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[硕士论文] 周全
特种医学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)是一种经济、安全、有效的疾病防治措施,已广泛应用于一氧化碳中毒、缺血性脑病以及减压病等的治疗。在一定范围内,HBO暴露可以通过改善机体缺氧,调动内源性保护机制产生等发挥保护作用,其疗效与暴露时间、压强成正相关。但过度的HBO暴露则会对机体造成损伤。研究发现,活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成是介导HBO发挥利害作用的关键因素。合理的HBO暴露可适度增加ROS生成,动员保护机制产生,对抗机体损伤;过度的HBO暴露则能引起ROS大量累积,引发氧化应激损伤。因此,明确HBO下细胞内ROS的生成机制和变化规律,能为指导HBO在实践中应用提供依据,开展了以下研究:
  第一部分:高压氧诱导内皮细胞活性氧生成以及细胞内活性氧来源估算
  研究目的:探索基础状态以及HBO下人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endotheliums,HUVECs)中ROS的来源并建立ROS来源估算方法。
  研究方法:利用全细胞以及线粒体靶向的超氧阴离子荧光探针,线粒体呼吸链(mitochondrial respiratory chain,MRC)复合体Ⅱ、NADPH氧化酶(NADPH oxidase,NOX)和黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XO)三条ROS生成途径的特异性抑制剂,以及流式细胞仪、共聚焦显微镜和酶标仪三种检测工具,检测了基础状态以及280kPa-60min HBO暴露下HUVECs中ROS的产生,并估算了不同状态下细胞内各ROS来源的比例。
  研究结果:HBO暴露使线粒体ROS增加至基础状态的2.14-2.44倍,全细胞ROS增加至1.32-1.42倍,MRC复合体Ⅱ抑制剂分别抑制了30%及16%的线粒体及全细胞HBO诱导ROS。NOX以及XO抑制剂不影响HBO诱导ROS的产生。通过ROS来源比例算法估算,线粒体ROS占基础全细胞ROS的32%-39%,其中至少3%来自MRC复合物Ⅱ,而NOX至少占24%-29%。HBO暴露后,几乎所有HBO诱导的ROS都来自线粒体,MRC复合体Ⅱ至少占这部分的45%-60%。
  研究结论:建立了一种简单有效的方法来估算细胞内ROS的来源,并证明线粒体中的MRC是HBO诱导HUVECs ROS产生的主要来源。
  第二部分:不同方案高压氧下脊髓神经元活性氧生成规律
  研究目的:探究不同方案HBO下原代大鼠脊髓神经元ROS的生成规律,进一步验证ROS估算方法。
  研究方法:利用超氧阴离子以及总ROS荧光探针,MRC复合体Ⅱ、NOX1/4、NOX2、XO以及单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的特异性抑制剂,检测21、100、145、190、235、280kPa-60min HBO方案以及15、30、45、60、90、120min-280kPa HBO方案下原代大鼠脊髓神经元ROS的产生情况。
  研究结果:基础状态下,MRC复合体ⅡROS占神经元ROS的3%-4%,NOX至少占35%-38%,MAO至少占19%-20%,XO约占3%-6%。280kPa-60min HBO暴露后,MRC复合体Ⅱ至少占HBO诱导ROS的44%-50%,而其他途径并未参与HBO诱导ROS生成。不同压强方案下,ROS随暴露压强增加而增长,超过235kPa后增长不再显著。不同时程方案下,ROS随暴露时程延长而增长,超过60min后增长不再显著。不同方案下ROS的增长均主要来自MRC复合体。
  研究结论:MRC是脊髓神经元中HBO诱导ROS的主要来源。一定范围内,ROS水平随着HBO暴露的压强与时程增加而增长,当压强超过235kPa,时程超过60min后ROS增长进入平台期。
[硕士论文] 刘广宇
应用心理学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  近几十年来,冥想作为一种辅助疗法和提升心身健康的手段,越来越受到研究者和大众的关注。人们通过形式多样的冥想训练方法来获得更好的健康状态和心灵平静,研究者们则采用丰富的实验设计来寻找冥想促进健康、辅助治疗心身疾病的证据。以往的研究多采用短期的冥想训练方法,以各种心理疾病(如焦虑、抑郁、创伤后应激障碍等)和各种慢性疾病(如高血压、心血管疾病)及疾病带来的慢性疼痛为研究对象,探讨冥想对疾病的作用。但是以健康人群为对象的研究相对较少,国外的研究较多,国内的研究刚刚起步,而且以实验探讨长期冥想对生命质量和大脑执行功能的影响研究较少。因此,本研究首先以长期冥想者为研究对象,探讨长期练习冥想对生命质量和大脑执行功能的影响。然后通过8周的冥想训练,探讨冥想训练的应用价值。生命质量关乎个体生理、心理健康的各个方面,是对生活满意度和幸福感的整体评价。执行功能是包含一系列心理过程,支配着个体的情绪管理、组织、计划和目标完成。通过对冥想影响生命质量和执行功能的研究,分析冥想对它们的作用,探讨影响关键因素,进而为冥想应用于军队提供实证基础。
  方法:
  本研究分别采用对照研究、横断面研究和随机对照研究方法。对照研究是选取长期冥想者(稳定练习冥想2年以上)及对照组(在人口学资料方面进行匹配的未冥想人群),进行生命质量和大脑执行功能的比较。横断面研究是对长期冥想者生命质量和其冥想生活方式的各因素的相关研究,探讨影响冥想者生命质量的关键因素。随机对照研究是设置实验组和对照组,进行为期8周的冥想训练,在冥想训练的第0、5、8周以及第12周随访进行纵向跟踪调查,系统性地研究8周冥想训练对生命质量和大脑执行功能的影响。
  结果:
  1、长期冥想者在生命质量中的一般健康状况(78.33VS67.62,p<0.001)、精力(79.82VS72.71,p<0.001)、社会功能(86.61VS82.75,p=0.024)、情感职能(75.28VS65.33,p=0.015)、心理健康(78.93VS72.97,p<0.001)5个维度得分明显高于对照组。生理健康总评(84.50VS80.42,p=0.004)、心理健康总评(80.16VS73.44,p<0.001)和生命质量总分(82.33VS76.93,p<0.001)也显著优于对照组。
  2、生理健康总评、心理健康总评和生命质量总分与达到冥想状态的频率和时间呈显著的正相关关系。每周达到冥想状态的时间大于40分钟,心理健康总评(83.55VS76.44,p=0.003)和生命质量总分(85.71VS78.77,p=0.001)较小于40分钟者有显著性差异;每周达到冥想状态的频率大于2次,心理健康总评(81.94VS76.05,p=0.019)和生命质量总分(83.70VS79.19,p=0.031)有显著性差异。
  3、长期冥想者的注意瞬脱程度显著小于对照组(T2short条件:0.732VS0.606,p=0.012),Stroop实验平均反应时差异不显著(色义相同:706.78VS742.10,p=0.267;色义不同:827.75VS861.31,p=0.354)。
  4、随机对照研究中,经过冥想训练,实验组的注意瞬脱程度显著小于对照组(T2short条件,T2正确率:F(1,54)=4.595,p=0.037),Stroop表现显著优于对照组(色义相同正确率:F(1,56)=6.459,p=0.014;色义相同反应时:F(1,56)=3.691,p=0.06;色义不同正确率:F(1,56)=4.446,p=0.039;色义不同反应时:F(1,56)=4.383,p=0.041)。实验组生命质量的前后测比较,在精力(59.24VS68.57,p=0.040)、情感职能(43.43VS53.44,p=0.028)、心理健康(58.18VS66.58,p=0.036)3个维度有显著提升,心理健康总评(59.72VS68.57,p=0.013)及生命质量总分(69.29VS76.52,p=0.021)也有显著提升。
  结论:
  1、冥想训练可以全面提升个体生命质量,尤其是在心理健康层面。
  2、冥想状态是影响冥想效果的关键因素。
  3、冥想训练可以改善个体大脑执行功能的更新功能和抑制功能。
[硕士论文] 李秀文
公共卫生 东南大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  输血作为临床上危重病抢救和慢性病防治的一项不可或缺的治疗手段,挽救了无数人的生命,但由于血液成分的复杂性、多样性以及患者体质的差异,输血可能发生各种输血不良反应。输血不良反应的发生对患者造成了严重的生命威胁,为有效的减少或避免迟发性溶血性输血反应的发生率。该研究将探索输血不良反应发生的影响因素,以及探讨输血前不规则抗体筛查在预防临床输血不良反应中的应用价值。
  方法:
  回顾性分析2015~2016年某三甲医院输血前使用不规则抗体筛选的输血不良反应发生率,并以2006~2007年输血前未使用不规则抗体筛选的输血不良反应发生率作对比,综合四年的数据资料,应用x2检验分析输血不良反应发生的影响因素,以及回顾性队列研究探索不规则抗体筛查与输血不良反应发生率的关系,探讨输血前进行不规则抗体筛查对临床输血不良反应的影响。
