略”-选择多个成员与遗传病相关的基因家族,克隆、定位其新成员,在其定位点附近选取已连锁定位的“候选疾病”,进行基因的突变检测,以期最终克隆新的遗传病致病基因。通过“基因家族-候选疾病克隆策略”克隆新的致病基因将是一条很有潜力的研究路线。
[成果] 0100110054 湖南
R739.6 应用技术 医学研究与试验发展 公布年份:2001
成果简介:将中国人鼻咽癌细胞株(CNE2)DNA转染对TPA敏感的小鼠上皮细胞株JB<,6>(P<'+>)CL41,从第三轮转染所获得转化细胞构建的基因组DNA文库中筛选出10个Alu阳笥克隆,对其中一个克隆进行了详细研究。这个克隆的DNA导入JB<,6>P<'+>细胞后有转化活性,钭此DNA段命名为Tx基因。初步证明,Tx基因与H-ras,K-ras,N-ras,src,myb,jum,myc,fos,raf或imt-2等癌基因均无同源性,燕发现这个基因在CNE2细胞株中有一个1.3kb的表达产物。随后运用岛枪法对Tx序列中与转化作用有关的一个2.8kbEcoRI片断作了核苷酸序列分析(全长2737bp),研究其开放阅读架(ORF)。与基因数据库中的DNA片民已知人类基因无同源笥。同时用荧乐标记的原位杂交(FISH),以2.8kb的Tx基因片段为探针与正常人外周血淋巴细胞中期染色体进行原位杂交,将该基因定位地8q23-24.1。Tx基因可能是一种 人癌基因。
[成果] 0801242097 湖南
[Q34, R714] 应用技术 医学研究与试验发展 公布年份:2000
成果简介:细胞遗传学研究的主要对象是染色体,染色体是基因的载体,染色体异常所致的疾病称为染色体病。1972年,夏家辉就在国内最先引进和改良了瑞典科学家GASPERSSON1970年发现的人类染色体显带技术,并于1974年最先提出了中国人G显带染色体模式图,在国内最先开设了染色体病遗传咨询门诊。二十六年来,该研究紧跟国际前沿建立了皮肤、羊水、绒毛、永生淋巴样细胞培养技术,细胞遗传学方面的G-11、C、Q、DA/DAP1、N显带、LX、X小体、Y小体、FRA(X)、高分辨等技术以及分子细胞遗传学的染色体原位杂交技术(FISH),完成了6893例门诊病人的染色体检查,对一些基础理论问题作了深入研究,查明了我国新生活婴中染色体异常的发生率为0.73%,与此同时为了配合我国有关“控制出生人口数量,提高出生人口素质”的计划生育政策的贯彻执行,在总结个别进修的基础上,于1980年开始在中央卫生部领导下举办了以妇产科主治医师为主体的半年一届的“全国细胞遗传学产前诊断专修班”,推广了染色体病的诊断和产前诊断技术,至今培养的学生共865名,他们来自除西藏、台湾以外的各省市,这些学员回单位后在临床广泛开展了染色体病的诊断和预防工作,从而使我国从零开始建立了“临床细胞遗传学”这一崭新的学科。
[成果] 0801241506 湖南
[Q78, R73-3] 应用技术 医学研究与试验发展 公布年份:1998
成果简介:该项目属于分子细胞遗传学科学技术领域。建立了可用于活性基因区域DNASE-1敏感区在人中期染色体上定位的BRDU完全替代的染色体原位切口移位的B带技术;系统阐明了B带技术显带机理;建立正常人淋巴细胞,上皮细胞和成纤维细胞的染色体B带核型图谱,并对其带型差异进行系统比较;应用B带技术证实肿瘤始动部位假说;通过对DNASE-1敏感区稳定性的观察,阐明表达活跃的基因位点遗传稳定性的分子基础。国际首创了用于活性基因在人中期染色体上定位的B带技术;首次系统阐明了B带及B带技术的产生机制和原理;B带技术能高分辨地显示基因组中活跃表达的基因区;B带技术能有效地为恶性肿瘤、遗传性疾病相关基因的克隆与分离提供简便而快速的分子细胞遗传学手段;B带技术所绘制的人淋巴细胞,上皮细胞和纤维细胞的B带图谱为研究基因组稳定性提供了极为重要的研究标准。哈尔滨医科大学遗传所,华西医科大学肿瘤所等单位将其移植于该研究室,先后用B带技术对肺癌,鼻咽癌细胞基因组中的活性基因区进行了定位和分子细胞遗传学的研究。B带技术对北京大学生物系尚克刚同志“应用BRDU抗体技术显示BRDU标永的染色体和DNA”的研究提供了重要启示。经查SCI和部分中文杂志,该项目已被引用40次。
[成果] gkls021266
R15 应用技术 公布年份:1992
成果简介:观察6 ̄82岁健康男性的血清过氧化脂质,红细胞超氧化物歧化酶和全血谷?胱甘肽过氧化物酶,Cu,Zn,Se与增龄的关系。发现60岁以上老人的?LPO较儿童组、青少年组、中年组及老年前期组显著增加,而SOD、G?PX、Cu、Zn、Zn/Cu显著降低,各年龄组的血Se含量无显著性?差异。经相关及回归分析,年龄与LPO呈正相关,与GPX、Zn/Cu?呈负相关,与LPO及GPX的关系最密切。提示:LPO促进衰老,而G?PX、SOD、Zn,Cu抑制衰老。?
