绑定机构
扫描成功 请在APP上操作
打开万方数据APP,点击右上角"扫一扫",扫描二维码即可将您登录的个人账号与机构账号绑定,绑定后您可在APP上享有机构权限,如需更换机构账号,可到个人中心解绑。
欢迎的朋友
导航
万方知识发现服务平台
获取范围
  • 1 / 24
  (已选择0条) 清除 结果分析
找到 464 条结果
[硕士论文] 卞晓锐
病原生物学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:淋病是全球发病率最高的性传播疾病之一,淋病奈瑟菌(Neisseriagonorrhoeae,Ng)是淋病的病原体。淋病奈瑟菌感染可导致不孕不育,还可促进人类免疫缺陷病毒(HIV)的传播。随着抗生素使用种类的更新,淋病奈瑟菌耐药性范围也不断扩增,给淋病治疗带来极大难度。为此亟需全面了解淋病奈瑟菌的生物学特性,以利于从根本上控制淋病。
  近年发现约90%古细菌和40%真细菌基因组中存在CRISPR系统,由CRISPR簇、前导序列(Leader)以及一系列CRISPR相关蛋白(Cas)基因构成,为细菌防御噬菌体和外源基因的侵袭发挥重要作用,是细菌的获得性免疫系统。课题组前期分析淋病奈瑟菌WHO-A株基因组信息发现6个CRISPR簇和2个分别属于CT1133家族和TM1801家族的Cas基因(下文分别称CT和TM),本研究检测了淋病奈瑟菌WHO-A株Cas基因的表达,并对其功能进行了初步探究。研究内容分为以下四个部分:
  一、淋病奈瑟菌Cas基因的类型分析与原核表达载体构建
  目前至少报道了45个Cas基因家族,为了分析淋病奈瑟菌WHO-A株Cas基因的类型,对WHO-A株的两个Cas基因进行BLAST分析,与已公布的相关基因进行同源性比较。为研究淋病奈瑟菌中CRISPR系统中Cas蛋白的结构和功能,根据前期WHO-A株基因组序列测定结果确定其Cas基因的具体位置并设计引物。为将CT或TM基因均分别插入pCold-TF和pGEX-6p-1中,上下游引物两端分别添加有PstⅠ和KpnⅠ以及BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点。提取淋病奈瑟菌WHO-A株总DNA为模板,PCR扩增Cas基因。扩增产物和载体使用相同双酶切处理,酶切产物分别纯化回收后用T4连接酶连接,构建Cas基因原核表达载体。
  二、重组Cas蛋白的原核表达和多克隆抗体制备
  将原核表达载体pCold-CT(TM)和pGEX-CT(TM)分别转化至大肠埃希菌BL21(DE3),得到的重组菌用IPTG作可溶性表达的小量诱导,经SDS-PAGE检测到分子量与预期大小一致的表达产物后,用同样方法进行大量诱导,取pCold-CT(TM)-BL21和pGEX-CT(TM)-BL21的上清分别通过镍亲和层析柱和谷胱甘肽树脂柱,纯化产物CT(TM)-His和CT(TM)-GST用SDS-PAGE作分子量分析,并用BCA试剂盒检测目的蛋白的含量。用纯化的CT(TM)-His融合蛋白免疫BALB/c小鼠,4w后收集血清,以CT(TM)-GST融合蛋白为抗原检测免疫血清中特异性抗体的效价。结果表明,获得了符合预期大小的CT和TM重组蛋白,间接ELISA检测表明小鼠免疫血清中的CT和TM抗体的效价分别为1∶25600和1∶12800。制备的特异性抗体为检测淋病奈瑟菌WHO-A株细胞内相应Cas蛋白的表达和研究蛋白功能提供了实验材料。
  三、淋病奈瑟菌WHO-A株Cas基因的表达分析
