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[博士论文] 高海涛
公共卫生与预防医学;营养与食品卫生学 东南大学 2017(学位年度)
摘要:邻苯二甲酸酯类(Phthalate,PEs)作为环境内分泌干扰物具有雄性生殖毒性。人类不可避免地通过膳食暴露于各种PEs,其中,我国人群∑PEs(各种PEs的总和)和邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)的暴露水平分别为23~159μg/kg/d和11~116μg/kg/d,与DEHP的TDI范围相临界或相当,说明我国人群可能处在PEs暴露致毒效应的风险当中。同时,我国人群经膳食又摄入不小于254mg/kg/d的食品乳化剂,如单硬脂酸甘油酯(Glycerol monostearate,GMS),可能会提高PEs等环境污染物的内暴露水平,提高它们的安全风险。基于此,本论文模拟人群长期低剂量混合暴露的特点,首先研究了GMS对PEs内暴露水平(促吸收作用)的影响;其次,根据人群的实际∑PEs暴露水平设定暴露剂量,探究了6种优先控制的PEs的混合物(MIXPs)联合GMS暴露对SD大鼠的雄性生殖毒性,探讨了相关的机理;通过后续的锌干预实验,研究了锌补充/强化对PEs致雄性生殖毒性的保护作用。主要结果如下:
  1MIXPs(六种优先控制PEs的等毒性混合物)或DEHP联合乳化剂GMS连续经口暴露30d,利用所建立的UPLC-MS方法检测尿液中6种PEs初级代谢产物水平以估算它们的内暴露水平,结果表明乳化剂GMS能够提高6种PEs在SD大鼠体内的内暴露水平,说明乳化剂促进了PEs在大鼠体内的肠吸收,将其生物利用率提高了30%-49%。
  2经长期(15w)低剂量MIXPs(6种优先控制PEs的等质量混合物)联合GMS暴露研究发现,即使PEs暴露低于其各自TDI值亦能够对SD大鼠的生殖系统造成损伤,有乳化剂GMS存在时损伤更加明显,主要体现在睾酮、促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平的改变,睾丸组织病理结构改变等,这可能与MIXPs暴露降低了甾类激素合成蛋白StAR(类固醇激素合成急性调节蛋白)、CYP17A1(17α-羟化酶、17,20裂解酶)、17β-HSD(17β-羟化类固醇脱氢酶)等的表达,上调了P450arom(芳香化酶)的表达,抑制了睾酮的生成,干扰了下丘脑-腺垂体-睾丸轴负反馈调节系统有关;同时还发现,MIXPs暴露上调了睾丸组织中p53、Bax,下调了Chk1、Cdc2、CDK6、Bcl-2的表达,可能导致了睾丸组织细胞细胞周期停滞,诱导其凋亡。
  GMS能够加剧MIXPs的雄性生殖毒性可能与其下调了CLDN11、ZO-1蛋白的表达,从而改变了睾丸组织中紧密连接的结构,损伤其屏障功能,同时也可能抑制了P-gp的外排功能有关。
  此外,还发现,MIXPs暴露对肝脏和肾脏组织也造成了损伤;在乳化剂存在时,损伤更加明显。
  3基于长期低剂量MIXPs联合GMS暴露,利用代谢组学方法,从大鼠的尿液中筛选出了17种潜在的生物标志物,其中,脱氢表雄酮(Dehydroepiandrosterone)、雄烯二酮(Androstenedione)、睾酮(Testosterone)、双氢睾酮(Dihydrotestosterone)、雌激素酮(Estrone)与甾类激素(雄激素代谢)代谢有关,可能用于表征PEs暴露致大鼠早期雄性生殖毒性的生物标志物。此外,甘油-3-磷酸(Glycerol-3-phosphate)、PC(16∶0/0∶0)、LysoPC(16∶0/0∶0)与磷脂代谢有关;琥珀酸(Succinic aicd)、α-酮戊二酸(α-ketoglutaric)、柠檬酸(Citric acid)与能量代谢(三羧酸循环)有关;L-色氨酸(L-typtophan)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine)、色氨酸(Melatonin)、吲哚(Indole)、L-苯丙氨酸(L-phenylalanine)、天冬氨酸(L-aspartic acid)等与氨基酸代谢有关;提示MIXPs暴露还可能导致了磷脂代谢、能量代谢、氨基酸代谢等紊乱。通过综合分析,这17种生物标志物提示,MIXPs暴露致雄性生殖毒性可能与其改变了雄性大鼠类固醇代谢有关,而GMS加剧了MIXPs的雄性生殖毒性可能与其改变了能量代谢有关。
  4通过锌干预实验发现,补锌和强化锌能够抑制锌缺乏-MIXPs暴露对诱导的SD大鼠雄性生殖毒性,主要体现在锌干预回调了大鼠体重、雄性生殖器官的绝对质量和相对质量以及血清睾酮、LH、FSH水平,改善睾丸组织病理学结构;这可能与锌干预回调了睾丸组织中PIWIL1(Miwi)蛋白和PIWIL2(Mili)蛋白的表达有关。说明,锌干预对MIXPs暴露致雄性生殖毒性有保护作用。
  综上,PEs长期低剂量暴露能够导致雄性生殖毒性,这可能与其干扰雄激素代谢,诱导睾丸组织细胞细胞周期停滞和凋亡有关;而乳化剂能够促进PEs的吸收,提高其内暴露水平,从而加剧其雄性生殖毒性,这可能与乳化剂改变了紧密连接结构,抑制了P-gp的功能有关。锌补充能够抑制PEs暴露引起的雄性生殖毒性,这可能与其回调了PIWI蛋白(Miwi,Mili)的表达有关。这些结论提示,锌补充可以降低人群PEs暴露诱导的在安全风险。
[硕士论文] MASIKA JESSICA
PUBLIC HEALTH 东南大学 2017(学位年度)
摘要:由于从饮食中所获的营养素有时并不能满足人体需要,所以营养素补充剂的应用仍较普遍。在冬天较为漫长的地区,暴露在阳光下的机会十分有限,所以维生素D的补充成为一种趋势。但需要强调的是不同国家的指南不同所补充的剂量也不同。值得一提的是,鉴于源于心血管疾病风险、糖尿病、肾脏疾病、癌症和膳食补充剂使用的争议,人们会根据政府网站和监管机构网站提供的可用信息,结合自身需要对购买营养素补充剂做出正确的选择。每个国家都是允许营养素补充剂的,但有的国家可能会无法交易或购买特定的补充剂类型,这基于该国家是否认可其为营养素补充剂。
  第一部分:不同国家的营养补充策略
  有大量的证据表明营养素补充剂可以缓解某些疾病症状,改善健康状况,减缓不同人群发病的风险,如胎儿、绝经后的妇女和孕妇。但现在有关于剂量、安全性和不同地区的法规都受到了关注。欧美论证了营养素补充剂的好处,法案被修订,食品和药物管理局不再对营养补充品制造商提出严格的规定,例如对使用成分的化学分析、鉴定和定量。
  为鼓励批准各种形式的营养补充剂如植物制剂、代谢产物和药物制定严格而真实的监管环境是强制性的。可以预见的是补充剂使用的营养和稳定性方面将会在医学实践中获得重视。但这将依托于政府为其制定政策方面更多的投入,确保补充剂对人群的有效性和安全性。
  第二部分:维生素D补充对血压影响的Meta分析
  目的:该荟萃分析目的在于探明维生素D补充剂对血压的影响。
  方法:用PubMed和Web of Science对有关维生素D的随机对照试验进行了系统性搜索(时间从2016年7月至2017年4月)。关键词和医学主题词为:“维生素D”、“胆钙化醇”、“随机”、“对照试验”、“临床试验”的心血管结果、冠状动脉疾病;高血压、心肌梗死、心力衰竭和Web of Science所采用的中风词汇等。搜索PubMed和Web of Science,研究维生素D补充对各种心血管标志物的影响。然后用加权平均差(效应量)和混合平均差值对收缩压和舒张压的差异进行数据分析。异质性统计收缩压和舒张压I2分别为65.5%和64.5%,属于中度,所以采用随机效应模型对95%置信区间(CI)进行汇总估计,分析维生素D补充对血压的影响。采用Jadad评分和对以下的报告来评估临床试验的质量;随机,双盲,退出和中止被用于对研究中所使用的试验进行质量评价。研究的得分范围在4和5之间,为研究质量良好,0分意味着质量差,5分意味着质量最好。敏感性分析被用来检测荟萃分析结果的稳定性,用Begg漏斗分析潜在的发表偏倚。
  结果:开始共搜索到98条文献。经筛检8条符合选择标准,其中6个随机对照试验,对总共1415名受试者补充维生素D与安慰剂对血压的影响进行了评估。参与者包括健康人、老年人、高血压和糖尿病患者。数据包括作者姓名、发表年份、研究设计、研究时间、人口地理位置、参与者特征干预等。大多数的临床试验在高收入国家进行,特别是在欧洲、美国和韩国。研究的总时间为2个月至1年,参与者平均年龄在36岁到77岁之间。维生素D补充干预措施表现出血压变化有较高的平均差异(平均差=-0.08,95% CI;0.30到0.14,P=0.013,收缩压I2为65.5%。平均差=0.00,95% CI;-0.22到0.22,P=0.015,舒张压I2为64.6%)。
  结论:研究表明,实验组和安慰剂组的血压在维生素D补充下没有显著的下降。从这个荟萃分析可看出维生素D在改善血压水平方面有一个潜在的作用,虽然结果没有统计学意义。因此,由于其变化无统计学意义,所以它可以被认为对高血压患者和一般人群是适当的且安全的。不过针对健康人的更大样本量和持续时间较长的随机对照试验研究仍需继续进行以进一步论证。
[硕士论文] 郭丽琴
公共卫生 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  通过对山西省五个市农村居民食品营养标签认知度调查,探讨影响农村居民营养标签认知度的因素,为针对性地对农村居民进行营养标签健康教育及健康促进,普及营养知识,引导消费者合理选择食品等工作提供一定科学依据。
  方法:
  采用便利抽样的方法,抽取山西省运城市、长治市、太原市、忻州市和大同市五市部分县18岁以上的900名农村居民,并采用他填式的调查研究方法进行调查,用SPSS22.0软件进行数据分析,定量资料的描述采用-x±s,定性资料的描述采用频数(构成比),无序分类资料的组间比较采用卡方检验,等级资料的组间比较采用Kruskal-Wallis秩和检验,检验水准取双侧α=0.05;多因素分析采用Logistic回归,自变量筛选方法为条件似然比向前逐步法(Forward:Conditional),标准为α入=0.05,α出=0.10。
  结果:
  1.21.2%的农村居民比较了解什么是食品营养标签,NRV的知晓率为29.8%。居民获得营养知识的途径从高到低依次是网络(53.4%)、电视广播(49.4%)、亲戚或亲人(47.3%)、同学、同事、朋友(38.8%)、报刊、杂志(36.4%)、培训、课堂讲座等(14.7%)。
  2.14.9%的居民总是会关注营养成分表,19.2%的居民会常常关注营养成分表,55.9%的居民认为有必要标注营养成分和含量说明,54.6%的居民认为营养功能声称对选择食品有帮助,57.1%的居民认为通过营养标签可以了解食物的营养成分特点,合理营养。
  3.34.2%的居民在购买食品时首要参考的因素是食品的营养价值;居民在选购食品时最关注的标签内容是生产日期与保质期,其次是质量安全标记、食品配料表、营养标示、净含量与制造者的名称和地址;对不同的产品关注营养标签的程度也不同,购买奶及奶制品时最注重查看营养标签,其次是豆类制品、面包、饼干类、熟肉制品、饮料类、婴幼儿食品、强化食品类;9.6%的居民总是会因营养标签而影响其对食品的购买行为,19.5%的人常常会受影响。