  结果:
  (1)2006~2007年某三甲医院输血不良反应记录31例,发生率为0.83%,其中过敏性反应占54.83%,非溶血性发热反应占32.26%,迟发性溶血性输血反应占9.67%,输血性急性肺损伤反应占3.23%;2015~2016年某三甲医院输血不良反应记录23例,发生率为0.38%,其中过敏性反应占78.26%;非溶血性发热反应占21.74%,未见迟发性溶血性输血反应等其他类型输血不良反应。2006~2007年度血液科输血不良反应发生率明显高于2015~2016年度血液科(x2=3.980,P=0.046);2006~2007年度悬浮RBC输注的患者引起的不良反应发生率明显高于2015~2016年(x2=3.859,P=0.049),少白RBC输注的患者引起的不良反应发生率也明显高于2015~2016年(x2=4.372,P=0.037);2006~2007年度患者血浆输注的患者引起的不良反应发生率与2015~2016相比差异无统计学意义(x2=0.127,P=0.722),血小板输注的患者引起的不良反应发生率与2015~2016相比差异也无统计学意义(x2=0.948,P=0.330)。
  (2)经x2检验分析,输血不良反应发生的影响因素中,性别、年龄和不同血液成分的比较均无统计学意义或实际临床意义。只有不规则抗体筛查(x2=8.780,P=0.003<0.05)和妊娠史/输血史(x2=44.360,P<0.001)与输血不良反应发生具有统计学意义。输血前未使用不规则抗体筛查与输血前使用不规则抗体筛选的输血不良反应发生率之间具有明显的统计学差异(x2=8.780,P=0.003)。输血前未使用不规则抗体筛查的迟发性溶血性输血反应发生率明显高于输血前使用不规则抗体筛查(x2=4.917,P=0.027),但输血前未使用不规则抗体筛查的过敏反应发生率与输血前使用不规则抗体筛查相比较差异无统计学意义(x2=1.700,P=0.192)。Pearson卡方检验发现有输血史/妊娠史的患者输血不良反应发生率明显高于无输血史/妊娠史患者(x2=5.662,P=0.017)。
  (3)在进行抗体筛查的回顾性队列研究中,发现接受不规则抗体筛查的输血不良反应率是未接受不规则抗体筛查的0.458倍(RR=0.458),所以接受不规则抗体检查可降低输血不良反应的发生率。
  (4)2015~2016年某三甲医院输血治疗的6084例患者中,检出不规则抗体阳性38例,阳性率0.62%(38/6084);38例不规则抗体主要涉及到Rh、MNSs、Duffy和P系统抗体,其中最常见的为Rh血型系统中抗-E抗体21例和抗-D抗体1例,MNSs系统8例,Duffy系统6例和其它系统2例。38例不规则抗体主要分布在血液科、妇产科、重症医学科、消化科和风湿科等多个科室,血液科不规则抗体检出率明显高于重症医学科位(x2=5.385,P=0.020),但血液科与妇产科不规则抗体阳性检出率之间无统计学差异(x2=1.865,P=0.172)。经x2检验,不同性别之间、有/无输血/妊娠史患者不规则抗体阳性检出率有统计学意义、输血次数≥2次的患者不规则抗体检出率高于仅输血1次的患者。38例不规则抗体阳性患者经临床选择配血相合的血液输注,患者均未发生迟发性溶血性输血反应,输注后患者临床症状得到缓解。
  结论:
  妊娠和反复输血产生的不规则抗体是引起迟发性溶血性输血反应的主要危险因素,不规则抗体筛查是输血不良反应发生的保护因素,因此输血前进行不规则抗体筛查,有助于提高配血的准确性,有效减少或避免迟发性溶血性输血反应的发生率,提高输血治疗的安全性。
[硕士论文] 王齐
民族传统体育学 北京体育大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  1、系统评价“习练太极拳对2型糖尿病患者血糖指标影响的随机对照实验”相关文献的报道质量;2、运用meta分析的方法,整合相关太极拳干预2型糖尿病患者效果的数据资料,分析太极拳对2型糖尿病患者的作用效果。
  方法:
  1、文献的检索与筛选:检索中文数据库中国知网和万方,英文数据库WEB OF SCIENCE和PUBMED进行检索,设定检索的时间控制为建库开始到2015年11月结束,在里面选择符合入选标准的随机对照试验;2、研究质量评价:将入选文献中的研究按照Cochran手册推荐的偏倚风险评估方法进行方法学质量评估;3、数据分析:使用Excel收集数据,运用RevMan5.3和Stata13.0进行数据的系统评价与数据分析。以上研究过程中涉及到文献筛选、资料提取等环节均由两名研究人员分别完成,遇到争议则寻求第三方帮助共同确定方案。
  结果:
  共纳入14项研究,包含785名受试者。结果显示:1、太极拳对2型糖尿病患者 FBG水平干预效果与常规药物/空白组(n=361,SMD=-0.48,95%CI(-0.69~-0.27),P=0.000)相比有显著性效果且无异质性(I2=0.0%,P异质性=0.705);与有氧运动组(n=347,SMD=-0.000,95%CI(-0.21~0.21),P=0.986)相比无显著性差异且异质性非常低(I2=3.3%,P异质性=0.396。2、进行HbA1c水平对比时发现,不管与有氧运动(P=0.008)还是常规治疗(P=0.000)相比,太极拳在降低糖尿病患者血液中 HbA1c浓度方面均表现出显著差异。但是数据间异质性依然非常高,分别是有氧运动(I2=75.2%,P异质性=0.007)和常规治疗(I2=88.9%,P异质性=0.000)。偏倚风险评估结果显示:方法学质量等级为A、B、C级的分别为0篇、4篇和10篇。
  结论:
  数据的分析结果表明:1、太极拳对于降低2型糖尿病患者的血糖水平有一定作用,且与其他有氧运动相比表现出等效性;2、HbA1c指标合并时产生的高异质性表明研究者在进行报道时未能全面报道相关变量,造成无法确定异质性来源,影响系统评价;3、练习太极拳对2型糖尿病患者血糖的控制效果相关研究的方法学质量较差,大部分研究未能正确使用随机、盲法和分配隐藏等。
[硕士论文] 张恒
内科学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:探讨不同腹膜转运特性对腹膜透析患者腹膜透析流出液中VEGF、ET-1及UA的影响,为保护腹膜、防治腹膜超滤功能衰竭提供实验依据。
  方法:选取本院2015年12月~2016年12月行PD的住院患者40例,通过判断腹膜转运特性(PET)的结果,依照PET结果,将入组PD患者分成2个组:高转运组(高转运与高平均转运),低转运组(低转运与低平均转运)。(1)记录患者24h的尿量及超滤量;(2)患者血液送至本院检验科,化验血红蛋白、血清白蛋白、血钙、血磷、甲状旁腺激素、血尿素氮、血肌酐、血钾、血钠等生化指标;(3)依据公式计算KT/V为尿素的清除指数,RRF评价残余肾功能;(4)同时用尿酸酶法测腹膜透析流出液中UA,ELISA法测定腹膜透析流出液中VEGF、ET-1的浓度;(5)用t检验的方法比较两组患者腹膜透析流出液中VEGF、ET-1、UA的水平,用Pearson相关分析,分析腹膜透析流出液中VEGF、ET-1、UA与超滤量、尿量的相关性。
  结果:⑴与低转运组相比,高转运组血液中BUN、Scr、Alb浓度明显降低。⑵高转运组患者超滤量、RRF、尿量明显低于低转运组。⑶高转运组腹膜透析流出液中VEGF、UA浓度与低转运组相比明显升高;高转运组与低转运组相比,ET-1的浓度无差异(P>0.05)。⑷腹膜透析流出液中VEGF、UA水平与超滤量呈负相关(R=-0.402、-0.378, P<0.05),腹膜透析流出液中VEGF、UA水平与尿量呈负相关(R=-0.323、-0.345, P<0.05),而腹膜透析流出液中的 ET-1水平与超滤量、尿量之间没有相关性(P>0.05)。
  结论:①通过本实验结果分析证实,腹膜透析流出液中VEGF、UA水平升高会导致腹膜损伤、腹膜纤维化等腹膜透析并发症;②如果降低腹膜透析流出液中VEGF、UA水平,能够防止腹膜透析纤维化等并发症的发生;③本实验完善了引起腹膜透析并发症的影响因素,为腹膜透析并发症防治的研究提供实验依据。
[硕士论文] 支子
运动人体科学 哈尔滨体育学院 2017(学位年度)
摘要:目的:
  探讨不同强度有氧运动对糖尿病模型小鼠PerilipinA mRNA及GLUT-4 mRNA表达的影响。
  方法:
  对4周龄雄性C57/BL6小鼠进行5周高脂高糖饲养后连续5日,每日1次空腹注射链脲佐菌素(STZ)诱导成糖尿病小鼠模型,并以空腹血糖≥11.1mol/l作为模型筛选的标准判定小鼠是否成模。实验小鼠随机分为8组,健康安静对照组(C,n=10),健康低强度运动组(CL,n=10),健康中等强度组(CM,n=10),健康高强度(CH,n=10);DM模型安静对照组(DM,n=10),DM模型低强度组(DML,n=10),DM模型中等强度组(DMM,n=10),DM模型高强度组(DMH,n=10)。对于运动组分别进行一周渐增强度的适应性训练后,按照分组强度开始对小鼠进行7周的动物跑台训练。训练期间对各组小鼠的体重、血糖进行监测。训练结束后,取血清并用全自动生化仪检测小鼠血脂各项指标;用Real-time PCR测定小鼠肝脏组织中PerilipinA mRNA及GLUT-4 mRNA表达;用Western blotting测定PerilipinA及GLUT-4两种蛋白的表达。