  为检测淋病奈瑟菌WHO-A株中Cas基因的转录和表达情况,我们用RT-PCR法、ELISA法和免疫荧光法3种方法分别检测了细菌细胞内的Cas-mRNA和Cas蛋白。
  (1)提取该菌总RNA为模板,通过RT-PCR法转录获得cDNA,用Cas基因引物对cDNA进行PCR扩增,产物经1%琼脂糖凝胶电泳分析;
  (2)对WHO-A株细菌作超声裂解处理,取裂解液为抗原,以制备的Cas抗体为第一抗体,棋盘滴定法检测裂解菌液中Cas蛋白的存在情况;
  (3)将WHO-A株细胞用4%多聚甲醛固定于载玻片上,以CT(TM)血清抗体作为一抗,以FITC标记的羊抗鼠IgG作为二抗进行免疫荧光实验,荧光显微镜下检测样品的发光情况。结果表明,从WHO-A株总RNA中用RT-PCR可扩增出与CT或TM基因大小一致的DNA条带;WHO-A株细菌超声裂解液包被量为200μg/ml时,以1∶12800的CT多抗和1∶800的TM多抗可以检测到相应Cas蛋白表达的明显信号;WHO-A株细菌细胞固定后用CT或TM抗体可检测到特异性荧光。以上结果提示Cas基因在淋病奈瑟菌WHO-A株细胞中可进行有效转录与表达,淋病奈瑟菌的CRISPR系统可能是一个具有活性的完整系统,为此需进一步研究Cas蛋白的结构与功能。
  四、淋病奈瑟菌WHO-A株Cas蛋白功能的初步研究
  实验室前期已构建pCas9-KRn重组载体,即一种靶向卡那霉素抗性基因的CRISPR简化系统,可作为Cas蛋白核酸酶活性的研究工具。为探究CT或TM蛋白是否发挥核酸酶活性,将pCas9-KRn中的Cas9基因替换为CT或TM基因。以pCas9-KRn中Cas9以外的部分为模板设计引物并进行PCR扩增,扩增产物两端分别添加了PstⅠ、KpnⅠ酶切位点,双酶切并纯化后与相同酶切处理的CT或TM基因连接,获得重组质粒pCT(TM)-KRn,转化宿主大肠埃希菌后分别用RT-PCR和ELISA两种方法检测到WHO-Cas基因的表达。pCT(TM)-KRn转化至含pET-30a的DH5α大肠埃希菌,用LB培养液对重组菌进行传代。每代菌液分别在卡那霉素和氯霉素LB平板上的活菌计数结果表明,二者的CFU值没有明显差异,提示未发现WHO-Cas蛋白的核酸酶活性,其作用机制可能与Cas9蛋白的核酸酶活性具有较大差别。
[硕士论文] 徐桐桐
病原生物学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae)俗称淋球菌(gonococcus),是淋病的病原菌,主要通过性传播,只感染人类,在男性常引起急性尿道炎,女性则一般表现为无症状感染,但病菌可向深部组织播散导致宫颈炎或不孕等严重后果。目前淋病没有可用疫苗进行预防,而治疗又因淋病奈瑟菌耐药性的日趋严重而越来越困难。全面理解淋病奈瑟菌的生物学特性可为淋病防治带来新的靶点。
  成簇规律间隔短回文重复序列(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat,CRISPR)是近年发现的细菌获得性免疫系统,可使细菌防御外源DNA的再次入侵,为细菌抵抗不利环境因素提供了保障。该系统由CRISPR簇、Leader序列和Cas蛋白编码基因等3部分组成,其中CRISPR簇由交替排列的保守性重复序列和特异性间隔序列组成。约90%古细菌和40%真细菌基因组中发现有CRISPR系统,但淋病奈瑟菌的CRISPR系统尚未见报道。我们前期用生物信息学技术分析显示在淋病奈瑟菌WHO-A株中存在CRISPR簇和Cas蛋白,并且发现CRISPR簇的间隔序列部分靶向自身基因,可能对细菌的生长活动具有某种调控作用。本研究旨在研究WHO-A株CRISPR簇与自身靶基因间的相互作用,为研究淋病奈瑟CRISPR系统的结构与功能积累资料。