  结论:
  1.农村居民营养标签KAP情况居民对食品营养标签的认知水平不高,但对营养标签的态度比较积极,营养标签对居民的食品选购行为有一定的影响。
  2.农村居民营养标签KAP影响因素性别、学历、慢性疾病史是居民了解营养标签的有利因素;营养标签了解程度高是居民对营养标签关注度、标注必要性及作用认识的有利因素;了解营养标签、营养标签相关态度积极是营养标签对农村居民食品选购行为有影响的有利因素。
[硕士论文] 郑思思
公共卫生 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  面对我国公众食品安全认知水平不高,结合食品安全教育发展现状,本研究通过食品安全认知调查,了解公众食品安全认知水平,梳理我国食品安全教育发展历程,进而总结出食品安全教育在发展过程中潜在的问题,制定发展策略,为完善我国食品安全教育体系,增进公众身心健康提供参考依据。
  方法:
  1.历史文献法
  基于对食品安全教育相关文献、书籍、政策文件的阅读,梳理我国食品安全教育的发展历程,以及各国在推进食品安全教育中的先进经验,为课题研究背景建立研究基础。
  2.问卷调查法
  本次问卷调查于2015年12月-2016年3月进行,问卷调查采用多阶段分层随机抽样的方法,首先将全国分为华北、东北、西北、华东、中南、西南6大区域,并在每个区域随机抽取出10个县(或区、县级市等);第二阶段,在抽取的60个样本县、区或县级市中,按照当地农村/城镇人口比例,每县(区、市)至少抽取70人进行问卷调查,共发放问卷4380份。调查前,由专业老师对调查员进行调查前培训。本次研究主要涉及的调查内容包括公众对食品添加剂的认知现状,以及对食品安全的信息需求情况调查。
  3. SWOT分析法
  采用SWOT分析法对我国食品安全教育未来的发展进行内在的优势、劣势的分析,外在的机遇、威胁分析,旨在全面总结目前所存在的问题,制定适宜的发展策略,为提出完善我国食品安全教育的政策建议提供基础。
  结果:
  1.问卷调查结果显示,73.15%的调查对象对食品添加剂处于高关注状态;对食品添加剂的使用持有反对态度的占比55.48%;近八成的调查对象对食品添加剂与非法添加物的概念混淆;仅有21.46%的被调查对象会看食品添加剂标签;“电视节目”、“手机”、“官方消息”是公众获取食品添加剂信息的主要渠道;在“公众想要了解的食品安全信息”问题中,对食品安全营养知识、食品安全常识的需求排在前两位。
  2.综合SWOT分析的结果,可以看出我国食品安全教育体系仍存在一些亟待改善的问题,例如:权威管理机构缺位,专门法律相对滞后;食品安全教育体系尚未建立健全,推进工作缺乏标准;教育内容过于宽泛,教育形式缺乏创新等问题。
  结论:
  调查对象对食品添加剂处于“高关注、低认知、强反对、弱行为”的认知模式,公众对食品安全知识的需求度远远高于过去。为了进一步促进我国食品安全教育事业的发展,通过SWOT分析可以看出,WO策略目前更适宜我国食品安全教育的发展,即以食品安全教育体系的完善为基础,从构建法律体系、完善教育体系、建立研究体系三方面提出相关建议。
[硕士论文] 田敏
公共卫生 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  1.观察长治地区人群膳食因素与颈动脉粥样硬化发生的关系,探讨影响当地人群颈动脉粥样硬化发生的膳食因素。
  2.观察膳食干预对颈动脉粥样硬化患者治疗的影响,探讨膳食干预对颈动脉粥样硬化的防治作用,为及早采取膳食干预措施,防止或延缓颈动脉粥样硬化的发生发展提供数据参考。
  方法:
  1.膳食因素与动脉粥样硬化的相关性分析
  (1)选取2015年1月~2015年10月在医院行健康体检和临床科室正规检查者作为研究对象,根据颈动脉彩色多普勒超声检测结果,纳入颈动脉粥样硬化患者273例(CAS组)和健康者308例(对照组)。
  (2)利用调查问卷收集受试对象的一般情况(包括年龄、性别、吸烟史、饮酒史),血压(blood pressure,BP),体质指数(body mass index,BMI)。
  (3)取空腹静脉血进行生化检测,检测指标包括甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterin,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterin,LDL-C)及血糖(glucose,GLU)等。
  (4)颈动脉超声测量患者双侧颈总动脉和颈动脉球部的内膜-中层厚度(intima-media thickness,IMT)、粥样硬化斑块面积及数目。
  (5)采用半定量食物频率法(SQFFQ)调查受试者近3个月主食类、蔬菜、水果、畜肉类、禽肉类、水产类、蛋类、奶类及奶制品、豆类及豆制品、坚果类、植物油、调味品等各类食物及膳食营养素的摄入情况。
  (6)整理和录入调查获得的数据,通过SPSS18.0统计软件进行分析。当假设检验P小于检验水准α(即P<0.05)时,组间的差异被认为具有统计学意义。
  2.膳食干预对颈动脉粥样硬化的防治作用
  (1)根据CAS斑块分级标准,经知情同意后,采用随机区组设计将颈动脉粥样硬化患者分为2组:药物+膳食联合干预组(DI组139例)、单纯药物干预对照组(对照组110例)。
  (2)两组受试者药物干预方案:阿司匹林肠溶片100mg/次口服1/日;阿托伐他汀钙片20mg/次口服1/晚。DI组根据第一部分研究结果,结合中国居民膳食指南2016版标准,制定膳食干预方案。采用逐一单独指导的形式,对DI组受试者进行指导,发放膳食干预方案,并以同比例食物模具作为对照,使受试者能将干预方案应用于实际生活中并指导日常膳食选择。于干预3个月和6个月时分别通过3天膳食回顾法记录实际膳食摄入情况。
  (3)进行膳食干预后3个月、6个月后,分别对DI组和对照组受试者行颈动脉超声检查,观察患者颈动脉IMT、斑块面积和数目的变化,复查上述体格检查指标和血生化指标。
  (4)所有数据通过SPSS18.0统计软件进行分析。当假设检验P小于检验水准α(即P<0.05)时,组间的差异被认为具有统计学意义。
  结果:
  1.膳食因素与动脉粥样硬化的相关性分析
  (1)CAS组患者一般情况指标(性别、年龄、吸烟史和饮酒史)、体格检查指标(体重、BMI、收缩压和舒张压)及血生化指标(空腹血糖)与对照组差异均无统计学意义。
  (2)CAS组患者血生化指标TG、TC和LDL-c水平显著高于对照组,而HDL-c、GLU差异无统计学意义。
  (3)CAS组患者主食类、畜肉类、食用油、盐的摄入量显著高于对照组,蔬菜、奶类及奶制品、禽肉类、水产类摄入量显著低于对照组。
  (4)CAS组患者总能量、碳水化合物摄入显著高于对照组,蛋白质、总脂肪摄入与对照组差异则无统计学意义,而CAS组患者饱和脂肪酸(SFA)摄入显著高于对照组,单不饱和脂肪酸(MUFA)摄入显著低于对照组。
  (5)经Logistic回归分析,维生素C、K的摄入与颈动脉粥样硬化的发生呈显著负相关,Na的摄入则呈显著正相关。
  2.膳食干预对颈动脉粥样硬化的防治作用
  (1)膳食干预3个月时,DI组患者体重、SBP、TG及LDL-c水平显著低于对照组。膳食干预6个月时,DI组患者体重、BMI、SBP、TG、TC、LDL-c及GLU水平显著低于对照组。
  (2)膳食干预3个月时,DI组患者斑块面积显著低于对照组,而IMT、平均斑块数与对照组差异无统计学意义。膳食干预6个月时,DI组患者IMT、斑块面积及平均斑块数均显著低于对照组。
  结论:
  膳食维生素C和微量元素K是颈动脉粥样硬化的保护因素,而Na是危险因素,在药物干预的基础上通过膳食干预可以对颈动脉粥样硬化产生积极的防治作用。
[硕士论文] 魏超
食品加工与安全 河北农业大学 2017(学位年度)
摘要:山楂是一种原产于我国的药食同源保健材料,其营养价值和保健功能已经得到肯定,其最受关注的功效成分之一是其高含量的膳食纤维。本研究室在前期研究中已经开发了提取山楂膳食纤维的专利方法,然而其所制备的山楂膳食纤维尚未建立相应的产品质量标准;关于山楂膳食纤维中含量丰富的可溶性成分——果胶的提取也未做系统的比较。
  本文以山楂膳食纤维为原料,采用常规的方法,测定了山楂膳食纤维的营养成分,结果表明,山楂膳食纤维中水分含量为9.82%、灰分含量为3.16%、蛋白质含量为5.25%、总半乳糖醛酸含量为52.6%、酯化度为75.5%、酸性洗涤纤维含量为21.4%、钾、镁、锌、钠、铁、铜、铅的含量分别为287mg/100g、214mg/100g、85.6mg/100g、58.9mg/100g、108mg/100g、3.88mg/100g、未检出。其中总半乳糖醛酸占比例最高,占总含量的一半以上,其次是酸性洗涤纤维;每一百克山楂膳食纤维中镁的含量占推荐摄入量(AI值)的72.0%,锌、铁的含量远超过AI值。
  以山楂膳食纤维为原料,分析了山楂膳食纤维的品质,考察了山楂膳食纤维的持水力、持油力、阳离子交换能力、亚硝酸盐的吸附能力、胆固醇吸附能力及扫描电镜观察。结果表明,山楂膳食纤维的持水力为8.26g/g,持油力为2.45g/g,膨胀力为2.35mL/g,阳离子交换能力为0.374mmoL/L,在pH=2(模拟人体胃液环境)的溶液环境中对NO2-吸附能力为0.270μg/g、pH=7(模拟人体肠液环境)溶液环境中对NO2-吸附能力为0.0600μg/g、pH=7时对胆固醇的吸附能为0.134mg/g、pH=2时对胆固醇吸附能力为0.0300mg/g,扫描电镜结果显示山楂膳食纤维形状不规则,颗粒比较紧凑,体积较大,表面带有褶皱。
  以山楂膳食纤维为原料,采用超声辅助酸法、酸提取法、冷水提取法、热水提取法对山楂膳食纤维中的果胶进行提取,比较了四种常用的提取方法对山楂果胶的提取率影响。结果表明,超声辅助酸法提取率为27.3%、酸提取法提取率为20.7%、冷水提取法提取率为32.2%、热水提取提取率为38.7%,其中热水法提取率最高,冷水法较高,超声辅助酸法次之,酸法最差。
  本研究以期为山楂膳食纤维新产品的质量管理和技术标准的建立提供依据。
[硕士论文] 金梅
临床医学 内蒙古民族大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  1、通过文献研究方法,归纳总结蒙古族饮食习俗特点。
  2、从营养学角度对蒙古族饮食习俗进行评价,验证蒙古族饮食的营养价值,为公众推荐科学搭配的饮食方法,为合理饮食习俗提供科学依据,为促进人们健康水平做出应有的贡献。
  方法:
  1、采用文献计量学方法对蒙古族饮食结构、种类、食用量及方法等进行研究,且对改革开放前后的蒙古族饮食习俗进行比较。
  2、采用文献比较方法,归纳总结蒙古族饮食特征,从营养学角度对其特点进行综合评估,验证蒙古族饮食习俗的合理性与科学性。
  结果:
  1、蒙古族饮食品种繁多,历史悠久,可分为查干伊德根(白食)、乌兰伊德根(红食)、饮品等。蒙古族饮食习俗中无不显示出追求天然、纯正、保持原汁原味的特点。
  2、蒙古族饮食结构搭配合理,“三分食物、三分饮品、三分空间”的饮食黄金食原则,“食用、劳动、享乐”的饮食文化特点,其中保护食物来源的特点尤为明显。
  3、蒙古族饮食营养价值高,能够满足高强度劳动所需能量补充需要。蒙古族饮食具有很高的预防治疗疾病和保健康复作用。
