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[硕士论文] 夏颖
眼科学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:本文从以下几个部分展开论述:
  第一部分 23G玻璃体切除手术中角膜缘后5.0 mm与4.0 mm巩膜穿刺口对晶状体及锯齿缘的安全性对比研究
  目的:观察和比较23G玻璃体切除手术(PPV)中角膜缘后5.0 mm、4.0 mm巩膜穿刺口对晶状体及锯齿缘影响的安全性。
  方法:前瞻性病例对照研究。首次行23G PPV治疗的连续病例290例300只眼纳入研究,其中146例150只眼术中作角膜缘后5.0 mm巩膜穿刺口,144例150只眼术中作角膜缘后4.0 mm巩膜穿刺口。灌注套管针穿刺口位于颞下方4:00或8:00时钟位,上方两个穿刺口分别位于2:00和10:00时钟位,均接受标准经睫状体平坦部三通道23G PPV。所有手术均由同一医师主刀。5.0 mm组男性87例89眼,女性59例61眼,右眼66只,左眼84只,患者平均年龄(56.36±10.00)岁,平均眼轴长度(23.97±2.47)mm,全部为有晶状体眼;4.0 mm组男性76例78眼,女性68例72眼,右眼80只,左眼70只,患者平均年龄(54.65±11.94)岁,平均眼轴长度(24.20±2.26)mm,全部为有晶状体眼。两组患者年龄、眼轴长度比较,差异无统计学意义(t=-1.324、0.867,P=0.186、0.387),性别、眼别、疾病构成比比较,差异无统计学意义(x2=1.366、2.615、10.195,P=0.242、0.106、0.07),具有可比性。
  结果:5.0mm组150眼,术中晶状体损伤4只眼,占所有患眼的2.67%,4.0 mm组150眼,术中晶状体损伤14只眼,占所有患眼的9.33%(x2=5.910,P=0.015);5.0mm组术中发生穿刺口附近视网膜裂孔5只眼,占所有患眼的3.33%,4.0 mm组术中发生穿刺口附近视网膜裂孔6只眼,占所有患眼的4%(x2=0.094,P=0.759);两组术中均未发生视网膜出血、暴发性脉络膜上腔出血、医源性视网膜脱离等其他并发症。5.0 mm组术中清除基底部玻璃体时间3~16min,平均(6.17±2.76)min,4.0 mm组术中清除基底部玻璃体时间4~35min,平均(10.03±5.56)min(t=7.599,P<0.01)。
  结论:23G PPV中角膜缘后5.0 mm与角膜缘后4.0 mm穿刺口相比,对晶状体及锯齿缘具有较高安全性,且切除基底部玻璃体效率高,可以作为初学者行保留晶状体PPV的优选方法。
  第二部分 成人正常眼球角膜缘至晶状体后顶点平面眼表距离的测量
  目的:测量成人正常眼球角膜缘至晶状体后顶点平面眼表距离。
  方法:选取同期105例行头颅轴向位CT检查的无眼部疾病患者,选取眼球前后径最长的1张图像测量眼球前后径、晶状体厚度、角膜缘至晶状体后顶点平面眼表距离。不同性别患者之间年龄、眼球前后径、晶状体厚度、角巩膜缘至晶状体后顶点平面眼表距离行两独立样本t检验。年龄、眼球前后径、晶状体厚度及角巩膜缘至晶状体后顶点平面眼表距离相关关系行Pearson相关性分析。
  结果:眼球CT图像测量结果显示,眼球前后径为22.00~26.00 mm,平均眼球前后径为(24.39±0.97)mm;晶状体厚度3.20~5.60 mm,平均晶状体厚度为(4.22±0.47)mm;角膜缘距晶状体后顶点平面眼表距离为4.5~9.40 mm,平均距离为(6.72±0.81)mm。不同性别患者之间年龄、眼球前后径、晶状体厚度及角巩膜缘至晶状体后顶点平面眼表距离比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。相关性分析结果显示,年龄与眼球前后径、角膜缘至晶状体后顶点平面眼表距离无相关性(r=-0.1173、0.1302,P=0.2332、0.1857);眼球前后径与角膜缘至晶状体后顶点平面眼表距离、晶状体厚度无相关性(r=-0.1470、0.0462,P=0.1347、0.6400);角膜缘至晶状体后顶点平面眼表距离与晶状体厚度无相关性(r=0.0107,P=0.9140);年龄与晶状体厚度有相关性(r=0.3289,P=0.0006)。
  结论:当眼球前后径在22.00~26.00mm之间,角膜缘至晶状体后顶点平面眼表距离与年龄、眼球前后径及晶状体厚度均无统计学相关性。角膜缘后5.0 mm巩膜穿刺口适用于眼球前后径在此范围的患眼。
[硕士论文] 裴超
中医五官科学 黑龙江中医药大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  通过牛血清白蛋白诱导而建立兔实验性葡萄膜炎,观察兔的眼部症状及体征变化情况,客观评价中药复方目炎宁对兔实验性葡萄膜炎的疗效,并探讨IL-2、TNF-α及ACA-IgG在兔实验性葡萄膜炎中的表达水平的变化。
  方法:
  将40只新西兰大白兔按照随机数表法随机分为:正常对照组、模型对照组、中药治疗组及激素治疗组。选用牛血清白蛋白作异体抗原,玻璃体及耳缘静脉二次注射法诱导兔实验性葡萄膜炎动物模型。将4%BSA0.25mL注射于兔眼玻璃体腔内;7天后,将2%BSA2.5mL于兔耳缘静脉处注射,以建立实验性葡萄膜炎动物模型。造模后,正常对照组不予任何处理;模型对照组予生理盐水灌饲;中药对照组予复方日炎宁灌饲;激素治疗组予醋酸泼尼松片溶解液灌饲。通过裂隙灯显微镜及检眼镜观察各组兔眼部的症状及体征,并采用Caspi标准予以各兔眼部炎症积分评价。同时,分别于不同时段(第1、3、7、10、14、21天)采集各兔房水及耳缘静脉外周血,并运用酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同时段各组兔房水及外周血的IL-2、TNF-α及ACA-IgG的表达水平情况。
  结果:
  1.建模后,模型组眼部炎症积分值呈不断增高。给药后,激素治疗组和中药治疗组眼部炎症积分值分别呈不同程度的下降,治疗前后比较均有统计学意义(P<0.05)。约1周左右,两治疗组眼部炎症积分明显低于模型对照组(P<0.05),但两治疗组间差异无统计学意义(P>0.05)。
  2.正常组兔外周血、房水中IL-2、TNF-α及ACA-IgG均具有一定的表达,其前后时段差异及其与其他三组造模前比较均无统计学意义(P>0.05)。建模后,房水和外周血中IL-2、TNF-α及ACA-IgG逐渐升高,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05);给药后,中药治疗组不同时段各项指标均明显低于模型组(P<0.05),治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05),与激素治疗组疗效相似。
  结论:
  1.牛血清白蛋白诱导的兔实验性葡萄膜炎的炎症反应可持续2周以上。
  2.随着兔实验性葡萄膜炎眼部炎症积分的增高,血清和房水中IL-2、TNF-α表达含量亦显著升高,说明IL-2、TNF-α与内源性葡萄膜炎的发生与发展呈正相关。
  3.复方目炎宁可以有效地控制和改善BSA诱导的兔实验性葡萄膜炎的症状及体征,降低眼部炎症积分以及血清和房水中IL-2、TNF-α及ACA-IgG含量,其疗效作用与醋酸泼尼松片相近。
  4.ACA-IgG与内源性葡萄膜炎的发生与发展具有相关性。
[硕士论文] 吴丽虹
中西医结合临床 黑龙江中医药大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  通过眼表综合分析仪(Keratograph5M)对眼表泪膜的检测,及对临床主观症状的观察,分析舒目散熏眼对年龄相关性白内障术后泪膜稳定性的影响,为改善白内障术后患者的生活质量提供有效中药方剂。
  方法:
  随机选取中航工业哈尔滨二四二医院接受白内障超声乳化吸除术联合人工晶体植入术符合条件的单纯老年性白内障患者97例,并将患者随机分为三组:治疗组32例(32只眼)用舒目散熏眼,对照组33例(33只眼)用开水热气熏眼,空白对照组32例(32只眼)。所有患者于术前1天,术后1天、10天、30天均进行首次泪膜破裂时间(FTBUT)、平均泪膜破裂时间(ATBUT)、非侵入式泪河高度(NITMH)、睑板腺腺体完整度评分和眼表指数问卷评分检测。
  结果:
  (1)空白对照组患者术后10天FTBUT、ATBUT、NITMH均低于术前1天,术后30天FTBUT、ATBUT、NITMH低于术后10天,两两比较差异具有显著统计学意义(P<0.05)。患者术后1天FTBUT、ATBUT、NITMH均高于术后10天、术后30天,具有统计学意义(P<0.05)。
  (2)术后10天,对照组患者FTBUT、ATBUT、NITMH高于空白对照组,治疗组患者FTBUT、ATBUT、NITMH高于对照组,两两对比差别具有显著统计学意义(P<0.05)
  (3)术后30天,对照组患者FTBUT、ATBUT、NITMH高于空白对照组,治疗组患者FTBUT、ATBUT、NITMH高于对照组,两两对比差别具有显著统计学意义(P<0.05)
  (4)术后30天睑板腺缺失程度显示:空白对照组与对照组比较无统计学意义(Z=-0.114,P=0.909);空白对照组与治疗组比较无统计学意义(Z=-1.487,P=0.137);对照组与治疗组比较无统计学意义(Z=-1.404,P=0.160)。
  (5)术后30天干眼指数调查问卷评分显示:治疗组比空白对照组患者干眼症状主观感觉较好,有明显统计学差异(Z=-6.256,P=0.000);治疗组比空白对照组患者主观感觉良好,有明显统计学意义(Z=-7.076,P=0.000);治疗组与对照组比较无明显统计学差异(Z=-1.192,P=0.233)。
  结论:
  1.白内障超声乳化术对患者泪膜稳定性有一定的破坏,此结论与相关文献结果相符合;2.舒目散熏眼能改善白内障术后泪膜的稳定性,缓解临床症状,提高患者术后生活质量。
[硕士论文] 第五朋朋
电路与系统 兰州交通大学 2018(学位年度)
摘要:日常生活中常见的一些疾病,如高血压、肾炎、糖尿病和心血管病等会引起眼底视网膜血管病变,所以,观察血管形态的变化可以初步预估或诊断人体的某些疾病。因此,需要利用数字图像处理技术对其进行检测与分析,重点检测视网膜血管的形态是否有异常,以此来帮助医生诊断病情。使用数字图像处理技术具有处理速度快、分析客观、可比性高等优点,避免了人工分析的主观性与不确定性。因此,研究眼底图像视网膜血管的分割算法具有重要的临床意义。本文针对眼底图像视网膜血管分割方法进行了相关研究,主要工作如下:
  (1)提出基于小波变换和Retinex相结合的视网膜血管增强算法,首先对图像进行小波分解,得到低频和高频系数,对低频图像采用多尺度Retinex算法处理,对高频图像采用小波分层增强处理,然后进行小波重构,最终所得视网膜血管图像的清晰度、对比度和细节突出程度均有较大提高,取得了良好的效果;