  一、淋病奈瑟菌WHO-A株CRISPR簇自身靶基因的筛选与克隆
  运用CRISPRs Finder在线系统从前期测序获得的WHO-A株基因组DNA序列中筛查CRISPR系统,获得P1~P6和CL等7个CRISPR簇,同时用重复区比对法进行人工分析获得1个CRISPR簇FAl。对这8个CRISPR簇的所有间隔序列进行BLAST分析,发现这些间隔序列与多个淋病奈瑟菌自身基因具有同源性。进一步按照间隔序列-靶基因间存在≧18 bp匹配序列的原则在已公布基因组序列的所有淋病奈瑟菌株中查找靶基因,再将所筛选的候选靶基因与WHO-A株基因组信息进行同源性比较,从WHO-A株自身基因组中初筛出自身间隔序列所靶向的基因。考虑到靶基因中上游受到干扰时对其表达的影响更显著,从上述靶基因中按照匹配位点位于中上游且至少有连续18 bp以上序列完全匹配的原则作进一步筛查,最终获得3个自身靶基因,即前噬菌体蛋白基因NGFG_01062、假定蛋白基因NGK_0072和菌毛相关蛋白基因NGK_2578。多个CRISPR簇中存在靶向NGK_2578基因的间隔序列,且CRISPR簇CL中存在多个间隔序列前后靶向该基因,提示淋病奈瑟菌CRISPR系统对菌毛可能发挥着重要的调控作用。运用PCR技术分别扩增了3个自身靶基因,插入到pET-GFP质粒中,重组载体pET-Targets-GFP导入到大肠埃希菌BL21中诱导表达,通过SDS-PAGE和荧光显微镜检测到靶蛋白-GFP的融合表达。
  二、利用重组大肠埃希菌分析淋病奈瑟菌CRISPR簇对自身靶基因的作用
  淋病奈瑟菌WHO-A株CRISPR系统的Leader与Cas蛋白的作用机制也不明确。但目前CRISPR/Cas9系统的结构与功能研究非常深入,Addgene提供的成熟载体pCas9中Leader与Cas9的作用方式非常明确,可作为研究未知CRISPR簇功能的理想工具。为在大肠埃希菌中借助pCas9系统研究淋病奈瑟菌WHO-A株CRISPR簇与靶基因间的相互作用,我们合成了筛选的CRISPR簇间隔序列并插入到pCas9中的克隆位点,构建重组质粒pCas9-S,导入含有靶基因表达载体pET-Targets-GFP的大肠埃希菌。重组菌用LB培养液传代,每代细菌分别在氯霉素和卡那霉素LB平板上活菌计数以分析间隔序列是否引导Cas9对靶基因发挥核酸酶的切割作用。结果表明,在pCas9-S导入的最初并没有发现其对靶基因产生明显作用。随着传代的进行,间隔序列P1S对靶基因NGFG_01062、CLS4对靶基因NGK_0072、CLS4和CLS5对NGK_2578基因都表现出了抑制效果,受体菌在含有卡那霉素平板上的CFU明显减少;qRT-PCR和SDS-PAGE分析显示靶基因的转录和蛋白表达水平明显下降。质粒提取提示,间隔序列对靶基因产生作用的过程中可能造成了含靶基因重组质粒的降解。间隔序列FAS1尽管不能降解靶基因NGK_2578但可抑制靶基因的转录从而降低目的蛋白的表达量。
  三、淋病奈瑟菌WHO-A株CRISPR簇的转录分析及基因敲除载体的构建