  结论:
  1.有氧运动能够有效改善糖尿病小鼠血糖水平,低、中等强度运动效果最为显著;
  2.不同强度运动干预下糖尿病模型小鼠PerilipinA mRNA的表达较对照组有降低,但只有高强度组显著;
  3.不同强度运动干预下糖尿病模型小鼠 GLUT-4 mRNA的表达较对照组升高,且中等强度最高。
[硕士论文] 杨雪艳
内科学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:探讨腹膜透析(PD)患者血清钠浓度与蛋白-能量消耗(PEW)的关系,为临床干预提供理论依据。
  方法:选择2015年6月-2016年12月于山西医科大学第一附属医院肾内科行PD患者共108例,符合入选标准88例。获取患者的基本情况包括[基础原发病因、性别、年龄、体重、身高、体重指数(BMI)、血压水平、透析龄],采用标准的技术检测患者的各项身体指标包括[上臂围(AC)、肱三头肌皮褶厚度(TSF)和上臂肌围(AMC)]等,检测生化指标包括[血清白蛋白(ALB)、血清前白蛋白(PLB)、血红蛋白(Hb)、红细胞压积(MCV)、血转铁蛋白(TF)、血总胆固醇(TC)、血甘油三酯(TG)、血肌酐(SCr)血超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血清钾离子(K)、血钙(Ca)、血钠(Na)]等,及采取主观的综合性评估法(SGA)评测患者的营养状况。根据ISRMN的诊断标准并计算患者的PEW患病率,根据入组患者血钠浓度的均值分为A组(血Na<137mmol/L)和B组(血Na≧137mmol/L),应用统计学方法分别比较两组上述指标及PEW的患病率的差异,并用pearson法分析PD患者PEW的一些指标与血钠浓度的相关性。
  结果:⑴男性48例,女性40例,年龄20~78岁,平均(49.6±13.93)岁,透析时间3~64月,平均透析龄(16.25±13.57)月,糖尿病患者24例,占(27.3%);⑵我院PEW患病率为39.7%;⑶两组的性别、年龄、BMI、透析龄、血压、TSF、PLB、Hb、MCV、TF、TC、TG、SCr、K、Ca、、hs-CRP差异均无统计学意义(P>0.05);⑷与B组相比,A组上臂围、上臂肌围、血清白蛋白水平偏低,SGA评分偏高,差异有统计学意义(P<0.01);⑸PD患者血钠浓度与上臂围、上臂肌围、血清白蛋白呈正相关(P<0.01),与SGA呈负相关(P<0.01)。
  结论:PD患者PEW发生率较高,且PEW的相关指标与血清钠浓度具有一定的相关性,提示预防PD患者的低钠水平,可在一定程度上减少PEW的发生,改善患者预后,延长生命。
[硕士论文] 李婷婷
临床医学 东南大学 2017(学位年度)
摘要:目的:探讨维持性血液透析(MHD)患者透析过程中血压变异性(BPV)对患者预后的影响。
  方法:选取2014年7月1日以前开始在东南大学附属中大医院血液净化中心维持性血液透析的患者行回顾性分析。记录自2014年7月-2016年6月期间每月第一次血液透析前、透析过程中每小时及透析后的血压值,求取收缩压、舒张压的平均值、标准差和变异系数(codficient of variation,CV),CV=(标准偏差SD/平均值Mean)×100%;随访时间未满两年的取时间平均分布的20-24个透析过程的血压计算。记录所有患者的基线资料、心血管死亡及全因死亡。将BPV按照四分位法分为四组,比较不同水平透析血压BPV患者心血管死亡、全因死亡率的关系,以COX回归分析模型分析各BPV对患者心血管死亡、全因死亡的影响。
  结果:共纳入265名患者。透析前收缩压(144.5±16.8)mmHg、舒张压(76.0±10.0)mmHg,透析中收缩压(140.1±16.8)mmHg、舒张压(75.8±9.5)mmHg,透析后收缩压(139.7±13.8)mmHg、舒张压(75.8±7.9)mmHg,以上血压不是患者心血管死亡及全因死亡的影响因素(P>0.05)。透析前收缩压、舒张压BPV分别为0.115±0.07、0.128±0.114,透析中收缩压、舒张压BPV分别为0.120±0.046、0.127±0.084,透析后收缩压、舒张压BPV分别为0.099±0.084、0.105±0.029。高透析前收缩压BPV组(>0.129)与其它三组相比,心血管死亡率和全因死亡率最高(P<0.05);单因素COX回归分析显示透析前收缩压BPV是心血管死亡及全因死亡的危险因素(P=0.021);多因素COX回归模型显示透析前收缩压BPV仍然是心血管死亡的独立危险因素(P<0.001),而不是全因死亡的独立危险因素(P>0.05);透析前舒张压BPV、透析中及透析后收缩压、舒张压BPV不是心血管死亡、全因死亡的影响因素(P>0.05)。
  结论:血压绝对值不是患者心血管死亡及全因死亡的影响因素,透析前收缩压BPV是MHD患者心血管死亡的独立危险因素,对MHD患者的预后有一定的预测作用。
[硕士论文] 周延峰
生物化学与分子生物学 兰州理工大学 2017(学位年度)
摘要:随着我国人口结构日趋老龄化,骨质疏松症的患者数量逐步上升,严重影响到了患者的生活质量,同时也加重了家庭的经济负担与社会的压力。当前对于骨质疏松症的治疗主要是采用双膦酸盐、雌激素类及降钙素等药物来缓解和抑制,但这些药物不仅费用昂贵,还伴随有一定的副作用。因此,寻找安全且有效的防治方式在科技迅速发展的今天势在必行。低频电磁场因其具有无创伤、无痛苦、可操纵性高等特点受到越来越多研究者的关注,已发现低频正弦交变电磁场可显著促进成骨细胞成熟及矿化,但其在细胞水平上的影响能否在动物实验中显现,同一参数的电磁场对两者的影响是否具有一致性,至今尚未有报道。
  为更进一步了解低频正弦交变电磁场对骨质疏松的影响,基于本课题组前期细胞实验筛选的有效电磁场参数,本实验展开了相关动物实验研究。实验分为两部分,第一部分将8周龄SD大鼠分为5组,依次为对照组、0.1mT组、0.6mT组、1.2mT组和1.8mT组,从中确定最佳磁场强度后继续开展第二部分实验,将8周龄SD大鼠分为4组,依次为对照组、15Hz组、30Hz组和45Hz组。实验期间大鼠连续接受相应参数的正弦电磁场干预,每天干预90分钟。8周后经双能X射线骨密度仪检测大鼠骨密度;酶联免疫试剂盒测定大鼠血清中骨代谢相关因子的含量;AG-X电子万能材料试验机检测大鼠骨的生物力学性能;双荧光间距测量骨的单位生长量;VG染色测定骨形态计量指标;动物微型CT测定骨微结构参数。与此同时,实验还从大鼠体重、脏器系数、脏器病理切片与血常规检查等方面对低频电磁场干预进行了安全性研究,以此来筛选正弦交变电磁场安全且有效的提高生长期大鼠骨密度的最佳参数,为骨质疏松症的防治及电磁场治疗仪的开发提供理论参考和科学依据。实验结果如下:
  1.磁场强度筛选结果:强度为0.1mT与1.8mT的50Hz正弦交变电磁场明显提高了大鼠的全身骨密度、股骨及椎骨骨密度;血清骨代谢生化指标、骨生物力学性能与骨形态计量学指标对比对照组,也有显著差异。
  2.磁场频率筛选结果:频率为15Hz与45Hz的1.8mT正弦交变电磁场在力学、骨质量与微结构各项骨相关指标上均显著优越于对照组。
  综合两次实验结果,45Hz1.8mT的正弦交变电磁场能显著提高生长期大鼠的骨密度,可作为有效防治骨质疏松症的最佳参数之一。
[硕士论文] 卫姝岑
营养与食品卫生学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  选用添加复方环磷酸腺苷的肠内营养干预方式,观察其对急性白血病化疗患者的临床症状、贫血状态、免疫功能及营养状况的干预效果,探讨适合于急性白血病化疗患者的肠内营养干预方式,以期改善急性白血病化疗患者的营养状况,缓解临床症状,纠正贫血,增强免疫防御能力,缩短住院治疗时间。
  方法:
  选用山西医科大学第二医院血液科确诊的急性白血病化疗患者73例,随机分为干预组37例,对照组36例。两组患者在常规临床治疗的基础上,均按照每标准公斤体重等热量(105kJ/d)等氮(1.5g/d)的膳食原则,分别给予个体化营养指导及肠内营养食谱的常规肠内营养支持,干预组患者在常规肠内营养支持的基础上给予复方环磷酸腺苷40ml/d,连续使用4周。在干预试验过程中,观察患者的生命体征,记录其胃肠道功能、精神睡眠状况的变化情况以及住院治疗时间,分别于干预前、干预的第2周末和第4周末抽取两组患者空腹静脉血(禁食12h),检测相关观察指标:①血液指标:血红蛋白(HGB)、红细胞(RBC)及血小板(PLT);②免疫指标:T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)及NK细胞;③营养指标:血清总蛋白(TP)、前白蛋白(PA)及白蛋白(ALB)。
  结果:
  1.临床观察指标:在肠内营养干预试验中,两组患者各项生命体征保持平稳,胃肠道不良反应发生率无明显差异(P>0.05)。与对照组患者相比,干预组患者的精神及睡眠状况在试验期间较稳定,恶心的发生情况也较轻(P<0.05);食欲下降及呕吐的发生情况虽有所减轻,但组间差异无统计学意义(P>0.05)。
  2.血液指标:试验前,干预组与对照组患者的血液指标组间无明显差异(P>0.05)。在干预的第2周末及第4周末,干预组患者的HGB、RBC及PLT较干预前均明显升高(P<0.05)。且与对照组患者相比,干预组患者的HGB、RBC及PLT在干预的第2周末及第4周末升高更为显著(P<0.05)。