  结论:
  1、蒙古族饮食讲究纯正天然,更接近人体所需营养物质,十分符合现代人的营养、保健、绿色理念,该研究阐明族饮食搭配方法的科学性,验证饮食结构、用法用量的科学性,体现了蒙古族饮食文化的科学内涵。
  2、蒙古族饮食具有很高的营养价值,在蛋白质、矿物质、维生素含量等方面其他饮食方法无法替代的优势,符合现代人们追求的营养、无害、绿色、天然的要求,将成为未来饮食发展方向的主流。
  3、蒙古族饮食的预防治疗及保健康复作用今后研究的主攻方向之一,研究发现策格等饮食对对心脑血管疾病、消化系统疾病、呼吸系统疾病都有良好的预防和治疗作用。这对于推广蒙古族饮食习俗提供了科学依据。
  该研究首次总结归纳了蒙古族饮食习俗的特点,为将来膳食、临床、护理、康复研究提供基础。
[硕士论文] 孟婵芳
营养与食品卫生学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  我国目前尚未制定中国人群膳食必需氨基酸推荐摄入量,有关蛋白质、氨基酸代谢动力学研究的方法也很少。本课题组前期实验得出中国健康青年男性膳食赖氨酸的需要量,为进一步验证此结果是否满足该人群的实际生理需要,本论文通过“赖氨酸摄入量对大鼠血浆IgG代谢动力学的影响”这一方面深入探讨。研究赖氨酸摄入量过低或过高,对体内IgG合成率的影响,与正常赖氨酸摄入量相比的差别,为进一步分析本课题组前期的人体赖氨酸需要量研究结果是否真正满足人体生理需要提供依据。
  方法:
  通过用重水腹腔注射大鼠来标记样品,90 min后取血并观察血液中IgG是否结合氘。梯度洗脱法确定IgG最佳纯化方案,并SDS-PAGE进行鉴定。酸水解IgG,衍生水解物中丙氨酸,最后GC/MS检测。
  检测饲料中氨基酸组分,分析大鼠体重和进食量。用在日常饮食状态下,较长时间段内大鼠摄入高剂量(1.6%)、正常剂量(0.9%)、低剂量(0.2%)三种赖氨酸水平的饲料。通过利用2H2O作为示踪剂,腹腔注射生理盐水(2H2O配制)和日常饮水中添加4%的2H2O两种方法,对大鼠体内的蛋白进行同位素氘标记。探究三组不同赖氨酸摄入量对大鼠血液IgG的代谢动力学和IgG的分数合成率的影响,剖析血浆IgG代谢动力学参数对赖氨酸摄入量的敏感程度,为进一步研究对赖氨酸摄入量较敏感的检测参数构建方法体系,从而为确定人体赖氨酸需要量的研究奠基。
  结果:
  梯度洗脱法确定IgG纯化最佳方案(缓冲液浓度、pH、流速、时间)并用SDS-PAGE鉴定表明此方案IgG纯化量多、纯度高。GC/MS结果显示,重水可以在大鼠腹腔注射90min时,短时间内完成对血浆IgG水解物中丙氨酸的标记,即重水标记丙氨酸检测方法建立成功。第三章实验表明:三组的大鼠体重和进食量都有显著差异,从大到小依次:高剂量组、正常剂量组、低剂量组;低剂量组的IgG、TP含量与高剂量组比,存在显著性差异(P<0.05),高剂量组IgG和TP含量最高,然后依次为正常剂量组,低剂量组;随着赖氨酸摄入量的增加,血浆IgG的分数合成率呈增加趋势;IgG合成动力学方程:高剂量组ft=0.076027×(1-e-02231t),正常剂量组ft=0.084139×(1-e-01483t),低剂量组ft=0.10620×(1-e-01051t)。由合成动力学曲线可知,随赖氨酸摄入量增加,大鼠血浆IgG中2H-丙氨酸丰度达到稳态的时间缩短,稳态丰度呈下降趋势。
  结论:
  低剂量赖氨酸能显著减少大鼠的体重和进食量,且短期内就能体现出对大鼠体重的影响效果。低剂量赖氨酸组血浆IgG含量和TP含量都显著低于高剂量赖氨酸组。随着赖氨酸摄入量的增加,血浆IgG的分数合成率呈增加趋势,稳态丰度均呈下降趋势。综上,大鼠血浆IgG的分数合成率、合成动力学方程均对赖氨酸摄入量具有较高的敏感性。
[博士论文] 胡丹旦
临床医学 北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院中国医学科学院 2017(学位年度)
摘要:研究目的:
  在现代社会,以肥胖、高血脂、胰岛素抵抗、动脉粥样硬化为特征的代谢相关疾病日益严重,给人体健康造成了极大负面影响。通过10年以上的研究,学者们证实时间限制性进食(Time-restricted feeding,TRF)可以预防甚至逆转这些不良健康状况。TRF指的是每天进食限制在8-10小时之间,其余时间无热卡摄入,但每日进食总量不限。这种饮食模式在成人中效果确切,对其机制的研究也逐渐明朗。然而现有研究局限于成人群体,对儿童的研究仍一片空白。考虑到儿童和成人在生理上具有根本性差异,我们认为不可盲目将成人的结论推广至儿童。再加上社会对青少年儿童代谢综合征和营养、饮食等话题的关注,我们设计实验,对该问题进行科学性研究。
  研究方法:
  受试小鼠为3周龄,恰离乳。在协和医院动物中心进行1周的适应后,我们将这200只雄性昆明小鼠随机分为TRF模式和普通的随时可进食(Ad libitum,AD)的模式。TRF具体做法:每日23:00将食物放入笼子,次日7:00撤走。小鼠幼年时期为4-8周龄,8周小鼠认为成年。为了方便表达,开始进行进食干预的时间记为0周(4周龄),4周后饮食进行调整,此时小鼠成年,记为4周(8周龄)。实验组小鼠定义为TA:幼年即0-4周TRF,成年后AD;AA:对照组,幼年成年均AD;TT组:幼年成年均TRF。每天纪录每笼小鼠进食量;每周纪录每只小鼠体重;4周和8周时通过血液生化学检测小鼠血糖、血脂、胰岛素、瘦素、饥饿素、GLP-1、性激素等指标;8周时进行肠道菌群和流式细胞分析调节T细胞,以及对肝脏、胰腺、主动脉根部切片染色,进行评估。
  研究结果:
  8周后,TA小鼠(幼年TRF,成年AD,即为实验组)体重明显高于对照组,血糖也明显高于对照组。(体重:47.1g vs.45.0g,p<0.01;23:00血糖:8.38mmol/L vs.7.99mmol/L,p<0.05;次日7:00:9.72mmol/L vs.9.40mmol/L,p<0.05)。与此同时,TA小鼠胰岛素水平和血脂水平却低于对照组:胰岛素:7.199mU/L vs.9.860mU/L,p<0.05;甘油三酯62.92nmol/L vs.83.86nmol/L,p<0.05;总胆固醇:19.95mmol/L vs.20.64mmol/L,p=0.39;低密度脂蛋白:327.87umol/L vs.401.56umol/L,p<0.05;高密度脂蛋白:253.04umol/L vs.295.21umol/L,p=0.13。组织切片发现:TA小鼠有脂肪肝表现;胰岛数量和容量均减少;主动脉根部出现血管壁僵硬、增厚和新生。同时TA小鼠性发育出现滞后,免疫功能下降(6.78%vs.2.69%,p<0.01)。
  研究结论:
  幼年TRF造成小鼠全面身体机能损伤,包括引起不可逆的代谢紊乱、免疫功能下降、性发育迟缓等。许多证据提示这些损害通过肠道菌群进行作用。一旦这些结论在人群研究身上得到证实,将会成为青少年儿童营养学的有力证据。
[硕士论文] 蔡雪薛
遗传学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:据世界卫生组织(WHO)于2015年统计结果显示,全球每年发生食源性疾病的病例数超过60亿人次,平均每10个人中就有一例感染,导致42万人死亡,食源性疾病已成为当今世界重大的公共卫生问题。由单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)、沙门菌(Salmonella spp.)和大肠杆菌(Escherichia coli)等病原细菌引起的食源性疾病是影响食品安全的最主要的因素之一。其中Lm引起的李斯特菌病具有高致死率的特点,早在2000年就已被WHO列入重点检测的食源性致病菌之一。Lm作为兼性胞内寄生的革兰阳性杆菌,在自然环境中广泛分布,随被污染的食物进入肠道后,可引发胃肠炎、脑膜炎、流产等临床症状。深入研究Lm的致病机理,获得与致病性相关的毒力因子和分子标识,对李斯特菌病的预防控制具有重要的意义。
  Lm体内致病相关毒力基因的挖掘及功能研究是揭示其致病机制的有效方法,其与宿主细胞相互作用的过程中,能根据所遇到的不同生境,随时调整多个毒力基因的表达模式,从而使细菌可在宿主中适应性生存。由于病原菌与宿主互作是一个多因子作用的复杂过程,目前对其致病性的研究已逐渐从过去对单个基因的功能研究,转变为从整体水平分析宿主和病原菌的相互作用。而转座突变技术已成为发现新基因、发掘已知基因新功能的有效途径之一,有利于我们开展高通量地体内致病毒力基因的筛选。
  本研究对强毒株Lm XYSN进行了比较基因组学分析,对毒力调控因子PrfA特有氨基酸突变以及新基因组岛8的功能进行了探究;另外,利用转座突变技术建立Lm XYSN突变体文库,以人结肠癌上皮细胞为筛选模型,进行毒力相关基因的全基因组水平高通量筛选、鉴定与功能研究。Lm XYSN毒力相关基因的挖掘及功能的解析,有利于揭示其在宿主体内适应生存的机制,为李斯特菌病的预防与控制奠定理论基础。
  1、Lm XYSN PrfA氨基酸替换突变株的构建及生物学特性研究
  对31株李斯特菌毒力调控因子PrfA的比较分析显示,Lm XYSN PrfA蛋白存在两处氨基酸自然突变Lys10Asn以及Thr151Ala。利用PyMOL软件对突变位点的氨基酸进行分析,发现位于第10位氨基酸突变改变了蛋白表面的电子分布,而第151位氨基酸突变位点则是位于PrfA变构活化热点区。由此提示,毒力调控因子PrfA氨基酸的自然突变可能影响到其调控作用,从而对Lm XYSN的体内致病特性产生影响。
  为了研究PrfA的自然突变对Lm XYSN毒力的影响,利用同源重组技术分别构建了prfA缺失突变株Lm XYSN△prfA以及第10位和151位氨基酸突变回复菌株Lm XYSNPrfA10K/151T。生物学特性测定结果显示,突变株及回复株在BHI培养基中的生长能力与野生菌株一致,氨基酸替换回复突变株的溶血活性也与野生株的相同。RT-PCR检测细菌感染细胞过程中毒力岛1(LIPI-1)中基因的转录表达水平,结果显示XYSN PrfA氨基酸突变后,其mRNA表达水平比野生株降低一倍,actA、hly、plcA以及mpl转录水平显著降低,提示Lm XYSN PrfA的自然突变增强了对LIPI-1中基因的调控能力。以非吞噬细胞系Caco-2 BBE以及HeLa细胞系为体外感染模型的测定结果表明,Lm XYSN PrfA氨基酸的自然突变显著提高了细菌对Caco-2 BBE的增殖能力以及HeLa感染的黏附、侵袭以及增殖能力;而以小鼠口服感染测定的LD50结果表明,回复菌株Lm XYSN PrfA10K/151T毒力比野生株降低7.34倍。上述实验结果提示,Lm XYSN PrfA蛋白第10位和151位氨基酸突变提高了prfA自身转录水平以及对LIPI-1中基因的转录表达水平,增强了Lm XYSN对非吞噬细胞的黏附侵袭能力,影响了细菌在宿主体内的致病能力。
  2、Lm XYSN基因组岛8突变株的构建及生物学特性研究