  提取淋病奈瑟菌WHO-A株总RNA进行RT-PCR检测发现,以针对CRISPR簇CL的特异性引物可以扩增出明显条带;对总RNA进行转录组测序,发现存在与CRISPR簇CL部分序列完全匹配的转录产物,提示CRISPR簇CL可转录形成前体crRNA。为构建CRISPR簇CL基因敲除的淋病奈瑟菌突变株,设计了6组针对CRISPR簇CL的sgRNA,插入pCas9的克隆位点获得打靶载体pCas9-sgRNA;同时克隆了淋病奈瑟菌CRISPR簇CL基因片段作为待敲除的靶基因。大肠埃希菌中证明特异性pCas9-sgRNA降解CL基因,pCas9-sgRNA转化淋病奈瑟菌WHO-A株构建突变株的实验正在进行中。另外还计划应用基于自杀载体的基因编辑技术对CRISPR簇CL进行突变,利用卡那霉素抗性基因kan替换了CL基因的中间部分,获得的携带kan抗性筛选标记的CL上下游同源臂插入自杀载体pGMB152,构建了重组载体pGMB152△CL∷Kan,为后期突变WHO-A株中CRISPR簇CL奠定了基础。
[硕士论文] 阚波
免疫学 延边大学 2017(学位年度)
摘要:目的:探讨自2013年1月至2015年12月于吉林大学第二医院诊疗的梅毒患者的流行病学特征以及影响梅毒预后的相关因素,为梅毒的防治提供依据。
  方法:以自2013年1月至2015年12月在吉林大学第二医院诊疗且规范驱梅治疗两年的梅毒患者共294人为研究对象,采集患者的流行病学特征、临床特点,进行RPR滴度、TP检测,对于TP及RPR阳性的患者,确定其临床诊断与分期。建立EXCEL随访数据库,对随访资料完整的患者进行相关因素对患者病情及预后的影响研究。
  结果:2013年1月~2015年12月,于吉林大学第二医院进行规范驱梅且定期随访的患者共计294例。其中(1)男性118例,占就诊患者的40.14%,女性患者176例,占就诊患者的59.86%,男女之比0.67∶1,女性患者约为男性患者的1.5倍。文盲28例,占就诊患者的9.52%,小学文化8例(占2.72%),初中文化128例(占43.54%),高中、职中70例(占23.81%),大学45例(占15.31%),硕士及以上15例(占5.10%)。文化程度为初中及初中以下病患共计164例,占到总患者量的55.78%。(2)以异性性传播为主(占总数的91.84%),其次为同性性传播(占总数的1.36%),医源性传播占总数的0.68%,母婴途径传播占总数的3.40%,途径未知者占到总数的2.72%。(3)一期梅毒9例(3.06%),二期梅毒141例(47.96%),三期梅毒2例(0.68%),潜伏梅毒132例(44.90%),胎传梅毒10例(3.40%)。(4)合并HIV、生殖器疱疹者共19例,其中合并HIV感染者3例(男性2例、女性1例),占1.02%;合并生殖器疱疹者15例(男性10例、女性5例),占5.10%,同时合并HIV、生殖器疱疹者1例(男性),占0.34%。(5)以苄星青霉素为药物进行治疗的为278例(占总患者数的94.56%),利用阿奇霉素进行驱梅治疗的共计12例(占总患者数的4.08%),使用头孢曲松钠进行治疗的为4例(占总患者数的1.36%)。经规范治疗,苄星青霉素方案治疗后RPR转阴率为90.28%,其他方案治疗后,转阴率为62.50%。苄星青霉素方案治疗后,一期梅毒转阴率达100%,远超过二期梅毒的转阴率90.84%,潜伏期梅毒90.63%、和胎传梅毒转阴率87.50%,而三期梅毒转阴率为0%。
  结论:
  (1)吉林省长春地区梅毒患者男女发病比例为0.67∶1,女性患者约为男性患者的1.5倍;
  (2)吉林省长春地区梅毒发病人群中以初中及初中以下文化程度为主,青年人与低文化人群是重点关注的对象;
  (3)吉林省长春地区梅毒的传播途径以异性性传播为主;