  3.免疫指标:试验前,干预组与对照组患者的免疫指标组间均衡可比(P>0.05)。与对照组患者相比,干预组患者的NK细胞含量在干预的第2周末及第4周末均高于对照组(P<0.05)。而干预组患者的CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+仅在干预的第4周末明显优于对照组(P<0.05)。在干预的第2周末,干预组患者的T淋巴细胞亚群指标虽均高于对照组,但无统计学意义(P>0.05)。
  4.营养指标:试验前,干预组与对照组患者的营养指标组间差异无统计学意义(P>0.05)。在干预的第2周末及第4周末,干预组患者的TP、PA及ALB较干预前均明显升高(P<0.05)。且与对照组患者相比,干预组患者的TP、PA及ALB在干预的第2周末及第4周末升高更为显著(P<0.05)。
  5.平均住院治疗时间:在肠内营养干预试验中,干预组患者的平均住院治疗时间与对照组相比缩短(P<0.05)。
  结论:
  天然肠内营养支持物复方环磷酸腺苷可减轻患者的胃肠道负担。应用复方环磷酸腺苷的肠内营养支持可纠正患者的贫血状况,增强机体免疫防御功能,改善患者的营养状况,且有助于改善患者的胃肠道功能、精神及睡眠状况,减轻化疗的毒副反应,缩短患者的住院治疗时间。
[硕士论文] 刘玉强
公共卫生 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  联合NRS-2002、PG-SGA两种方法调查晚期初治消化系统肿瘤化疗患者营养状况,分析两种方法的适用性,评估营养风险和营养不良对化疗后相关副反应发生率的影响,分析营养风险与临床结局(包括医疗总费用和住院时间)之间的关系,为临床预防、治疗晚期消化系统肿瘤患者的营养不良提供指导依据。
  方法:
  本研究采用前瞻性研究方法,选择山西医科大学附属长治市人民医院2016年6月~11月于肿瘤内科、普外科、消化内科就诊的晚期初治消化系统肿瘤99例患者作为研究对象。当天入院后48小时内取得患者及家属知情同意。收集患者资料包括患者
  ①一般情况:姓名、住院号、床位号、性别、年龄、入院时间、出院时间、住院费用;
  ②疾病情况:疾病诊断、肿瘤部位、既往治疗情况;
  ③饮食情况、活动情况;
  ④体格检查情况:身高、体重、肌肉丢失情况;
  ⑤实验室指标:血红蛋白、白细胞、中性粒细胞、血小板、前清蛋白、清蛋白。
  随后进行NRS-2002、PG-SGA量表评定。所有统计采用SPSS17.0软件包完成。计数资料采用频数、率表示,组间比较采用χ2检验。计量资料采用(均数±标准差)或中位数表示,组间比较采用t检验或t,检验,或Wilcoxon秩和检验。一致性分析采用Kappa一致性检验。P<0.05为差异有统计学意义。
  结果:
  1.PG-SGA调查显示营养不良发生率50.50%;NRS-2002营养风险发生率37.37%,χ2=8.471,P=0.002,差异有统计学意义。PG-SGA、NRS-2002经Kappa一致性检验,k=0.657,P<0.001,差异有统计学意义。以NRS-2002为标准,PG-SGA阳性预测值70%,阴性预测值95.92%。
  2.以NRS-2002结果分组,BMI在无营养风险组和有营养风险组间有统计学差异(P<0.001)。以PG-SGA结果分组,前清蛋白、清蛋白在无营养风险组和有营养风险组间有统计学差异(P=0.032,0.014)。
  3.全组患者消化道反应、疲劳、骨髓抑制的发生率分别为72.7%、59.6%、60.6%。经PG-SGA评定,营养风险越高,恶心/呕吐的发生率越高,差异有统计学意义
  (P<0.05)。存在营养风险的患者化疗后疲劳、骨髓抑制发生率有增加的趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。
  4.PG-SGA、NRS-2002两种筛查结果中有营养风险组较无营养风险组的住院时间更长,医疗总费用更高,差异均有统计学意义(P<0.05)。
  结论:
  1.PG-SGA、NRS-2002都可应用于晚期初治消化系统肿瘤患者营养风险筛查,但PG-SGA营养不良检出率更高,更利于发现机体慢性营养状态的改变;
  2.肿瘤患者化疗前营养风险越高,化疗相关不良反应发生率增加;
  3.营养风险可预测临床结局。
[硕士论文] 李哲
公共卫生 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  分析大同矿区急诊病人疾病谱特征,为急诊科物资准备、设备及人员管理及矿区人员组织管理提供依据。
  方法:
  选取2013年至2015年3年间急诊就诊、处置,转归登记的全部资料57467份,进行统计分析,内容包括:年龄、性别、疾病类型、疾病的原因、疾病构成、就诊时间及与年龄的相关性,将数据输入到计算机中,采用SPSS18.0对数据进行统计学处理,分析大同矿区急诊患者疾病病谱的变化情况。
  结果:
  3年期间共收治急诊病人57467例。其中,2013年共诊治17413例,占30.30%,2014年共诊治18551例,占32.28%,2015年共诊治21503例,占37.40%;男性41290例,占71.85%;女性16177例,占28.15%。急诊患者分布于各个年龄段,除76-80岁年龄组,其它各年龄组男性患者均多于女性患者;从发病年龄来看:16-60岁年龄段急诊患者较多,占81.96%;57467例急诊患者中,煤矿工人有20935例,其中男性18516例,占88.45%,女性2419例,占11.55%。
  57467例急诊患者中,排在前三位的疾病分别为:呼吸系统疾病、创伤性疾病和神经系统疾病,分别占:26.54%、17.36%和16.49%;其中有9976例外伤患者,排前三位的外伤类型为车祸外伤、井下工作伤和打架斗殴伤,分别占;46.20%、32.23%和14.04%。急诊的20935例煤矿工人中有3215例为外伤患者,外伤部位数排在前三位的分别为:四肢、颅脑外伤及颌面部以及胸部,分别占:34.56%、31.57%及19.04%。
  急诊患者就诊时间段主要集中在18-22时,其中,18-20时9992例,占17.39%;20-22时8390例,占14.60%。
  呼吸系统疾病发病主要集中在41-60岁,神经系统疾病发病主要在46-60岁,创伤性疾病发病主要在26-50岁,不同疾病发病年龄段差异具有统计学意义(χ2=9620.62,P<0.001)。
  结论:
  (1)大同矿区急诊病人发病年龄主要集中在16-60岁,且疾病主要以呼吸系统疾病、创伤性疾病和神经系统疾病为主。呼吸系统及神经系统疾病发病年龄集中在40-60岁,年龄越大,发病率越高。患者就诊集中在18-22时。
  (2)应根据急诊患者的疾病谱确定急诊科技术建设的重点和人才培养方向,提高急诊患者诊治水平,并且在疾病高峰来到之前做好相应的抢救准备,降低临床病死率和致残率,提高抢救成功率。
[硕士论文] 张新
内科学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:慢阻肺是一种气流受限不完全可逆的,呈进行性发展的肺部疾病,延缓此类患者肺功能的进展至关重要,药物治疗有一定的局限性,在此基础上新的治疗方案有待研究。本研究通过观察常规治疗基础上的个体化肠内营养结合呼吸康复治疗对急性加重期慢阻肺(AECOPD)患者肺功能、营养状况、免疫功能、生活状况的改善,评价其对AECOPD的治疗意义及价值,为AECOPD的临床治疗增添新的思路。
  方法:收集山西省汾阳医院2015-10至2016-5期间80例AECOPD的患者,随机分组(两组各40例)。实验组行呼吸康复治疗+个体化肠内营养+常规治疗,对照组行常规对症支持治疗+常规饮食治疗。两组患者均治疗14天。治疗前后对患者进行慢阻肺生活评分量表(CAT)评分,并测定肺功能、淋巴细胞数及营养状况相关指标。对结果进行统计分析并得出结论。
  结果:⑴两组患者治疗前肺功能(FEV1、FVC)、血清前白蛋白、血清白蛋白、CAT、淋巴细胞比较,差异无统计学意义(P>0.05)。⑵两组患者治疗后FEV1、血清前白蛋白、血清白蛋白均得到改善,差别具有统计学意义(P<0.01),实验组治疗后效果较对照组显著(P<0.01)。⑶两组患者治疗后FVC得到改善,差别具有统计学意义(P<0.01),实验组治疗后效果较对照组无明显差异(P=0.94)。⑷实验组患者治疗后CAT、淋巴细胞得到改善,差别具有统计学意义(P<0.01),对照组患者治疗前后无明显差别(P>0.05)。
  结论:与常规治疗相比,联合个体化肠内营养和呼吸康复治疗方案可有效改善肺功能、免疫功能及营养状态,提高患者生活质量。
[硕士论文] 张晨露
神经病学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:对NICU肠内营养患者误吸与胃残余(胃残余量、胃残余浓度)的相关性进行研究并探讨影响胃残余浓度的因素。