  (2)提出改进的多尺度单通道线性跟踪分割算法,基本思想是从图像中所选取的一部分种子像素开始跟踪,在跟踪过程中对满足条件的像素点赋予较高的置信度,跟踪结束后,将所有像素点置信度矩阵量化后获得血管网络。然后用中值滤波与连通域标记相结合的方法对噪声进行处理,不仅可以去除斑点噪声,还可以将视网膜图像边缘视为连续的块状目标噪声一起去除。将形态学理论运用在分割后的处理中,从一定程度上扩展了该算法的广度与深度;
  (3)提出基于条件随机场模型的分割算法,该算法主要包含两部分:第一部分是根据局部特征对图中某节点所属的标记做初始判断;第二部分是根据相邻节点之间的联系来估计满足要求的权重参数。然后分别利用二维Gabor小波特征、Zana和Klein提出的血管增强方法来计算一元势函数和二元势函数,之后通过选取一定的样本训练分类器,将分类器的输出结果作为条件随机场模型的输入,通过调整权重参数来决定分类结果对最终结果的影响程度。利用扩展的条件随机场模型对视网膜血管图像进行分割,结果表明,血管定位的精度高,能够有效地避免血管粘连的现象,血管更加光滑,边界定位也更加准确,同时可以对微细血管达到良好的分割效果。
[硕士论文] 李政丹
中医内科学 福建中医药大学 2018(学位年度)
摘要:目的:通过观察中药汤剂“加减定痫丸”治疗前后,肝风痰瘀型眼睑痉挛患者的睑痉挛强度分级(Cohen分级)、临床症状、中医证候积分及血常规、肝肾功能等安全性指标的改变,评价“加减定痫丸”的有效性及安全性。
  方法:采用随机平行对照的研究方法。共纳入符合入组标准的肝风痰瘀型眼睑痉挛患者70例,并随机分配到观察组(35例)和对照组(35例)。治疗期间,对照组予“谷维素片+维生素B1片+ATP片+葡萄糖酸钙片”联合治疗,观察组在上述对照组治疗方案的基础上加予“加减定痫丸”治疗。观察组与对照组均以4周为一疗程。观察两组患者治疗4周前后的睑痉挛强度分级(Cohen分级)、临床症状及中医证候积分的改变,以及血常规、肝肾功能等安全性指标,并对其进行统计学分析,客观评价“加减定痫丸”治疗肝风痰瘀型眼睑痉挛患者的有效性及安全性。
  结果:(1)本次临床研究共纳入70例符合入组标准的眼睑痉挛患者,其中,共有66例患者完成了临床观察,观察组中脱落1例,对照组中脱落3例,本研究总脱落率为5.71%。(2)治疗前,两组的性别、年龄、睑痉挛强度分级(Cohen分级)、单项中医证候积分分布及中医证候积分比较,均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。(3)治疗后,观察组在改善睑痉挛强度分级(Cohen分级)与中医证候总积分方面明显优于对照组,两组相比有显著性差异(P<0.05)。(4)总体疗效性分析结果显示,治疗后观察组总有效率91.18%,明显优于对照组总有效率62.50%,两组相比具有非常显著性差异(P<0.01)。(5)安全性方面,治疗过程中,所有患者未出现不良事件,血常规、肝肾功及心电图检查等指标均未见明显异常变化,两组内血常规、肝肾功能结果治疗前后无统计学意义(P>0.05)。
  结论:1、“加减定痫丸”联合“谷维素片+维生素B1片+ATP片+葡萄糖酸钙片”治疗肝风痰瘀型眼睑痉挛患者疗效明显,在降低中医证候积分、睑痉挛强度分级(Cohen分级)及改善临床症状方面比单纯运用“谷维素片+维生素B1片+ATP片+葡萄糖酸钙片”更具优势。2、“加减定痫丸”未发现明显不良反应,具有良好安全性。
[硕士论文] 栗胜男
针灸推拿学 黑龙江中医药大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  通过观察电针风池及天柱穴配合眼周穴位治疗组与传统针刺对照组治疗眼肌麻痹的临床疗效,以探讨电针风池及天柱穴配合眼周穴位治疗眼肌麻痹的临床疗效。
  方法:
  按照纳入标准和排除标准选取符合眼肌麻痹诊断标准的62例眼肌麻痹患者,按其随机数字表法分为治疗和对照2组,每组患者数量均为31人,治疗组31人,采用电针风池及天柱穴配合眼周穴位的治疗方法;对照组施以传统针刺治疗方法。每日治疗1次。每周治疗6天,休息1天。每周为1个疗程。共观察4个疗程。对治疗组与对照组在治疗前、后的进行眼位、斜视度检查,并观察头晕、恶心、代偿头位改善情况。用SPSS22.0统计学软件分析以上所得的数据,比较两组临床疗效。
  结果:
  1.电针风池及天柱穴配合眼周穴位治疗方法组与传统针刺治疗方法组眼位评分相比较,P<0.05治疗组显著优于对照组。
  2.电针风池及天柱穴配合眼周穴位治疗方法组与传统针刺治疗方法组斜视度评分相比较,P<0.05治疗组显著优于对照组。
  3.电针风池及天柱穴配合眼周穴位治疗方法组总有效率为96.77%,传统针刺治疗方法组为74.19%经过卡方检验两组之间的疗效相比较其具有明显差异性(P<0.05),说明治疗组疗效明显优于对照组。
  结论:
  1.电针风池及天柱穴配合眼周穴位治疗与传统针刺治疗方法对治疗眼肌麻痹均有效。
  2.电针风池及天柱穴配合眼周穴位治疗方法治疗眼肌麻痹明显优于传统针刺治疗方法。
[硕士论文] 郭晗丽
眼科学 福建中医药大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  通过观察儿童过敏性结膜炎患者的眼部主观症状特点,同时评估其干眼的患病率、泪膜功能、眼表炎症以及泪膜功能与眼表炎症之间的相关性,为临床实践中儿童过敏性结膜炎干眼发生的早期诊断及预防提供理论依据。
  方法:
  本研究严格依据纳入标准、排除标准,将2017年5月至2017年12月于福建省立医院眼科门诊就诊,并确诊为常年性过敏性结膜炎或季节性过敏性结膜炎的儿童患者纳入过敏性结膜炎组(AC组),共42例(84只眼),同时收集性别、年龄相匹配的正常儿童作为对照组,共30例(60只眼)。AC组的平均年龄为9.86±1.53岁,男女构成比分别为52.4%、47.6%。对照组的平均年龄为9.50±1.34岁,男女构成比分别为53.3%、46.7%。所有研究对象均在获得知情同意后进行询问基本资料、病史、症状以及裂隙灯检查,并使用Keratograph5M眼表综合分析仪检查首次非侵入式泪膜破裂时间(non-invasive first tear break-up time,NIBUT-f)、平均非侵入式泪膜破裂时间(non-invasive first tear break-up time,NIBUT-av)、眼红指数(bulbar redness,BR)以及角膜荧光素染色检查(fluorescent corneal staining,FCS)。此外,所有AC组研究对象均需接受过敏原皮肤点刺试验。并根据NIBUT-av水平将AC组分为3个亚组(AC亚组),分别为AC组1(level0:NIBUT-av≥14s)、AC组2(level1:NIBUT-av≥7且<14s)和AC组3(level2:NIBUT-av<7s),比较亚组间泪膜功能、眼红指数和皮肤点刺结果。使用SPSS22.0进行数据统计分析。
  结果:
  1.AC组眼部主观症状:AC组的眼部主观症状中瞬目次数增加的比例最高,达到85.71%;异物感患者最低,为4.76%,其余分别为眼红33例(78.57%),频繁揉眼27例(64.28%),干涩10例(23.81%),眼痒9例(21.42%),分泌物增多8例(19.04%),畏光6例(14.28%),流泪6例(14.28%)。
  2.AC组与对照组比较:AC组与对照组干眼患病率分别为81.00%、21.67%,差异具有统计学意义(X2=49.988,P=0.000);AC组泪河高度为0.16±0.05mm,低于对照组0.24±0.03mm,差异具有统计学意义(t=-11.865,P=0.000);NIBUT-f为6.71±4.98s,低于对照组11.80±3.53s,差异具有统计学意义(t=-5.795,P<0.001);NIBUT-av为8.71±5.69s,低于对照组16.35±2.92s,差异具有统计学意义(t=-9.888,P<0.001);眼红指数为1.6±0.4,低于对照组0.8±0.2,差异具有统计学意义(t=13.852,P<0.001);角膜荧光染色为0.81±0.39,高于对照组0.17±0.37,差异有统计学意义(t=-9.823,<0.001)。
  3.AC亚组组间比较:根据NIBUT-av水平分组,AC组1为16只眼,AC组2为21只眼,AC组3为47只眼。AC组1的泪河高度为0.21±0.04mm,AC组2为0.16±0.04mm,AC组3为0.15±0.04mm,差异具有统计学意义(F=9.981,P<0.001);AC组1的NIBUT-f为14.83±5.40s,AC组2为7.04±2.47s,AC组3为3.80±1.02s,差异具有统计学意义(F=96.868,P<0.001);AC组1眼红指数为1.60.3,AC组2为1.5±0.2,AC组3为1.8±0.2,差异具有统计学意义(F=77.504,P<0.001);AC组1过敏原皮肤点刺反应强度为30.50,AC组2为37.02,AC组3为45.03,差异具有统计学意义(W=9.672,P=0.008)。
  4.AC组各项检查参数间的相关性分析:NIBUT-av值与泪河高度、NIBUT-f值呈正相关,结果具有统计学意义(r=0.315,P=0.004;r=0.823,P<0.001);NIBUT-av值与眼红指数、过敏原皮肤点刺反应强度水平呈负相关,结果具有统计学意义(分别为r=-0.763,P<0.001.r=-0.271,P=0.013);泪河高度与眼红指数、过敏原皮肤点刺反应强度无相关性(分别为r=-0.210,P=0.065;r=-0.229,P=0.036)。
  结论:
  1.儿童过敏性结膜炎患者主观症状多以瞬目次数增加为主,以眼干涩为主诉较少,往往由患儿家长发现就诊,与成人过敏性结膜炎患者的主要症状存在明显不同。
  2.儿童过敏性结膜炎患者干眼患病率高,多存在泪膜功能改变,泪液容量降低,泪膜稳定性下降尤为明显。
  3.儿童过敏性结膜炎患者泪膜稳定性下降与眼表炎症刺激有显著的相关性。
  4.对儿童过敏性结膜炎患者进行眼科常规检查时,应考虑到存在干眼的可能性,建议采用对儿童痛苦相对较小、非侵入性的眼表综合分析仪进一步评估患儿干眼情况。
[硕士论文] 李慧敏
中医五官科学 黑龙江中医药大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  观察中药经验方达明饮2号加味联合球内注射雷珠单抗对黄斑水肿患者的视力及眼底黄斑区的干预作用,研究中药内服联合球内注射对黄斑水肿的临床疗效及作用机制。
  方法:
  将符合纳入标准的黄斑水肿患者共40例(72只眼),随机分为治疗组20例和对照组20例。治疗组口服中药汤剂达明饮2号加味联合球内注射雷珠单抗1次,对照组球内注射雷珠单抗1次,两组的疗程均为1个月。观察两组患者治疗前与治疗10天后、治疗1个月后及治疗2个月后的视力、中心子区厚度变化情况,并进行统计分析。
  结果:
  1.两组患者性别通过卡方检验x2=0.902,P=0.342>0.05,差异无统计学意义,两组患者的性别具有可比性。两组患者年龄通过独立样本t检验,t=-0.638,P=0.543>0.05,差异无统计学意义,说明两组患者年龄具有可比性。
  2.两组患者经治疗后,通过非参数检验得出:治疗组患者经治疗10天、1个月及2个月后,其BCVA值较治疗前明显提高,差异均有明显统计学意义(P<0.05);治疗10天后与治疗1个月后的BCVA值的变化,差异无统计学意义;治疗10天后与治疗2个月后相比较,治疗1个月后与治疗2个月后相比较,差异均具有统计学意义。两组间治疗前和治疗10天后的BCVA值的变化,差异均无统计学意义(P>0.05)。对照组患者经治疗10天后,其BCVA值较治疗前明显提高,差异具有统计学意义(P<0.05);经治疗1个月后,其BCVA值较治疗前稍提高,差异仍具有统计学意义(P<0.05);经治疗2个月后,其BCVA值较治疗前变化不显著,差异无统计学意义(P>0.05)。对照组患者治疗10天、1个月、2个月后三个时间点间的前后BCVA值的变化,差异均具有统计学意义(P<0.05);两组间治疗1个月后和治疗2个月后的BCVA值的变化,差异均具有统计学意义(P<0.05)。说明治疗组患者经中药联合抗VEGF治疗后,其视力呈现稳步提高的趋势且疗效持久;但对照组患者经单纯抗VEGF治疗黄斑水肿10天时,其视力提高明显;随着治疗周期的延长,其视力开始呈现不同程度的下降趋势。
  3.两组患者经治疗后,通过组内配对样本t检验得出:治疗组患者经治疗10天、1个月及2个月后,其CMT(黄斑中心厚度)值较治疗前明显降低,治疗前后经统计学分析均有明显统计学意义(P<0.05)。对照组患者经治疗10天后,其CMT值较治疗前明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);经治疗1个月后,其CMT值较治疗前稍下降,差异仍具有统计学意义(P<0.05);经治疗2个月后,其CMT值较治疗前变化不显著,差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者治疗10天、1个月、2个月后三个时间点间的前后CMT差值的变化,差异均具有统计学意义(P<0.05)。说明两组患者经治疗10天时,其疗效最显著。随着治疗周期的延长,治疗组患者疗效持续时间更为持久,可维持2个月左右;但对照组患者经治疗至1个月后,其疗效开始呈下降趋势,至2个月时治疗前后变化不显著甚至加重病情变化。两组患者经治疗后,通过组间独立样本t检验得出:两组间治疗前、治疗10天后,其CMT值变化经统计学分析,差异无统计学意义(P>0.05);两组间治疗1个月、2个月后,其CMT值变化均具有统计学意义(P<0.05)。说明单纯抗VEGF和中药联合抗VEGF治疗黄斑水肿10天时,其疗效最明显,但无明显差别;经治疗1个月、2个月后,治疗组患者较对照组疗效显著,且可持续2个月左右。
  结论:
  达明饮2号加味联合球内注射雷珠单抗对黄斑水肿治疗优于单纯球内注射雷珠单抗。可以更好地提高患者的视力及降低黄斑中心凹处视网膜厚度,并且可以保持黄斑区的稳定,避免或减轻复发。
[硕士论文] 陈林静
中医五官科学 黑龙江中医药大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  通过观察孙河教授青光眼治疗方案的疗效,分析孙河教授青光眼视神经保护相关基础及临床研究,剖析学术思想,并加以归纳总结,丰富中医眼科学理论。
  方法:
  1.跟师学习,观察孙河教授青光眼治疗方案的疗效,与导师沟通交流,体会老师辨证用药思路。
  2.搜集孙河教授基础及临床研究文献,提炼数据,分析归纳。
  3.整理孙河教授青光眼视神经保护的学术思想,为龙江医派中医眼科学术思想奠定基础。
  结果:
  1.青光眼视神经保护治疗应遵循整体观念,在辨证论治的框架下进行。孙河教授在治疗过程以“整体观念和辨证论治”为核心思想。诊查中望闻问切、四诊合参,治疗中明辨标本缓急、阴阳寒热、表里虚实,内外因合进行治疗。辩证与辨病相结合、全身辩证和局部辩证相结合、内治与外治相结合。强调在整体观念下进行眼病的脏腑经络精准辨治,潜方用针用药。
  2.提出青光眼体质学说。孙河教授在长期的临床观察中发现患者平素性格急躁易怒,发病时辩证多为典型的肝郁气滞证。因此进行了原发性青光眼体质特征调查。调查表明,原发性闭角型青光眼符合肝郁证者占81.0%;原发性开角型青光眼符合肝郁证者占79.5%;正常眼压性青光眼符合肝郁证者占60.0%。200例原发性青光眼调查问卷中,符合肝郁证表现166例,占83%,其中自幼性格急躁易怒的占90.96%。由此证明原发性青光眼具有一定体质特征,主要表现为肝郁证;患原发性青光眼前既有肝郁体质。
  3.肝郁是青光眼最重要的病因,肝失疏泄是青光眼的重要病机,疏肝通窍法是青光眼视神经保护的主流治则。首创具有疏肝通窍作用的通窍明目Ⅳ号方剂,该方剂为青光眼视神经保护的有效方剂;首创具有疏肝通窍作用的针刺组穴。既往临床研究表明,通窍明目Ⅳ号及针刺可以有效的改善青光眼患者的视功能及RNFLT,调节血液流变学的作用,降低血液黏滞性;增强视觉中枢生物电活动。实验研究表明,以疏肝通窍为治则的通窍明目Ⅳ号方剂及针刺,对高眼压引起的视神经损害的保护作用,可能是通过以下几方面:减轻视网膜视神经超微结构损伤;阻断或防止视网膜神经节细胞的凋亡;减轻NO、Glu对视网膜神经节细胞毒性作用;上调视网膜抗凋亡基因Bcl-xl和神经营养因子BDNF的表达;增加视神经轴突的存活率;可以通过NGF-TrkA信号通路对RGCs产生保护作用。
  4.将视中枢体表位置命名为“窍明穴”,提出视神经萎缩的视中枢唤醒理论。“窍明穴”位于以枕骨粗隆上0.5cm为下界,向上、左、右各2cm的区域。相对于枕皮质视中枢所对应的头皮区域,不仅局限于皮层功能理论,更准确地确定了视区的治疗范围。提出视中枢唤醒理论,视神经萎缩可能会导致高级视觉中枢的全部或者部分功能减退,处于休眠状态,加重视功能的障碍。针刺“窍明穴”能增强视觉中枢的功能,或起到唤醒作用,促进其功能的恢复和活跃,并改善视神经的传导性,抑制视网膜神经节细胞及其轴突发生退行性病变,使视神经电活动增加,促进视神经损伤的自我恢复。此外,针刺治疗可以改善视网膜血管微循环,为神经纤维的再生提供良好环境,使受抑制的视神经纤维恢复,发挥其传导的正常功能。
  5.重视足厥阴肝经及足少阳胆经穴位的应用。针刺是孙河教授治疗青光眼视神经萎缩的常规治疗方案,在临床中发挥着重要的治疗作用,治疗中尤其重视足厥阴肝经及足少阳胆经穴位的应用。足厥阴肝经的行间、太冲,足少阳胆经的光明、风池、率谷为孙河教授针刺组穴中的重要配穴。
  6.针药并用提高疗效。孙河教授视神经保护方案以针刺疏通经络,中药调理脏腑,针药并用,使经络畅通,脏腑调和,气机调畅,五脏六腑之精气上注于目而目视精明,提高临床疗效。
  结论:
  孙河教授青光眼视神经保护以“整体观念和辨证论治”为核心思想,乃疗效之本。所提出的青光眼体质学说,疏肝通窍法,中枢唤醒理论,重视足厥阴肝经及足少阳胆经取穴,针药并用的方法,丰富了中医眼科学术思想,成为龙江医派眼科特色。疏肝通窍法作为青光眼视神经保护的治疗法则,通窍明目Ⅳ号及针刺组穴作为青光眼视神经保护的治疗方案,形成了较为规范青光眼视神经保护辨治方案,有助于提高中医药防治青光眼的疗效,有进一步研究开发的价值。
[硕士论文] 曹庆喜
针灸推拿学 黑龙江中医药大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  本课题通过针刺眼外肌点加太阳穴与常规针刺方法的对比,来观察以针刺眼外肌点加太阳穴为主的治疗方法治疗外展神经麻痹的临床疗效,为以后临床针刺治疗外展神经麻痹提供更为安全、有效的治疗方法。
  方法:
  本研究共收集60例符合研究要求的外展神经麻痹的患者,随机进行编号分为两组,1-30为治疗组,31-60为对照组。治疗组采用眼外肌穴加太阳穴的治疗方法,对照组采用针刺常规腧穴,每日治疗一次,时间为30分钟,10天为一个疗程,每个疗程间隔1天,共3个疗程30天。将治疗组与对照组眼球运动改善相对比,使用SPSS19.0统计软件对治疗后获得的数据进行分析。
  结果:
  通过比较分析,治疗组总有效率为90.00%,对照组为80.00%,差异有统计学意义(P<0.05),说明治疗组治疗眼肌麻痹的效果优于对照组。
  结论:
  1.通过治疗组和对照组总有效率的比较,治疗组显著高于对照组。
  2.以眼外肌点加太阳穴的针刺方法优于常规针刺方法,疗效显著、安全,值得临床上积极推广。
[硕士论文] 戴梦君
动物学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:乙烷基亚硝基脲(ENU)是目前公认的最有效的小鼠诱变剂之一。利用ENU可以在短期内获得大量突变小鼠从而建立人类疾病的小鼠模型进而用于相关疾病发生机制的研究。本文在ENU诱变获得一例瞳孔散大小鼠Dp2(Dilated pupil mutation2)模型基础上,成功定位与鉴定引起该表型的突变基因并对该表型发生原因进行研究分析。现汇报如下:
  1、ENU诱变获得Dp2瞳孔散大小鼠模型
  通过注射ENU诱导小鼠突变手段,获一例大瞳孔杂合子小鼠Dp2,当用光照射小鼠眼球时瞳孔无明显缩小。本文以此大瞳孔小鼠为研究对象,将该小鼠与野生型B6小鼠配种,观察并记录770只后代,其中359只小鼠具有大瞳孔表型,且该表型在小鼠4周龄(4W)左右恢复。组织学分析Dp2小鼠眼球发现,小鼠虹膜未见明显缺损。毛果芸香碱不能使该表型小鼠瞳孔缩小。以上结果显示:Dp2小鼠大瞳孔表型是由瞳孔括约肌收缩缺陷引起的瞳孔散大。
  2、Dp2小鼠突变基因的定位与鉴定
  将B6背景瞳孔散大杂合子小鼠与野生型D2小鼠配种获得F1代瞳孔散大小鼠,F1代小鼠回交B6获得[(B6×D2)×B6]N2代小鼠,筛选出具有瞳孔散大表型的N2代小鼠用于突变基因的定位。基因连锁分析显示:突变基因与微卫星D6Mit230连锁(LOD值12.92),初步将该基因定位于小鼠第6号染色体上。为对该突变基因进行精确定位,增加N2代小鼠数量并在小鼠第6号染色体上增加微卫星密度。最终,突变基因被确定在D6Mit149和D6Mit148之间,即遗传距离48.93cM-51.53cM之间。
  在精确定位区间,MGI数据库报道有10个蛋白编码基因(Arl8b、Bhlhe40、Crbn、Edem1、Il5ra、Itpr1、Lrrn1、Setmar、Sumf1、Trnt1)和两个未分类的非编码RNA基因(0610040F04Rik、Gm17055)。对以上基因序列进行测序对比后发现,除Itpr1基因外,其他基因未发现突变。对Itpr1基因编码区测序发现,该基因编码区第5927位核苷酸发生由G到A的转换,蛋白预测发现,该突变可引起其编码蛋白IP3R1第1976位氨基酸由半胱氨酸转变为酪氨酸。
  3、Dp2瞳孔散大机制的研究