  (4)吉林省长春地区梅毒的临床分期以二期梅毒和潜伏梅毒为主;
  (5)吉林省长春地区利用苄星青霉素方案进行驱梅的患者,转阴率达90.29%,明显超过其他方案(62.50%)。
  (6)吉林省长春地区一期梅毒患者RPR转阴率最高,100%的一期梅毒患者RPR滴度转阴,显著高于二期梅毒90.84%及潜伏梅毒90.63%的转阴率。而三期梅毒转阴率为0。
[硕士论文] 赵乐
皮肤性病学 广西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:对LCH皮损组织炎症反应模式进行分析,探讨其病理特征与临床表现、预后的关系。
  方法:选择有皮损表现的25例LCH患者作为研究对象,分析患者皮损组织炎症反应模式,通过免疫组化技术检测患者皮损组织中ki-67、CD163的表达情况,采集分析患者临床资料,电话随访患者治疗情况以及预后。所得数据用SPSS15.0统计软件进行统计学分析。
  结果:
  (1)LCH皮损组织中有两种炎症反应模式,一种为表现为朗格汉斯组织细胞周围多量组织细胞、淋巴细胞浸润模式,另一种表现为朗格汉斯组织细胞周围稀疏组织细胞、淋巴细胞浸润模式。
  (2)25例LCH皮损组织中ki-67阳性密度平均为16.99%±12.02%,浸润炎细胞CD163阳性密度为16.71%±12.17%。在仅累及皮肤的SS-LCH中,ki-67及CD163阳性密度均值分别为14.13%±8.47%和24.64%±13.91%;累及皮肤和内脏器官的MS-LCH中ki-67及CD163阳性密度均值分别为17.94%±13.02%和14.06%±10.61%。SS-LCH与MS-LCH比较,ki-67阳性细胞浸润密度差异无统计学意义(P>0.05),CD163阳性细胞浸润密度差异具有统计学意义(P<0.05)。
  结论:
  (1)LCH皮损组织中朗格汉斯组织细胞增殖指数水平较低,增殖指数水平与患者内脏是否累及无相关性。
  (2)CD163阳性炎性细胞浸润密度可能与LCH侵袭进展相关。
[博士论文] 吴凡
皮肤病与性病学 北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院中国医学科学院 2017(学位年度)
摘要:本文主要从以下几个部分展开论述:
  第一部分 梅毒螺旋体粘附于人脑微血管内皮细胞的实验研究
  目的:观察梅毒螺旋体与体外培养的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)的粘附方式和粘附规律。
  方法:将HBMEC接种于含细胞爬片的24孔细胞培养板中,加入8×106条/ml的梅毒螺旋体悬液共培养,分别于0.5、2、4h后使用扫描电镜分析梅毒螺旋体与HBMEC的粘附方式;加不同浓度(4×106条/ml、8×106条/ml、1.6×107条/ml)梅毒螺旋体悬液共培养,分别于2、4、6、16h后运用暗视野显微镜计数单个HBMEC上粘附的梅毒螺旋体数量。实验数据用重复测量资料的方差分析进行分析。
  结果:扫描电镜结果显示梅毒螺旋体集中粘附于HBMEC膜表面的某些区域,两者在粘附的部位可发生融合。时间与浓度间存在交互作用(F=98.74,P<0.001),在各浓度组,不同时间点细胞上粘附的螺旋体数目间的差异均有统计学意义(F=387.72,P<0.001),粘附的螺旋体数量随着共培养时间的延长而逐渐增多,4h时达到高峰,然后逐渐降低。在4h时,不同浓度组间细胞上粘附的螺旋体数目间的差异也具有统计学意义(F=593.23,P<0.001)。
