成果简介：异基因造血干细胞移植已成为根治血液系统恶性疾病的有效治疗手段，而移植后并发症严重影响移植受者的生存率和生存质量。移植物抗宿主病(GVHD)和肝静脉闭塞病(HVOD)是其中最常见、最严重的并发症，探索二者的发病机理及其防治策略具有重要的临床现实意义。因此，该项目重点研究移植相关并发症GVHD及HVOD的机制并探索其防治措施。主要技术内容：GVHD发生机理及防治策略研究：利用小鼠异基因造血干细胞移植(all-HSCT)模型，探索Th17、Treg等T细胞新亚群及内皮细胞对GVHD发病的影响，并解析其作用机制。基于小鼠模型筛选GVHD预警指标，并将系列指标用于GVHD患者的监测，拟合优化出一套适用于人体的GVHD预警指标和评价体系。立足GVHD早期预警，实践GVHD的临床抢先治疗。显著减少Ⅲ-Ⅳ度GVHD的发生，提高了all-HSCT的临床疗效。HVOD发生机理及防治策略研究：建立小鼠造血干细胞移植(HSCT)模型，分析移植受者肝窦内皮的损伤情况，明确HVOD发生的始动因素。利用内皮祖细胞对损伤内皮的修复功能，在HSCT中联合输注该细胞，探索内皮细胞修复在HVOD防治中的作用。利用成功构建的小鼠all-HSCT模型，探索HSCT并发HVOD动态监测的实验诊断指标，并行临床验证与推广。科学价值：探索Th17、Treg及内皮细胞等在GVHD发病中的作用和机制，有助于加深对GVHD的理解，促进新防治策略的孕育；建立了GVHD的预警系统和抢先治疗体系，为进一步提高allo-HSCT临床疗效提供支持；以内皮损伤为HVOD的研究重心，深入解析HVOD的发生机制并为HVOD的防治提供新的作用靶点，建立客观的HVOD的动态监测指标，提高HVOD的诊断与疗效评估。推广应用和实际效益：GVHD预警方案及HVOD动态监测的实验诊断在多家医院推广。该研究在SCI收录杂志、国内核心期刊等共发表相关论文95篇，其中SCI论文32篇，共被引用160次，其中他人引用132次。在国内外学术会议上进行专题讲座7次，地区学术会议专题讲座12次。培养博士及硕士研究生34名。

成果简介：技术领域：利用标点法系统地研究MRI-CT图像的融合算法，进行MRI-CT图像后的融合精度评价，探索医学图像融合的快速有效算法，寻求最佳融合算法，解决融合精度评价标准不统一、融合精度的不确定性问题，为脑部肿瘤术后进行放射治疗的患者寻找更有效的融合算法和精度评价标准提供指导，为医学融合图像用于临床放疗计划系统提供依据。主要内容：1.标点法定位图像的获取。采用在头膜外人工确定定位标记点，即标点法进行定位扫描将脑肿瘤术后拟行放射治疗的患者，运用CT和MRI相同扫描层厚、扫描范围和定位位置，获得相应图像然后进行快速配准与实时融合，可以减少通常情况下多次扫描带来的无法确定同一体位的问题，有效提高配准精度，方便实现快速融合。2.新的三角形外标记尺的方法，研制了三角形外标记尺定位装置，解决人工介入过多及误差问题，增加自动化程度，实现精确定位和快速准确的图像配准与融合过程。3.不同格式的医学图像影响着融合性能研究。4.对基于小波变换的医学图像融合算法进行研究。5.将非下采样Contourlet变换(NSCT)应用于医学图像融合。6.基于体外标记点的CT/MRI图像实时融合。7.CT/MRI扫描工作站仿真系统的研究与实现。8.基于CT/MRI融合图像的放射治疗计划系统的研究与实现。 项目的创造性成果：1.提出了一种基于小波变换的医学图像融合改进算法。2.首次将NSCT应用于医学图像融合，提出了一种非下采样Contourlet 变换(NSCT)医学图像融合算法。3.发明了基于外标记点的CT、MRI双机图像实时融合的新方法。4.发明了外标记点新的设置及标点法定位图像的获取方法。5. 获得了1项发明专利、5项实用新型专利和3项计算机著作权证书，在中文核心期刊上发表了5篇论文，EI会议论文2篇。特点：1.采用我们的定位标记点，可以减少通常情况下多次扫描带来的无法确定同一体位的问题，有效提高配准精度，方便实现快速融合。不仅可以降低各种客观因素对融合精度的影响，而且可以缩短融合时间，提高融合效率，在临床工作中更加实用。2.对医学图像快速融合算法进行了全面对比研究，提出的融合算法更加快捷方便，可以直接应用于放射治疗与放射诊断临床。3.开发的CT、MRI扫描工作站仿真系统，全真实现CT、MRI扫描工作站的功能，建立了CT、MRI双机图像快速融合的平台与环境。研究了基于外标记点的融合图像的二维放射治疗计划系统，有效提高了放疗计划设计的精度。应用推广：标点法MRI-CT图像融合在脑部肿瘤放疗中应用使用两年来，取得了巨大的社会效益和经济效益。现已在徐州医学院肿瘤研究所、徐州市二院、四院脑部肿瘤放疗中得到应用；开发的CT、MRI扫描工作站仿真系统已在已在第三军医大学、桂林电子科技大学、盐城职业卫生学院、滨州医学院等多家院校得到应用。现在已为我国医学影像设备教学做出了重要贡献，获得经济效益年均150余万元。