  以Anti-IP3R1、Anti-Myosin light chain(phospho S20)及Anti-GRP78BIP抗体为一抗,采过免疫组织化学技术对未恢复(2W)和恢复(4W)的Dp2小鼠及同窝野生型小鼠瞳孔括约肌进行分析,结果发现:与野生型小鼠相比Dp2小鼠IP3R1水平未见明显差异,Itpr1基因的突变不影响IP3R1蛋白的表达;未恢复(2W)Dp2小鼠Myosin light chain的磷酸化水平明显低于野生型小鼠,平滑肌收缩活动受到抑制,恢复(4W)的Dp2小鼠Myosin light chain的磷酸化水平与野生型小鼠未见明显差异,平滑肌收缩能力恢复正常水平;未恢复(2W)Dp2小鼠BIP水平明显高于野生型小鼠,此时存在未折叠蛋白反应,恢复(4W)的Dp2小鼠BIP水平与野生型小鼠未见明显差异。
  结论:本文使用ENU诱变获得一例瞳孔散大小鼠,基因定位及鉴定发现该表型是由Itpr1突变引起。进一步研究结果显示Itpr1突变可引起内质网未折叠蛋白反应,使得部分IP3R1蛋白功能暂时性丧失,导致瞳孔括约肌收缩障碍,从而引起小鼠临时性瞳孔散大表型。
[硕士论文] 张丛青
中西医结合临床 中国中医科学院 2018(学位年度)
摘要:年龄相关性黄斑变性是(AMD)我国50岁以上中老年人最常见的致盲性眼病之一,临床常表现为视物模糊、变形、遮挡,眼底玻璃膜疣、渗出、出血等,目前针对不同阶段采用不同的治疗手段,但临床作用有限、易复发且价格昂贵。AMD在中医眼科中属于“视瞻昏渺”、“视直如曲”、“暴盲”的范畴,临床治疗多从脏腑论治,各医家经验丰富,然“诸脉皆属于目”,眼内血管的生理功能、病理变化直接影响着疾病的发生,是辨治眼底病不可忽视的部分。在此基础上导师亢泽峰教授继承和发扬历代研究成果,结合多年临床实践,创新性的提出“瞳神络病”证治体系,从目络的角度重新认识眼底病变及多种症候,为临床诊治眼底病提供了新的思路。
  1.研究目的:
  (1)采集导师门诊上诊断为年龄相关性黄斑变性进展期患者处方,利用中医传承辅助平台的算法构建进行数据挖掘,总结导师用药经验,发掘组方规律,传承治疗理论;
  (2)在临床实践的基础上,采用数据统计软件计算显效率,为“瞳神络病”证治提供数据支撑。
  2.研究对象:
  (1)自2015年8月-2017年8月导师门诊上基于“瞳神络病”证治体系治疗的AMD进展期患者,筛选出符合纳入标准的102人,共计350诊次;
  (2)选取其中坚持治疗3个月(及以上)病例数据记录完整的51位患者。
  3.研究方法:
  (1)采用中医传承辅助平台软件提供的规则分析、复杂系统熵聚类及无监督的熵层次聚类等算法进行数据挖掘,将筛选出符合要求的病历信息录入系统,包括基本信息(姓名、性别、年龄、就诊时间)、病史(主诉、现病史、舌脉)、诊断(中医诊断、西医诊断、中医辨证、治则治法、处方等)录入,分析患者的一般资料、处方用药、药对关联,获取药物频次、分类、核心药对、新方等组合结果;(2)采用SPSS20.0软件,组间对比采取采用独立样本t检验,P<0.05差异具有统计学意义。
  4.研究结果:
  (1)入组患者平均年龄66.55±6.71岁,60-75岁患者最多占46%;其中最大86岁,最小50岁。男性占38%;女性占62%;患者视力0.1以下41人,占40%。进展期患者症状较为集中,视物模糊证候最多频率为16%;毒伤目络,肝肾不足者最多占41.2%;舌暗红者最多占60.7%;苔薄者最多占60.8%。本次录入共计182味中药,使用频率前六位的为当归、炙甘草、茯苓、半夏、柴胡、桂枝;四气分析:温性药物占36%;寒性药物占33%;五味分析:甘味药物共计3098次,占35%;辛味药物2524次,占29%;归经分析:入肝经的药物占22%;入脾经的药物占15%;入肾经的药物占14%。设置支持度70,置信度0.9,得出较为常用的药对:当归-茯苓、半夏-当归、半夏-茯苓、当归-桂枝、半夏-半枝莲、枸杞子-僵蚕;进行药物相关性分析:如川芎->半夏、当归->半夏、半夏->僵蚕、黄芪->当归、黄芪->僵蚕、枸杞子->半枝莲、生蒲黄->半枝莲等。按照相关度8,惩罚度2,聚类3-5味药物的核心组合,较常见的有:钩藤-桑叶-怀牛膝、全蝎-钩藤-羌活、全蝎-防风-羌活、天冬-褚实子-石菖蒲、炒黄柏-砂仁-泽泻。同时,提取组合4首新方:①川楝子、防风、龙胆草、全蝎、羌活②川楝子、炒栀子、龙胆草、鸡血藤、银柴胡③黄芪、广郁金、三棱、熟地黄、山萸肉、泽泻④地骨皮、赤芍、黄精、鸡血藤、银柴胡
  (2)从视力、黄斑中心凹厚度、FFA的渗漏面积等方面进行对比,患者平均视力由之前的0.12±0.07提高至0.31±0.12,p<0.05视力提高具有统计学意义;黄斑中心凹厚度的平均值由之前的489.40±70.04μm降低至176.91±82.90μm,p<0.05黄斑中心厚度降低具有统计学意义;FFA造影显示治疗有效(显效+有效)率达86.27%,最佳矫正视力有效(显效+有效)率达92.16%。
  5.结论
  (1)虽有研究显示,随年龄增长,男女患者之比为1.44∶1,但临床阳虚质、痰湿质及心里障碍群体发病率更明显,加之女性患者更关注早期症状及微小病变,故临床发现女患者更多。
  (2)邪阻是导致目络不通,络虚不容,近而发生瞳神疾病的核心病因病机,故核心药对组成及药物关联性分析发现,多为通络药相须、相使。
  (3)“通目络、调气血、护气阴”是瞳神络病的总治则,新方组成中通络的基础上常配伍益气滋阴升阳之品。
  (4)“瞳神络病”证治体系指导下的处方用药效果明显,视力提高,渗出、出血均有吸收,可以为该体系提供定量证据支撑。
[博士论文] 杜茂波
中药学 中国中医科学院 2018(学位年度)
摘要:老年黄斑变性病是全球第三大致盲性疾病,其分为干性和湿性两种。课题组前期临床研究表明:川芎、黄芪两味药组成的川芪方,具有益气活血,改善眼部循环,保护视网膜神经细胞的功能,用于视网膜变性类疾病及眼部缺血性疾病的治疗有很好疗效。
  局部滴眼用药是治疗眼部疾病的重要手段,延长药物在眼部滞留时间,提高眼后段药物浓度,是治疗眼底疾病的必要条件。微乳作为新型纳米给药系统,稳定性好、溶解能力强、粒径小且分散均匀,而原位凝胶作为载体可以延长药物眼部滞留时间,微乳-原味凝胶比普通制剂具有更强的优势。
  本课题采用微乳纳米技术,以中药复方川芎、黄芪为模型药,以微乳-原位凝胶作为载体,构建了中药复方微乳-原位凝胶给药系统并进行了制剂学表征;研究了中药复方川芪微乳-原位凝胶释药特点及规律;探索了其延长眼部滞留时间,通过跨眼-给药屏障,提高眼底药物浓度的途径与渗透机制;研究了药物在眼体各组织中的分布以及粘膜刺激性评价;初步揭示了川芪眼用微乳-原位凝胶对实验性视网膜变性的干预作用与可能的机制。
  1.川芪眼用微乳原位凝胶提取工艺研究
  根据川芎、黄芪的化学成分及药理作用,设计提取工艺路线,对提取工艺进行筛选。选择药效学与指标成分为综合指标进行考察,指标成分选择藁本内酯及黄芪甲苷,设计三条工艺路线,确定工艺(3)为其提取工艺。采用正交实验设计分别对醇提工艺和水提工艺进行筛选,确定川芪方的提取工艺为:川芎用6倍量85%的乙醇提取2次,每次1.5小时;药渣按照1∶1的比例加入黄芪,后用10倍水提取2次,每次1.5小时。
  2.川芪眼用微乳原位凝胶精制工艺研究
  眼用制剂的载药量一般比较小且对水溶性有较高的要求,因此需要对其进行精制,大孔树脂和水提醇沉是常用的两种方法。结果水提醇沉法得到的水提物中黄芪甲苷的总量高于大孔树脂精制得到的,且具有更好的水溶性。因此,确定用水提醇沉法对进行精制。
  采用L9(34)正交试验设计,黄芪甲苷为指标对醇沉工艺进行筛选,结果醇沉工艺的最佳共以为:药液的浓度为1g生药/ml,2倍量95%乙醇,醇沉时间16小时。
  3.微乳配方优化与川芪微乳制备工艺研究
  通过对微乳油相、表面活性剂及助表面活性剂的筛选确定微乳配方,以刺激性为指标对微乳配方进行筛选,且对微乳的稳定性、流变学及形态学进行了考察。结果溶解度筛选的微乳配方1有刺激性,粒径法筛选的微乳配方2无刺激性。因此采用配方2作为川芪微乳的配方。
  确定的微乳的制备工艺为:助表面活性剂由PEG400及甘油共同组成,其比例为9∶1;表面活性剂与助表面活性剂Km值为8∶2;油酸(OA)与混合表面活性剂的比例为1∶9。制备工艺为:称取处方量的混合表面活性剂,加入最少量的水,磁力搅拌均匀(400rpm,30min)后,向其中缓慢的滴加处方量的油酸,滴加完毕后继续搅拌均匀后(400rpm,30min),即得。
  结果微乳加速6个月表现稳定,其粒径在33nm左右;沉降稳定性中川芎微乳仍然是澄清透明的溶液,未出现分层现象,粒径为36.41±0.52nm;粒子稳定性中,不同浓度的NaCl溶液均未出现药物析出的现象,仍然是澄清透明的溶液。
  流变学结果显示川芎微乳属于牛顿流体。采用透射电镜法观察了川芪微乳的形态,川芪微乳无论粒径大小均呈圆形或者类圆形分布,并可以清晰的看到川芎醇提物微乳中央的分布。
  4.川芪微乳原位凝胶系统的构建
  采用流变学的方法,以相转变温度为指标,确定原位凝胶的配方。其配方及制备工艺:(1)称取川芪85%的醇提物适量,加入聚乙二醇、油酸(OA)、丙二醇及聚氧乙烯氢化蓖麻油RH40适量,制成微乳部分,备用;(2)称取适量川芪水提物,加入到原位凝胶基质中搅拌均匀制成载药的原位凝胶部分;(3)将(1)少量多次的加入到(2)中,20℃下搅拌30min(400rpm),制即得川芪微乳原位凝胶。
  对微乳原位凝胶的载药量、相转变时间、相容性及形态学进行考察。结果川芪微乳原位凝胶的载药量为5%;川芪微乳原位凝胶从4℃起完成相转变所需要的时间为40±5s,25℃起完成相转变所需要的时间为5±0.4s。采用观察法及均匀度相结合的方法对其相容性进行了考察,结果在4℃条件下放置的川芪微乳原位凝胶是一种澄清透明的淡黄色液体,无沉淀,无浑浊;在32℃条件下放置的川芪微乳原位凝胶是一种透明的淡黄色凝胶,无浑浊。川芪微乳原位凝胶样品中川芎嗪的L值为8.88,藁本内酯的L值为8.79,黄芪甲苷的L值为7.83,从含量的角度可以说明川芪微乳部分与微乳凝胶部分的相容性是良好的。微乳原位凝胶形态学观察中,50μm的倍数下能看到较为清晰的微乳原位凝胶的形态,粒子的分布主要有两种,较大粒子的形态接近椭圆形,较小的粒子的形态接近圆形。
  5.川芪眼用微乳原位凝胶评价研究
  5.1 释放度评价
  释放度研究以川芎嗪、藁本内酯为指标,采用改良Franz法对其释放行为进行考察,结果川芎嗪释动力学符合Higuchi方程;川芎嗪Pepps方程拟合得到的n为0.7229,说明其释放为非Fick扩散,释放行为是药物成分与基质骨架溶蚀共同作用的结果;Pepps方程拟合得到藁本内酯的n为0.9970,其放动力学符合零级方程,说明其释放为Fick扩散,其释放行为由藁本内酯的理化性质决定。川芪微乳原位凝胶体系中藁本内酯、川芎嗪的平均累积释放率分别为84.32%、90.08%,初步说明川芪眼用微乳原位凝胶中的指标成分可以稳定、持续的从体系中释放出来。
  5.2 流变学评价