  结论:梅毒螺旋体可以粘附于体外培养的HBMEC,梅毒螺旋体可能是通过菌体尖端与细胞膜溶解的方式与HBMEC粘附;1.6×107条/ml和共培养4h分别是梅毒螺旋体与HBMEC粘附的最佳浓度和时间。
  第二部分 梅毒螺旋体刺激后人脑微血管内皮细胞基因表达谱分析及差异表达基因的功能分析
  目的:探讨梅毒螺旋体粘附对人脑微血管内皮细胞(HBMEC)基因表达谱的影响,分析差异表达基因的功能,从mRNA水平了解HBMEC对梅毒螺旋体的反应。
  方法:构建HBMEC单层模型,加入1.6×107条/ml的梅毒螺旋体悬液,以未加螺旋体的HBMEC作为对照,4h后提取细胞RNA,利用Agilent SurePrint G3Human Gene Expression Microarray(8×60K)基因芯片检测HBMEC的基因表达谱,筛选差异表达基因。利用GO和KEGG富集法分析差异表达基因的功能,利用qRT-PCR对7个感兴趣的差异表达基因进行验证。
  结果:基因芯片共筛选出249个差异表达的基因,包括218个上调表达的基因和31个下调表达的基因。GO富集分析结果显示差异表达基因共参与38个GOterms,其中生物学过程、分子功能、细胞成分的terms数目分别为27、6和5,内皮细胞活化、宿主细胞免疫反应和细菌粘附等多个生物学过程。KEGG富集分析结果显示差异表达基因富集于12条信号通路中,两者相互作用过程可能涉及Th17 cell differentiation通路和Cell adhesion molecules通路。qRT-PCR结果显示RARRES2、ADAMTS5、F3、MACF1和DCN表达上调,CLDN4和LDLR表达下调,与基因芯片结果基本一致。
  结论:梅毒螺旋体可改变HBMEC的基因表达谱,差异表达基因广泛参与多个生物学过程。梅毒螺旋体粘附后的HBMEC被激活,同时发起一系列免疫防御对抗螺旋体的侵袭。该基因芯片分析结果为进一步研究人脑微血管内皮细胞在神经梅毒发病机制中的作用提供新的平台和研究方向。
  第三部分 梅毒螺旋体对人脑微血管内皮细胞中多个趋化因子配体表达的影响
  目的:探索梅毒螺旋体对HBMEC中趋化因子配体(CXCL)表达的影响。
  方法:将HBMEC接种于6孔或96孔细胞培养板中,分为梅毒螺旋体组、灭活梅毒螺旋体、脂多糖组和空白对照组,分别加入梅毒螺旋体、灭活的梅毒螺旋体、脂多糖和细胞培养液培养,于6、12、24h后分别用荧光定量PCR和酶联免疫吸附试验检测细胞中CXCL-6、CXCL-8、CXCL-10和CXCL-13的基因表达水平和蛋白表达水平。利用Transwell小室细胞迁移实验检测梅毒螺旋体刺激后HBMEC对人早幼粒细胞白血病细胞(HL-60)的趋化作用。
  结果:在各时间点,梅毒螺旋体组中CXCL-6、CXCL-8和CXCL-10的mRNA表达水平均显著高于空白对照组和灭活梅毒螺旋体组(均P<0.05),而灭活梅毒螺旋体组与空白对照组之间的差异无统计学意义(均P>0.05)。各组细胞中CXCL-13的mRNA表达差异无统计学意义。在各时间点,梅毒螺旋体组中CXCL-6和CXCL-8的含量均高于空白对照组和灭活梅毒螺旋体组(均P<0.05),而灭活梅毒螺旋体组与空白对照组间差异无统计学意义(均P>0.05);在各时间点,梅毒螺旋体组细胞培养上清液中CXCL-10的含量与空白对照组和灭活梅毒螺旋体组间差异无统计学意义(均P>0.05)。在各时间点,梅毒螺旋体组的吸光值均高于空白对照组和灭活梅毒螺旋体组(均P<0.05)。