成果简介：急性缺血性脑血管病、癫痫、阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease;AD）已成为临床上危害人类健康的主要杀手，但至今未有有效的治疗措施。大量研究表明，突触后谷氨酸受体（主要是NMDA受体和Kainate受体）过度激活是上述病理过程中神经元损伤的主要的共同原因，又称兴奋性毒性（excitotoxicity）。但是，各种谷氨酸受体拮抗剂在临床试验中却未取得理想的治疗效果，治疗时间窗短且有较强的毒副作用，主要因为谷氨酸受体在正常的生理功能中也是不可缺少的。因此，比较生理与病理状态下兴奋性突触后信号传递的差异，有助于发现潜在的药物靶点，为开发神经保护药物提供新的线索。在兴奋性突触后信号传递的过程中，脚手架蛋白PSD-95起着募集上下游信号分子、传递兴奋性信号的作用，但其功能调控的分子机制尚不清楚。该项目主要围绕PSD-95介导的兴奋性突触后信号传递开展深入研究，并采用全脑和局灶脑缺血模型、Kainate致癫痫模型以及AD的beta-淀粉样肽（Abeta）神经毒性模型开展神经损伤保护的研究，取得了以下重要发现：1、发现Src家族酪氨酸蛋白激酶调节PSD-95的功能，鉴定出主要的磷酸化位点（Y523），更重要的是揭示了PSD-95Y523磷酸化具有重要的病理意义，发现PSD-95Y523磷酸化后可以增强NMDA受体介导的兴奋性。（代表性论文1）2、揭示了激活GABA受体抑制Kainate诱导的大鼠海马CA1和CA3区神经元的损伤，并减轻缺血性神经元损伤，其机制是通过抑制PSD-95介导的NMDA受体兴奋性、MLK3及其下游信号转导来实现的；发现MLK3信号通路也是Abeta引起神经元凋亡的关键通路。（代表性论文2、3、4）。3、揭示了AMPA受体激动剂预处理对脑缺血后的神经元有保护作用，其机制与促进Erk1/2、Akt的磷酸化有关。（代表性论文5）4、开展了靶向于特异性PSD-95信号复合体的神经保护策略研究，发现并验证了若干个神经损伤保护的潜在药物作用靶点。（二）科学价值1、该项目在国际上首次报道了PSD-95的酪氨酸磷酸化调节作用，提出了PSD-95Y523磷酸化增强谷氨酸兴奋毒性的新观点。2、该研究表明联合应用GABAA和GABAB受体的激动剂能显著抑制兴奋性神经毒性，并阐明了其分子机制；AMPA受体是兴奋性谷氨酸受体主要亚型之一，但其在神经元损伤中的作用一直不清楚，该项目发现AMPA受体激动剂预处理有显著的神经保护作用。以上研究提供了神经保护的新途径。3、基于PSD-95信号复合体的神经保护研究方面，筛选了2个基因治疗药物和1个小肽类药物，已申请发明专利2项（1项已进入实质审查阶段），有潜在的开发应用前景。（三）同行引用及评价该项目研究在国际生物化学领域以及神经科学领域的权威期刊BiochemJ（IF:5.155）、Epilepsia（IF:3.955）、JBiolChem（5.52）、Hippocampus（IF:4.609）等发表论文共27篇，其中SCI收录23篇，SCI影响因子大于等于3的论文有13篇（按发表当年影响因子计算）。20篇代表性论文被PNAS、JNeurosci等国际著名的SCI期刊他引112次，总引用131次。已鉴定的蛋白质化学修饰调节位点被国际知名数据库（PhosphoSitePlus:www.phosphosite.org）收录。主要发现和结论被国际神经科学领域权威期刊多次引证和正面评述，主要代表性论文还被国际权威杂志收入论文集并在国际大会上推出，有的代表性论文作为封面论文发表。

成果简介：长期高血糖引起的氧化应激、多元醇代谢通路激活、蛋白质非酶糖化、细胞因子表达失衡等从不同环节促进了糖尿病肾病(diabeticnephropathy，DN)的病理进程，其中高糖持续刺激下线粒体活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)的生成增加被认为是糖尿病并发症的共同上游机制。课题组的研究发现：高糖状态下，ROS大量产生，并通过上调TGF-β1，激活其下游的smads信号通路，导致了细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)的大量积聚，最终引起肾脏纤维化。而在此过程中，TGF-β1又可通过激活其下游的PI3K/Akt/FoxO3a信号转导通路，进一步促进ROS的释放，最终在高糖培养的大鼠系膜细胞(mesangialcell，MC)中形成了ROS生成的正反馈环路。针对DN复杂的发病机制，该项目组提出中药在DN的防治中可能会发挥重要的作用。该研究证实了黄芪甲苷(astragalussaponinI，ASI)、苄达赖氨酸(bendazaclysine，BDL)均可抗氧化应激、降低TGF-β1相对水平、抑制ECM的堆积等，具有一定的肾脏保护作用。但由于西药或是中药单体成分的作用相对单一，DN的发生发展又是受多种因素共同作用的影响，因此多靶点施治将更有助于延缓DN的病理进程。银杏叶提取物(Ginkgobilobaextract，GBE)是多组分的天然药物，该研究证实了其能显著提高抗氧化酶的活性、抑制糖基化终末产物(advancedglycosylationendproducts，AGEs)产生及醛糖还原酶(aldosereductase，AR)活性，并能明显抑制TGF-β1/smads信号通路异常所致的ECM的大量表达，并在形态学上可显著减轻肾小球系膜外基质增生和基底膜增厚，明显改善DN大鼠肾脏组织的病理改变。但由于其物质成分组成众多，因此探讨其药效物质基础及作用机理尤为重要。该研究将血清药理学、血清药物化学、药动学-药效学、复方效应成分动力学、药效学等研究方法相结合，初步证实了芦丁、槲皮素、槲皮苷、山奈酚、异鼠李素等13个成分为GBE防治DN的药效物质基础组成部分，并在该研究基础上建立了GBE中8个黄酮类成分同时定量与指纹图谱相结合的质量控制模式。该项目结题时累计发表系列论文23篇，其中SCI收录的9篇论文被SCI期刊引用77次，其中他引62次，且被Phytomedicine，Currdrugmetab，JChromatogrB，Tissueandcell，JPharmacolSci等国际权威学术期刊引用；国家核心期刊论文6篇。研究成果在结题后陆续发表论文7篇，其中SCI收录论文6篇。该项目共培养博士研究生2名，硕士研究生10名，获徐州市科技进步一等奖及淮海科技进步一等奖各1项，获江苏省高校优秀本科毕业设计优秀团队奖1项、三等奖3项。