  采用流变学的方法对川芪微乳原位凝胶的流体性质、线性粘弹区域进行了考察,结果川芪眼用微乳原位凝胶的粘性随着剪切速率的增大而减小,属于流体中的假塑性流体。川芪微乳原位凝胶是具有线性粘弹区域的,以剪切力为指标,得到其临界剪切力为302.74Pa,此时储能模量(G')等于损耗模量(G"),即G'=G"=2976.60Pa,临界剪切力范围为[0,302.74Pa]。以形变为指标,川芪眼用微乳原位凝胶的临界形变范围为[0,7.45%],临界形变值7.45%,此时G'=G"=2976.60Pa。
  5.3 刺激性评价
  川芪微乳原位凝胶在一次给药实验中未表现出刺激性,家兔眼睛24h均可恢复到给药前的状态。川芪眼用微乳原位凝胶在7天给药实验中未表现出刺激性。说明川芪微乳原位凝胶无刺激性。
  5.4 眼部滞留时间
  川芪眼用微乳原位凝胶在眼部滞留时间为40min左右,可有效延长眼部滞留时间,可促进药物的吸收和分布,使其更好的发挥疗效。
  6.川芪微乳原位凝胶角膜渗透机理初探
  本部分分两个层面对川芪微乳原位凝胶治疗干性AMD的机制进行探讨:(1)通过制剂中药物成分在眼组织中的分布,考察微乳对跨眼屏障的作用,探索川芪微乳原位凝胶药物成分到达视网膜可能的通道和渗透机制。(2)通过川芪微乳原位凝胶制剂干预大鼠实验性视网膜变性的作用观察,探讨川芪微乳原位凝胶干预干性AMD模型的可能的机制。
  川芪微乳原位凝胶组织分布对比研究结果表明,川芪微乳原位凝胶中的藁本内酯在角膜、玻璃体及视网膜中均有分布,而普通凝胶中的藁本内酯只能在角膜中检测到且含量较低。在此过程中微乳起到了两个重要作用:(1)水包油(o/w)型微乳与原位凝胶基质就有更好的相容性(2)增加藁本内酯类成分的溶解性,使其在角膜外的泪液中有更好的分配,可以以较高的浓度快速的到达角膜,形成角膜浓度梯度。
  研究采用组织分布与药效学相结合的方法探讨川芪微乳原位凝胶角膜渗透的机理。先碘化钠造成干性AMD的模型,分别用于组织分布及药效学观察。组织分布研究中,藁本内酯可以在角膜、玻璃体及视网膜中测到,其含量由高到低的顺序依次为角膜>玻璃体>视网膜,存在浓度差,藁本内酯是由角膜途径进入后眼部位的。
  组织病理学结果表明,川芪微乳原位凝胶对暗适应ERG、最大混合反应、明适应ERG、30Hz闪烁光及视网膜色素上皮细胞数量具有较为明显的改善;对碘化钠造模后破坏的视网膜有一定的修复作用。
[博士论文] 孔琳
眼科学 山东大学 2018(学位年度)
摘要:真菌性角膜炎(fungal keratitis, FK)是一种多发于热带及亚热带地区的感染性角膜病变,发病率极高,且有极高的致盲率。尤其是在发展中国家,FK为最常见的致盲性眼病之一,其发病率在各种严重感染性角膜病变中甚至可以居于首位。
  FK的病因多种多样,在发达国家,该病最常见的诱因为佩戴角膜接触镜;而在发展中国家,该病的主要诱因则是角膜外伤,尤其是植物性角膜外伤。在世界范围内,FK的致病真菌有七十余种,其中最常见的是镰刀菌属真菌和曲霉菌属真菌。临床数据表明,与其它真菌引起的角膜炎相比,曲霉菌性角膜炎具有诊断率低、药物治疗效果差、手术治疗需求率高、预后不良和复发率高等特点,已成为目前临床上最为棘手的FK之一。因此,本研究选用烟曲霉菌(Aspergillusfumigatus, A.fumigatus)构建FK的动物模型并进行相关研究,这具有重要的理论价值和临床意义。
  FK病情进展迅速且预后相对不良,因此必须进行及时的诊断和有效的治疗,否则就有可能出现前房积脓、角膜穿孔、恶性青光眼或真菌性眼内炎等症状,甚至导致失明乃至眼球摘除的后果。目前的相关研究已经表明,在FK的过程中,机体的免疫功能是抵抗真菌感染的重要因素。因此,想要研究FK,就需要深入探究疾病发生发展过程中角膜的免疫防御体系。
  角膜由外向内依次分五层结构,角膜上皮细胞(cornal epithelial cell,CEC)因为居于角膜的最表面,因而成为了角膜抵挡病原微生物入侵的第一重生物学防线。病原微生物侵犯角膜组织时,CEC可以通过其上的Toll样受体(Toll likereceptors, TLRs)和NOD样受体(NOD like receptors,NLRs)等重要的模式识别受体(pattern recognition receptors, PRRs)识别病原微生物表面的病原体相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMPs),从而启动下游的免疫反应,发挥抵抗病原微生物入侵的作用。我们的前期研究已经表明,在A.fumigatus性角膜炎发生发展的过程中,CEC表面上的TLR2和TLR4受体可以接受A.fumigatus的刺激并对它们进行识别,激活核转录因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)并启动NF-κB下游的信号通路,释放白细胞介素(interleukin,IL)-6,IL-8,IL-10,IL-1β和TNF-α等细胞因子以及hBD2和LL37等抗菌肽,并通过与NOD1和NOD2的交互作用参与免疫反应。
  本研究的结果表明,在角膜A.fumigatus感染的过程中,TSLP促进DCs聚集、活化、成熟和迁移;成熟的DCs分泌Th2细胞趋化因子,促进促炎因子和Th2细胞因子的分泌,诱导Th2型炎症反应。这有助于我们深入了解FK过程中获得性免疫反应的机理,为防治FK提供了新的理论基础和思考方向,具有重要的理论意义和临床价值。
  本文主要从以下几方面进行论述:
  第一部分 烟曲霉菌角膜感染介导DCs诱导Th2型炎症反应的实验研究
  目的:
  研究A.fumigatus角膜炎中,树突状细胞(dendritic cells,DCs)参与免疫反应并诱导Th2型炎症反应的过程。
  方法:
  1.用针头在野生型C57BL/6(B6)小鼠的角膜中央划出三道长度为1mm的划痕,用A.fumigatus菌液感染小鼠,将封口膜修剪成适合的角膜接触镜,置于小鼠角膜表面,并缝合小鼠眼睑,24小时后取出接触镜。在感染后0.5d,1d,3d,5d和7d于裂隙灯下观察感染情况,并进行临床评分,PBS处理的小鼠作为阴性对照组,未经处理的小鼠作为空白对照组;
  2.PCR检测感染不同时期小鼠角膜DCs的表达,PCR和Western blot检测感染不同时期小鼠角膜CD11c+DCs的成熟情况,免疫荧光检测感染不同时期小鼠角膜DCs的聚集、迁移和成熟,以及成熟DCs的迁移;
  3.PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测感染不同时期小鼠角膜DCs分泌的Th2细胞趋化因子TARC和MDC的表达情况,PCR和ELISA检测感染不同时期小鼠角膜促炎因子TNF-α和Th2细胞因子IL-4,IL-5和IL-13的表达情况,并进行统计学分析。
  结果:
  随着感染的进行,角膜溃疡逐渐加重,而后逐渐减轻并形成瘢痕愈合。在感染的过程中,DCs聚集、成熟,由基底膜向角膜上皮层迁移,同时由角膜缘向角膜中心迁移,并于感染早期分泌TARC和MDC,于感染中晚期诱导促炎因子TNF-α和Th2细胞因子IL-4,IL-5和IL-13的表达。
  结论:
  在A.fumigatus角膜炎的过程中,角膜中的DCs聚集,逐渐成熟并迁移,表达OX40L激活CD4+T细胞,分泌TARC和MDC发挥Th2趋化作用,并于感染中晚期诱导促炎因子TNF-α和Th2细胞因子IL-4,IL-5和IL-13的表达,诱导Th2型炎症反应。
  第二部分 烟曲霉菌角膜感染介导TSLP活化DCs诱导Th2型炎症反应的实验研究
  目的:
  研究A.fumigatus角膜炎中,TSLP对DCs参与的免疫反应及其诱导的Th2型炎症反应的影响。
  方法:
  1.野生型C57BL/6(B6)小鼠结膜下注射TSLP小干扰RNA(TSLP siRNA),乱序小干扰RNA,人重组TSLP蛋白(rTSLP)和IgG预处理。用针头在小鼠的角膜中央划出三道长度为1mm的划痕,用A.fumigatus菌液感染小鼠,将封口膜修剪成适合的角膜接触镜,置于小鼠角膜表面,缝合小鼠眼睑,并于感染后1d拆除缝线,于裂隙灯下观察感染情况,并进行临床评分,普通感染的小鼠作为对照组;
  2.PCR和Western blot检测不同处理组中小鼠角膜成熟DCs的表达情况,免疫荧光检测不同处理组中小鼠角膜成熟DCs水平迁移和垂直迁移情况;
  3.PCR和ELISA检测不同处理组中小鼠角膜DCs分泌的Th2细胞趋化因子TARC和MDC的表达情况,PCR和ELISA检测不同处理组中小鼠角膜促炎因子TNF-α和Th2细胞因子IL-4,IL-5和IL-13的表达情况,PCR和ELISA检测不同处理组中小鼠角膜Th1细胞因子IFN-γ和Th17细胞因子IL-17的表达情况,并进行统计学分析。
  结果:
  与普通感染组小鼠相比,TSLP siRNA组中TSLP的表达显著下降,rTSLP组中TSLP的表达显著增加。TSLP siRNA组中小鼠角膜炎症情况显著减轻,rTSLP组中小鼠角膜炎症情况显著加重。
  TSLP siRNA组中TSLPR和OX40L的表达显著下降,rTSLP组中TSLPR和OX40L的表达显著增加。TSLP siRNA组中,成熟DCs的数量减少,迁移速率减慢,在角膜缘、角膜中间区和角膜中央区的数量均减少;rTSLP组中,成熟DCs的数量增加,迁移速率加快,在角膜缘、角膜中间区和角膜中央区的数量均增加。
  TSLP siRNA组中TARC和MDC的表达显著下降,rTSLP组中TARC和MDC的表达显著增加。TSLP siRNA组中TNF-α,IL-4,IL-5和IL-13的表达显著下降,rTSLP组中TNF-α,IL-4,IL-5和IL-13的表达显著增加。TSLP的变化对IFN-γ和IL-17表达没有显著影响。
  结论:
  在A.fumigatus角膜炎的过程中,TSLP促进角膜中的DCs聚集,促进DCs表达OX40L成熟并迁移,促进DCs分泌TARC和MDC发挥Th2趋化作用,并于感染中晚期诱导促炎因子TNF-α和Th2细胞因子IL-4,IL-5和IL-13的表达,诱导Th2型炎症反应。
[硕士论文] 高仲淳
社会医学与卫生事业管理 山东大学 2018(学位年度)
摘要:截至2016年,全球约有14亿人患近视眼,其中东亚地区发病率约为欧美地区的2倍。目前,中国城市青少年近视发病率已达78.4%,大学生群体近视发病率高达95.5%。近视眼不仅影响人群健康,还造成严重社会经济负担,与此同时,接受近视眼手术治疗的患者数量也逐年攀升,开展相关经济学评价研究具有重要意义。
  卫生经济学评价作为各国卫生决策的重要组成部分,发挥着越来越重要的作用。健康相关生命质量(HRQOL)与健康效用值的有效测量是进行卫生经济学评价和HTA的关键和基础,直接影响其在决策中的应用。健康效用值的测量方法较多,主要分为直接测量与间接测量两大类,直接测量法中标准博弈法(SG)和时间权衡法(TTO)较为常用。间接测量法以多属性效用量表(MAU)为主,MAU更容易被受访者理解,通过积分体系可转化为效用值,在测量健康效用方面更具优势,在国际上得到广泛应用,常见的成人MAU量表主要有6种(QWB,15D,EQ-5D,HUI,SF-6D和AQoL)。目前,国际上在眼科领域采用直接与间接测量法的研究较多,国内的相关研究较少,且不同测量方法的选择、应用缺乏统一标准。