  结论:梅毒螺旋体可上调HBMEC中CXCL-6、CXCL-8和CXCL-10的基因表达水平,增加CXCL-6和CXCL-8的分泌,增强HBMEC对HL-60细胞的趋化作用。
[硕士论文] 孔维萍
皮肤病与性病学 安徽医科大学 2017(学位年度)
摘要:研究目的:
  第一部分
  1.通过临床对照试验,比较口服米诺环素与肌注苄星青霉素两种方法治疗早期梅毒的临床疗效;
  2.验证米诺环素作为一种青霉素替代疗法治疗早期梅毒的安全性和有效性;
  3.为口服米诺环素治疗早期梅毒提供临床依据。
  第二部分
  1.通过临床对照试验比较口服米诺环素与静脉滴注青霉素两种方法治疗神经梅毒的临床疗效;
  2.验证米诺环素作为一种青霉素替代疗法治疗神经梅毒的安全性和有效性;
  3.为口服米诺环素治疗神经梅毒提供临床依据。
  研究方法:
  第一部分
  通过临床对照研究比较早期梅毒病例口服米诺环素与肌注苄星青霉素两种方法治疗的血清学疗效。采用病例对照方法,将106例早期梅毒患者分为治疗组和对照组两组,两组患者的性别、年龄、各期梅毒例数无显著性差异(P>0.05),具有可比性。治疗组42例患者给予米诺环素100mg2次/天饭后口服,疗程15天。对照组64例患者给予苄星青霉素240万 IU分两侧臀部肌肉注射,每周1次,连续3周,同时给予小剂量泼尼松口服预防吉海反应。疗程结束后随访2年,记录所有患者的皮损消退时间,分别于治疗结束后的3、6、9、12、18、24个月随访其临床及血清TRUST(甲苯胺红血清不需加热试验)情况。采用SPSS17.0 for windows统计软件,计量资料以均数±标准差(x?s)表示,采用t检验,计数资料采用?2检验,P<0.05视为差异有统计学意义
  第二部分
  回顾性分析比较安徽省省立医院皮肤性病科于2010年1月至2015年1月病房收治的神经梅毒病例71例的临床资料。将采用米诺环素治疗的病例设为治疗组,采用青霉素治疗的病例设为对照组。治疗组14例患者给予口服米诺环素100mg,每日两次,连续服用30天。对照组57例患者给予静脉滴注青霉素钠400万IU次,6次/日,每4小时一次,连续14天,继以苄星青霉素240万IU肌内注射,每周一次,共3次。为预防发生吉海反应,所有患者在接受治疗的前一天均给予口服泼尼松10毫克/次,2次/日,连服3天。疗程结束后随访18个月,记录患者临床症状改善情况,分别于治疗后6个月,12个月,18个月随访脑脊液甲苯胺红血清不需加热试验(TRUST)、WBC、蛋白定量情况。采用SPSS17.0 for windows统计软件,计量资料以均数±标准差(x?s)表示,计数资料采用?2检验, P<0.05视为差异有统计学意义。
  研究结果:
  第一部分
  米诺环素组患者的血清学治愈率为95.24%(40/42),苄星青霉素组患者的血清学治愈率为96.87%(62/64),两组治愈率差异无统计学意义(P>0.05),治疗组和对照组分别有2例患者治疗失败。米诺环素组患者皮损的消退时间稍晚于苄星青霉素组,但差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者血清固定的发生率分别为19.05%(8/42)和20.31%(13/64),差异无统计学意义(P>0.05)。
  第二部分