  方法收集山西医科大学第一临床医学院2016年6月至2016年12月入住NICU、年龄≥18岁,且经鼻饲饮食给予肠内营养≥4天的患者,排除既往胃食管反流病史、发病前有严重肺部疾病、消化道出血、消化道先天畸形的患者,排除因各种原因不能持续鼻饲进食的患者。所有病人鼻饲喂养时床头抬高30°-45°,使用同一型号鼻胃管、鼻肠管。患者鼻饲营养液有肠内营养乳剂TPF-D(瑞代),肠内营养乳剂TPF-T(瑞能),肠内营养乳剂TP-HE(瑞高)以及肠内营养混悬液TPF1.5(能全力)。患者进行鼻饲肠内营养乳剂后的3天时间内分别于每天10:00-22:00之间每间隔4小时回抽胃残余,利用手持折光仪测定胃内容物的折射率并计算胃残余量和胃残余浓度,同时由专业护士收集痰标本,对痰液标本采用 ELISA法进行胃蛋白酶检测,根据胃蛋白酶含量检测结果将患者分为频繁误吸组和非频繁误吸组,按照胃残余浓度分为低、中、高胃残余浓度组,进而分析比较各组之间胃残余浓度、胃残余量等有无统计学差异,寻找影响胃残余浓度的因素。
  结果:⑴纳入NICU患者30例,其中男22例,女8例,年龄36-83岁,平均年龄59.83±14.82岁,GCS评分3-15分,平均8.10±3.01,APACHEⅡ评分14-38分,平均24.93±6.12,监测胃残余量0-310ml,平均(23.02±27.78)ml,胃残余浓度0-100%,平均(50.28±28.13)%。纳入患者中,脑血管病19例,非脑血管病11例,其中脑血管病患者NIHSS评分9-43分,平均24.79±9.07。所有患者中气管插管5例,气管切开2例,呼吸机辅助呼吸4例。共留取痰标本174个。⑵以胃蛋白酶含量≥6.5ng/mL为阳性,样本阳性率>25%为频繁误吸组,<25%为非频繁误吸组,频繁误吸组共16人,非频繁误吸组14人,频繁误吸组GCS评分为7.06±2.79,非频繁误吸组 GCS评分为9.29±2.89,两组之间差别具有统计学意义(P=0.041);两组间年龄、性别及鼻饲方式等差别无统计学意义。⑶频繁误吸组GRV均数为(27.30±29.75)ml,非频繁误吸组为(18.13±25.55) ml,两组之间差别无统计学意义(P=0.376)。频繁误吸组与非频繁误吸组相比,两组间出现GRV增高(≥50、100、150ml)的次数差别亦无统计学差异。⑷频繁误吸组胃残余浓度高于非频繁误吸组,分别为(59.70±28.11)%、(39.53±24.90)%(P=0.048)。对比频繁误吸组与非频繁误吸组中患者不同胃残余浓度出现的次数,当胃残余浓度至少1次出现≥60%、70%、80%时,两组之间差别无统计学意义。然而,当出现至少3次胃残余浓度≥60%、70%时,更易出现频繁误吸;频繁误吸组出现至少2次胃残余浓度≥80%及至少1次≥90%的例数较非频繁误吸组更多。⑸按照胃残余浓度不同分为<30%、30%-60%以及>60%组(即低胃残余浓度、中胃残余浓度和高胃残余浓度组)。NICU患者低、中、高胃残余浓度组相比,GCS评分及脑血管病患者NIHHS评分差别具有统计学意义;不同鼻饲方式在这三组之间差别同样具有统计学意义。
  结论:对NICU留置鼻饲饮食的患者,监测胃残余量并不能用于评估误吸发生的风险,胃残余量较低时仍存在有误吸频繁发生。误吸更常发生于胃残余浓度较高的患者,监测胃残余浓度及胃残余浓度增高的次数可以评估误吸频繁发生的风险。胃残余浓度受意识障碍程度及鼻饲方式的影响,留置鼻肠管可以明显降低胃残余浓度。
[硕士论文] 林双双
营养与食品卫生学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  探讨强化支链氨基酸(BCAA)和谷氨酰胺的肠内营养支持对肝硬化患者的临床症状、营养状况、肝功能、凝血功能及免疫功能的影响,以期达到缓解患者临床症状,改善营养状况,恢复肝功能及凝血功能,增强免疫防御能力,进而改善预后,为肝硬化患者的肠内营养支持提供合理方案。
  方法:
  选择山西医科大学第二医院消化科肝硬化患者116例,随机分为对照组58例,干预组58例。两组患者均采用热量为146kJ/(kg·d)、蛋白质1.4g/(kg·d)的肠内营养支持,对照组在常规肠内营养的基础上给予复方氨基酸颗粒17.5g/d(含氮量为1.78g,BCAA含量为3.88g)。干预组则给予强化BCAA的营养制剂50g/d(含氮量为1.8g,BCAA含量为5.55g)和谷氨酰胺0.3g/(kg·d),两组均于早中晚分三次溶解于40℃左右温开水中服用。整个干预时间为九周,干预前后观察两组患者临床症状的变化。并在营养干预前、干预第四周末和第九周末,抽取患者空腹(禁食12h)状态下前臂外周静脉血5ml,检测相关血液观察指标:①营养指标:血清总蛋白(TP)、前白蛋白(PA)、血清白蛋白(ALB)、转铁蛋白(TRF);②肝功能指标:丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL);③凝血指标:凝血酶原时间测定(PT)、凝血酶原活动度(PTA);④免疫指标:T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)。
  结果:
  1、临床症状:整个干预期间,两组患者病情较为稳定,干预第九周末,干预组患者疲劳、食欲不振、腹泻或便秘的症状较对照组显著改善,且差异有统计学意义(P<0.05)。
  2、营养指标:营养干预前,两组患者TP、PA、ALB及TRF均衡可比(P>0.05)。营养干预第四周末和第九周末,干预组患者TP、PA、ALB及TRF值较干预前明显升高(P<0.05)。与对照组患者相比,干预组患者TP、PA、ALB及TRF在干预第四周末和干预第九周末均显著升高(P<0.05)。
  3、肝功能指标:营养干预前,两组患者的ALT、AST、TBIL和DBIL差异均无统计学意义(P>0.05)。营养干预第四周末和第九周末,干预组患者ALT、AST、TBIL和DBIL较干预前显著降低(P<0.05)。与对照组患者比较,干预组患者的ALT、AST、TBIL和DBIL在干预第四周末和干预第九周末均显著降低(P<0.05)。
  4、凝血指标:营养干预前,两组患者的PT和 PTA差异均无统计学意义(P>0.05)。营养干预第九周末,干预组患者较干预前PT和 PTA显著改善(P<0.05),而营养干预第四周末,干预组患者PT和PTA较干预前虽有改善,但差异无统计学意义。与对照组患者相比,干预组患者的PT和 PTA在干预第九周末显著改善,且差异有显著性(P<0.05),而干预第四周末两组患者PT和 PTA的差异无统计学意义(P>0.05)。
  5、免疫指标:营养干预前,两组患者的各T淋巴细胞亚群指标均衡可比(P>0.05)。营养干预第四周末、第九周末,干预组患者较干预前及对照组CD4+和 CD4+/CD8+均显著改善(P<0.05)。而在整个干预过程中,两组患者CD8+在各个干预期基本无差别(P>0.05)。
  结论:
  强化BCAA和谷氨酰胺的肠内营养支持:
  1、可显著缓解肝硬化患者的临床症状,阻止病情的恶化;2、可改善肝硬化患者的营养状况,升高蛋白质水平;
  3、可改善肝硬化患者的肝脏功能,促进营养物质正常代谢;
  4、在一定程度上缩短凝血时间,升高凝血酶原活动度,改善肝硬化患者的凝血功能;
  5、可增强肝硬化患者淋巴细胞的免疫防御能力,改善免疫功能。
[硕士论文] 崔学晴
麻醉学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  利用血栓弹力图(Thrombelastograph,TEG)监测大量输血(massive transfusion, MT)患者凝血功能动态变化,以此为依据指导大量输血患者新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma, FFP)的输注,探讨TEG在大量输血患者凝血功能监测中的作用及指导个体化精准血浆输注方案。
  方法:
  选择2015年5月~2016年12月术中进行大量输血的病人90例,ASA分级Ⅱ~Ⅳ级,年龄20~52岁,体重52~83kg。患者分为三组:大量血浆输注组(D组)30例, RBC:FFP=1:1;少量血浆输注组(S组)20例,RBC:FFP=2:1;TEG指导血浆输注组(T组),40例。(注:1URBC:100mlFFP=1:1)记录所有病人出血量、红细胞(Red blood cell, RBC)与FFP的输注量、晶胶体的输注量及输注血制品完成后即刻血栓弹力图的参数(R、K、α和MA)。利用SPSS22.0统计软件进行数据分析,p<0.05认为差异有统计学意义。
  结果:
  三组患者的年龄、性别、身高、体重和ASA分级差异无统计学意义(p>0.05)。
  三组患者在术中的出血量,RBC、晶体液和胶体液的输注量,差异无统计学意义,(p>0.05)。
  术中新鲜冰冻血浆的输注量,D组明显大于T组与S组,差异有统计学意义(p<0.05),T组与S组比,T组大于S组,差异有统计学意义(p<0.05)。
  TEG监测的相关参数,与S组比,D组、T组的R值、K值明显减小,α值和MA值明显增大,差异有统计学意义(p<0.05);T组与D组之间差异无统计学意义(p>0.05)。
  结论:
  1、从血浆输注量比较:TEG指导血浆输注组明显小于大量血浆输注组,可避免不必要的血液制品浪费。
  2、从凝血功能方面比较,TEG指导血浆输注组与大量血浆输注组优于少量血浆输注组,能维持凝血功能状态相对稳定。
  3、TEG指导血浆输注组中的红细胞与血浆的输注比例集中于(1~2):1。
  4、TEG适合用于大量输血患者血浆输注的指导,并能提供个体化的血浆输注方案。
[硕士论文] 何尤夫
内科学(心血管病) 遵义医学院 2017(学位年度)