[成果] gkls021783
R31 应用技术 公布年份:1992
成果简介:该研究通过小鼠胚胎取样、冷冻保存、体外发育和单卵裂球体外增殖以及染?色体制备技术等方面的研究,成功地建了4-细胞鼠胚遗传学诊断模型。发?明了一种从4-细胞胚胎中吹出单卵裂球的活检方法,避免了单卵裂球取出?时因过度变形造成的单卵裂球损失;建立了单裂球和输卵管联合体外培养系?统,提高了单卵裂球体外增殖率,为染色体制备打下了基础;建立了用微型?胚泡制备染色体技术,为着床前胚胎遗传学诊断打下了基础。?
[成果] 99022268 湖南
R730 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:从人鼻咽癌(NPC)活检标本、裸鼠/SCID鼠移植感染EBV(Epstein-Barr病毒)的人胚鼻咽上皮和创制EBV致NPC的转基因鼠模型三条途径,采用分子生物学、分子病理学、分子遗传学新技术,病理标本与实验研究、动态与静态研究相结合,阐明EBV诱发NPC的阶段性及其分子生物学特征,特别是鼻咽部感染EBV的敏感细胞、TPA受体(PKC)基因突变、p53蛋白的失活、端粒酶的活化、抑瘤基因的变化等,以创立鼻咽上皮癌变的分子模型。
[成果] 94207510 湖南
R394 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:以该校发现的49种世界首报核型为基础,鉴定、编辑了《中国人类染色体异常目录》第一、二集;构建了“目录数据库”,已鉴定输入世界首报核型986种;选择了其中由116个实验室提供的553种罕见核型编著了《世界首报中国人类染色体异常核型图谱》。中国人异常核型的发现与登记,是有关中华民族的一份极有价值的细胞遗传学资料,是开展各种遗传学研究不可少的基础材料,不但可为人类基因定位、克隆致病基因提供信息,且新的罕见突变核型的发现是克隆新的融合基因、研究基因间的相互作用等基础问题的重要研究材料。
[成果] 6000009207 湖南
R13 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:该项目用动物实验、霉菌分离培养、光镜、电镜、免疫荧光、血浆IgG测定、形态计量等方法,动态观察实验性粮谷尘肺的病变,探讨发病机理。对发病机理提出以下见解:①粮谷尘中含有的游离SiO2为慢性肺损害扩要原因;②嗜热放线菌(TV)吸入肺脏后可以逐渐消除,若非反复感染不致造成慢性肺损害;③异物肉芽肿病变与纤维化关系不大;④呼吸道的急性症状与支气管壁肥大细胞脱颗粒释放组胺等活性介质有关。同时描述了实验性粮谷尘肺的病理变化,以及SiO2、TV对Ⅱ型肺泡上皮细胞增生的影响。上述研究结果对粮谷尘肺的预防有积极意义。
[成果] 961196 湖南
R96 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:该成果以常用的重要心血管系统和中枢神经系统药物为测试药,研究证实华人对普萘洛尔β受体阻滞作用和降压作用较白人敏感,两个人种的普萘洛尔药代动力学特征有明显差异。以药代动力学为基础进一步研究了种族因素在阿托品与吗啡药物反应中的作用。它揭示了药物代谢和反应存在种族差异这一自然规律,为遗传药理学的发展作出了重要贡献,对临床药理学和治疗学、新药发展均具有重要指导意义。该成果受到国内外专家的重视,并在实践与研究中被应用。
[成果] 93201750 湖南