  目的:
  本研究利用不同方法开展我国近视眼手术患者健康效用值的测量研究,结合生命质量测评,探索近视眼健康效用值的最佳测量方法,为近视眼卫生经济学评价提供有效的方法借鉴和数据支持。同时分析该人群健康状况及影响因素,为相关研究提供基础性数据支持。
  1.采用直接测量法(TTO、SG)和间接测量法(AQoL-7D量表)测量我国近视眼手术患者的健康效用值;探索患病人群健康效用值的主要影响因素。
  2.比较3种测量工具测量结果的一致性,并与视觉生命质量量表VFQ-25进行比较,寻找适合我国近视眼手术人群的健康效用值测量方法。
  3.采用视觉相关生命质量量表(NEI-VFQ-25)测量近视眼手术患者健康生命质量;分析影响我国近视眼手术患者健康相关生命质量的主要因素。
  方法:
  本研究资料来源包括文献收集与现场问卷调查。2014年10月~2016年3月于山东省某眼科医院对确定进行LASIK准分子激光原位角膜磨镶术的500名近视眼患者进行了问卷调查,收集样本人群的社会人口学信息与临床信息,通过TTO、SG、AQoL-7D三种测量方法测量患者的健康效用值,并采用NEI-VFQ-25视功能量表,测量近视眼患者的健康相关生命质量。
  AQoL-7D量表已获得相应研发机构授权使用,TTO、SG的问题设计参考国际上相关文献,结合我国近视眼疾病特点设计完成。最终在被调查者知情同意的情况下,由经过专业培训的调查人员完成调查。
  主要分析方法包括:(1)描述性分析、非参数秩和检验;(2)组内相关系数(ICC)、Bland-Altman plot图法和Spearman相关系数;(3)有序多分类logistic回归分析、两独立样本t检验;(4)探索性因子分析(EFA)。
  结果:
  1.样本人群基本情况。500名调查对象中,477名完成问卷的受访者被纳入分析,占被调查人群的95.4%。受访者平均年龄为25.2±6.0岁,男女比例基本相同。学生群体约占总样本的35.4%,本科及以上学历人群超过总样本的50%。在居住地方面,近四分之一的样本人群来自农村地区,其余患者全部来自城市。
  2.样本人群健康效用及影响因素。本研究利用TTO、SG、AQoL-7D量表对样本人群进行效用值的测量,3种方法平均健康效用值分别为0.95、0.95、0.80。SG测得被调查者健康效用值在性别、年龄、职业、受教育程度不同亚组之间的差异具有统计学意义(P<0.05);男性组别效用均值为0.94±0.10,女性的效用值均值0.96±0.10;在年龄方面,25岁以上人群效用值0.97±0.11,25岁以下人群为0.93±0.07;职业分类中,学生组效用水平相对较低。TTO各组别结果间没有统计学意义。
  间接测量法AQoL-7D量表测得效用值在受教育程度、近视程度不同亚组间差异有统计学意义(P<0.05),所测健康效用值结果明显低于直接测量法TTO、SG,所得效用值随近视程度提高而减小,随学历不断提高而增加。
  3.不同效用量表与VFQ量表比较。通过TTO、SG、AQoL-7D量表3种效用测量方式的比较显示,SG、TTO存比较严重的天花板效应(20.5%、7.5%),AQoL-7D效用量表未出现明显的天花板效应。三种测量方法总体组内相关系数为0.08,总体不具备一致性。Bland-Altman Plot图对三组方法间的两两分析显示,各组方法间总体不具备一致性。针对TTO、SG、AQoL-7D与VFQ的Spearman相关系数的分析显示,AQoL-7D与VFQ间相关程度较高,相关系数为0.51,TTO、SG间的Spearman相关系数为0.21,存在低水平相关性,其余组别无明显相关性体现。针对AQoL-7D与VFQ的探索性因子分析显示,5个公因子间的条目构成上差异明显,交叉较少。但在不同因子维度组成上存在相似性,量表间各因子存在重叠,这使得两量表存在一定程度的可替代性。
  4.AQoL-7D量表各维度测量的比较。AQoL-7D关系维度得分最高,平均得分达0.94±0.13,独立生活、视觉维度分别为0.93±0.11、0.93±0.09,心理健康维度得分最低,约为0.80±0.19。AQoL-7D各维度间相关程度较高,心理健康维度与感官维度相关性最高,Spearman相关系数为0.52。
  5.VFQ-25量表所测近视眼患者视觉相关生命质量。样本人群测得生命质量得分均值为82.70±11.82分,有序多分类Logistic回归分析显示影响生命质量因素中,教育、手术原因、近视程度有统计学意义。通过与国际同类型数据结果进行对比,结果显示,在多种维度下的中外生命质量得分存在差异。
  结论:
  三种健康效用测量方法中,SG、TTO得分显著高于间接测量法AQoL-7D,且天花板效应明显,AQoL-7D无明显天花板效应,一致性检验显示三种量表间总体上不具备一致性。在不同量表的相关性分析中,AQoL-7D与VFQ-25眼科疾病量表相关性较高,进一步进行的探索性因子分析显示,不同因子维度间具备一定相似性,因子载荷部分重叠,两种量表间存在可替代性,同时结合国际研究现状,建议在近视眼健康效用值的测量中,以AQoL-7D量表测量为主。样本人群健康效用的主要影响因素包括性别、年龄、学历与近视程度等。AQoL-7D在心理健康方面取得了较好的测量效果,心理维度健康效用得分较低。VFQ-25测得生命质量平均得分为82.70分,分值低于国际同类研究,教育、手术原因、近视程度是影响样本人群生命质量的主要因素。
[硕士论文] 武玉芬
眼科学 山东大学 2018(学位年度)
摘要:目的:应用LipiView(R)眼表面光干涉仪测量泪膜脂质层厚度(lipid layer thickness,LLT),比较睑板腺功能障碍(meibomian gland dysfunction,MGD)患者与正常人群的LLT差异,并分析LLT与MGD诊断指标间的相关性,以期发现其在MGD诊断中的应用价值。
  方法:采用前瞻性病例对照研究方法。纳入2017年9月至2018年3月在山东大学齐鲁医院眼科门诊确诊的MGD患者93例(93眼,均为右眼),同时选择健康志愿者50名(50眼,均为右眼)作为正常对照组。所有受检者均按先后顺序进行如下6项检查:眼表疾病评分指数(ocular surface disease index,OSDI)问卷调查(12项症状)、应用LipiView(R)眼表面光干涉仪测量LLT、泪膜破裂时间(break-up time,BUT)测定、角膜荧光素染色(fluorescein staining,FL)、泪液分泌试验(Schirmer I)及睑板腺分泌功能评估(睑板腺排出能力评分、睑酯性状评分)。根据OSDI评分将MGD组患者分为轻度症状(12.0<OSDI≤22.0)、中度症状(22.0<OSDI≤32.0)和重度症状(32.0<OSDI≤100.0)。将MGD组患者LLT计量资料转化为等级资料并进行分组,LLT≥75nm,高LLT组;60nm<LLT<75nm,中LLT组;LLT≤60nm,低LLT组。采用SPSS19.0对数据进行统计分析,比较MGD患者组与正常对照组各项参数结果之间的差异;对高、中、低LLT三组患者的各项检查指标进行评估,并进行组间比较;分析MGD患者组和正常对照组中LLT与干眼症状、眼表体征等MGD诊断指标间的相关性。
  结果:本研究共纳入MGD患者93例(93眼),其中男性患者42例(42眼),女性患者51例(51眼),年龄18~72岁,平均(45.13±13.51)岁;健康志愿者50例(50眼),其中男性23例(23眼),女性27例(27眼),年龄21~71岁,平均(41.74±15.75)岁。两组受试者年龄、性别差异无统计学意义(P>0.05)。MGD患者组泪膜LLT较正常对照组薄,分别为(60.37±22.85)nm和(70.80±18.97)nm,差异有统计学意义(t=-2.758,P<0.05),其中MGD患者组与正常对照组中LLT≤60nm的例数分别为52例、18例(分别占各组总数的55.9%、36.0%),LLT≥75nm的例数分别为26例、21例(分别占各组总数的28.0%、42.0%),两组泪膜脂质层检查LLT≤60nm例数占各组总例数的比率存在显著性差异(P<0.05);MGD患者组OSDI评分高于正常对照组,差异有统计学意义(Z=-9.642,P<0.05);MGD患者组的睑板腺排出能力评分、睑酯性状评分分别为(3.70±1.86)、(3.52±2.15),明显高于正常对照组的(1.52±1.30)、(0.66±1.00),差异有统计学意义(t=7.358、10.811,均P<0.05);MGD患者组BUT、SchirmerⅠ均低于正常对照组,差异有统计学意义(Z=-4.777、-4.842,均P<0.05);MGD患者组中角膜荧光素染色(+)患者10例,正常对照组中角膜荧光素染色(+)者0例。MGD患者组中,高LLT组患者(LLT≥75nm)26例、中LLT组患者(60nm<LLT<75nm)15例、低LLT组患者(LLT≤60nm)52例,三组OSDI评分分别为(24.27±12.69)、(30.53±13.94)、(35.02±16.04),组间比较差异有统计学意义(F=4.560,P<0.05),三组中轻、中、重度症状患者所占比例差异具有统计学意义(x2=17.039,P=0.001);三组间睑板腺排出能力评分、睑酯性状评分、BUT、SchirmerⅠ比较,差异均有统计学意义(F=44.259、14.768、16.091、3.642,均P<0.05)。MGD患者组中,LLT与BUT呈正相关(r=0.510,P<0.05),与OSDI评分、睑板腺排出能力评分、睑酯性状评分呈负相关(r=0.412、-0.720、-0.552,均P<0.05),与角膜荧光素染色评分、SchirmerⅠ无相关性(r=-0.101、-0.022,P=0.337、0.832);正常对照组中,LLT与其他所有观察指标均无相关性(均P>0.05)。
  结论:MGD患者的泪膜LLT明显较正常人群薄;MGD患者的LLT与BUT呈正相关,LLT≤60nm时,BUT明显缩短,对泪膜稳定性的间接评估具有重要意义;MGD患者的LLT与干眼症状呈负相关,LLT≤60nm时,症状严重;MGD患者的LLT与睑板腺排出能力评分、睑板腺分泌物性状评分存在负相关性,LLT≤60nm时,显示睑板腺的分泌功能较差;LipiView(R)眼表面光干涉仪以无创、自动量化的方式测量LLT,与MGD诊断指标存在较好相关性,是一种客观可靠的可协助MGD诊断和病情评估的检查方法。
[硕士论文] 曾佳佳
外科学(整形外科) 南方医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:对部分汉族青年女性的眼-眉外形进行观察、测量和统计,由专业整形外科医师进行主观评分后进行分组,对比被认为具有吸引力的眼-眉形态与不具有吸引力的眼-眉形态之间的美学差异,并探讨其规律性,为眼睑整形手术的设计提供一定的理论基础及指导。