摘要:目的:大量研究证实,心脏干细胞(cardiac stem cell,CSC)移植治疗可显著减轻心肌梗死后心室重构,改善心功能,故被认为是目前细胞移植治疗心肌梗死最为理想的干细胞源。然而,心肌梗死后局部微环境恶劣,致使干细胞存活量极少。外泌体(exosomes)作为细胞间信号传导的重要方式,也是细胞存活的微环境的重要组成部分。相关文献报道骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Stem cell,BMSC)来源的外泌体可调控心脏干细胞的增殖、分化及凋亡等过程,而缺氧预处理间充质干细胞可提升其分泌的外泌体抵抗细胞凋亡的能力。此外,众所周知,钙稳态在心肌谱系细胞的信号转导及凋亡中均扮演着弥足轻重的地位,以受磷蛋白(Phospholamban,PLB)等蛋白为主的细胞内质网钙库平衡最关键的内平衡调节系统,调节了细胞内约44%的钙离子。有研究表明,BMSCs源外泌体内富集microRNA-133a,其在心脏谱系细胞中可发挥强大的抗凋亡能力,并可能参与细胞的钙稳态调节过程。本研究前期预实验初步证实,缺氧预处理BMSC-exosome可以抑制氧化应激状态下的C-kit+CSC凋亡,那是否是通过microRNA-133a来发挥作用的呢?是否也是通过作用于以PLB等蛋白为主的内质网钙库系统来调节了其钙稳态进而抑制的凋亡呢?综上所述,本研究旨在探讨缺氧预处理BMSC-exosomes对氧化应激环境中C-kit+CSCs抗凋亡作用及其钙稳态调控在其中发挥的重要作用。
  方法:⑴采用组织块贴壁法培养SD大鼠BMSCs,采用流式细胞技术鉴定其纯度,选取P3-P5代BMSCs备用。以不同浓度的H2O2作用于BMSCs不同时间以模拟缺氧预处理环境,采用CCK-8法检测细胞活性,确定促使BMSCs活性达最大值的H2O2最佳浓度和时间。⑵采用SBI试剂盒法、PEG法、qEV试剂盒法提取骨髓间充质干细胞源外泌体,采用蛋白质印迹法(western blot,WB)检测外泌体表面标记蛋白的表达情况,采用电子显微镜及纳米颗粒跟踪分析技术(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA)分析所提取外泌体的大小,从平均粒径、蛋白浓度及颗粒拟合浓度等方面对比各方法优劣并选取最优方法提取外泌体。⑶采用酶消化法联合磁珠分选法体外分离、培养大鼠C-kit+CSCs,采用免疫荧光检测CSCs表面c-kit的表达情况,采用流式细胞术鉴定细胞纯度。同时,以不同浓度的H2O2作用c-kit+CSC不同时间以模拟氧化应激环境,选取使c-kit+CSC达到最大凋亡程度的H2O2最佳作用浓度和时间。⑷采用DiI对所提取的BMSC-exosome进行染色标记,并将之与C-kit+CSCs共培养0、1、6、12、24h,观察c-kit+CSC对BMSC-exosome的内化摄取情况,确定最佳共培养时间。⑸将BMSC-exosome浓度分为0、100、200、400、800ng/μL组,分别与c-kit+CSC共培养,以cck8法检测其活性,确定使C-kit+CSC达最大活性的BMSC-exosome浓度。⑹将实验分为四组:常氧对照组(normal组):不予以任何处理的CSCs;对照组(control组):以H2O2处理模拟氧化应激状态的CSCs;常氧外泌体组(N-exo组):与常氧状态BMSC-exosome共培养的氧化应激状态C-kit+CSCs组;缺氧外泌体组(H-exo组):与经缺氧预处理的BMSC-exosome共培养的氧化应激状态下C-kit+CSCs组。以Annennexin V-Prodidium iodide(Annexin V-PI)染色,行流式细胞荧光分选技术(Fluorescence activated Cell Sorting,FACS)检测各组细胞凋亡情况;采用WB检测凋亡相关蛋白caspase8、caspase9、cleaved-caspase3的蛋白表达情况;以fluo-8进行染色并采用激光共聚焦显微镜检测细胞内钙超载情况。⑺为明确H-exo调控氧化应激状态C-kit+CSCs钙超载的机制,实验分为三组:normal组;control组;H-exo组。行WB检测H-exo对内质网钙库调节系统最主要调控蛋白,即心肌肌浆网Ca2+-ATP酶2a(sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPase2a,SERCA2a)、受磷蛋白(Phosphoprotein,PLB)、2型兰尼碱受体(Ryanodine Receptor2,RyR2)的蛋白表达水平的影响。⑻为明确其机制,我们采用RT-PCR检测N-exo及H-exo组内micorRNA-133a mRNA水平表达情况,以明确缺氧预处理对BMSC-exosome中micorRNA-133a表达的影响。⑼随后实验分为四组:normal组;control组;N-exo组;H-exo组。以RT-PCR分别检测各组CSCs内micorRNA-133amicroRNA表达情况,以明确BMSC-exosome作用后对C-kit+CSCs内micorRNA-133amicroRNA表达的影响。⑽以life2000TM为载体将micorRNA-133amicroRNA抑制剂及模拟物及其阴性对照物(50nM)转染至C-kit+CSCs,以抑制及过表达氧化应激状态下C-kit+CSCs内microRNA-133a的表达。实验分为六组:Control组;H-exo组;转染mimic-micorRNA-133a组(mimic组):转染micorRNA-133a mimic,随后加入H2O2诱导细胞处于氧化应激状态组;转染mimic模拟物的阴性对照组(mimics nagetive control,MNC组):转染micorRNA-133a mimic的模拟物,随后加入H2O2诱导细胞处于氧化应激状态组;作为负性对照的inhibitor组(inbihitor组):转染micorRNA-133a siRNA作为micorRNA-133a抑制剂,随后加入H2O2诱导细胞处于氧化应激状态组;作为负性对照的阴性对照的inhibitor-negative组(INC组):转染micorRNA-133a siRNA的模拟物作为micorRNA-133a siRNA的阴性对照组,随后加入H2O2诱导细胞处于氧化应激状态组。以RT-PCR分别检测各组细胞中micorRNA-133a及PLB mRNA的表达变化;采用WB检测各组细胞中凋亡蛋白caspase8、caspase9和cleaved-caspase3及通路蛋白PLB的表达情况;采用Annexin V-PI染色,行FACS检测各组中细胞凋亡情况;采用fluo-8染色,行激光共聚焦显微镜检测各组中细胞钙离子情况。⑾为进一步明确PLB在H-exo调控氧化应激状态下C-kit+CSCs钙稳态和凋亡中的作用,我们以life2000TM为载体将PLB抑制剂(siRNA)转入C-kit+CSCs中行抑制实验。实验分为4组,即:Control组;H-exo组;转染siRNA的阳性对照组(PLB siRNA组):转染siRNA-PLB,随后加入H2O2诱导细胞处于氧化应激状态组;转染PLB的siRNA模拟物作为阴性对照组(SNC组):转染siRNA nagetive control,随后加入H2O2诱导细胞处于氧化应激状态。行RT-PCR检测各组中PLB mRNA的表达情况;采用WB检测各组中凋亡蛋白caspase8、caspase9和cleaved-caspase3及通路蛋白PLB的表达情况;采用FACS检测各组细胞凋亡情况;采用fluo-8染色,行激光共聚焦显微镜检测各组中细胞钙稳态情况。
  结果:⑴BMSCs培养48h后部分细胞开始贴壁生长,P3-5代时细胞呈峰谷状或漩涡状生长。FACS结果显示:BMSC表面标记物CD29及CD90分别表达99.7%和96.8%,而白细胞标记物CD45表达仅为1.17%。CCK8结果示,与其余各组相比,以100μmol/L H2O2处理2h时,BMSCs活性达到最大值(P<0.05)。⑵采用exoquick、qEV、PEG三种方法提取BMSC上清液中的exosome。WB结果显示,三组外泌体CD63蛋白表达均为阳性。电镜示,exosome呈茶托样或杯口样,直径在30-150nm之间。NTA结果示,exoqucik、qEV、PEG所提外泌体峰值分别为:139nm、161nm、163nm。结合外泌体浓度、纯度等相关结果,最终选取exoqucik试剂盒法进行下一步实验。WB结果显示,以细胞碎片为对照,经exoquick提取的外泌体中CD63、CD9、ALIX表达均为阳性。⑶原代CSCs贴壁第二天可见部分细胞呈圆形亮点状,第3-5天CSCs逐渐变为长梭形。磁珠分选后行免疫荧光鉴定结果显示,c-kit阳性的CSCs达90%以上;FACS结果显示: CSCs阳性率91.26%,表达CD45的CSCs为0.65%,表达CD34的CSCs仅为0.32%。Annexin V-PI FACS示:与normal组(总体凋亡率2.6%)相比,在100μmol/L H2O2处理2h时总体凋亡率达到95.86%(P<0.05)。⑷采用DiI染色检测对BMSC-exosome进行Dil染色,采用免疫荧光观察CSC对BMSC-exosome的内化摄取情况。结果显示:在共培养24h时,被DiI染色的外泌体可被CSC完全内化吸收。