R19 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:该成果在国内外同类研究的基础上,引进、修正、发展、完善了有关的几个健康和疾病危害程度评价指标,并提出了一些新的计算方法,即减寿年数,或潜在的寿命损失年数(PYLL);潜在的健康生命损失天数(PHDLL);慢性病致残百分数和预期劳动寿命等指标,可作为当前生命统计、残疾统计、病伤死因统计分析、疾病危害程度评价以及人群健康测量与评价的重要手段,为制订卫生计划,为病伤死因防治决策,为有限的人力、人才、资金的合理分配和使用等提供重要依据,因而具有巨大的社会效益和潜在的经济效益,对建立我国卫生信息系统也将产也深远影响。
[成果] 89218933 湖南
R65 应用技术 医院
成果简介:脑外伤是常见病,严重者则伴有脑水肿,而控制脑水肿与颅内压增高是降低患者死亡率的关键。该研究根据脑外伤后,脑水肿液可由压力较高的水肿区流向压力较低的正常区,最后流入脑室系统的机理,设计了控制性持续性闭式脑室引流术,从而使颅内压控制在较低的水平,不但使原脑室内的脑脊液流出,而且还可促进脑水肿液的廓清,为脑水肿的治疗与降低颅内压提供了一种新的有效途径。该方法较其他抗脑水肿治疗方法简单,易于推广,对全身副作用小。该治疗方法为国内外首次提出。
[成果] 892317 湖南
R28 应用技术 [医学研究与试验发展, 中成药制造]
成果简介:该项研究首次用多种动物模型和多种指标,在整体、离体和细胞水平上证明,人参皂甙能改善心脏血流动力学,减轻心脏负荷,减少心肌耗氧,阻止缺血心肌乳酸和游离脂肪酸的代谢紊乱,改善心肌代谢,保护缺血心肌细胞膜等作用,从而对心肌缺血和再灌注损伤有保护作用。同时首次发现人参皂甙对血管α1 和α2 受体的不同作用。该项研究对阐明人参药理作用和临床防治冠心病、心肌梗塞以及冠脉搭桥术施术等提供了科学依据。
[成果] 93201804 湖南
R18 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:该课题对卡介菌成分及其作用机理进行了深入研究,对卡介菌多糖核酸的提取工艺作了重大改进,对多糖核酸组分进行生物学测定和分子量测定。并通过动物实验确定所提组分是一种小分子多糖核酸,在体内能激活巨噬细胞,增强非特异性T细胞转化并诱发γ-干扰素、白细胞介素2及MIF的产生,使机体的吞噬作用加强。在药物安全工作方面进行了急性、亚急性和慢性毒性试验,证明该品是安全的。经临床治疗455例观察,对初治肺结核痰阳转阴、病变吸收、空洞闭合有显著疗效。此外对流感、感冒、哮喘、慢性支气管炎等亦均有疗效。
[成果] 93201789 湖南
R59 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:该课题组对217名健康男性体内自由基反应产物一过氧化脂质与抗氧化酶SOD、GSH-px及与之有关的微量元素铜、锌、硒等在血及红细胞中的含量进行测定、用多元回归及逐步回归方法处理分析,评定这些指标的增龄性变化,并探讨自由基反应与衰老的关系。结果发现:老年时抗氧化酶SOD及GSH-px活性及血锌、铜、锌/铜含量急剧下降,过氧化脂质增加、蓄积,其中与年龄关系最密切的是过氧化脂质,其余依次为GSH-px、SOD、锌及铜LPO促进衰老。该研究对各项指标相互关系和影响的分析论证科学性强,对自由基反应与衰老关系的研究较为深入,具有重要的基础理论意义及应用价值。
[成果] 90207062 湖南
G43 应用技术 其他教育
成果简介:该发明涉及一种画面胶片投影教学装置,是使用一画面分解活动进行授课的投影片板。该投影片板由框底板、盖板、胶片、拉线、橡皮筋等组成。在现有的教学领域中,投影教学方法已广泛应用于大中学校,尤其是采用画面投影进行示教,有直观理解,容易掌握知识的效果,而且便于携带,深受师生喜爱。但是,目前国内所有采用投影仪进行教学的图象胶片,全是单张呆板不动的画面胶片,若要分解说明某些专业内容,或者需要用动态形式讲解时,则往往需要多张单独不同图象形状的投影胶片来进行讲解,这样比较麻烦而且不易理解。该投影片板不仅避免了教师授课费时多语的劳累,而且还能获得更好的教学效果。该成果专利号89212205。