成果简介：【科学技术领域】此项目属于分子药理学领域。涉及肾缺血再灌注（I/R）损伤的分子机制及药物防治作用研究。【主要技术内容】通过建立体内、外肾I/R损伤模型，采用免疫印迹、免疫细胞化学、形态学、光电镜技术、TUNEL、流式细胞术等多种方法和技术，本项目主要进行了三个方面的研究。①大鼠肾缺血再灌注期间，ASK1-MKK3/6-p38、JNK信号通路的激活及PI3K/AKT通路活性的下调，激活了JNK介导的外源性 (JNK-c-Jun-FasL-caspase3) 及内源性凋亡通路（Bcl-2/Bax--Caspase3），促进肾I/R伤诱导的细胞凋亡，从而加剧了肾组织损伤。②缺血前30分钟分别给予p38MAPK特异抑制剂SB203580、JNK特异抑制剂SP600125，显著抑制ASK1-MKK3/6-p38、JNK及其下游信号通路的激活；同时，抑制剂能拮抗肾I/R诱导的肾小管上皮细胞凋亡，改善大鼠肾组织病理损伤。表明，ASK1-MKK3/6-p38、JNK及其下游信号通路为防治肾I/R损伤的新靶标。③ 缺血前30分钟给予抗氧剂类药物银杏叶提取物、亚硒酸钠、依达拉奉分别抑制ASK1-MKK3/6-p38及JNK介导的通路，上调PI3K/AKT通路，抑制肾小管细胞凋亡，且明显减轻自由基所引发脂质过氧化损伤，改善大鼠肾组织病理变化。从而减轻肾I/R损伤。【特点】与其它国内外同类研究相比，本研究更为系统、全面，与临床结合紧密。具有创新性、实用性。首先，本研究更为系统、全面。不同于国内外其它仅仅着眼于一个或几个激酶对肾缺血再灌注损伤影响的相关研究，本项目首先系统揭示了MAPK信号通路中ASK1-MKK3/6-p38及JNK，JNK介导的下游信号通路在肾I/R损伤的调控机制，其次，进一步研究了上述通路与PI3K/AKT通路的串话对肾缺血再灌注损伤的影响。再次，进一步研究了药物通过抑制该通路防治肾I/R损伤的作用。该部分成果已经被包括《肝脏病学杂志》(IF: 11.4))等SCI收录期刊论文引用39次（附查新及检索报告）。其次，本项目与临床结合紧密。临床上肾移植、碎石等手术易产生肾I/R损伤, 给患者带来极大的痛苦。本项目组较早开展了预防应用抗氧剂、亚硒酸钠、依达拉奉保护肾I/R损伤作用及机制的研究。发现，缺血前预防上述抗氧剂能明显减轻肾I/R损伤。为临床防治肾I/R损伤开辟了一条新途径。为避免急性肾衰竭等并发症的发生有重要意义。【科学价值及同行引用评价情况】本项目揭示了MAPKs及PI3K/AKT通路调控肾I/R损伤的机制及药物保护作用。本项目的成功，为临床防治肾I/R损伤寻找到新靶点，开辟了新的治疗途径；同时为相关药物的研发奠定实验基础。因为我们较早开展了该研究，研究成果已被多篇SCI收录论文引用，他引37次。此外，抗氧剂类药物保护肾缺血的研究成果已被吉林大学、中国医科大学二十余家科研单位引用借鉴。应用范围涵盖了肾缺血，肝脏缺血、肺缺血损伤、老年肺心病等疾病的试验研究。Percoll法分离培养的肾小管上皮细胞数量多,均一性生长较好,接近组织原位RTECs 细胞功能和特征。被22篇相关研究应用。剪碎法制备肾组织单细胞悬液细胞形态完整、存活率高被十余篇文献引用。经教育部科技查新工作站检索，发表22篇论文。4篇发表在国际有影响的刊物上，10篇发表在国家级核心期刊。SCIE数据库：他引37次，单篇最高他引28次，中国引文数据库中有18篇，共被引用149次，其中他引135次。充分说明，本研究成果受到国内外同行专家的认可。

成果简介：(一)在方法学上的发现：在国际上首先筛选到霍乱毒素亚单位B与辣根过氧化物酶复合物(CB-HRP)作为神经示踪剂，能清晰标记脑内触液神经元。早在20世纪初，Trejakoff等学者就在第三脑室壁观察到有神经末梢伸入脑脊液中；1978年Coates等进一步发现，某些神经元的胞体直接浸于脑脊液中。此后，许多学者报道了不同种属动物脑脊液中或脑室壁上普遍存在着接触脑脊液的神经结构。基于这一事实，1989年Vigh-T将中枢神经系统内这种特殊类型的神经元，统称为接触脑脊液神经元，简称触液神经元(thecerebrospinalfluid-contactingneuron)；但上述报道大多是依据胞体或突起与脑脊液的接触关系，属于紧临脑室壁的室管膜内或位于室管膜上的细胞，不难直接确认；对于远离室管膜的脑实质内是否存在触液神经结构？多年来由于没有特殊标记方法能将脑实质的触液神经元与非触液神经元鉴别开来，不仅对脑实质内是否存在接触脑脊液神经元一直没有明确的结论，而且进一步探索其功能意义就更是一筹莫展，无法取得实质性突破。CB-HRP是一种公认灵敏的外周神经示踪剂；但能否用来标记位于中枢内的远位触液神经元，国内外没有先例。(二)脑实质内触液神经元系统的分布及接触脑脊液神经核团的发现采用上述课题组自行发现与创立的标记方法，课题组系统报道了各类触液细胞在脑内的分布：⑴接触脑脊液的伸长细胞(Tanycyte)：胞体位于脑室壁上，突起伸入脑实质；⑵接触脑脊液的胶质细胞：胞体位于脑实质，突起伸入脑脊液，这一发现为胶质细胞的传统认识观念提出了新的神经生物学基础；⑶远位接触脑脊液神经元：胞体位于脑实质，突起伸入脑脊液。其分布特点是：在许多脑区，如隔外侧核、丘脑前背核、乳头体上核、第四脑室底灰质和外侧上橄榄核等仅见有零星、散在的分布，但在脑的某个特定部位，课题组首次发现大量的远位触液神经元，恒定地密集此处；它占据一定的空间体积，并构成境界分明的神经细胞簇；因此，课题组暂将其定名为“接触脑脊液神经核”，简称“触液核”(CerebrospinalFluid-ContactingNucleus,CSF-CN)。(三)触液核内触液神经元超微结构特征、突触联系方式、信息传递方向的发现发现了触液核内Dcsf-CN与脑内非触液神经元的多种突触关系；证实Dcsf-CN在脑实质、血液与脑脊液之间起双向信息传递的形态学基础。(四)触液核内触液神经元神经活性物质(递质、受体、离子通道等)的分布课题组以CB-HRP示踪与特定物质双标技术证明了Fos，Nnos，GABA，5-HT及其受体，SP及NK-1受体，P38mapk，ERKs，JNK，TRPM8，Drebrin，IL-1B，CaMKⅡa，TRH，TRPV1，TRPC6等10余种神经活性物质在CSF-CN中的分布，并初步揭示CSF-CN内物质表达与疼痛、应激、吗啡依赖/戒断等生命活动的关系。(五)触液核与疼痛、应激、吗啡依赖与戒断等生命活动关系的发现课题组在国家和省自然科学基金支持下，通过核团内注射毁损剂和经脑脊液途径靶向毁损触液核、结合行为学观察，发现触液核与疼痛、应激、吗啡依赖与戒断等有关；并以脊髓水平的调制研究为基础，以触液核为靶点，初步揭示了触液核在脊髓上水平参与上述生物现象的部分细胞与分子机制。2.触液核对脊髓水平痛觉调制的影响：通过对神经病理性痛与炎性痛状态下，大鼠触液核与脊髓水平痛物质表达与行为学变化的研究，初步证实：(1)脊髓初级传入中枢神经元敏感化与脊髓上水平的触液核在与伤害性刺激相关的中枢敏感化的发生、发展和维持过程中分享一些共同的细胞和分子机制；(2)首次揭示了触液核内SP介导病理性疼痛的部分分子机制，外周伤害性刺激不但引起触液核内痛物质的高表达，同时还伴发应激相关激素水平的上调，这一新发现将拓展和加深课题组对触液核在痛觉调制中的确切作用机制的研究；(3)通过靶向毁损技术与行为学、形态学与免疫印迹等分子生物学技术相结合，课题组发现触液核介导了下行痛觉易化调节。下一步将结合应用功能基因组学等新方法，以触液核缺失模式生物为靶标，更深入地揭示触液核在上、下行易化调节中起确切作用的分子机制，从而有望实现经脑脊液途径对病理性疼痛与吗啡依赖/戒断的治疗寻找到新的确切分子靶标。(六)小结：综上所述，该项目对接触脑脊液神经核团的发现及其物质分布和功能探索，在理论上不仅揭示了“触液核”的神经解剖学结构特点、突触联系方式、信息传递等客观规律，还以触液核为靶点初步研究了脑—脑脊液—脊髓水平信息传递规律，从而从一个新的角度初步阐述了药物依赖/戒断、应激和病理性疼痛等生命活动现象发生发展和维持的部分机制，拓宽和加深了课题组对吗啡依赖、应激和病理性疼痛的认识；在应用上，该研究阐明了一些信号通路作为药物依赖/戒断以及病理性疼痛治疗新靶点的可能性，这将为临床戒毒和镇痛药物的开发提供理论依据和新的思路。