  方法:选取符合一定标准的225名19~24岁汉族青年女性作为研究对象,按要求拍摄其正面照片,对其重睑发生率及类型、内眦赘皮发生率及类型、睑裂倾斜度进行观察和统计;通过6名专业整形外科医师对上述研究对象的眼-眉部照片进行主观评分,根据评分结果选出眼-眉具有吸引力的女性(设为高分组)和眼-眉不具吸引力的女性(设为低分组),对比两组间的形态特征差异,使用Adobe Photoshop CS6.0软件对上述两组照片进行测量,分别计算出眼-眉的13项比例关系与2个角度指标,对比两组之间的差异并进行统计学分析,探讨并总结其规律性。所得数据使用SPSS20.0软件进行统计分析。
  结果:225名汉族青年女性中,双侧重睑发生率为74.67%,双侧单睑发生率为23.11%,一单一双发生率为2.22%;重睑者中开扇型占69.64%,平行型占25.00%,新月型占5.36%;内眦赘皮发生率为88.89%,无内眦赘皮者11.11%,轻度内眦赘皮者32.00%,中度内眦赘皮者48.00%,重度内眦赘皮者8.89%;睑裂倾斜度内低外高型占20.44%,水平型77.78%,内高外低型1.78%。由6名专业整形外科医师评选出的高分组为30例,低分组为58例,其中高分组重睑发生率(100%)高于低分组(34.48%),而内眦赘皮发生率(60%)低于低分组(94.83%)。高分组和低分组眼-眉比例关系的对比中,一共有7项比例数值具有统计学差异:高分组的睑裂高度与睑裂水平宽度比值(0.4112±0.0061)、睑裂水平宽度与内眦间距比值(0.7399±0.0103)、睑裂高度与眉睑间距比值(1.0651±0.0291)、重睑高度与眉睑间距比值(0.2225±0.0109)、重睑高度与睑裂高度比值(0.2207±0.0136)、睑裂水平宽度与面宽(0.1847±0.0014)比值均大于低分组,内眦间距与容貌睑裂水平宽度比值(1.0714±0.0314)小于低分组;角度对比中,高分组的眉倾斜度(15.92±0.57°)大于低分组。在眼-眉比例关系中,高分组的睑裂水平宽度与眉宽比值、外眦间距与面宽比值均符合黄金分割比例,睑裂高度与眉睑间距、内眦间距与容貌睑裂水平宽度均存在整比关系。
  结论:1、汉族青年女性中,重睑发生率较单睑高,重睑类型中开扇型占多数,内眦赘皮发生率高,多为中、轻度内眦赘皮,睑裂倾斜度多呈现内低外高型。2、汉族青年女性中,具有吸引力的眼-眉形态多具有以下特点:眉型上挑,眉睑间距较短,存在明显且富有立体感的重睑皱襞,睑裂宽度和高度较大,角膜显露率高,无严重的内眦赘皮,眼眉关系中存在黄金比例及整比关系。3、本研究为眼睑整形手术的设计提供了美学参考,具有一定的临床意义。
[博士论文] 郭颖卓
眼科学 南方医科大学 2018(学位年度)
摘要:适当控制角膜上皮的伤口愈合对角膜健康至关重要,涉及到细胞增殖、迁移、锚定和分化。透明质酸钠(SH)已被证实对角膜伤口愈合具有积极的药理学作用,但具体机制尚未阐明。在此基础上,我们拟采用体外细胞实验来探讨miRNA在SH刺激角膜上皮伤口愈合中的作用和机制。
  本文主要从以下几个部分展开论述:
  第一部分 参与调节透明质酸钠促进角膜上皮伤口愈合的miRNA表达谱测定
  目的:
  分析SH处理后人角膜上皮细胞(HCECs)中miRNA的差异表达。
  方法:
  细胞分两组:对照组常规培养在KGM-2中,实验组培养基加入0.6mg/ml SH。提取RNA,微阵列分析miRNA差异表达,定义log2FC≥1.5或≤-1.5,adjP<0.05。RT-qPCR验证差异表达最明显的miRNA。
  结果:
  SH组miR-18a、 miR-92表达显著下调,miR-210、miR-26b和miR-378表达上调,miR-18a差异表达最明显。RT-qPCR示miR-18a下调最显著,miR-92紧随其后。
  结论:
  miR-18a在SH处理的HCECs中显著下调,可能为关键miRNA。
  第二部分 miR-18a表达失调对HCECs生物学特性的影响
  目的:
  分析miR-18a上调或下调对HCECs生物学特性的影响。
  方法:
  脂质体转染HCECs,分三组:miR-18a mimics、miR-18a antagomir组和Scrambled对照组。转染后24h、48h、72h,RT-qPCR检测miR-18a的表达。MTT法检测波长570nm的吸光度值。
  结果:
  RT-qPCR示,与Scrambled组相比,miR-18a在mimics组显著上调,在antagomir组显著下调,表达差异随时间推移逐渐缩小。MTT法示antagomir组HCECs细胞活力高于Scrambled对照组,mimics组细胞活力显著低于Scrambled组,表达差异随时间推移逐渐减小。
  结论:
  miR-18a失表达影响HCECs生物学特性,可确定为SH促进HCECs增殖的效应器。
  第三部分 miR-18a靶向CTGF调节透明质酸钠促进角膜上皮伤口愈合
  目的:
  预测miR-18a的可能靶基因并进行验证;分析靶基因是否对SH处理HCECs进行调控。
  方法:
  TargetScan与通路富集分析预测miR-18的靶基因。细胞转染分四组:miR-18amimics、antagomir、Scrambled Control和SH+Scrambled组,Western blot、RT-qPCR检测miR-18a失表达对靶基因的影响。双荧光素酶报告分析miR-18a对靶基因的转录水平影响。脂质体转染技术沉默SH处理HCECs中的靶基因,RT-qPCR、Western blot检测沉默效率,MTT法检测靶基因沉默对SH处理HCECs增殖的影响。Transwell migration和划痕实验检测靶基因沉默对SH处理HCECs迁移的影响。
  结果:
  miR-18a预测靶基因富集于Arf6下游通路,预测为CTGF。mRNA和蛋白质水平上,miR-18a高表达/低表达分别抑制/增强HCECs中CTGF的表达,SH+Scrambled组CTGF表达显著高于Scrambled组。双荧光素酶报告证明miR-18a与CTGF3'UTR结合。与Scrambled组相比, SH处理HCECs在CTGF沉默后24h、48h、72h细胞生长速率显著降低,24h划痕愈合程度、细胞迁移距离显著低下。
  结论:
  CTGF是miR-18a的靶基因。miR-18a对CTGF具有抑制作用。miR-18a靶向CTGF,在SH促进角膜上皮伤口愈合中发挥始动作用。
[硕士论文] 许凯
中西医结合临床 中国中医科学院 2018(学位年度)
摘要:目的:
  观察黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶对实验性大鼠干性年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)模型的干预作用,并探讨其作用机制,为干性AMD的治疗提供新的研究方法和思路。
  方法:
  1.黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶对实验性大鼠干性AMD的保护作用:以碘酸钠尾静脉注射的方法建立干性AMD大鼠模型,将造模后的大鼠随机分为3组,每组各15只,分别为模型对照组、黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶组、七叶洋地黄双苷滴眼液组。于造模后第一天,分别予生理盐水、黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶、七叶洋地黄双苷滴眼液滴眼,4次/天,给药时间分别为9:00、12:00、15:00、18:00。正常组正常饲养,不予特殊处理。给药14天后对视网膜电图(electroretinograms,ERGs)、组织病理学指标进行观察检测。
  2.黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶对实验性干性AMD大鼠视网膜细胞凋亡的影响:造模、分组及给药方法同上。给药14天后,采用TUNEL检测视网膜细胞的凋亡,免疫荧光法检测线粒体DNA氧化损伤情况。
  3.黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶对Keap1-Nrf2/ARE信号通路相关因子表达的影响:造模、分组及给药方法同上。给药14天后,采用Reverse Transcription PCR法测定视网膜组织中Keap1、Nrf2、HO-1、NQO1mRNA的相对表达量。
  结果:
  1.ERG检查:14天时,模型对照组ERG各项指标较正常组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶组、七叶洋地黄双苷滴眼液组ERG各项指标与模型对照组比较均有明显改善(P<0.05)。暗适应0.01ERG和暗适应3.0ERG,黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶组与七叶洋地黄双苷滴眼液组之间无明显差异(P>0.05);暗适应3.0震荡电位,七叶洋地黄双苷滴眼液组ERG总振幅高于黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶组(P<0.05);明适应3.0ERG和明适应3.0闪烁光反应,黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶组ERG b波振幅高于七叶洋地黄双苷滴眼液组(P<0.05)。
  2.病理组织学观察:14天时,模型对照组视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)层及外核层(outer nuclear layer,ONL)出现明显病理损伤,细胞数目减少,排列紊乱,ONL出现波浪样改变,与正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶组、七叶洋地黄双苷滴眼液组与模型对照组比较,RPE层及ONL细胞数目均增加,排列相对整齐,视网膜病变程度均有所改善(P<0.05)。黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶组RPE层、ONL细胞数目多于七叶洋地黄双苷滴眼液组(P<0.05)。
  3.TUNEL法检测视网膜细胞的凋亡:14天时,模型对照组RPE层、ONL和内核层(inner nuclear layer,INL)见大量呈均匀固缩状或月牙状的凋亡细胞,与正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶组、七叶洋地黄双苷滴眼液组与模型对照组比较,REP层、ONL细胞凋亡均减少,INL未见明显细胞凋亡现象(P<0.05)。且黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶组视网膜细胞凋亡率低于七叶洋地黄双苷滴眼液组(P<0.05)。