[成果] 883256 湖南
R33 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:对多能造血干细胞的功能、性质及其调控的研究,是当前造血干细胞研究中的前沿问题。该研究应用脾集落测定、生物辐射、骨髓细胞移植、细胞免疫、细胞培养、组织学观察和染色体显带等多种方法,证实了13天的CFU-S是更为早期的、重建造血的主要干细胞,并发现CFU-S表面胆硷能N受体与细胞向粒系分化有关,提出表面受体与CFU-S不均一性的一些新见解,丰富了对造血生理和病理的认识。
[成果] 99021999 湖南
R24 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:辩证标准的规范化、定量化、客观化直接关系到中医学的医疗、教学、科研水平及中医学术的发展,也涉及中医学走向世界的问题。该项目根据中医肝脏象的理论特点,应用现代医学理论,提出一项有关肝实质的假说,并从肝气郁结、肝火上炎、肝阳上亢、肝阳化风、肝血虚5个证入手,采取证病结合,与心、脾、肾相应证及同病异证对比鉴别,以及临床验证、方证对应的方法进行研究。其主要内容包括:根据中医传统理论、专家咨询、严格控制条件的流行病学调查和电子计算机计量诊断相结合的方法,列出主症,建立主症量化计分标准,确定肝脏5证的研究病种,制订5证的临床辩证标准及因病而异的辩证要点;通过同病异证、它脏它证对比鉴别,建立5证有特征性的或相关性较强的实验指标,作为辩证诊断参考标准;临床验证:选用常用方,对相应的证进行治疗,逐步扩大验证,以临床疗效及指标变化为依据,检验辨证标准的准确性和实验指标的相关性。通过研究,制订既有主症及其量化值,又有相关实验指标的中医肝脏5证的辨证标准,并阐明5证的病理生理基础,揭示中医肝脏象部分实质。
[成果] 942373 湖南
[Q51, R55] 应用技术 [医院, 自然科学研究与试验发展]
成果简介:该成果采用了高分子量DNA的制备、聚合酶链式反应选择性扩增β-珠蛋白基因片段、探针标记、分子杂交和放射自显影等技术。建立了PCR扩增单拷贝基因的直接双链基因组测序技术及绒毛和羊水的采集方法。建立了大规格的层析柱纯化血红蛋白组分的方法,并运用离子交换法和超滤技术浓缩分离的血红蛋白稀溶液。改进了微晶纤维素薄层指纹法,采用高压电泳取代常规电泳。采用高效液相色谱进行氨基酸组成分析,并用邻苯二甲醛显色,用DABITC/PITC双偶联法测序。建立了“薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦”技术,并用于血红蛋白病的诊断。
[成果] 6000012508 湖南
R55 应用技术 医学研究与试验发展
成果简介:人工红细胞G6PD陷症是人类遗传性酶病中发病率最高的一种常见病和多发病。该研究应用薄层等电聚焦技术测定人工红细胞G6PD同工酶,发现了16条同工酶带,其分辨率显著高于国内外同行学者研究水平。在此基础上又作了改进,使该方法更简便、快速,加样量少,其结果仍与原法一致,形成独特的微量法检测G6PD同工酶技术。该研究还研制了一种定性筛查G6PD缺陷症的方法及诊断盒。应用该法不仅具有取血量少、操作容易、结果迅速可靠的特点,而且可直接在农户家中检测。这与国内外学者已建立的11种定性筛查法比较,是一技术上的突破,它可直接应用于症疫防治发病现场,保证疟疾防治工作顺利开展。
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