成果简介：疼痛是临床上最常见的症状之一，吗啡是临床上最常用的镇痛药。但长期应用吗啡导致的耐受和依赖大大限制了它的应用。吗啡依赖性可分为精神依赖性和躯体依赖性。以戒断反应为特征的躯体依赖不仅进一步加重精神依赖性，且由其引发的痛觉过敏等症状导致患者不愿接受戒毒或戒毒后复吸。大量的研究已证实脊髓神经元可塑性变化参与痛觉过敏的形成和发展；课题组早期的研究也发现脊髓神经元敏感化(可塑性的一种形式)介导吗啡戒断反应。因此，课题组提出吗啡戒断引起的脊髓神经元敏感化与伤害性刺激相关的中枢敏感化的发生发展和维持分享一些共同的细胞和分子机制的观点。该项目综合运用行为学、神经电生理学技术、形态学、神经药理和分子生物学等方法，从细胞—分子—整体行为等多层次系统地证实了这一观点。课题组的发现包括：①脊髓水平NMDA-NO/ERK-CREB/Fos信号通路及NO和ERK之间的相互调节介导外周炎症或神经损伤引起的痛觉过敏和吗啡介断反应(包括戒断反应相关的痛觉过敏)；②EphrinBs/EphBs-MAPK-CREB/Fos通路通过改变脊髓神经元可塑性参与痛觉过敏和吗啡戒断反应；③脊髓水平基质蛋白酶9，而不是基质蛋白酶2参与吗啡戒断反应；因此课题组认为脊髓神经元敏感化是痛觉过敏和戒断反应的细胞学基础，病理性疼痛和吗啡戒断状态下各种信号通路在胞内的异常整合形成脊髓神经元敏感化的神经化学基础，MAPK通路及其下游的转录因子CREB、Fos的激活是脊髓神经元敏感化维持并进一步介导行为改变的最后通路。科学意义：(1)在理论上，该研究从一个新的角度阐述了药物躯体依赖(戒断反应)和病理性疼痛的发生发展和维持机制，进一步拓宽和加深了课题组对吗啡躯体依赖性和病理性疼痛的认识；(2)在应用上，该研究阐明了一些信号通路作为药物耐受和依赖以及病理性疼痛治疗新靶点的可能性，为临床戒毒和镇痛药物的开发提供理论依据和新的思路。该研究发表系列论文31篇，其中SCI收录论文25篇，最高影响因子7.178，其中影响因子大于4的论文共10篇，影响因子共计90.641；论文被SCI收录期刊引用188次，其中他引160次；被影响因子大于5的SCI杂志引用46次，其中他引共31次。一篇论文获得首届中国百篇最具影响的优秀国际学术论文。一篇论文入选Facultyof1000Biology。

成果简介：本项目属神经科学与基础医学交叉学科范畴。这是一项历经近17年的研究成果。　　早在1992年，我们就筛选到CB-HRP能可靠标记中枢神经系统内接触脑脊液神经元（简称触液神经元）。这一发现为开展同类研究提供了科学可靠的方法学基础。　　藉此基础，我们系统证明了伸长、胶质、远位等各类触液神经元在中枢神经系统的确切分布，发现了脑实质内存在接触脑脊液神经核团（简称“触液核”）这一新的客观现象；该核团的最显著特点是，其内神经元的胞体，位于脑实质，突起伸在脑室系统的脑脊液中，推测可能在脑－脑脊液信息传递、物质转运或功能调控中发挥特殊的桥梁作用。此前，人们对其功能意义尚一无所知。我们以自行发现的特异方法，首先明确了该核团在脑实质的空间位置、占位大小和立体定位坐标；首次揭示了“触液核”内触液神经元的超微结构特点、突触联系方式、信息传递的方向、递质受体分布等客观规律。为揭示其在机体调节中的作用奠定了坚实的工作基础。　　神经病理性疼痛、应激、吗啡戒断与依赖等是当今多科学领域共同关注的热点问题，迄今机理不明。为探索触液核与上述重要生命活动的关系，我们在制作内脏痛、神经病理性疼痛、噪声应激、吗啡戒断与依赖等动物模型的基础上，考察了激活及毁损“触液核”，对上述生命活动行为学的影响，同时测定了触液核物质变化与脑脊液物质变化的关系，揭示了触液核在上述生命活动中的重要作用与地位。进一步提示了触液核（脑）－脑脊液－脊髓－外周神经这一新的痛信息传递与调控路径。　　上述研究不仅技术上为进一步对触液核进行微透析、推挽灌流、靶向毁损等在体研究提供了不可缺少的方法学基础；也将为揭示脑的形态与功能奥秘提供了新的认识；不仅为阐释生理或病理状态下脑脊液中物质变化的起源提供了形态学依据，也为通过脑－脑脊液途径人为施加恰当的影响，实现对脑和机体生命活动的调节乃至某些疾病的诊断、预防和治疗提供新的理论依据。　　我们的研究结果多属原创，具有完全自主知识产权。

成果简介：对围术期常用药物的相互作用进行了二十多年的研究，主要做了以下工作： 1．发表了百余篇论文、著作、综述、专论、译文。 2．提出了“协同”、“ 拮抗”的新定义。 3. 提出了评价药物相互作用定量新公式——等效剂量合并法。 4. 建立了测定清醒小鼠呼吸、自主活动、电刺激测痛及兔颈总动脉给药等模型。 5．增加了挥发性全麻药注射及氯胺酮灌胃、滴鼻等给药新途径。 6．观察了百余种围术期常用药物的相互作用。