  对基因组岛8内分布的基因比对分析,选择与其它李斯特菌同源性较低的基因簇(XYSN_0819、XYSN_0820、XYSN_0821和XYSN_0822)进行功能的初步研究。采用同源重组技术对该基因簇进行敲除,并对Lm XYSN△XYSN0819-0822不同条件下的生长能力以及不同温度下生物被膜的形成能力进行了测定。结果表明,突变株Lm XYSN△XYSN0819-0822在BHI培养基和MEM培养中生长速率均显著低于野生株(P<0.05),耐受1% Triton的能力显著弱于野生株(P<0.05),且在37℃和42℃形成生物被膜的能力也显著下降(P<0.05;P<0.01)。
  以细胞系Caco-2 BBE、HeLa为体外感染模型、BABL/c小鼠为体内感染模型,对XYSN_0819-0822缺失株的侵袭能力、小鼠致病能力进行测定。结果表明,XYSN_0819-0822缺失对细菌侵袭Caco-2 BBE、HeLa细胞系的胞内增殖能力造成显著影响(P<0.05),并降低了对小鼠的致病力。上述研究结果表明,Lm XYSN基因组岛8中XYSN_0819、XYSN_0820、XYSN_0821以及XYSN_0822构成的基因簇参与该菌生长代谢、生物被膜形成和胞内增殖,提高其在不利环境中的抵抗能力,促进在宿主细胞中的适应性生存。
  3、Lm XYSN新毒力相关基因的筛选及功能研究
  利用Mariner家族中的TnYLB-1转座元件构建了含有6000个Lm XYSN突变子的转座突变体文库,从中随机挑取1127个突变子,以人结肠癌上皮细胞系Caco-2 BBE建立突变子筛选模型进行毒力相关基因的筛选,共获得增殖能力下降5倍以上的突变株15株,其中包括降低20倍以上的3株突变株。利用反向PCR(reverse PCR)和测序分析,对3株突变株的插入位点进行了鉴定,它们的转座插入位点分别位于XYSN_0462、XYSN_1095以及XYSN_1098中。其中XYSN_0462是已知的在感染非吞噬细胞中发挥重要作用的内化素基因inlA,由此证明本研究采用的细胞模型筛选Lm XYSN毒力因子方法的可行性。
  对XYSN_1095∷Tn和XYSN_1098∷Tn在BHI培养基中生长能力测定结果显示,基因的插入失活对细菌的生长能力未造成明显影响。通过扫描电子显微镜对细菌形态进行观察则发现,XYSN_1095∷Tn和XYSN_1098∷Tn的菌体变短且部分菌体发生弯曲。对Caco-2BBE的黏附、侵袭以及胞内增殖能力进行测定结果表明,XYSN_1095和XYSN_1098的基因突变,极显著降低了细菌的侵袭与增殖能力。同时,对XYSN_1095∷Tn以及XYSN_1098∷Tn口服感染BABL/c小鼠LD50测定结果显示,XYSN_1095∷Tn的毒力(LD50=1010.24 CFU)比Lm XYSN(LD50=105.08 CFU)降低了105.16倍;且XYSN_1098∷Tn的毒力(LD50>2×1010.6CFU)比野生株降低了105倍以上,提示XYSN_1095和XYSN_1098是Lm XYSN的重要毒力相关基因,在其感染与致病中发挥重要作用。
[硕士论文] 戴倩倩
营养与食品卫生学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  给予大鼠一定浓度的2H2O作为示踪剂标记动物体内骨骼肌蛋白,以期建立氘标记丙氨酸的检测方法,为研究骨骼肌蛋白分数代谢率提供方法保证;在日常饮食状态下,分别观察大鼠在较长时间内摄入含有低(0.2%)、正常(0.9%)、高(1.6%)剂量的赖氨酸饲料,骨骼肌蛋白分数合成率是否相同,分析骨骼肌蛋白代谢动力学指标是否对赖氨酸摄入量敏感,骨骼肌蛋白代谢动力学是否一致。分析2H2O标记法是否能有效测定骨骼肌蛋白的合成动力学参数,是否适用于长期标记实验,从而为进一步进行人体赖氨酸动力学实验研究奠定基础。
  方法:
  第一部分:(1)2H2O标记大鼠身体水90min,收集血液;2H2O标记大鼠骨骼肌一周,收集四肢肌肉,提取骨骼肌蛋白和血浆游离氨基酸。将身体水中的2H与丙酮发生交换,萃取丙酮。(2)酸水解法水解骨骼肌蛋白,收集水解后丙氨酸,同时收集血液游离丙氨酸。(3)对骨骼肌水解后丙氨酸经0.22μm微孔膜对水解液进行过滤,对血浆游离丙氨酸进行分离和纯化。(4)对丙氨酸进行衍生化处理,身体水的萃取物经过微孔膜过滤,分别经GC/MS检测,确定了氘标记丙氨酸检测方法的可行性。第二部分:(1)参考AIN-93G各氨基酸成分比例设计三种饲料赖氨酸含量分别为低(0.2%)、正常(0.9%)、高(1.6%)。(2)健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠72只,12周龄,体重320g左右,随机分为3组,每组24只。分别给予低、正常和高剂量赖氨酸饲料,喂养8周,自由进食,正常饮水。(3)自第9周开始,给予大鼠2H2O以标记血液游离丙氨酸、骨骼肌蛋白以及身体水,标记至第18周结束。18周内每周称量大鼠体重并记录每组大鼠的进食量。(4)在8,9,11,13,14,18周处死大鼠,收集血液和四肢肌肉,作为样本,用凯氏定氮法测骨骼肌蛋白的含量,GC/MS检测骨骼肌蛋白中的2H-丙氨酸的丰度、血浆游离丙氨酸中2H的丰度及身体水的2H丰度,观察各丰度的变化情况。(5)分别绘制各组大鼠骨骼肌蛋白中2H示踪剂的变化趋势图,计算2H标记骨骼肌蛋白的代谢动力学方程和蛋白质的合成率,比较不同日粮赖氨酸组所得结果的异同,观察身体水的2H丰度的变化情况,分析不同赖氨酸摄入水平对机体骨骼肌蛋白代谢动力学具有怎样的影响。
  结果:
  第一部分:(1)腹腔注射2H2O90min后,身体水中丙酮的分子量为58/59,血浆游离丙氨酸衍生物的分子量为99/100、158/159基团的丰度均可测出,确定了身体水中2H丰度出峰时间为2.3min左右。(2)大鼠骨骼肌蛋白中丙氨酸衍生物的分子量为99/100、158/159基团的丰度均可测出,通过与标准库对比,确定骨骼肌丙氨酸衍生物的出峰时间为8.45min左右,且结果具有一致性。第二部分:(1)大鼠饲料的检测结果,低、正常和高剂量饲料中赖氨酸含量分别为0.23g/100g、0.89 g/100g和1.61 g/100g,均符合实验要求。(2)三组大鼠的日均进食量分别为21.64g、23.07g和23.78g,低剂量赖氨酸组大鼠的进食量明显减少,而正常剂量组与高剂量赖氨酸组大鼠的进食量并未受到显著影响。(3)高剂量赖氨酸组与正常剂量组大鼠体重均值分别是低剂量组大鼠体重均值的1.20倍和1.17倍,三组大鼠体重均值具有显著性差异,随赖氨酸摄入量增高,体重呈增加趋势。(4)低、正常和高剂量组大鼠身体水中2H丰度均值分别为:0.1116、0.1190和0.1180,大鼠身体水被氘标记,摄入2H2O后2H能够在很短时间内与全身各组织的水达到平衡并且稳定。(5)三组大鼠的骨骼肌蛋白含量分别为18.28%、18.87%和18.77%,无显著性差别。(6)低、正常和高剂量赖氨酸组的骨骼肌蛋白分数合成率分别为11.6%,12.8%和18.8%。(7)骨骼肌蛋白合成动力学方程为:低剂量赖氨酸组ft=0.1604×(1-e-0116t);正常剂量赖氨酸组ft=0.158×(1-e-0128t);高剂量赖氨酸组ft=0.1464×(1-e-01878t)。
  结论:
  腹腔注射2H2O90min后,即能检测出血浆游丙氨酸和身体水被氘标记,说明摄入2H2O后能够成功的标记血浆游丙氨酸并且2H能在很短时间内与全身各组织的水达到平衡;每日给予4%2H2O作为日常饮水,持续1周后,即能检测出骨骼肌蛋白中的丙氨酸被氘标记,说明该方法能够成功标记骨骼肌蛋白。与正常剂量赖氨酸(0.9%)摄入量组大鼠骨骼肌蛋白分数合成率相比,低剂量赖氨酸(0.2%)摄入量组大鼠骨骼肌蛋白分数合成率略有降低,高剂量赖氨酸(1.6%)掇入量组提高了大鼠骨骼肌蛋白的分数合成率。从骨骼肌蛋白分数合成率、合成动力学方程及曲线图可知,骨骼肌蛋白的分数合成率和代谢动力学方程能敏感反映机体的高赖氨酸摄入状态,但对低赖氨酸摄入状态不敏感。
[博士论文] 蔡达
制糖工程 广西大学 2017(学位年度)
摘要:广西巴马长寿现象凸显,具有突出的地方特色。本文通过探究巴马百岁老人、巴马80-99岁老人、巴马60-79岁老人以及南宁80-99老人的营养素摄入水平,利用非靶标代谢组学技术对巴马百岁老人和巴马60-79岁老人的尿液代谢轮廓进行分析,采用代谢物靶标分析技术对四组老人与饮食相关的代谢产物进行分析测定,利用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)对四组老人指甲元素水平进行分析,并进一步采用模式识别方法鉴别出与长寿区百岁老人密切相关的特征物质,此外分析代谢产物、指甲元素含量与营养素摄入量之间的相关关系,旨在揭示巴马百岁老人代谢特征和指甲元素特征,解析饮食与代谢之间的联系。主要结果如下。
  采用称重法并结合膳食史回顾法对四组老人进行膳食调查,分析比较营养素摄入量。结果表明,巴马百岁组和巴马80-99岁组的能量摄入量均显著低于南宁对照组(p<0.05),分别降低20%和19%。巴马百岁组、巴马80-99岁组和巴马60-79岁组的蛋白质、脂肪和胆固醇摄入量均显著低于南宁对照组(p<0.05)。而巴马百岁组的膳食纤维摄入量显著高于其他三组(p<0.05),是南宁对照组的1.7倍。巴马百岁组的维生素A摄入量也为最高,显著高于南宁对照组(p<0.05)。巴马百岁组的镁摄入量也显著高于巴马80-99岁组和南宁对照组(p<0.05)。通过偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)进行模式识别,结果表明,膳食纤维、维生素A、能量、脂肪、蛋白质、胆固醇这些营养素对组间差异的贡献相对较大,显示出巴马长寿区健康老人的饮食具有高膳食纤维、高维生素A以及低能量、低脂肪、低蛋白质、低胆固醇摄入量的特征。这种特定的营养素摄入模式,应该对长寿现象的形成具有重要而积极的影响作用。
  以巴马百岁老人和巴马60-79岁老人作为研究对象,采用LC-MS分析尿液代谢组,并利用多元统计分析手段主成分分析、PLS-DA、正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)进行模式识别。PLS-DA模型与OPLS-DA模型均表明,巴马百岁老人和巴马60-79岁老人的尿液代谢组显示出明显的分离,说明两组研究对象的尿液代谢组存在明显差异。正离子模式下鉴定出38个差异代谢物,负离子模式下鉴定出67个差异代谢物。进一步鉴别出18种与巴马百岁老人密切相关的特征代谢物,其中,5-羟基-L-色氨酸、咖啡酸、D-核糖、L-谷氨酰胺、L-蛋氨酸、焦谷氨酸、Lyso PE(0∶0/18∶1)、Lyso PE(0∶0/20∶4)、Lyso PE(0∶0/22∶4)、Lyso PE(0∶0/22∶5)、Lyso PE(0∶0/22∶6)、PS(20∶0/19∶0)、PS(22∶0/18∶3)、PS(22∶4/22∶4)、PS(O-18∶0/19∶0)在巴马百岁组中显著增加(p<0.01),而L-组氨酸、组胺、吲哚在巴马百岁组中显著减少(p<0.01)。变化倍数最高的四种特征代谢物依次为PS(O-18∶0/19∶0)、PS(22∶4/22∶4)、PS(20∶0/19∶0)、PS(22∶0/18∶3),均属于磷脂酰丝氨酸类物质,对于调节百岁老人神经系统功能、改善认知能力、延缓衰老、延长寿命应该具有积极影响。