  4.免疫荧光法检测线粒体DNA氧化损伤情况:14天时,模型对照组RPE层、ONL和INL均见较多的8-OHdG阳性表达,与正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶组、七叶洋地黄双苷滴眼液组与模型对照组比较,RPE层、ONL和INL8-OHdG阳性染色均明显减少(P<0.05)。且黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶组RPE细胞DNA损伤率低于七叶洋地黄双苷滴眼液组(P<0.05)。
  5.RT-PCR法检测视网膜组织中Keap1、Nrf2、HO-1和NQO1mRNA的相对表达量:14天时,模型对照组大鼠视网膜组织中Keap1mRNA相对表达量显著升高,与正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶组、七叶洋地黄双苷滴眼液组与模型对照组比较,大鼠视网膜组织中Keap1mRNA相对表达量均下降(P<0.05)。模型对照组大鼠视网膜组织中Nrf2、HO-1和NQO1mRNA相对表达量显著降低,与正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶组、七叶洋地黄双苷滴眼液组与模型对照组比较,大鼠视网膜组织中Nrf2、HO-1和NQO1mRNA相对表达量均升高(P<0.05)。黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶组HO-1mRNA相对表达量高于七叶洋地黄双苷滴眼液组(P<0.05),其他因子相对表达量两组无明显差异(P>0.05)。
  结论:
  1.黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶对实验性干性AMD大鼠视网膜有保护作用,能够改善视网膜细胞功能及病理组织损伤。
  2.黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶可抑制实验性干性AMD大鼠视网膜细胞凋亡,修复线粒体DNA损伤。
  3.黄芪甲苷纳米乳眼用凝胶保护实验性干性AMD大鼠视网膜的作用机制可能与调控Keap1-Nrf2/ARE信号通路相关因子的表达有关。
[博士论文] 李雪菲
中西医结合临床 中国中医科学院 2018(学位年度)
摘要:非动脉炎性前部缺血性视神经病变(nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy,NAION)是指由于各种原因造成供应视神经的血管发生循环障碍的视神经功能异常,是导致中老年人视力严重受损,甚至失明的常见眼病。由于该病病机尚不明确,故目前缺乏公认有效的治疗方法,成为一项眼科疑难病。导师冯俊主任医师在辨病与辨证相结合基础上,结合眼底病气血辨证理论以及络病学理论,将NAION的病机概括为精血亏虚、目络瘀阻,并提出相关治法剔络化瘀、养血明目法,总结经验方归元剔络养血方。本方由当归、土鳖虫、桃仁、川芎、黄芪、丹参组成,前期在临床观察取得了一定的疗效。此次拟探讨归元剔络养血方改善NAION的作用机制。
  目的:
  观察不同剂量归元剔络养血方对大鼠NAION模型视神经组织病理学改变的影响,探讨归元剔络养血方可能改善大鼠NAION模型视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)凋亡的作用机制,探讨归元剔络养血方改善大鼠NAION模型血管舒缩、氧化应激的作用机制。
  方法:
  选用健康SD大鼠96只,随机分为正常组,模型组,甲钴胺组以及中药低、中、高剂量组,除正常组外其他组均采用光动力法制备NAION模型。造模成功后,正常组常规饲养,模型组采用蒸馏水灌胃,其他药物组分别采用相对应药物灌胃,总共干预28天。第28天取材,分别通过经上丘逆行标记RGC、HE染色、视神经透射电镜、Western blotting、酶联免疫法、放射免疫法、比色法从形态和功能角度讨论归元剔络养血方改善NAION的作用机制。
  结果:
  1.视神经病理切片HE染色后,正常组大鼠纤维排列规则有序,其间可见胶质细胞。模型组大鼠4周后视神经萎缩,视盘周围神经纤维层变薄,视神经内可见细胞增生,红细胞溢出。甲钴胺组大鼠视神经萎缩,盘周视神经纤维层结构疏松明显。中药低剂量组大鼠视神经萎缩,盘周神经纤维层欠规则,网状改变。中药中剂量组大鼠视神经萎缩,盘周神经纤维层排列疏松。中药高剂量组大鼠视神经纤维排列有序,盘周神经纤维层结构略疏松;
  视网膜病理切片HE染色后,正常组大鼠视网膜层次清晰,结构完整,RGC数量丰富,排列紧凑,致密有序。模型组大鼠RGC结构疏松,排列散乱,大部RGC缺失。甲钴胺组大鼠RGC结构疏松,排列散乱,较多RGC缺失。中药低剂量大鼠RGC结构疏松,排列散乱,较多RGC缺失。中药中剂量组大鼠RGC结构略紧密,排列有序,间有缺失。中药高剂量组大鼠RGC结构紧凑有序,RGC数量较丰富,偶有缺失。
  视神经透射电镜观察正常大鼠视神经内神经纤维束大小不等,视神经纤维束膜内包裹大量排列较为规整的轴突。模型组大鼠视神经大量轴突消失,胶质瘢痕明显,轴索肿胀,髓鞘解体。甲钴胺组大鼠视神经轴突消失较多,排列不规则,胶质瘢痕严重,轴索肿胀。中药低剂量组大鼠视神经轴突消失较多,排列不规则,胶质瘢痕严重,轴索肿胀。中药中剂量组大鼠视神经轴突排列略紊乱,轴突部分缺失,轴索肿胀。中药高剂量组大鼠视神经轴突排列有序,缺失较少,偶有髓鞘异常。
  荧光显微镜大鼠RGC分布:荧光显微镜下可见RGC形态清晰,分布呈放射状排列,与视网膜血管走形方向一致,邻近视盘处RGC排列较为紧密,向视网膜周边部延伸分布的RGC排列逐渐稀疏。正常组大鼠实验眼各象限RGC密度无明显差异,模型组大鼠实验眼RGC数量明显减少,视乳头上方区域减少较其他区域更为明显,可见胞体形状不规则之小胶质细胞散在分布,甲钴胺组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组均可见实验眼RGC数量减少并呈区域性分布。
  RGC存活率:不同组别RGC存活率存在统计学意义。经LSD法两两比较:模型组,甲钴胺组,中药低、中、高剂量组RGC数量均低于正常组;中药低、中、高以及甲钴胺组的RGC存活率均高于模型组;中药中、高剂量组的RGC数量高于甲钴胺组;中药中、高剂量组的RGC数量高于中药低剂量组;中药高剂量组RGC数量高于中药中剂量组;甲钴胺组与中药低剂量组间不存在统计学意义。
  2.不同组别caspase-3存在统计学意义(P<0.05)。经过LSD法两两比较:中药低、中、高剂量组及甲钴胺组均与正常组之间存在统计学意义;甲钴胺组及中药高剂量组caspase-3表达低于模型组;中药低剂量组、中药中剂量组caspase-3表达高于甲钴胺组;中药高剂量组caspase-3表达低于中药低剂量组;中药高剂量组caspase-3表达低于中药中剂量组;中药高剂量组与甲钴胺组无统计学意义。
  不同组别caspase-9存在统计学意义。经过LSD法两两比较:模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、甲钴胺组均与正常组之间存在统计学意义;中药高剂量组caspase-9表达低于模型组;中药高剂量组caspase-9表达低于甲钴胺组;中药高剂量组caspase-9表达低于中药低剂量组;中药高剂量组caspase-9表达低于中药中剂量组;模型组、甲钴胺组、中药低剂量组、中药中剂量组之间均无统计学意义。
  不同组别fas存在统计学意义,经过LSD法两两比较:中药高剂量组及甲钴胺组fas表达低于正常组;甲钴胺组及中药高剂量组fas表达低于模型组;中药低剂量组、中药中剂量组fas表达高于甲钴胺组,中药高剂量组fas表达低于甲钴胺组;中药高剂量组fas表达低于中药低剂量组;中药高剂量组fas表达低于中药中剂量组。
  不同组别fas配体(fas-ligand,fas-1)存在统计学意义,经过LSD法两两比较:中药高剂量组及甲钴胺组均与正常组之间存在统计学意义;甲钴胺组及中药高剂量组fas-1表达低于模型组;中药低剂量组、中药中剂量组fas-1表达高于甲钴胺组;中药高剂量组fas-1表达低于中药低剂量组;中药高剂量组fas-1表达低于中药中剂量组。
  不同组别bcl-2存在统计学意义。经过LSD法两两比较:模型组、低、中、高、甲钴胺组的bcl-2表达均高出正常组表达;中药高剂量组bcl-2表达高于模型组、甲钴胺组、中药低剂量组、中药中剂量组。中药模型组、甲钴胺组、中药低剂量组、中药高剂量组之间均不存在统计学意义。
  不同组别bax存在统计学意义,经过LSD法两两比较:模型组、中药低剂量组均与正常组之间存在统计学意义;甲钴胺组及中药低、中、高剂量组与模型组之间存在统计学意义;中药低剂量组bax表达高于甲钴胺组、中药高剂量组bax表达低于甲钴胺组;中药中、高剂量组bax表达低于中药低剂量组;中药高剂量组bax表达低于中药中剂量组。
  3.不同组别活性氧(reactive oxygen species,ROS)存在统计学意义,经过LSD法两两比较:模型组ROS表达高于正常组,中药高剂量组ROS表达低于正常组;中药低、中、高剂量组ROS表达低于模型组;中药高剂量组ROS表达低于中药低剂量组;中药高剂量组ROS表达低于中药中剂量组。
  不同组别在超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)上存在显著差异。经过LSD法两两比较,模型组与正常组、高组之间均存在显著差异。
  不同组别一氧化氮(nitric oxide,NO)不存在统计学意义。
  不同组别在血管内皮素-1(endothelin-1,ET-1)上存在统计学意义。经过LSD法两两比较:模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组ET-1表达均高于正常组;中药低、中、高组ET-1表达全部低于模型组;中药中、高剂量组ET-1表达全部低于中药低剂量组;中药高剂量组ET-1表达低于中药中剂量组。
  结论:
  1.归元剔络养血方对NAION模型大鼠病理组织形态的修复起到一定积极作用,可能具有防止或延缓RGC死亡的作用,高剂量归元剔络养血方效果更优。
  2.高剂量组中药归元剔络养血方可能具有从抑制外源性途径及内源性途径蛋白凋亡双重作用并刺激凋亡抑制蛋白表达等方面起到抑制RGC凋亡的作用。
  3.高剂量组中药归元剔络养血方针对大鼠NAION模型可能具有一定的保证血管张力稳定,保护器官灌流以及修复损伤的作用;高剂量组中药归元剔络养血方可以通过抑制自由基在体内不断堆积,促进自由基清除剂生成,减少脂质过氧化物的生成和堆积,降低氧化应激反应的负面效应,维护氧化与抗氧化之间作用的平衡等方式保护视神经。
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