成果简介：由于全身麻醉主要由全身麻醉药引起，针刺麻醉、激光麻醉等非药物麻醉所占比重极少，因此，全麻原理主要指全麻药的中枢作用机理，即全麻药在中枢神经系统的作用部位和分子机制。1.全麻药中枢作用机制是当今生命科学研究的前沿、热点课题之一。项目组经过了20年研究和积累，应用生命科学的多学科知识与技术，在整体、细胞和分子水平系统研究了全麻药的中枢作用机制，获得了一些富有新意的发现和结果。2.阐明了吸入麻醉药的作用部位是广泛的、弥散的，发现一批麻醉相关神经核团、受体(NMDA、P物质、甘氨酸、GHB、烟碱)和酶(ATP,NOS)。发现GABA、M胆碱、阿片等受体与全麻药镇痛、催眠作用无关。3.提出“全麻原理研究必须多学科、多水平、多方法联合攻关”、“全麻药中枢作用是多部位、多机制的”、“神经生化等改变必须与行为变化相平行且超前，方可能是全麻的原因”、“全麻原理研究必须先对镇痛、催眠、遗忘等作用分别进行研究，然后再进行综合研究"等观点，为今后的深入研究积累了厚实的基础。4.建立和改进了6种实验方法，并首先把定量药物脑电图用于麻醉深度监测和全麻原理研究，证实定量药物脑电图可能成为监测麻醉深度的无创、实时、简便、数字化并能反映疼痛程度的方法。

成果简介：技术说明：逆转录病毒、腺病毒及腺相关病毒是基因转移中常用的载体，但这些载体各有其缺陷性。课题组近十年来，一直围绕慢病毒载体的结构改造、优化及应用，开展了较为系统和深入的研究，结果如下：1.技术内容：该项目主要进行了三个方面的研究：①构建了来源于人类免疫缺陷病毒－1的慢病毒载体三质粒包装系统，通过引入PPT元件、更换其内部启动子及对转移质粒进行改造，初步比较4种内部启动子驱动GFP表达的效率，并在载体的3′LTR中，删除启动和增强序列，用四环素反应原件取代U3区，以实现目的基因表达可控性。②制备慢病毒载体转导的单纯疱疹病毒1型胸苷激酶(HSV1-TK)或突变型单纯疱疹病毒1型胸苷激酶(HSV1-sr39TK)基因工程T细胞，并观察HSV1-TK/HSV1-sr39TK-丙氧鸟苷/无环鸟苷(GCV/ACV)系统对小鼠T淋巴细胞的杀伤效应。建立小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型，评价HSV1-TK/GCV或HSV1-sr39TK/ACV系统在防治小鼠aGVHD中的作用。③构建含B区缺失的凝血因子VIII(FVIII)基因的慢病毒载体，在体外观察慢病毒载体是否能够介导FVIII体外的有效表达，在体内观察其是否能长期稳定表达。2.技术指标：①成功构建了含PPT元件和不同内部启动子的慢病毒载体，其中以CMV启动子效率最高；并改造和优化出条件性自身失活慢病毒载体。②成功构建HSV1-TK/HSV1-sr39TK基因工程T细胞。并在体内实验证实，HSV1-TK/GCV系统能够有效控制小鼠Agvhd，且早期用药效果优于发生Agvhd后治疗性用药。③携带凝血因子基因FVIII的慢病毒载体在体外可以有效感染靶细胞并表达有活性的FVIII，同时在小鼠体内也获得了相对稳定的表达。应用前景：课题组将改造和优化出条件性自身失活慢病毒载体应用于小鼠Agvhd防治及血友病A的基因治疗的研究，得到了较为满意的结果，为防治Agvhd研究的提供了新的思路，为血友病A的基因治疗开辟了新的研究方向。慢病毒载体作为一种理想的基因转移工具，其应用前景广泛：①由于其对哺乳动物细胞具有泛噬性，可作为多种细胞的基因转移工具，可应用于其他系统疾病的防治研究；②能感染非分裂期细胞，可将其应用于正常干细胞及肿瘤干细胞的基因修饰，从而为发育生物学及肿瘤生物学的研究提供基因转移工具；③由于实现了对目的基因条件性表达的调控，可将其应用于特定基因的功能研究；④由于其包装容量大，可将其应用于携带其他更多的目的基因用于实验研究；⑤对于血友病A的基因治疗争取尽早进行大动物实验研究；⑥在Agvhd的防治研究中，更深入研究突变型HSV1-TK/GCV(ACV)系统的作用，筛选出毒副作用较小的前体药物。

成果简介：一、项目资金来源项目　　1、国家自然科学基金项目，编号：30570564　　2、教育部科学技术研究重点项目，编号：204055　　3、江苏省教育厅自然科学基金资助项目，编号：02KJB310009　　二、本项目系应用基础研究　　胶质细胞源性的神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF）能够有效地保护DA能神经细胞阻止其变性死亡，是神经营养因子中有希望用于帕金森病治疗的一种。　　2003年Paratcha等提出一种神经细胞粘附分子（neural cell adhesion molecule,NCAM）可以作为GDNF家族的一个信号转导受体。对NCAM的研究揭开了粘附分子作为GDNF受体研究的序幕。大量的研究表明integrinβ1、N-cadherin，作为与NCAM有着类似特性的粘附分子，也能作为信号转导受体传递信号。有鉴于此，我们多年来致力于GDNF新型受体及其机制的研究。　　三、我们的研究目标：　　1、观察三种粘附分子（NCAM、integrinβ1、N-cadherin）在正常大鼠和模型鼠不同时期脑黑质DA能神经细胞中的表达，以揭示粘附分子参与DA能神经细胞保护机制的可能；　　2、建立帕金森模型，研究这三种粘附分子对GDNF保护DA能神经细胞的影响；　　3、观察三种粘附分子与GDNF之间是否能够结合；　　4、在加入GDNF这一因素的作用下，观察三种粘附分子的表达、结构以及位置的变化；　　5、研究脂筏是否参与粘附分子介导GDNF保护DA能神经细胞的作用，揭示粘附分子作为GDNF受体的平台；　　6、揭示粘附分子介导GDNF保护DA能神经细胞的胞内信号通路。　　四、本项目取得的成果　　1、NCAM能够通过增加钙结合蛋白表达来介导GDNF保护DA能神经细胞的作用，且此生物学作用发生在脂筏这一平台上。　　2、integrinβ1能够介导GDNF保护DA能神经细胞的作用，且需要脂筏这一平台。　　3、N-cadherin能够通过激活下游的PI3K/AKT信号通路来介导GDNF保护DA能神经细胞的作用，且不需要脂筏这一平台。　　4、脂筏在GDNF保护DA能神经细胞的过程中发挥着重要的作用　　五、本研究项目处于国内外领先水平　　本项目率先系统地研究了三种粘附分子，即NCAM、integrinβ1、N-cadherin，在GDNF保护DA能神经细胞过程中的作用。目前国内外对这三种粘附分子作为GDNF受体的研究较少，尤其是系统性的对比研究，以及加入脂筏这一因素的研究更寥寥无几。

