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病原生物学 山东大学 2004(学位年度)
摘要:A组轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起全世界婴幼儿严重腹泻的最重要病原,该课题组对于轮状病毒基因工程疫苗进行了系统研究,其思路是利用腺病毒载体表达轮状病毒保护性抗原作为疫苗.由于腺病毒能感染呼吸道和肠道,从而在诱导全身免疫的同时产生局部粘膜免疫,这是预防肠道病毒感染的最佳选择,而且安全可靠,可以通过口服或滴鼻给药,适于婴幼儿使用,因此腺病毒载体成为轮状病毒基因工程疫苗载体的首选.为了进一步评价重组腺病毒的免疫反应性以及安全性,该文以非人灵长类动物恒河猴为模型,联合应用课题组已包装成功的表达人轮状病毒VP6和G3型VP7的重组腺病毒rvAdVP6和rvAdG3VP7,分别通过滴鼻和灌胃途径对恒河猴进行了免疫,探讨了重组腺病毒在恒河猴模型的免疫学效果以及安全性.总之,表达轮状病毒EW株中和抗原VP7基因和表达轮状病毒组特异性抗原VP6基因的重组腺病毒免疫小鼠后,取得了良好的免疫学效果,并能明显抑制小鼠体内轮状病毒的复制,对小鼠轮状病毒的感染具有一定的保护作用;而用重组腺病毒在恒河猴上应用的安全性也得到了初步证明.这些结果为研制中国具有自主知识产权的新型轮状病毒基因工程疫苗奠定了坚实的基础.
病原生物学 中国疾病预防控制中心 2003(学位年度)
摘要:伤寒副伤寒在中国一些地区仍是肠道传染病防治中的重要问题,尤其1998年开始,甲型副伤寒在这些地区的发病数逐年增多,并出现多起暴发流行.该研究应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)、管家基因mdh与侵袭相关基因spaO测序比较和ERIC-PCR方法,对全国部分伤寒高发省份的71株伤寒菌株和38株甲型副伤寒菌株进行了分析,以揭示这两种血清型菌株的分子流行病特征和各自的遗传变异关系.我们用PFGE、重要基因测序以及ERIC-PCR的方法,对部分分离于中国伤寒副伤寒高发省区的分离菌株进行分子流行病学分析,初步获得了中国重点伤寒副伤寒流行省份菌株的一些病原分子流行病学特征.为选择合适的分子流行病学监测方法提供了参考依据,通过以上研究,我们认为不同方法相结合可从多个方面代表性地反映菌株间差异,从而获得更多的信息,在伤寒副伤寒的分子流行病学监测工作中,可以PFGE为主,适当结合spaO基因测序的方法.ERIC-PCR的实际应用价值有限.
免疫学 中国疾病预防控制中心 2003(学位年度)
摘要:由于具有自身修复和分化潜能,以及相对的易于分离纯化,不需要在基因治疗的同时辅以药物,造血干细胞和祖细胞是理想的基因治疗的场所,已被广泛的用于遗传病、自身免疫性疾病的基因治疗等.CD34抗原是一个分子量为105-120kD的Ⅰ型跨膜糖蛋白,是造血干细胞和祖细胞的表面标志.重组腺病毒伴随病毒2型(AAV2)载体被证实为一种很有效的基因转移至造血干细胞和祖细胞的载体,具有非致病性、位点特异整合性和高效持续表达等优点.但重组AAV载体进入CD34+细胞和表达外源基因的能力存在很大的个体差异,不同个体的CD34+细胞表达的AAV受体可能具有差异,因此寻找稳定高效转移基因的方法显得非常重要和必要.重组双特异性抗体可以增强基因转移能力,该课题的目的是分别获得针对抗AAV2和抗CD34的单克隆抗体,为基于抗AAV2和抗CD34的基因工程双特异性抗体的构建,研究解决AAV2基因治疗中基因靶向递呈的生物技术问题,提高重组腺病毒伴随病毒载体进入CD34+细胞的能力奠定基础.该研究利用噬菌体抗体库技术,筛选得到了人源的抗腺病毒伴随病毒2型(AAV2)的Fab段抗体,并获得了其基因工程全抗体.同时,我们从my10杂交瘤细胞中筛选获得了抗CD34的抗体及其表达.
免疫学 中国疾病预防控制中心 2003(学位年度)
摘要:血吸虫病疫苗的研制工作已经开展了近半个世纪,迄今为止没有取得突破性进展.世界卫生组织曾经公布的被认为最有希望的六种曼氏血吸虫的候选抗原目前已全部完成试验,结果并没有达到预期的效果.而其他途径生产的抗原分子试验结果也同样不理想.日本血吸虫方面,研究进展相对缓慢一些.寻找新的候选抗原迫在眉睫.目前看来照射致弱尾蚴仍然是抗血吸虫感染最有效的免疫原,它不仅能诱导啮齿类动物产生较高的保护力,而且免疫灵长类动物如狒狒也能取得同样效果.由于其来源、制备以及安全性等问题,照射致弱尾蚴不可能直接应用于人群或牲畜的大规模免疫预防.因此克隆并表达其中起主要作用的抗原分子,制备核酸或重组疫苗才有可能实现大量生产并保证其安全性,同时又能保持其原有的免疫原性.该研究利用紫外线致弱童虫免疫兔血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库,发现了若干编码具有保护作用的Sj抗原基因,并对其中的Myosin部分重链基因进行了研究.
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