  分析比较四组健康老人与饮食相关的代谢产物水平,包括短链脂肪酸(SCFA)(乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸)、总胆汁酸、苯酚、对甲酚、肌酐、尿酸、尿素、氨态氮。结果表明,巴马百岁组的粪便中短链脂肪酸和总胆汁酸含量显著增加(p<0.05),而尿液中苯酚、对甲酚、氨态氮、尿酸和尿素含量显著降低(p<0.05),这种特定的代谢模式,应该对长寿区百岁老人的健康长寿具有重要而积极的影响。与营养素摄入量的相关性分析结果显示,粪便丁酸含量与膳食纤维摄入量呈极显著正相关(r=0.896,p<0.01),相关系数最高。此外,乙酸、丙酸、异丁酸、戊酸、总SCFA及总胆汁酸含量均与膳食纤维摄入量呈极显著正相关(p<0.01),而尿液中苯酚含量与膳食纤维摄入量呈极显著负相关(p<0.01),另外,尿液中氨态氮、对甲酚、尿酸及尿素含量均与膳食纤维摄入量呈负相关关系。据此推断日常膳食中适量增加膳食纤维摄入量在一定程度上有利于人体的健康长寿。
  采用ICP-MS分析比较四组健康老人指甲元素含量。结果表明,巴马百岁组的Mn、Fe、Co、Zn、Se元素含量显著增高(p<0.05),而Pb含量显著降低(p<0.05),对长寿区百岁老人的健康长寿应该具有积极影响。指甲元素与饮用水中相应元素含量的相关性分析结果表明,Co、Sr、Ni元素均呈显著正相关(p<0.05)。因此可以判断饮用水是研究对象体内Co、Sr、Ni元素的重要来源。与营养素摄入量的相关性分析发现,指甲中的Mn元素含量与能量、蛋白质、脂肪、膳食纤维、胆固醇、维生素A、硫胺素、烟酸、钠、镁、锌、硒摄入量呈显著相关关系(p<0.05)。Fe元素含量与能量、维生素A、烟酸、钠摄入量呈显著相关关系(p<0.05)。Co元素含量与能量、膳食纤维、胆固醇、维生素A、硫胺素、烟酸、钠、镁摄入量呈显著相关关系(p<0.05)。Se元素含量与维生素E、磷摄入量呈显著正相关(p<0.05)。
  综合解析与饮食相关的代谢产物和人体元素水平对健康长寿的协同作用和综合影响,利用PLS-DA进行模式识别,建立巴马百岁组、巴马80-99岁组、南宁对照组三组研究对象的区分模型,探究不同地域、不同年龄的高龄老人在代谢产物和指甲元素水平方面的差异。结果表明,巴马百岁组、巴马80-99岁组和南宁对照组在代谢产物如短链脂肪酸、总胆汁酸、苯酚、对甲酚、肌酐、尿酸、尿素、氨态氮水平以及元素代谢模式方面存在显著差异。PLS-DA模型结合单维非参数秩和检验,鉴定出7种与长寿区百岁老人密切相关的特征物质,包括乙酸、总SCFA、Mn、Co、丙酸、丁酸、戊酸,其含量在巴马百岁组显著增加(p<0.05)。综合考虑乙酸、丙酸、丁酸、戊酸这些短链脂肪酸以及Mn、Co元素的生理功能及对人体健康长寿的有利影响,因此,认为广西巴马百岁老人这种特定的代谢模式,应该对长寿现象的形成具有重要而积极的影响。
[硕士论文] 姚凯
急诊医学 解放军军事医学科学院;中国人民解放军军事医学科学院 2017(学位年度)
摘要:研究目的:
  建立以氯化汞灌胃为基础的SD大鼠亚急性汞中毒动物模型,研究高剂量、中剂量和低剂量氯化汞对SD大鼠的血管内皮损伤情况。选择以NO、ET和CEC计数为主的血管内皮损伤标志物变化情况作为证实汞对血管内皮具有直接损伤作用的证据,同时选择腹主动脉上段动脉血管进行病理观察,记录血管内膜变化。最后对实验数据进行总结和统计学分析,评估汞对血管内皮损伤的程度,为深入研究汞对心脑血管系统损伤提供研究数据。
  研究背景:
  汞及其衍生物有机汞,因具有持久性、易迁移性、高度的生物富集性和高生物毒性等特点,对人类健康和生态环境构成很大危害,一直是人类环境医学研究的重点问题。最新环境医学研究表明,汞可能是心脑血管疾病风险增加的一个重要独立危险因素,国外已有学者研究发现血管内皮细胞在含汞环境中其功能会受到影响,推测原因可能是Hg对血管内皮细胞有损伤作用,尚无相关证据的可靠研究,具体损伤机制研究更是缺乏,并且国内相关研究更是很稀少。基于此,本研究计划在建立可靠汞中毒大鼠动物模型后,对汞致血管内皮的损伤进行全面研究,评估汞中毒对血管内皮的损伤程度及对可能的损伤机制讨论。
  研究方法:
  1.采用高剂量、中剂量和低剂量浓度氯化汞盐水溶液灌胃制备 SD大鼠亚急性汞中毒动物模型。以染毒后是否出现肾损伤和神经损伤等症状为中毒模型成功的症状标准,以血汞检测指标为大鼠中毒模型成功的实验检测标准;
  2.动物分组:SD雄性大鼠分为4组,中毒组每组15只,对照组9只;高剂量组(17mg/kg/d)、中剂量组(8.5mg/kg/d)、低剂量组(4.25mg/kg/d)经口灌胃氯化汞盐水溶液;对照组生理盐水(2ml/d)经口灌胃;四组均连续灌胃21d。
  3.监测指标:染毒成功后,分别于中毒后7d,14d,21d,测定大鼠血细胞汞值、血清NO(一氧化氮)和ET-1(内皮素-1)值,同时行CEC(循环内皮细胞)计数;中毒后大鼠取腹主动脉上段动脉血管进行病理观察,并测量动脉直径和血管内膜厚度。
  研究结果:
  SD大鼠给予不同剂量氯化汞灌胃染毒后出现不同程度的汞中毒神经损伤和肾损伤症状,提示符合动物模型成功的症状标准。血细胞汞值:对照组血细胞汞值接近于零,中毒组较对照组(14d:P高=0.010;21d:P中=0.029;P低=0.016)存在统计学差异。血清ET-1:组间比较,高剂量组与对照组存在统计学差异(21d:P高=0.010)。组内比较,不同时期 ET-1值有统计学差异(高剂量组7d VS14d,P=0.010),证实符合动物模型成功的检验标准。血清NO:组间比较,各剂量组均与对照组存在统计学差异(21d:P高=0.010,P中=0.016,P低=0.016)。同期比较,不同中毒剂量组之间比较也有统计学差异(7d:高剂量组VS低剂量组P=0.016)。组内比较,不同时期之间在统计学上也存在差异(高剂量组7d VS14d P=0.009;中剂量组14d VS21d P=0.008,7d VS21d P=0.032;低剂量组7d VS14d P=0.016,7d VS21d P=0.016)。血循环内皮细胞计数:组间比较,各剂量组与对照组存在统计学差异(14d:P高=0.024,P中=0.036,P低=0.393;21d:P中=0.036,P低=0.036)。组内比较,不同时期之间在统计学上也存在差异(高剂量组:7d VS14d P=0.004;中剂量组:7d VS14d P=0.036,14d VS21d P=0.008,7d VS21d P=0.036;低剂量组:7d VS14d P=0.413,14d VS21d P=0.008,7d VS21d P=0.016)。中毒后大鼠腹主动脉上段血管病理检查无明显病理损伤表现。各组腹主动脉上段动脉内径在统计学上无差异,且血管内膜厚度与对照组比较也无统计学差异,各中毒组之间血管内膜厚度也未达到统计学差异。
  研究结论:
  通过给予不同剂量的氯化汞灌胃方式可以有效的建立SD大鼠的亚急性汞中毒动物模型。汞中毒后,大鼠的血清NO和ET水平及血CEC计数较对照组变化有统计学差异,提示氯化汞可对血管内皮细胞有直接损伤作用。在NO和CEC计数的统计计算中表现出的组间差异,提示汞对血管内皮的损伤作用与剂量、时间存在同一变化趋势。SD大鼠在亚急性期对血管内皮的损伤未引起明显的病理性改变,血管内膜厚度无明显变化,说明亚急性期汞对血管内皮的影响仍主要停留在代谢和功能水平上。
[硕士论文] 徐宁
营养与食品卫生学 解放军军事医学科学院;中国人民解放军军事医学科学院 2017(学位年度)
摘要:食品安全问题是当今全球公共卫生所面临的重要问题,各种人工合成或天然化合物推动着食品工业的迅速发展,而食品安全状况却每况愈下。随着食品污染物持续增多、安全标准更加严格、市场竞争和贸易挑战日益增加,和谐稳定的社会要求人们完善检测技术体系、健全食品药品监管制度、逐步形成食品安全良性循环机制。
  地西泮属于常见的苯二氮卓类处方药物,可通过化学神经递质作用于大脑及神经从而起到镇静作用,通常口服即可起效,临床当中广泛应用于治疗焦虑、失眠、癫痫、戒断反应以及肌痉挛等。因其代谢产物可在体内富集且仍具有生物活性,已被各国列为畜禽产品中禁止检出化合物。另一方面,由于地西泮具备镇静、催眠作用,犯罪分子常利用这一特点实施犯罪,造成很大的社会危害;并有部分商家在保健品中非法添加类似成分,以片面夸大其产品效果。近来,投毒、误服大量地西泮而中毒的事件引起了政府及社会各界的广泛关注。因此,建立快速、有效的地西泮检测方法是打击此类犯罪活动、监测地西泮非法添加与滥用的一种重要手段。目前已有一系列的分析方法可用于检测相关样品中地西泮的含量,其中包括高效液相色谱(HPLC)、液质联用(LC-MS)、气质联用(GC-MS)以及电喷雾质谱(ESI-MS)等大型仪器分析。此外,还有荧光测定、毛细管电泳及生物传感器检测地西泮的相关报道。尽管这些方法的灵敏度及可靠性已经在分析领域得到确认,然而以上检测方法都存在各自的缺陷,有的需要复杂的样品前处理过程,有的仪器设备昂贵需要专业人员操作,使得这些分析技术往往不适用于现场检测。同时,由于物流、互联网行业高速发展,地西泮及其同类管控药品的获取途径较以往更为便利,这也使地西泮在食品安全及社会事件中出现的频率急剧增加。因此,对于地西泮的检测需求已经从传统的兽药残留向更多方向扩展,亟需一种快速、简便、抗干扰的技术用于实际样品的快速检测。
  量热生物传感器(enzyme thermistor,ET)是将生物、物理和化学反应中最基本的热量变化转变为检测信号的生物传感装置,具有稳定性强、信号响应不受离子环境或光学特性干扰以及可实现连续监测等优势。其标准设备由内含反应柱的加热恒温装置、注射泵、进样阀、加样环、惠斯通转化放大器、信号采集工作站及连接管路组成。ET作为新型分析仪器已在临床医学、食品安全、环境监测、工业发酵监控等领域得到应用。量热酶联免疫分析法(TELISA)是通过量热传感器来检测酶联免疫吸附试验当中酶催化反应所产生的热信号,相比传统的ELISA具有抗干扰性强、标记酶种类多及免疫吸附剂能够重复使用等优点,还可以实现对待测物的连续监测。
  本论文以苯二氮卓类药物地西泮为靶标,基于量热传感器及免疫分析技术,建立了可以快速检测地西泮的量热免疫检测技术。该方法抗基质效应性强,通用性良好,无需复杂前处理过程仅需过滤中和稀释,便可直接检测液体样品。并在此基础上进行了多种不同类型实际样品的加标回收实验,通过一系列验证展现出该方法的可靠性,为该快速检测方法在不同领域中广泛应用提供了技术支持;为了进一步提高检测灵敏度,我们引入生物素-亲和素放大系统重新构建了间接竞争免疫检测体系,实现了对目标物更为经济、有效的分析,为量热传感免疫分析技术在食品安全等领域的应用奠定了基础。
  1、地西泮直接竞争量热免疫检测技术的研究