成果简介：本研究主要作为应用基础方面的成果，较全面地揭示了药物毒性、激素和受体水平改变对当前临床上最常见的心衰、缺血性心脏病的影响及其机制。我们认为，我们的工作将会对这个领域的研究具有促进和推动作用，为研究心衰、缺血性心脏病的机制及临床防治提供了新的理论、实验依据和研究途径，从而丰富了基因治疗心衰、雌激素替代疗法、药物处理等重大课题的研究内容。我们相信，其推广应用的前景是广阔的，为进一步寻找防治心衰、缺血性心脏病的对策和药物作用的靶点提供了思路。

成果简介：一、任务来源：1、HIF-1α和ki67双siRNA干扰对脑胶质瘤干细胞分化、增殖的影响（江苏省医学领军人才项目）；2、NEDD4-1调控PTEN/Akt、HIF-1α信号通路对脑胶质瘤侵袭性作用的研究（江苏省“333”中青年科技领军人才资助项目、“六大人才高峰”资助项目）；3、脑胶质瘤分子影像学MR技术的临床与病理研究（江苏省卫生厅课题）；4、siRNAs特异性阻抑脑胶质瘤HIF-1α表达实验研究（江苏省卫生厅重点课题）。二、技术内容：运用蛋白质沉降（pulldown）、蛋白免疫共沉淀等生化和分子生物学方法，阐明脑胶质瘤发生发展的新的信号通路。应用分子影像学MR成像技术在分子水平上成像，术前判断肿瘤恶性程度、术后早期判断有无复发。三、社会效益与存在问题：本研究有望为胶质瘤治疗提供新的思路。发表论文28篇，其中SCI收录3篇，中华医学会系列杂志14篇，具有较高应用价值。此方面研究多次获得省级课题资助。克隆的人源性HIF-1α基因序列6次被国外重要的学术期刊发表的论文引用，提取的HIF-1α质粒被国内十余家科研单位使用。该项目采用分子影像学MR成像技术在分子水平上无创实时成像，产生了重大社会经济效益：1、开展了2次江苏省继续教育项目，在2008年徐州市神经外科年会、2009年中华神经外科年会和江苏省神经外科年会上做大会报告。2、从2007年8月至2010年3月，检查治疗361例颅脑肿瘤；97例胶质瘤。3、经济指标：磁共振功能学检查方便、快速、无创，在门诊即可完成。关于基础研究存在一定局限性：仅采用2种常见的脑胶质瘤细胞系，且胶质瘤细胞增殖、侵袭的机制研究尚不深入。四、创见与创新：1、首次成功地从人脑胶质瘤细胞中克隆出人源性HIF-1α基因，其基因序列已被美国科学院登记收录国际基因库（GenBank序列号：AF304431），被中国科技部评选为2000年中国十大基础研究科技侯选项目，（全国20项，江苏省唯一一项）。2、构建的HIF-1α质粒被中国科学院微生物研究所、昆明医学院神经科学研究所等10多家科研单位采用，在国内有一定的影响。3、探索NEDD4-1在脑胶质瘤发病中的作用，填补NEDD4-1在脑胶质瘤中的研究空白。提出NEDD4-1下游新的作用靶点。4、研究发现HIF-1α、MDR1、Survivin、FoxM1B、hTERT的shRNA可抑制胶质瘤细胞的生长与增殖，且双基因干扰法较单基因干扰法效果更强，为胶质瘤提供新的作用靶点。5、通过研究发现：DNA-PK、Ku86活性与胶质瘤化疗药物DDP的耐药性有关(正相关)，且发现DNA-PK活性与胶质瘤分级有关（正相关）。6、本项研究以先进的3.0T MRI功能成像作为研究核心，术前准确判断肿瘤的恶性度；评判手术及放化疗的效果、指导肿瘤的诊断治疗和估计预后，国内外报道甚少。