⑸采用CCK-8法检测不同浓度BMSC-exosome对CSCs细胞活性的影响,结果显示:BMSC-exosome作用浓度为400ng/μl时氧化应激状下C-kit+CSCs活性达到最大值(P<0.05)。⑹将实验分为四组:常氧对照组(normal组);对照组(control组);常氧外泌体组(N-exo组);缺氧外泌体组(H-exo组),行Annexin V-PI FACS检测细胞凋亡率,结果示:与normal组相比,control组的细胞凋亡率明显上升(P<0.05);与control组相比, N-exo组和H-exo组均可抑制氧化应激状态下c-kit+CSCs总体凋亡率和早期凋亡率(P<0.05),且H-exo组的抗凋亡作用更为显著(P<0.05);此外,H-exo组可明显抑制c-kit+CSCs晚期凋亡率(P<0.05)。WB结果示:与normal组相比,control组凋亡相关蛋白caspase8、caspase9和cleaved-caspase3的蛋白水平表达明显上升(P<0.05);与control组相比, H-exo组可明显抑制cleaved-caspase3、caspase8、caspase9蛋白表达(P<0.05),而N-exo组则只可抑制cleaved-caspase3、caspase9蛋白表达(P<0.05)。激光共聚焦显微镜结果示:与control组相比, H-exo组和N-exo组均可明显抑制CSC内钙离子荧光强度(P<0.05),且H-exo组抑制效果更为明显(P<0.05)。⑺将实验分为三组:normal组;control组;H-exo组。采用WB检测SERCA2a、PLB、RyR2的蛋白水平表达。结果示:与normal组相比,control组和H-exo组SERCA2a和PLB蛋白水平表达均明显下降(P<0.05),RyR2蛋白水平表达明显上升(P<0.05);与control组相比,H-exo组SERCA2a蛋白水平表达明显上升(P<0.05),PLB和RyR2蛋白水平表达明显下降(P<0.05)。⑻采用RT-PCR检测N-exo组和H-exo组外泌体内micorRNA-133a mRNA的表达,结果示:与N-exo组相比, H-exo组内micorRNA-133a mRNA表达明显上升(P<0.05)。⑼将实验分为四组:normal组;control组;N-exo组;H-exo组。采用RT-PCR检测各组细胞内microRNA-133a mRNA表达水平,结果示:与normal组相比, control组micorRNA-133a mRNA表达水平明显上升(P<0.05);与control组相比,H-exo组内micorRNA-133a mRNA表达水平明显上升(P<0.05)。⑽实验分为六组:Control组;H-exo组;mimic组;MNC组;inbihitor组;INC组。FACS结果示:与mimic组相比,control组早期凋亡率、晚期凋亡率和总体凋亡率明显上升(P<0.05),H-exo组早期凋亡率、晚期凋亡率和总体凋亡率明显下降(P<0.05);与inhibitor组相比, control组晚期凋亡率明显上升(P<0.05),早期凋亡率和总体凋亡率明显下降(P<0.05),H-exo组早期凋亡率明显上升(P<0.05),晚期凋亡率和总体凋亡率明显下降(P<0.05),坏死率明显减少(P<0.05)。WB结果示:与 mimic组相比, H-exo组 caspase8、cleaved-caspase3蛋白水平明显下降(P<0.05), inhibitor组 caspase9、cleaved-caspase3蛋白水平明显上升(P<0.05);与inhibito组相比, H-exo组caspase8、caspase9、cleaved-caspase3蛋白水平表达明显下降(P<0.05),mimic组caspase9、cleaved-caspase3蛋白水平明显下降(P<0.05)。这表明,过表达microRNA-133a可明显抑制caspase9和cleaved-caspase3蛋白水平表达,但对caspase8蛋白水平影响不大。CLSM结果示:与mimic组相比,control组和H-exo组荧光强度明显上升(P<0.05);与control组相比,H-exo组钙离子荧光强度明显下降(P<0.05);与inhibitor组相比,H-exo组和mimic组钙离子荧光强度明显下降(P<0.05),但与control组相比,H-exo组钙离子荧光强度情况仍存在明显差异(P<0.05)。⑾针对各组PLB蛋白表达水平情况,WB结果示:与mimic组相比,control组PLB蛋白水平表达明显上升(P<0.05),H-exo组表达明显下降(P<0.05);与inhibitor组相比,H-exo组表达明显下降(P<0.05)。RT-PCR结果示,与mimic组相比, H-exo组PLB mRNA水平表达明显下降(P<0.05;与inhibitor组相比,H-exo组PLB mRNA水平表达明显下降。mimic组与inhibitor组 PLB mRNA表达水平无明显差异(P>0.05)。对此,我们认为, microRNA-133a对于氧化应激状态下C-kit+CSCs的PLB调控可能仅限于蛋白水平。⑿实验分为4组,即:Control组、H-exo组、PLB siRNA组、SNC组。将PLB siRNA转染入C-kit+CSCs后,RT-PCR结果示:与PLB siRNA组相比,control组、H-exo组和SNC组PLB mRNA水平表达均明显上升(P<0.05)。WB结果示,与PLB siRNA组相比,control组、H-exo组和SNC组PLB蛋白水平表达均明显上升(P<0.05)。WB检测各凋亡蛋白,结果示:与PLB siRNA组相比,control组和SNC组caspase9和 cleaved-caspase3蛋白表达水平明显上升(P<0.05),而H-exo组 caspase8、caspase9和 cleaved-caspase3蛋白表达水平均明显下降(P<0.05)。本实验说明抑制PLB可能会导致cleaved-caspase3和caspase9蛋白表达水平下降,但对caspase8蛋白水平表达无明显调节效应。激光共聚焦显微镜结果示:与control组相比,siRNA组钙离子荧光强度程度明显下降(P<0.05),说明PLB的差异性表达在H-exo对氧化应激状态下c-kit+CSCs钙稳态的调节中扮演着弥足轻重的作用。
  结论:①缺氧预处理BMSC所分泌的exosome对氧化应激状态下的C-kit+CSCs更具有抗凋亡作用,其抗凋亡效应可能与其对钙稳态的调控效应有关;②缺氧预处理BMSC-exosme可能通过microRNA-133a/PLB信号通路抑制氧化应激状态下的C-kit+CSCs钙稳态和凋亡。
[博士论文] 史惠
临床检验诊断学 江苏大学 2017(学位年度)
摘要:目的:皮肤烫伤破坏皮肤屏障功能,给患者带来触觉痛觉等障碍,且皮肤烫伤现有治疗方法效率不高,加速创面愈合至关重要。以间质干细胞为主的细胞治疗被广泛报道,利用小分子药物预处理间质干细胞可提高其在损伤修复中的治疗效率,加速损伤组织愈合。本文旨在研究小分子药物3,3'-二吲哚甲烷(3,3'-diindolylmethane,DIM)对人脐带间质干细胞(human umbilical cordmesenchymal stem cells,hucMSC)预处理后的作用,以期在皮肤烫伤中发挥更好治疗效果,并阐明DIM预处理hucMSC的分子机制。
  方法:MTT试验确定DIM作用的浓度和时间。体内构建SD大鼠深Ⅱ度烫伤模型,以PBS和hucMSC为对照,观察DIM改造后hucMSC的治疗效果。创面大体照片,HE染色及组织学评分用以评价皮肤表皮再生及毛囊等附属结构再生情况。免疫组织化学染色检测损伤部位增殖细胞核抗原PCNA,免疫荧光染色检测角蛋白CK19表达,荧光定量PCR检测Ⅰ型/Ⅲ型胶原比值,免疫组化检测皮肤组织β-catenin表达。体外探寻DIM对hucMSC预处理作用时,运用荧光定量PCR和Western blot检测hucMSC干性转录因子Oct4,Sox2,Nanog,Sall4表达情况。平板克隆检测hucMSC自我增殖能力,成脂诱导试验及成骨诱导试验检测hucMSC诱导分化潜能,定量PCR检测脂联蛋白adiponectin及碱性磷酸酶ALP表达,蛋白液相芯片技术检测hucMSC在DIM作用后旁分泌水平的改变。在研究DIM通过何种机制改造hucMSC时,采用荧光素酶报告基因检测Wnt信号通路的活化情况,免疫荧光及高内涵分析β-catenin的表达和入核情况。Westen blot检测β-catenin及其下游基因CyclinD3,CD44蛋白表达水平。使用β-catenin信号通路抑制剂ICG001进一步验证Wnt/β-catenin信号通路的作用,免疫荧光验证抑制剂抑制效果。平板克隆试验,成脂成骨诱导试验检测ICG001阻断β-catenin后,hucMSC自我增殖和多向分化的能力的改变。在进一步寻找关键Wnt分子时,荧光定量PCR筛选DIM作用后hucMSC中改变最为明显的Wnt分子。借助慢病毒载体干扰Wnt11基因的表达,定量PCR和Western blot验证慢病毒敲减效率。平板克隆,成脂成骨诱导试验检测Wnt11敲减后hucMSC自我增殖和多向分化能力的改变,并在体内模型中进一步验证。为了寻找Wnt11的有效传递形式,我们收集DIM处理过hucMSC的条件培养基,ELISA检测其中Wnt11分泌情况。用蔗糖密度梯度超速离心法提取上清中exosome。Western blot检测exosome表面标记物CD9,CD63,CD81,Nanosight分析对提取的exosome直径、分布、颗粒及表面标记进行鉴定。同时留取匹配的去exosome上清,ELISA检测exosome及去exosome上清中Wnt11表达情况。将不同处理的exosome和去exosome上清作用于皮肤细胞,检测皮肤细胞增殖和迁移能力的改变。