  在本研究中,基于流动注射和酶免疫分析技术,利用直接竞争法,设计并构建了快速检测地西泮的量热传感器,并将实样分析结果与传统检测方法进行了比对。其实验原理是利用蛋白G琼脂糖凝胶(PGSFF)作为固相载体,使β-内酰胺酶标记的抗原与样品中目标物竞争结合蛋白 G上吸附的地西泮抗体,目标物浓度与酶催化特异性底物氨苄西林产生的量热信号相关。在经过系列条件优化后建立起了检测曲线,最低检出限达到33.71 ng mL?1,线性检测范围为45.37至726.71 ng mL?1。该方法能够实现对地西泮的精确定量,其灵敏度足以检出地西泮对成人的最低起效剂量(2 mg),可适用于地西泮非法添加及投毒的检测。在与五种地西泮结构及功能类似物的交叉反应率对比当中,除结构高度相近的替马西泮外均无交叉反应。对为期3个月的重复性实验结果进行统计学分析,该方法信号响应的变异系数(CV)小于6.17%,且反应柱填料的使用寿命在50次以上。随后选取了包括自来水、橙汁、朗姆酒及口服液等几种具有代表性的饮料及保健品进行了实样检测,加标回收实验的回收率范围在100.15%至116.26%之间,同时采用高效液相色谱法(HPLC)进行方法比对,其结果准确一致,从而进一步证实了本方法在实际应用当中的可靠性。更值得关注的是,我们所建立的检测策略省去了复杂的样品前处理过程,仅用0.22μm的滤器过滤及必要的中和稀释后便可对液体样品直接进行分析,且能够在20分钟之内获得检测结果,使得该方法在快速检测当中具有十分明显的优势。后续研究当中,可进一步优化加样方法,提高整体工作效率,根据反应柱填料特性优化流动相提高其使用寿命。另外,若能充分发挥该传感器抗基质效应的能力,并利用识别元件 G蛋白通用性强的特点,实施生物样本中更多类型目标物的检测,有望进一步拓展量热免疫传感技术的应用领域。
  2、基于生物素-亲和素放大系统的间接竞争量热免疫检测技术研究
  本研究以量热免疫检测技术为基础,采用 ELISA的间接竞争法模型,实现对地西泮检测灵敏度的进一步提高。该方法的检测原理是将地西泮半抗原通过活性酯法直接包被在固相载体标准孔径玻璃珠(CPG)上,使其在结合单克隆抗体时与样品中目标物产生竞争作用,与此同时对β-内酰胺酶进行生物素修饰后,通过生物素化二抗引入生物素-链霉亲和素放大系统,将目标物浓度以酶催化底物氨苄西林的量热响应强度反映出来。实验中对反应体系中的关键条件,包括不同试剂的加入顺序及浓度、比例等进行优化后,建立了地西泮的检测标准曲线,其线性范围为0.1 ng mL?1至1000 ng mL?1;最低检出限为0.12 ng mL?1。选取替马西泮、劳拉西泮、硝西泮、氟西泮及佐匹克隆等地西泮类似物进行特异性研究,线性检测范围内选取的浓度未检测到量热信号响应。随后进行的重复性实验中,99.94-106.25%的回收率也充分验证了检测方法的可靠性。该策略在样品进样30分钟后,即可计算出待测物的浓度。新的检测技术除了具有直接竞争量热免疫传感器自身的优势外,大大提高了检测灵敏度及线性范围,并且增强了传感器中核心元件的寿命及稳定性。未来的研究可针对该策略加样特点,改进量热设备搭建方式,并深入探索流动相体系对间接竞争量热免疫检测技术的影响,建立更为有效、经济的新型量热传感免疫检测策略,为高灵敏检测食品药品非法添加物、农兽药残留提供一个富有应用前景的技术平台。
[硕士论文] 董文亚
公共卫生 汕头大学 2017(学位年度)
摘要:心脑血管疾病位居全球死因的第1位,高血压被认为是其主要危险因素,可导致60%的脑卒中和50%的冠心病的发生。2010年全球有高血压患者10亿,其中我国高血压患者人数已逾3.3亿,且呈现年轻化趋势。每年由于血压升高而导致的过早死亡及伤残给社会和家庭带来了沉重的经济和心理负担。
  研究显示,钠盐摄入过多不仅是高血压的独立危险因子,还可以使脑卒中的相对风险增加23%,心血管病相对风险增加14%,而限制高钠盐摄入不仅可以使高血压患者血压降低,还可以预防正常人群的高血压患病风险,并进一步降低心血管事件的发生。世界卫生组织建议成人钠盐摄入量不超过5g/d,我国居民膳食指南推荐成人钠盐摄入量不超过6g/d,而世界大多数国家钠盐平均摄入量达9~12g/d,许多亚洲国家甚至超过12g/d,我国北方人群的钠盐摄入量高达12~18g/d,是世界卫生组织建议值的两倍以上。目前关于钠盐摄入量的研究主要采用膳食调查法和尿钠检测法,而24小时(h)尿钠法被认为是评估膳食钠盐摄入水平的公认方法。
  潮汕居民有着其独特的生活方式和饮食习惯,其饮食素有“清、淡、甘、和”的特点,但由于潮汕地处沿海,其含盐海产品如海鲜、咸鱼、鱼干等摄入较多,且该地区食用调味品如沙茶酱、咸豆酱、鱼露较为普遍,目前为止,尚未见对潮汕人群钠盐摄入水平以及对钠盐相关知识、态度、行为的的评估报道。本研究拟通过横断面流行病学调查方法,收集潮汕地区社区居民24小时尿液,测定尿钠、尿钾的水平,比较不同性别、不同区域及不同语系居民的钠盐摄入量的差异,分析尿钠、尿钾水平与血压的关系,同时采用问卷调查获取居民对钠盐摄入的相关知识、减盐的态度及相关行为情况,共同分析潮汕居民的钠盐摄入水平的现况及存在的问题,进而为社区卫生计划、高血压病的管理及防治措施提供科学依据。
  对象和方法:
  采用整群随机抽样的方法分别于2016年3月至2017年1月期间分别抽取汕头市的3个主要行政区(金平区、龙湖区、澄海区)以及揭阳市的主要行政县(揭西县)的1个街道(镇),每个街道随机抽取1个居委(村)作为研究点,研究点中的所有符合纳入排除标准的居民作为研究对象。进一步结合自愿的方式,获得居民知情同意后,由经专业培训的调查人员对调查对象进行问卷调查和体格检查,并收集调查对象24 h尿液,登记尿液收集时间段,测量并记录尿量,检测尿钠、尿钾和尿肌酐浓度后推算钠盐摄入量。采用Epidata3.0建立数据库,双人录入并核查,应用SPSS21.0统计软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示,计数资料以百分比(%)表示。计量资料的正态性检验采用Shapiro-Wilk检验,对于正态分布的计量资料,两组间均数的比较采用t检验,多组间均数的比较采用单因素方差分析;对于非正态分布的计量资料,两组比较采用Mann-Whitney U检验,多组间均数的比较采用Kruskal-Wallis H检验。率或构成比的比较采用χ2检验,双变量相关性分析采用Spearman等级相关分析。对高血压的相关影响因素的分析采用二分类非条件Logistic逐步回归分析,对知识题目得分、态度题目得分、行为题目得分的影响因素分析采用多元线性回归模型。显著性水平采用双侧ɑ=0.05,P<0.05差异有统计学意义。
  结果:
  1、本研究共纳入调查对象302例,平均年龄59.0±15.2岁,其中男性75例,平均年龄60.9±15.3岁,女性227例,平均年龄58.4±15.1岁。农村居民205例(占67.9%),城镇居民97例(占32.1%);客家语系居民131例(占43.4%),潮汕语系居民171例(占56.6%)。
  2、潮汕社区居民的尿钠、尿钾平均含量分别为149.61 mmol/d与48.20mmol/d,钠钾比为3.52,转换为钠盐摄入量平均为8.74 g/d,不同性别间24 h尿钠、尿钾含量及钠钾比差异均无统计学意义(P>0.05),其中,农村居民的钠盐平均摄入量为9.19g/d,钠钾比为3.68,城镇居民的平均钠盐摄入量为7.78g/d,钠钾比为3.18,农村居民高于城镇居民(P均<0.001)。客家语系居民钠盐摄入量为9.70g/d,钠钾比为3.79,潮汕语系居民的钠盐摄入量为8.01g/d,钠钾比为3.25,客家语系居民高于潮汕语系农村居民(P<0.001),而24 h尿钾含量在不同区域,不同语系间差异均无统计学意义(P均>0.05)。
  3、高血压人群24 h尿钠含量及钠钾比均高于血压正常人群(P=0.007,P=0.01),24 h尿钠含量分别与收缩压和舒张压呈正相关(r=0.159,P=0.008;r=0.150,P=0.012);钠钾比分别与收缩压和舒张压呈正相关(r=0.211,P<0.001;r=0.142,P=0.018)。多因素分析表明,高龄、钠盐摄入较高是高血压的危险因素(OR=5.604,95%CI:3.220-9.754;OR=2.149,95%CI:1.210-3.814),低BMI为高血压的保护因素。
  4、相关分析发现,知识、态度、行为得分三者之间呈正相关(r分别为0.563、0.663、0.532,P均<0.001),行为得分和每天钠盐摄入量呈负相关(r=-0.193,P=0.001),而知识得分和态度得分与钠盐摄入量之间相关不明显(P均>0.05)。
  5、多元线性回归显示,区域、语系、教育程度、家庭月收入是影响知识、态度、行为题目得分的主要因素。
  结论:
  1、潮汕社区居民钠盐平均摄入量高于中国居民膳食指南推荐摄入量,以农村居民与客家语系居民较为明显,并与居民血压水平相关。
  2、潮汕社区居民减盐行为不足与相关知识缺乏和态度不良有关。
  3、应加强对农村居民、潮汕客家方言居民、文化程度较低及经济收入较低这类重点人群的减盐限盐的健康教育。
[硕士论文] 朱姗姗
遗传学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:食品安全是一重要的社会民生问题,猪肉是人类主要的动物食品,但猪及其制品易受沙门菌感染,威胁着食品安全及人类健康。猪霍乱沙门菌为宿主适应性沙门菌,易引起2-4月龄仔猪副伤寒病,发病死亡率较高,对养猪业中有着严重的危害。同时,鼠伤寒沙门菌作为沙门菌最常见血清型,其动物宿主广泛,包括猪,是重要的食源性病原菌之一,也是人类食物中毒主要原因。实践证明,疫苗是防控猪沙门菌病的有效措施之一。
  猪霍乱沙门菌C500株已经作为减毒疫苗使用40余年,该疫苗可从动物饲养源头控制沙门菌对动物的感染和侵害,能有效预防仔猪副伤寒,并减少沙门菌对肉产品的污染,从而减少沙门菌通过食物链感染人类,阻断沙门菌人畜之间传播,防止沙门菌病的发生。该疫苗在疾病防控中发挥重大作用,但遗憾的是动物接种该疫苗后不能通过基于玻板凝集的试验方法,简单快速鉴别动物是被免疫还是被感染(Differentiating Infected from VaccinatedAnimals,DIVA)。为此,本研究构建猪霍乱沙门菌的LPS相关基因rfaJ缺失株,致力于区分免疫动物和自然感染动物。另外,还构建了鼠伤寒沙门菌D6的faJ缺失株,并对它们生物学特性和免疫保护进行了评价,初步探索了rfaJ基因在DIVA疫苗设计及其鉴别诊断中的应用潜能。
  1.猪霍乱沙门菌rfaJ基因缺失株的构建及其生物学特性研究
  本研究利用λ-red同源重组方法构建了猪霍乱沙门菌C500ΔrfaJ缺失株,测序和PCR鉴定结果表明,rfaJ基因从基因组中缺失,同时构建了回复株C500Δrfa∷rfaJ。缺失株C500ΔrfaJ的生长速度与野生株C500相比无明显变化,液体培养缺失株C500ΔrfaJ易发生自凝集沉淀现象。与亲本株C500相比,缺失株LPS结构因O抗原缺失而不再完整,细菌由光滑型变为粗糙型。C500ΔrfaJ免疫后的小鼠血清不与亲本株C500发生凝集,能够区分感染动物和免疫动物的血清。缺失株C500ΔrfaJ感染猪空肠上皮细胞IPEC-J2后,缺失株C500ΔrfaJ对细胞的黏附和侵染能力有明显下降(P<0.01),其在细胞内增殖能力无显著变化。荧光定量PCR方法检测C500ΔrfaJ刺激细胞后细胞炎性因子mRNA表达水平,结果显示,与亲本株C500感染细胞组相比,TNF-α、IL-4与IL-6表达水平明显下降。
  2.鼠伤寒沙门菌rfJ基因缺失株的构建及其生物学特性研究