成果简介：布—加综合征介入治疗研究的技术核心是治疗的安全性，成功率和远期效果三个方面。在进行安全性的研究方面，做了以下工作：1.术前尽可能通过非创伤性手段了解下腔静脉或肝静脉阻塞类型。通过与超声科、影像科的通力合作，互相交流和联合攻关，提高超声、CT、MRI诊断的敏感性，特异性，和正确率，为制定科学、合理、安全的治疗方案打下了牢固的基础。2.由于下腔静脉阻塞的存在，导管和导丝无法通过闭塞处，必须使用较坚硬的钢针穿刺闭塞段，此操作称之为破膜穿刺。破膜穿刺不仅是布—加综合征的介入治疗中关键性操作步骤，而且也是发生严重并发症的关键时刻。在不断总结经验的基础上，提出了根据血管闭塞端形态决定破膜穿刺方向的科学观点。开创了采取由上向下穿刺的安全操作技术，避免了误穿刺心包腔而发生心包填塞的严重并发症。3.肝静脉闭塞为布—加综合征介入治疗中的难题，部分病例需要直接经皮经肝穿刺肝静脉，经皮经肝穿刺肝静脉并行顺行性破膜穿刺和球囊扩张。国外文献报告要采用经皮经肝途径插入球囊导管和放置内支架，此种操作方法具有对肝组织损伤重，易发生穿刺点出血和腹腔出血之严重并发症。课题组在经皮经肝破膜穿刺成功后，将导丝从颈静脉引出，然后经颈静脉途径插入球囊导管或放置导管内支架，此项技术将经皮经肝穿刺对肝脏的损伤降低导最低程度，同时大大提高了介入治疗的安全性。在提高介入治疗布—加综合征成功率方面做了以下研究：在下腔静脉和肝静脉长节段和厚膜型闭塞的病例中，破膜穿刺成功后，球囊导管难以通过闭塞段，此时，需要使用粗大的扩张管或小球囊对闭塞段进行预扩张，然后再给以大球囊扩张，该操作不仅费时，而且增加了病人的经络负担。课题组首创的导丝贯穿技术，代替了球囊或粗大扩张管的预扩张，使复杂、疑难病例的成功率不断提高。2000年以来，下腔静脉阻塞的介入治疗成功率达到了99.5%，达到了国内和国际上最高水平。肝静脉阻塞时可以合并副肝静脉阻塞。在部分病例中，由于肝静脉长段闭塞和合并大量腹水，使经皮经肝穿刺无法进行。课题组首创了副肝静脉成形术，由于开通副肝静脉具有和开通肝静脉同等的价值，使副肝静脉成形术成为解决肝静脉阻塞介入治疗难题的有效方法。由于了开创了副肝静脉成形术，使肝静脉介入治疗成功率达到了94%的最高水平。近几年来，来自外省市首次治疗未能取得成功的病例远道而来该院，在该院均取得了成功的治疗。下腔静脉阻塞合并血栓形成曾被认为是介入治疗的禁忌症。在冲破这一禁忌症的研究中，课题组大胆采用了先溶栓，配合血管内支架植入技术，充分发挥了血管内支架固定血栓和支撑管腔的双重作用。有效地解决了下腔静脉阻塞合并血栓形成介入治疗的难题。在提高远期效果方面做了以下研究：1.肝静脉和下腔静脉阻塞使用球囊扩张后即刻效果显著，但是由于血管的弹性回缩可以导致再狭窄的发生，而再狭窄是影响远期疗效的重要因素，在选用球囊大小方面课题组从最初使用23mm球囊逐渐扩大到25mm、28MM和30mm，下腔静脉支架直径由24mm扩大到30mm。上述研究降低了再狭窄和提高了远期疗效。2.介入治疗后再狭窄的发生是影响远期效果的重要因素。而再狭窄的发生与血栓形成之间关系密切，因此术后正规、有效的抗凝是治疗再狭窄的措施之一。由于多数患者来自农村，其文化水平相对较低，对术后抗凝认识不足，对术后和出院后医嘱执行不到位，导致肝静脉和下腔静脉成形术后再狭窄的发生。为此课题组制定了布—加综合征出院医嘱，交给每一位出院病人。在出院医嘱上详细告知病人出院后按医嘱服用抗凝药物和定期复查超声和凝血功能的时间安排，取得了病人的合作和好评。应用及推广情况：2004年，由祖茂衡教授主编的《布—加综合征的影像诊断与介入治疗》一书被刘玉清院士评价为国内首部具有权威性专著，该书已成为国内布—加综合征介入治疗的工具书和参考书。由于在临床研究中首创了经皮经肝与经颈静脉行肝静脉成形术，副肝静脉成形术，血管内支架植入治疗下腔静脉阻塞合并血栓形成和导丝贯穿技术四项新技术。近10年来，多项新技术已被通过去外院会诊的形式而在国内上海、重庆、成都、西安、济南、青岛等三级甲等医院扩大应用。布—加综合征患者由于疾病的原因导致劳动能力丧失，不仅患者遭受身心的伤害，更导致数以千计的家庭因病致贫，给社会和家庭带来了沉重的负担。布-加综合征患者经介入治疗后在一周内即可恢复正常。故该项研究不仅使数以千计的患者恢复了健康，同时为社会和患者家庭减轻了负担，其社会效益显著。

成果简介：科学技术领域：该项目属于药学领域，对绿色制药理念进行研究，形成了具有自主知识产权的、处于国内领先水平的生产手性氨基化合物绿色化工专有技术。项目情况：该项目获得以下资助：萃取法提取苯丙氨酸，2006年度国家火炬攻关项目，项目编号：Z20060106；采用清洁生产技术提取酪氨酸，2003年度国家科技产业化项目，项目编号：2003EE880055；氨基化合物在药物领域综合利用研究，项目编号：横向委托。(1)化学生物转化法制备D-氨基酸和多胺类物质该项目采用微波促进化学反应技术进行高效L-氨基酸化学消旋和酶催化生物转化制备高附加值的医药中间体D-氨基酸，同时还可得多胺类化合物。该技术在国内外、省内外相关行业具有较强的竞争力，该研究成果可应用于氨基酸产业结构的调整及促进氨基酸产业的发展，该方法具有广阔的市场化前景。应用的新技术：微波反应技术、生物转化技术、细胞固定化技术。已与徐州市化工研究所签订成果转让合同，合同名称“Ⅱ型糖尿病药那格列奈关键中间体D-苯丙氨酸制备技术”，于2008年8月进行试生产，已累计新增产值100万元，获利20万元。已申请专利5项，其中4项已授权。(2)氨类化合物组合拆分剂在D-萘普生的制备应用技术应用“组合拆分法”制备D-萘普生制备技术，具有生产成本低和环境保护好等优点，在国内同类产品竞争对手中有很强的竞争力，产品比市场上同类产品平均低10%左右，生产过程技术含量高，国内市场上尚无此相同工艺与之竞争。应用的新技术：组合拆分技术。已与徐州市化工研究所签订成果转让，合同名称“非甾体抗炎药D-萘普生手性拆分技术”，于2008年6月进行试生产，已累计新增产值150万元，获利10万元。同时徐州化工研究所又将该项目研究成果“DL-萘普生制备技术”技术转让给江苏成正化工有限公司，已正式立项，“徐州市经济贸易委员会企业投资项目备案通知书，备案号：3203000901361”，确立了年产600吨的DL-萘普生的建设，以提高企业的生产技术水准。为此公司为该项目获批规划用地34000m<'2>(折38亩)，总建筑面积25000m<'2>，固定资产投资10275万元，加强了对“非甾体抗炎药D-萘普生手性拆分技术”的现实应用前景。

成果简介：本项目为自选项目，来源于医学教学具体实践，我们深刻分析当前医学工程技术尤其是影像技术及设备教学的实际需要，充分研究当前国内外发展状况，立足自身科研特色，创造性开发出系列化具有独立知识产权的教学产品。　　项目包括两部分创新内容。一是大型医学影像设备仿真操作训练系统的开发；二是钴60治疗机教学模型的研制。　　提出利用计算机仿真、数据库、图像处理、虚拟现实和三维重建等多项技术开发大型医学影像设备仿真操作训练系统用于医学教学实践的方法，设计并实现了具有自主知识产权的系列化仿真操作训练系统：“CT扫描工作站仿真教学系统”；和“MRI扫描工作站仿真操作训练系统”。　　提出用光源代替放射源，开发一套钴60治疗机教学模型，可以解决钴60治疗机实验课无法避免高放射性的难题，获得实用新型专利1项。上述成果已在医学影像设备实验教学中取得很好的应用。　　系列化仿真操作训练系统和钴60治疗机实验教学模型在医学教学领域具有重要推广价值。可以在全国百余所医学院校和百余所医学职业技术学院推广使用，是医学院校学生实习和在职医务人员实训的优秀平台。　　大型医疗设备仿真操作训练目前还没有成型产品，开发系列化大型医学影像设备CT、MRI仿真操作训练系统，可以解决医学影像设备“只能看，不能摸”的问题。“钴60治疗机实验教学模型”的成功开发，填补了国内空白。上述原创性成果，已在医学影像设备实验教学中取得很好的应用。　　系列化仿真操作训练系统和钴60治疗机实验教学模型在医学教学领域具有重要推广价值。可以在全国百余所医学院校和百余所医学职业技术学院推广使用，可以使广大以医学生尤其是医学影像学专业学生的对设备原理的理解，可以进行充分练习使其尽快掌握使用技术。　　成果2006年、2007年获得了国家版权局计算机软件著作权证书2项，获得院科技创新大赛一等奖；2008年获得实用新型专利1项，2009年获得校教学成果一等奖2项。