  结果:MTT结果显示hucMSC较肿瘤细胞对DIM显示出更强的耐受性,DIM IC50为158.11μM,我们选取既不损伤细胞活性又具有最强效应的浓度和时间,即50μM DIM作用hucMSC48小时。DIM预处理后的hucMSC(DIM-hucMSC)在体内明显加速大鼠深Ⅱ度烫伤修复,大体创面结痂脱落,表皮再生化完成,毛囊等附属结构增殖活跃,炎性浸润显著降低,组织学评分及治疗效率高于hucMSC治疗组。免疫组化检测结果显示DIM-hucMSC治疗组,损伤部位皮肤细胞增殖活跃。CK19表达及Ⅰ/Ⅲ型胶原表达比值均上调。免疫组化检测损伤组织中β-catenin的表达,DIM-hucMSC组也明显升高。体外检测DIM对hucMSC预处理作用,能明显上调其干性转录因子Oct4,Sox2,Nanog,Sall4的mRNA和蛋白表达水平,增强其核内表达。平板克隆和成脂、成骨诱导试验显示DIM-hucMSC较hucMSC呈现出更强的自我增殖和多向分化的诱导潜能,Adiponectin和ALP表达水平佐证了这一结果。蛋白液相芯片结果显示DIM-hucMSC旁分泌水平上调。荧光素酶报告基因检测显示DIM-hucMSC中Wnt信号活性增强,β-catenin表达上调且入核增加,转录稳定性提高。β-catenin信号通路抑制逆转了DIM-hucMSC中干性上调和旁分泌能力增强的作用,并在体内抑制了DIM-hucMSC的修复作用。慢病毒载体干扰Wnt11基因表达,Wnt11的干扰体外抑制了DIM-hucMSC中β-catenin的活化,体内削弱了DIM-hucMSC在烫伤组织中的治疗作用。收取DIM-hucMSC上清,发现上清同样具有上调hucMSC干性的作用。ELISA检测DIM-hucMSC上清中Wnt11分泌量增加,且去exosome上清中Wnt11表达含量较低。Exosome对Wnt11分子有效富集并成为其在细胞间传递,发挥生物学功能的主要活性形式。
  结论:DIM促进hucMSC中Wnt11蛋白的自分泌,活化自身Wnt/β-catenin信号通路,上调hucMSC自我增殖,多向分化和旁分泌水平,提高其在大鼠深Ⅱ度烫伤修复中的修复效率,为干细胞及干细胞成分治疗提供了新的方法和实验依据。
[硕士论文] 杨秀莲
运动人体科学 广州体育学院 2017(学位年度)
摘要:研究目的:
  近年来,抗阻训练在减肥方面有一定的研究,非酒精性脂肪肝人群大部分伴随肥胖状态,有氧运动对脂肪肝的干预效果已有大量的研究,并取得良好效果。抗阻训练结合有氧运动共同干预性脂肪肝当前未见有研究,本研究通过制定12周规律、合理、个体化的抗阻训练结合健步走运动处方对非酒精性脂肪肝患者实施干预,观察分析非酒精性脂肪肝患者的身体形态、身体成分、肝功能、血脂和肝脏B超影像等的变化,探讨抗阻训练结合健步走运动对非酒精性脂肪肝的干预效果,以期望能为非酒精性脂肪肝的防治工作提供有效的依据。
  研究方法:
  采用自愿报名参加的形式,在医学体检的基础上,通过问卷调查和肝脏 B超筛选出符合脂肪肝诊断标准的非酒精性脂肪肝患者进行抗阻训练结合健步走运动干预。其中男性18名,女性10名,年龄在32岁-56岁之间,平均年龄45.82±7.55岁。12周的抗阻训练结合健步走运动后,将13名连续1周内不能达到3次运动次数的研究对象视为脱落,对其余15名研究对象数据进行分析。实验过程中进行四次健康教育讲座;在开始实验前和实验结束后相同实验条件下测试研究对象的各项指标,包括肝脏 B超、身体形态指标、身体成分、肝功能和血脂等指标。数据分析采用SPSS17.0社会科学统计软件包完成,运动干预前后的比较采用配对样本T检验完成,P<0.05为差异有统计学意义。
  实验结果:
  1运动前后身体形态的变化
  经过12周的运动干预后,非酒精性脂肪肝患者形态指标均有非常明显的降低。其中体重、BMI、腰围、臀围、腰臀比、胸围、大腿围均呈现出非常显著性降低(P<0.01);运动干预前 BMI仅有3例(20%)在正常范围内,运动后增加到7例(46.6%);腰臀比2例(13.3%)运动后增加到4例(26.6%),运动干预前有5例(33.3%)腰臀比超过1.0,运动后降低到0例。
  2运动前后身体成分的变化
  经过12周的运动干预后,非酒精性脂肪肝患者脂肪百分比、内脏脂肪水平和去脂肪软体重、腹部脂肪厚度具有非常显著性差异(P<0.05)。
  3运动前后肝功能的变化
  经过12周的运动干预后,非酒精性脂肪肝患者ALP、γ—GT、LDH、DBIL、IBIL、TBIL、TP、GLOB、ALT、AST均降低,其中 GLOB的降低具有显著性差异(P<0.05),ALT和AST具有非常显著性差异(P<0.01),其他指标均无统计学意义(P>0.05)。另外A/G、ALB、AST/ALT有所上升。
  4运动前后血脂的变化
  经过12周的运动干预后,非酒精性脂肪肝患者运动前后除 ApoA1/ApoB均值上升外, TG、CHOL、HDL-C、LDL-C、ApoA1、ApoB等六项指标均值均降低,除 TG的降低具有显著性差异外(P<0.05),其他指标的降低均不具统计学意义(P>0.05)。运动干预前TG异常有10例(66%),经12周运动干预后,下降为4例(26%),CHOL从运动干预前的7例(46%)下降为5例(33%),LDL-C从运动前的6例(40%)下降为4例(26%)。
  5运动前后脂肪肝程度和疗效的分析
  经过12周的运动训练后,非酒精性脂肪肝患者中,3例中度脂肪肝均降低到轻度脂肪肝;12例轻度脂肪肝中有8例变为无脂肪肝,7例仍为轻度脂肪肝,B超图像显示5例在同等级中程度减轻,其他2例B超声像图显示无改变。本实验非酒精性脂肪肝患者中,治愈率为53.3%,有效但无治愈率为40%,无效率为6.7%,总有效率为93.3%。
  研究结论:
  1本研究制定的12周抗阻训练结合健步走运动方案,可有效的改善NAFLD患者的体重、腰围和腰臀比等身体形态指标。
  2本研究制定的12周抗阻训练结合健步走运动方案,可有效的改善NAFLD的体脂率、内脏脂肪含量和腹部脂肪厚度。
  3本研究制定的12周抗阻训练结合健步走运动方案,可以有效改善NAFLD患者的肝功能、血脂指标。
  4坚持进行本研究制定的12周抗阻训练结合健步走运动方案,可有效的治疗NAFLD,并可使大部分轻度NAFLD完全逆转。
  5本研究制定的抗阻训练结合健步走运动方案安全有效且容易重复,可作为防治非酒精性脂肪性肝病的一项重要、安全、有效的基础治疗措施,值得在社区、临床上推广使用。
[硕士论文] 李姝蓉
生物医学工程 电子科技大学 2017(学位年度)
摘要:调节性免疫细胞网络是目前移植免疫领域研究热点内容之一,其中调节性B细胞(Regulatory B cells,Bregs)是新近发现的一群具有负向调节功能的B细胞,该类细胞可通过多种作用方式从而促进器官移植术后免疫耐受形成,以及维持耐受状态。Bregs的发现及作用机制的研究,为诱导移植耐受策略提供了新方向。但是目前对于Bregs细胞的表型、功能、及调节机制没有深入的认识,尤其在移植免疫中Bregs细胞发挥的作用至今尚未明确。在已有报道的基础上,我们进行了以下研究。
  本研究立了同种异基因小鼠胰岛移植动物模型,按以下方式分组:对照组(n=5);单纯移植1周组(n=5);移植+双抗体1周组(n=5);单纯移植2周组(n=5);移植+双抗体2周组(n=5);长期耐受组(即移植物存活超过90天)(n=4)。流式细胞仪检测移植后受体小鼠脾细胞中CD19+CD5+CD1d+B10细胞和CD19+Tim-1+B细胞比例。结果表示,只有移植+双抗体2周组小鼠体内的B10细胞有明显增加,最高增加至5.9%(P<0.05)。单纯移植2周组、移植+双抗体2周组,以及长期耐受组小鼠体内的CD19+Tim-1+B细胞则均有明显增加(P<0.05)。为进一步明确Bregs是通过与哪些免疫细胞作用而促进耐受形成,同期检测了CD4+CD25+Tregs以及CD4+IFN-γ+Th1细胞和CD4+IL-4+Th2细胞。结果表明,移植+双抗体2周组小鼠体内的CD4+CD25+Tregs和CD4+IL-4+Th2均有显著增加(P<0.05),CD4+IFN-γ+Th1细胞则明显减少(P<0.05)。并且,除Th2细胞外,长期耐受小鼠的各淋巴细胞比例变化趋势都与术后2周数据一致。以上结果提示在抗CD45RB/抗Tim-1联合诱导的小鼠移植耐受过程中,调节性B细胞在耐受的初期及维持过程中都起到了重要作用,其具体机制可能是通过与调节性T细胞,Th1细胞以及Th2细胞的相互作用参与免疫调节。对调节性B细胞的扩增条件进行了探索。结果表明LPS可刺激B10细胞在体外进行增殖,LPS的作用时间(72h)与细胞的增殖成正相关(P<0.05)。
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