  以鼠伤寒沙门菌D6为研究对象,构建了D6ΔrfaJ基因缺失株及其回复株D6ΔrfaJ∷rfaJ。鼠伤寒沙门菌D6ΔrfaJ基因缺失株生物特性与猪霍乱沙门菌缺失株C500ΔrfaJ的生物特性基本一致。缺失株D6ΔrfaJ生长速度与野生株相比无明显变化,液体培养过程中缺失株发生自凝集沉淀;与其亲本株D6相比较,D6ΔrfaJ的LPS结构因O抗原缺失不再完整,细菌由光滑型变为粗糙型,D6ΔrfaJ免疫后的小鼠血清不与其亲本株D6发生凝集。然而,有些生物学特性发生了改变,多项生化指标发生改变,缺失株运动能力下降。以缺失株D6ΔrfaJ和亲本株D6分别感染猪空肠上皮细胞IPEC-J2后发现,缺失株D6ΔrfaJ对细胞的黏附和侵染能力有明显下降,但增殖能力无特别明显变化,并在感染8h后缺失株的增殖能力超过亲本株D6;以BALB/c为动物模型,口服途径免疫6周龄小鼠,间隔2周,再次免疫,2周后以口服途径攻毒,对D6ΔrfaJ进行了免疫保护效力评价,结果显示,血清中抗体水平在14d时达到较高水平,并且小鼠经2次免疫后两周,能够对高毒力菌株SL1344提供80%的免疫保护;缺失株D6ΔrfaJ在体内脏器和粪便中的带菌时间低于亲本株D6在体内存在时间;口服细菌后,相比较亲本株D6,缺失株感染组小鼠脏器的病理切片无明显病灶。
  综上所述,D6ΔrfaJ不仅具有良好的安全性,同时能提供良好的免疫保护力,为鼠伤寒沙门菌DIVA疫苗设计奠定重要的基础。
[硕士论文] 刘宁伟
军事预防医学 解放军军事医学科学院;中国人民解放军军事医学科学院 2017(学位年度)
摘要:近年来食品安全问题不断,人们渐而不以为奇,甚或一度谈“食”色变。食源性疾病是我国乃至世界范围内的首要食品安全问题,以及公共卫生问题之一,给世界各国带来了难以估量的经济负担和社会影响。在所有食源性疾病致病因素包括微生物因素、化学物理以及有毒动植物因素中,微生物因素是最重要的致病因素,高居第一位;而细菌在微生物中占绝大多数,所以食源性致病菌是我国食品安全和公众健康面临的最根本问题。沙门氏菌是最常见且最重要的致病菌,其血清型众多,是我国细菌性食源性疾病中位居第二位的致病菌。副溶血性弧菌大量分布于世界各地的近海水域,人类大多由于摄入生的或未熟的海产品而致病,其已成为我国乃至亚洲许多国家第一位的食源性致病菌。单核细胞增生李斯特菌可引起致命性的李斯特菌病,其在欧美国家十分常见,近年来在我国市售食品中也频频检出,已成为我国最常见的食源性致病菌之一。对于上述三种致病菌,建立其快速筛查和诊断的方法十分必要。
  总的来说,食源性致病菌的快速鉴定方法包括免疫学方法、生物传感器技术以及核酸检测。免疫学方法如ELISA、IMS等依赖于抗原抗体的特异结合,抗干扰能力差。生物传感器技术具有低稳定、高成本的缺点。PCR及其衍生技术作为核酸检测的经典代表,在检测灵敏度、稳定性方面都大有增进,但其对专业操作和精密仪器如温度循环仪的依赖使其应用至今仍局限于实验室内,越发难以满足传染病即时诊断的现实需求。核酸恒温扩增技术的出现填补了这一缺憾,这些方法无需热循环,在恒温条件下即可实现核酸序列的特异扩增,从而使核酸检测从实验室走向现场成为可能。
  LAMP技术,即环介导恒温扩增,是核酸恒温扩增的集大成者。其反应在恒温条件下,仅需一种类型的酶即可实现扩增;扩增反应在60min内完成,且具有高特异性和类似于巢式PCR的灵敏度;快速、连续的LAMP反应成就了其高扩增效率,还可用于RNA的扩增;其结果肉眼可判,也可利用浊度和荧光对其反应进行实时监测。由于LAMP反应结合了以上特点,其自发明以来在各领域都有深入应用,包括病原鉴定、基因诊断、环境样品的快速检测等。
  LAMP技术的发展似乎已十分完备,但美中不足的是,目前LAMP反应大都局限于单靶标检测,即一次反应只能检测一个目的基因,多重LAMP的发展受到限制。究其原因,大致可归结为一“易”一“难”:一是多重LAMP体系非特异扩增之易;由于LAMP引物为4-6条,多重LAMP体系中引物数量就要数倍于此,引物间交叉反应的几率相应增加,从而导致非特异扩增。二是多重LAMP体系目的基因区分之难;由于LAMP产物大小不等、长短不一,所以多重LAMP无法像多重PCR那样仅通过电泳就可对其体系中的多个目的片段进行区分。这两个因素是制约多重LAMP发展的瓶颈。鉴于以上分析,本研究主要有以下三部分内容:
  一.副溶血性弧菌、沙门氏菌、单增李斯特菌LAMP检测方法的建立
  分别以副溶血性弧菌tlh基因、沙门氏菌bcfD基因、单增李斯特菌iap基因为靶序列,设计相应的LAMP引物,Blast序列分析进一步验证引物特异性;综合考虑扩增效率和检测灵敏度,选取最优引物,建立LAMP反应体系。以相近的其他食源性致病菌DNA为模板评价其特异性,以PCR反应为参照判定和评价其检测灵敏度。实时浊度结果显示,扩增可在40min内完成。特异性实验显示,这三种致病菌的LAMP引物均只能扩增其相应的目的基因,而以其他相近致病菌DNA为模板的反应和阴性对照均无扩增出现,表明其高度特异。以PCR反应作为比较的灵敏度实验显示,该法灵敏度好,或具有优于PCR的灵敏度。
  二.副溶血性弧菌、沙门氏菌和单增李斯特菌多重LAMP检测方法的建立
  本实验旨在建立能够同时检测副溶血性弧菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的多重LAMP反应体系。引入引物浓度优化的概念和意识,通过考察三种引物浓度组合的多重反应体系对扩增效率的影响,综合考虑检测成本,以确定最佳引物配比,并以此建立多重LAMP反应体系,初步评价特异性和灵敏度。结果显示,减少各LAMP引物浓度为其原浓度的一半(1.3μmol/L),以此建立的含有18条引物的多重LAMP反应体系,在保证扩增效率的同时,又能减小非特异扩增产生的可能。特异性和灵敏度实验表明,当这三种致病菌DNA或之一、或之二、或之三存在时,该多重LAMP都能够将其检测出来,其最低检测浓度与相应的单重LAMP灵敏度是一致的。该方法在某种程度上减少了工作量、节省了成本,适用于大量样品检测时的初步筛查和诊断。
  三.沙门氏菌和副溶血性弧菌多重实时荧光LAMP检测方法的建立
  本实验旨在建立一种同时检测并鉴别沙门氏菌和副溶血性弧菌的多重实时荧光LAMP方法,以打破“多重LAMP体系目的基因区分之难”的瓶颈。其方法是在多重LAMP反应体系中加入荧光染料EveGreen,在反应结束后对多重LAMP产物进行熔解曲线分析,依据目的基因LAMP产物熔解温度(Tm值)的不同以同时检测沙门氏菌和副溶血性弧菌,并进行区分。初步评价该实时荧光LAMP的特异性和灵敏度,并研究其定量能力。
  实验结果显示,沙门氏菌bcfD基因和副溶血性弧菌toxR基因LAMP产物具有相对稳定的Tm值,分别为86.25±0.06℃和84.05±0.06℃;这两个Tm值之间的差异可使二者在多重体系中被区分,在熔解曲线上表现为两个峰值。特异性实验显示,该方法能够扩增全部的沙门氏菌和副溶血性弧菌DNA,且7株沙门氏菌的Tm值统一落在86.5oC-86.8oC之间;表明该方法具有较好的检测特异性。对沙门氏菌和副溶血性弧菌同时检测和鉴别的灵敏度与多重PCR是一致的。该实时荧光LAMP定量能力评价实验表明,模板DNA浓度与反应时间Cq值之间存在线性关系(R2=0.934),表明该法具备基本的定量能力。多重LAMP体系中的优势扩增现象亦在本实验中得到发现和证实,并依据“强”减“弱”增的引物浓度调整原则优化引物浓度,平衡了不均衡扩增。
  综上所述,本研究针对我国三种重要的食源性致病菌,致力于LAMP检测技术的研究,着力打破制约多重LAMP发展的两大瓶颈;以进一步优化和完善LAMP技术,为食源性致病菌的快速检测提供技术支持,并为多重生物检测技术的发展奠定理论依据。
[硕士论文] 邢星
公共卫生与预防医学;流行病与卫生统计学 东南大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  慢性膳食暴露评估理论上需要收集人群长期膳食消费数据,但实施这样的调查是很困难的,如何对现有的短期膳食调查数据运用统计方法与计算机模拟技术获得长期膳食数据值得探讨,也是目前该领域研究热点。本研究基于混合效应模型原理提出新的纵向数据模拟方法,即将短期数据“拉伸”为长期结果,为慢性膳食暴露评估中日常摄入量的计算提供新的思路。
  方法:
  通过整合消费量数据和污染物浓度数据进行膳食暴露量的计算,其中消费量数据来源于“中国健康与营养调查”中江苏省数据,选取2004,2006,2009,2011非连续四年每年连续3天成人消费量调查数据,而污染物浓度数据则来源于2004-2009年江苏省污染物监测网中镉的数据。构建桥梁数据库,计算镉的每天暴露量利用混合效应模型算出固定效应参数和随机效应参数,计算暴露量的一阶自相关系数。根据这些模型参数,设置模拟人数、模拟天数,利用Monte Carlo模拟,获得个体长期每天暴露量数据,并对模拟数据的数据结构进行验证,分析暴露量的变异性和均数、P95的不确定性,计算日常摄入量分布,并与OIM、BBN结果比较,分析本次研究方法的可行性。
  结果:
  本次研究4个年份连续3天均参加调查的成人共535人,其中男性247人,女性288人,城市成人178人,农村成人357人,分析结果如下:
  1、每天暴露量的分布:江苏省成人及其亚组镉的每天暴露量(μg kg-1bw day-1)分布如下:总人群(535人)均值为0.36,P25~P999为(0.04~7.51);男性均值为0.36,P25~P999为(0.04~7.59);女性均值为0.36,P25~P999为(0.04~7.51);城市成人均值为0.34,P25~P999为(0.04~5.54);农村成人均值为0.37,P25~P99.9为(0.04~10.60)。
  2、相关模型参数:将性别、城乡、年份及各一级交互纳入混合效应模型进行分析,最终年份、城乡及其一级交互作用有意义,随机效应项中个体间方差为σb2=0.054,个体内方差为σ(B)2=0.732,一阶自相关系数ρ=-0.059。
  3、模拟方法验证:本次研究共模拟3组数据,其模拟人数、模拟天数设置分别为(300人,365天),(500人,365天),(1000人,365天)。将对数转换后的原始数据和模拟数据从均值、标准差、方差成分比例及一阶自相关系数进行比较,结果,模拟数据以上几个指标均与原始数据十分接近。
  4、不确定性分析:重复200次Bootstrap抽样,分别计算3组模拟数据的总人群(所有成人)、城市成人、农村成人暴露量的统计量(均数和P95)及其置信区间,各统计量的95%置信区间均包含单次Monte Carlo模拟结果。
  5、日常摄入量分布:基于混合效应模型计算的日常摄入量均数为0.34μg kg-1bw day-1,标准差为0.09μg kg-1bw day-1,P25~P999为(0.20~0.72)μg kg-1bw day-1,相应的BBN模型计算结果为0.34μg kg-1bwday-1,标准差为0.09μg kg-1bw day-1,P25~P999为(0.20~0.73)μg kg-1bw day-1,各人群P999均小于ADI值。
  结论:
  1、镉膳食每天暴露量的差异主要体现在高端百分位数上,农村成人高于城市成人。
  2、基于混合效应模型原理的模拟方法可以利用短期数据模拟获得与原始数据数据结构特征一致的长期纵向数据。
  3、利用本次模拟方法模拟获得的长期纵向暴露量数据用于日常摄入量的计算,其结果与BBN方法的结果相近。
  4、根据该样本获得的长期暴露评估还看不出含镉食物对江苏省成人的健康造成危害。
[硕士论文] 容祖华
劳动卫生与环境卫生学 南方医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  1.研究间歇性断食对老年前期肥胖大鼠代谢及肠道菌群的影响。