成果简介：一、经纹状体定位注射6-OHDA而制备早期帕金森病（PD）大鼠模型。　　以往的PD模型建立，多通过前脑内侧束定位注射6-OHDA，注射28后用阿朴吗啡诱发旋转来建立PD模型，这样的PD模型，动物中脑黑质DA能神经元几乎完全被破坏，属于较晚期PD模型，适用于晚期PD的治疗研究，不能满足于早期PD研究需要。而我们纹状体内注射6-OHDA后第7天，检测其行为学的姿势不对称性、前肢始动不能实验、前肢使用不对称性这三项指标，结果均出现有统计学意义的改变，因此建立早期帕金森病大鼠模型。在相同的时间点，取模型动物中脑黒质节段作免疫组织化学染色及焦油紫染色进行细胞计数，结果细胞数目减少与其行为学变化一致，进一步证明制备的早期PD大鼠模型的科学性，为早期PD研究建立动物模型。　　二、研究PD早期大鼠模型，黑质内是否存在神经干细胞，并进一步观察其增殖和分化的情况。　　Lie等研究发现，成年大鼠黑质内含有少量分裂状态的神经祖细胞，而PD早期大鼠黑质内是否存在神经祖细胞？目前未见报道。我们将PD早期大鼠模型，于纹状体内注射6-OHDA后第7天、10天、14天、17天、21天、24天、28天共7个时间点分别处死动物，用免疫组织化学方法检测其黑质内神经干细胞和神经元前体细胞及分化状况。结果表明PD早期大鼠纹状体内注射6-OHDA导致中脑黑质多巴胺能神经元变性死亡后的第14天左右一段时期内，能诱导黑质内神经干细胞大量增殖，并向神经元前体细胞分化。其结果提示：黑质内这些神经干细胞和神经元前体细胞，极有可能在适宜的内环境或某些细胞因子作用下分化为多巴胺能神经元，作为内源性细胞再生的细胞来源。　　三、黑质内GDNF或GDNF+EGF联合注射，能促进PD早期大鼠黑质内神经元前体细胞向多巴胺能神经元方向分化。　　PD早期大鼠于纹状体内注射6-OHDA后第7天，黑质内注射EGF+GDNF，通过免疫组织化学方法，Western blot半定量分析及行为学检测进行研究，结果表明GDNF能促进PD模型大鼠黑质内神经元前体细胞向多巴胺能神经元方向分化，EGF对GDNF的作用起到促进加强的作用。为内源性细胞替代疗法治疗PD提供理论基础。

成果简介：在促血管生成基因治疗中，由于单基因作用时效点不符合血管生成的生物学特征，诱生血管结构及功能欠佳，转染基因过表达副作用不易控制。本研究根据血管生成的生物学特征，对缺血心脏联合转染不同时相促血管生成因子（VEGF/Ang-1），通过主动性调控转基因适时、适度表达，探索序贯调控多基因促血管生成治疗缺血性心脏病的新策略。本研究以rAAV为载体，分别构建HRE-hVEGF165 /rtTA2s-S2-TRE-ANG-1，同期转染兔缺血心脏模型/心肌细胞，以缺氧/复氧及加入/撤除Dox，“启/闭”HRE/Tet-on基因开关，序贯调控hVEGF165/Ang-1基因适时、适度表达，发挥协同促血管生成作用。结果表明，转染hVEGF165长期表达所促生血管结构及功能尚存不足；在HRE/Tet-on系统序贯调控下，转染hVEGF165/ Ang-1基因适时、适度表达，所促生血管密度、血管成熟度、血管灌注及缺血心脏整体功能均显著优于hVEGF165/Ang-1单基因转染及联合转基因非调控组。此外，也有效减少转基因过表达的副作用。本研究为序贯调控多基因促血管生成治疗缺血心脏病提供了有益的实验依据。

成果简介：此项目是多种基因失活技术阻断Ki67基因治疗肾癌的临床基础研究。受到国家自然科学基金（3项）、863计划、卫生部及江苏省科技计划（4项）资助。　　使用技术如下：（1）反义技术，包括反义核酸（ASODN）、反义肽核酸（ASPNA）。（2）放射性核素反义技术，包括125I偶联的ASODN、ASPNA。（3）RNA干扰（RNAi）技术，包括合成的siRNA、质粒及增殖缺陷腺病毒（Ad）介导的RNAi。（4）靶向RNAi技术，包括利用肾癌特异性抗G250单克隆抗体（G250-McAb）修饰的PEI载体介导，以及利用溶瘤腺病毒介导的靶向RNAi。 　　体外及动物实验发现：（1）反义治疗能通过抑制Ki67基因表达，抑制肾癌生长，ASPNA优于ASODN。（2）放射性核素反义治疗优于反义治疗，其中125I-ASPNA效果最好。（3）RNAi优于反义治疗。siRNA、质粒及Ad介导的RNAi无靶向性、作用时间短。（4）G250-McAb修饰的PEI能把RNAi质粒靶向转入肾癌细胞，转染效率与Ad病毒相仿。（5）溶瘤腺病毒能在肾癌细胞内增殖，导致携带的siRNA大量扩增、作用时间明显延长、杀肿瘤效果显著增强，使RNAi更为安全、有效，是更好的靶向技术。　　本项目确定了以Ki67基因作为肾癌治疗靶点的有效性，通过对多种技术阻断Ki67基因治疗肾癌效果进行比较，发现采用RNAi具有更好效果。特别是利用溶瘤腺病毒介导Ki67基因RNAi，能使RNAi治疗作用局限在肾癌细胞内，杀伤肿瘤效果显著增强，治疗时间显著延长。增强了肿瘤治疗靶向性，避免毒副作用，极大提高抗肿瘤疗效。　　【应用前景】 　　鉴于RNA干扰治疗肿瘤的有效性，而溶瘤腺病毒的安全性已被较多临床试验证实，因此利用溶瘤腺病毒介导Ki67基因RNAi有望为晚期肾癌临床治疗开辟新的途径，具有临床应用前景。在既往研究基础上，将进一步扩大实验规模，探索最佳用药方式和剂量，评价相关毒副作用，积累肿瘤治疗经验。争取早日通过审批，开展临床试验和推广应用。