  2.研究不同断食形式对人体肠道菌群的影响。
  3.研究饮水断食对人体代谢的影响。
  方法:
  1.雌性Wistar大鼠经42w高脂高糖饲料饲养造模,根据体质量((x)±SD)选取模型鼠进行间歇性断食干预。干预方法为每2w断食72h,总干预时间18w。干预后进行口服葡萄糖耐量试验、血脂四项检测。收集粪便,通过Illumina高通量测序检测16S rRNA基因V4可变区,运用BIPES、QIIME及LEfSe分析肠道菌群。
  2.招募健康志愿者进行持续7日的断食实验,分为饮水断食组和果汁断食组。收集断食前两周至断食后四周的粪便样本,通过Illumina高通量测序检测16S rRNA基因V4可变区,运用BIPES、QIIME及LEfSe分析肠道菌群。
  3.收集饮水断食组志愿者在断食前后的血液标本,进行生理生化指标检测以及预处理后进行核磁共振分析样本中的代谢产物。使用MestReNova对1H CPMG谱进行分析,Simca-P进行多元统计分析。根据人类代谢产物数据库对断食前后有统计差异的代谢产物成分进行鉴定。
  结果:
  1.大鼠实验中间歇性断食组体质量相对于模型对照组显著下降(P<0.01);高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇均显著下降(P<0.05);空腹血糖显著上升(P<0.01);葡萄糖耐量测试曲线下面积显著高于模型对照组,糖耐量减退(P<0.05);HE染色显示间歇性断食轻度减少肝脏脂肪变性。肠道菌群结果显示,断食组肠道菌群得到显著改善,具体表现为YS2、RF32、Helicobacteraceae(螺杆菌科)增加,Lactobacillus(乳杆菌属)、Roseburia(罗氏菌属)、Erysipelotrichaceae(韦荣球菌科)、Ralstonia(青枯菌属)、Bradyrhizobiaceae(慢生根瘤菌科)和RF39减少。Spearman相关性分析发现Bradyrhizobiaceae与总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇呈正相关;RF39与大鼠体质量呈正相关。
  2.饮水断食比果汁断食对人肠道菌群的影响更为强烈,且效果在宿主恢复饮食后能长久维持。但饮水断食的效果具有个体差异,总的来看饮水断食能使肠道菌群变成以Prevotella(普雷沃氏菌属)、Bacteroides(拟杆菌属)、Faecalibacterium(柔嫩菌属)和Succinivibrio(琥珀酸弧菌属)为主。
  3.饮水断食前后的代谢产物水平存在明显差异,断食期间3-羟基丁酸酯和乙酰乙酸的表达上升(P<0.05),而丙氨酸、谷氨酸盐、组氨酸、氧化三甲胺、β-葡萄糖、α-葡萄糖的表达显著下降(P<0.05)。断食期间,机体的血糖、胰岛素、甘油三酯下降,酮体、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、血肌酐、血尿酸、皮质醇升高,提示机体可能通过促进代谢脂肪酸、肌肉、核酸等物质产生能量。机体代谢改变可能与脂肪酸合成、鸟氨酸循环、氨基酸代谢、丙氨酸循环、转录翻译、酮体代谢、三羧酸循环、糖异生、糖酵解等多个通路相关。在恢复饮食3天后代谢产物水平恢复至与断食前相似。
  结论:
  1.间歇性断食能改善肠道菌群,降低老年前期肥胖大鼠体质量和血脂水平,但对糖代谢可能有不良影响。
  2.无卡路里摄入比限制卡路里摄入的断食方式对肠道菌群影响更大。
  3.饮水断食能把拟杆菌为主的肠道菌群变为以普雷沃氏菌为主,而对普雷沃氏菌为主的肠道菌群结构影响不大。
  4.机体在饮水断食期间可能通过调节能量相关的代谢通路,消耗脂肪酸、肌肉、核酸维持机体活动所需的能量消耗。
  5.饮水断食后恢复饮食第3天,机体的代谢产物都恢复到正常水平,但肠道菌群仍没有恢复,说明机体代谢调节比肠道菌群对饮食的改变更加敏感。
  总体而言,断食对肠道菌群的影响个体差异性较为显著,用于临床疾病预防和治疗仍需深入研究,但能为肥胖患者提供新的视角。
[硕士论文] 汤弘智
营养与食品卫生学 解放军军事医学科学院;中国人民解放军军事医学科学院 2017(学位年度)
摘要:近年来功能化磁性微球作为一种新型固相萃取材料获得越来越广泛的关注。通过对微球表面进行改性或修饰,可满足污染物在提取、分离和净化等多方面的需求。本研究利用不同功能化磁性材料对四环素类(四环素、土霉素、金霉素、强力霉素)、喹喏酮类(培氟沙星、诺氟沙星、氟罗沙星、左氧氟沙星、依诺沙星、洛美沙星、二氟沙星、司帕沙星、达氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、加替沙星)抗生素的吸附特性,建立了基于磁分散固相萃取的多种抗生素色谱质谱检测新技术,相关研究对于进一步探索和完善抗生素高灵敏度检测新技术,拓宽磁性材料的应用范围都具有重要的意义。
  主要的研究内容包括:
  1.基于氨基功能化磁性微球的四环素类抗生素HPLC检测新技术
  本研究以Fe3O4为磁性内核,制备了氨基修饰磁性功能材料,考察了不同材料对TCs的吸附性能。利用氨基功能化磁性微球(MNP-NH2)在有机相中对四环素类抗生素(TCs)高效的吸附特性,将分散固相萃取技术与磁固相萃取技术相结合,建立了4种TCs的磁分散固相萃取HPLC检测新技术,并应用于牛奶样品的检测。内容包括:
  (1)功能化磁性材料的制备:在实验室前期氨基修饰磁性微球基础上,将SBA-15大分子介孔材料引入磁性功能材料制备,并进一步优化了APTES用量,研究制备了不同比表面积及氨基含量的磁性材料 Fe3O4@SBA-15@APTES和Fe3O4@SiO2@APTES。傅里叶红外光谱,元素分析表征结果证实偶联成功,对硝基苯甲醛比色法对磁性材料表面氨基定量结果表明:通过控制合成过程中APTES用量可制备不同氨基含量的磁性功能材料。
  (2)功能化磁性材料对TCs吸附效果研究:Fe3O4@SiO2@APTES在乙腈溶液中对 TCs展示了良好的吸附特性。实验研究了萃取剂用量、磁性材料用量、pH值、吸附时间、洗脱液组分、洗脱时间和洗脱次数等因素对TCs吸附效果的影响,结果表明:以NaCl为盐析剂,MgSO4·7H2O为络合剂,乙腈为萃取剂,利用分散固相萃取可将TCs从水相萃取至乙腈溶液中;以Fe3O4@SiO2@APTES作为吸附剂,1mL萃取液加入90μL浓度为1mol/L的 NaOH,以20mg的Fe3O4@SiO2@APTES吸附10min可实现TCs的高效吸附;水:乙腈:高氯酸比例为86:10:4(V:V:V)的混合溶液洗脱5min可获得较好的洗脱效果,4种TCs的吸附率在77.36%-99.04%之间。
  (3)牛奶样品中 TCs测定:采用实验建立的方法对牛奶中四种TCs进行测定,方法线性范围为0.05-2.5mg/L,相对标准偏差在3.85-9.30%之间,检出限40μg/L,加标回收率在87.78-107.48%之间。相对于国标固相萃取方法,本研究建立的磁分散固相萃取方法具有操作简便、快速等优点,可满足牛奶样品TCs日常检测的需求。
  2.基于SBA-15新基质的喹诺酮类抗生素MALDI-TOF MS高通量检测新技术
  传统基质多为小分子有机酸,MALDI测定时在低分子量范围内(<500Da)会产生很强的基质背景干扰。针对以上问题,实验在传统基质CHCA基础上,引入SBA-15大分子介孔材料,制得改性CHCA新基质SBA-15@APTES@CHCA并应用于喹诺酮类抗生素的检测,建立了基于MALDI-TOF MS新基质的12种喹诺酮类抗生素(QNs)检测新方法。利用传统CHCA基质和SBA-15反应所得的SBA-15@APTES@CHCA基质不仅保留了传统基质吸收和传递激光能量的性质,而且通过SBA-15大分子的引入可有效消除传统基质在低分子量测定时的基质背景干扰。主要研究内容包括:
  (1) SBA-15@APTES@CHCA新基质的合成:实验利用SBA-15表面的羟基基团,通过APTES水解反应制备了表面氨基化SBA-15@APTES前体;利用EDC和NHS酰胺反应,将CHCA的羧基进行活化后与SBA-15@APTES偶联,制备了SBA-15@APTES@CHCA新基质。傅里叶红外光谱,扫描电镜鉴定偶联成功。
  (2) SBA-15@APTES@CHCA使用条件优化:实验对基质溶剂种类、基质浓度、样品基质混合比、点样方法等条件做了优化,结果表明:选用乙腈:0.1%TFA(1+1)为基质溶剂,1mg/mL基质悬浮液,基质与样品体积比为1:6时,采用混合点样法可获得较好的MALDI-TOF-MS分析信号。
  (3)喹诺酮类抗生素MALDI-TOF MS检测方法建立:利用制备的新基质,在优化好的条件下对12种QNs用MALDI-TOF MS进行检测,可获得较好的分析信号,分别是:达氟沙星m/z358(M+H)+,恩诺沙星m/z360(M+H)+,环丙沙星m/z332(M+H)+,二氟沙星 m/z400(M+H)+和 m/z422(M+Na)+,依诺沙星 m/z321(M+H)+,加替沙星m/z376(M+H)+,氟罗沙星m/z370(M+H)+,洛美沙星m/z352(M+H)+,司帕沙星 m/z393(M+H)+,诺氟沙星 m/z320(M+H)+,左氧氟沙星m/z362(M+H)+,培氟沙星m/z334(M+H)+,12种QNs的方法检出限在0.5-1.0mg/L之间。
  3.石墨烯功能化磁性材料在喹诺酮类抗生素MALDI-TOF MS高通量检测中的应用
  本研究以氨基功能化磁性微球为基础,在其表面进一步修饰氧化石墨烯,制备了石墨烯功能化磁性材料(GO-NH-Fe3O4),并应用于喹诺酮类抗生素的分离富集。结合前期建立的MALDI-TOF MS检测技术,建立了基于石墨烯功能化磁性材料的喹诺酮类抗生素MALDI-TOF MS检测新技术,并应用于环境水样的检测。内容主要包括:
  (1) GO-NH-Fe3O4的制备:实验在利用Hummer’s改良法制备氧化石墨烯基础上,将氨基化磁性微球与氧化石墨烯偶联,制得石墨烯功能化磁性材料GO-NH-Fe3O4。FT-IR和 SEM结果证明石墨烯氧化成功,氨基磁性微球成功偶联到了氧化石墨烯表面,且在水中具有较好的分散性。
  (2) GO-NH-Fe3O4对QNs吸附效果研究:实验对磁性材料种类、pH值、吸附反应时间、GO-NH-Fe3O4用量、洗脱液中氨水浓度、洗脱时间、洗脱次数进行了优化,结果表明:在弱酸性、中性或弱碱性条件下,3mL的GO-NH-Fe3O4与适量样品反应30min,可将样品中的喹诺酮类抗生素吸附到GO-NH-Fe3O4材料上,质谱图中12种目标物特征峰均能明显辨别,吸附后残液中检测不到目标物;用15%的氨水甲醇溶液对吸附剂洗脱15min,可获得较好的洗脱效果。
  (3)水样中QNs检测:在优化的条件下利用GO-NH-Fe3O4磁性功能材料,结合MALDI-TOF MS方法对自来水、海河水、井水等水样中的12种QNs进行检测,结果表明:结合GO-NH-Fe3O4的富集净化,利用MALDI-TOF-MS测定12种QNs方法的检出限可达10μg/L。实验建立的方法具有高通量、检测速度快等特性,可应用于环境水中多种QNs的快速高通量筛查需要。
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