  米诺环素组和青霉素组脑脊液 TRUST转阴率分别为92.9%(13/14)、94.7%(54/57),两组转阴率相当,无统计学意义(P>0.05)。两组均有患者血清学及脑脊液TRUST值未转阴。两组的脑脊液白细胞计数均降至5×106/L以下,其蛋白定量分别为治疗组5例(35.7%)、对照组20例(35.1%)降至500mg/L或以下。治疗组和对照组分别有1个和3个患者的脑脊液TRUST滴度降为1:1之后始终不能转阴。两组梅毒性脑膜炎及麻痹性痴呆患者临床症状均得以改善。脑膜血管梅毒患者预后均欠佳。米诺环素组与青霉素组都有非常高的好转率,两组疗效无显著性差异(?2=0.01,P>0.05)。
  结论:
  第一部分米诺环素治疗早期梅毒效果显著,患者接受程度高,给药途经方便、毒副作用小,是苄星青霉素治疗梅毒可靠的替代药物。
  第二部分米诺环素治疗神经梅毒疗效与青霉素相当,且使用方便,患者接受程度高,可以作为青霉素治疗神经梅毒的替代药物。
[硕士论文] 倪启飞
儿内科 中国医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:对重症组和一般组患儿一般资料进行比较分析,研究年龄、地区、父母职业对患儿疾病轻重程度的影响。对重症组患儿脏器损伤程度比较分析,探讨婴儿重症梅毒脏器损伤种类、程度。对重症组患儿治疗及转归进行比较分析,研究重症患儿影响疾病预后的因素。通过对近几年来临床诊治的婴儿重症梅毒的临床分析,试图提高对婴儿重症梅毒的识别和救治的能力。
  研究方法:回顾性根据病志记录以及疾病防控报表收集2011年至2016年就诊于我院皮肤科、感染科、儿科年龄在30d-12m之间,经过治疗的患儿。采集患儿性别、年龄、发病至入院时间、地区、父母职业、病死率、梅毒分期、体重、发育是否落后、喂养方式、治疗、转归,收集住院重症患者合并疾病、辅助检查(包括血常规、肝功、肾功、心肌酶谱、脑脊液常规及生化、胸片、骨X线),评估脏器损伤,同时评估比较两组患者一般资料,家庭状况,治疗开始时间,治疗持续时间,治疗方式以及转归。
  结果:所有纳入研究的39例重症组患儿中,皮肤损伤为61.53%,继发肺炎为58.97%,肝功能不全为48.72%,心肌损伤41.03%,胃肠道损伤38.46%,同时合并二个器官功能不全占53.85%,三个器官功能不全占28.21%,三个以上器官功能不全占17.95%;2例患儿因呼吸衰竭给予机械通气,所有患儿均需给予抗生素治疗,青霉素应用率为58.97%,治疗全过程一种抗生素单独应用为33.33%,10.26%患儿应用了万古霉素,7.69%患儿给予了抗病毒治疗,15.38%的患儿使用了激素。36例患儿纳入病死相关因素分析,死亡8例,存活28例,死亡率为22.22%,非足月、出生体重小于2.5kg、给予机械通气、器官功能障碍的数目大于三个的婴儿死亡率较高,与病死率具有相关性(P<0.05)。与一般组对比,非足月儿、人工喂养、伴有发育迟缓、乡村来源、父母无业的婴儿重症梅毒发生率均高于一般梅毒婴儿,与重症梅毒发病率具有相关性(P<0.05)。
  结论:婴儿重症梅毒以皮肤损伤、继发肺炎及肝功能不全为主要临床特征入院,病死率高,多数需联合多种抗生素治疗,患者来自乡村、出生为早产、人工喂养、父母无正规职业者、同时伴有发育迟缓为重症疾病的高危因素。
[硕士论文] 严一成
公共卫生 苏州大学 2016(学位年度)
摘要:目的:
  了解太仓市2008-2014年梅毒流行状况,为太仓市的梅毒干预工作提供科学指导。
  方法:
  对2008-2014年太仓市的梅毒病例数据进行统计分析,按照年龄、性别、梅毒分期等不同特征对梅毒病例数据分类,分析太仓地区梅毒流行的特征。
  结果:
  太仓市7年梅毒发病率平均为53.50/10万人。15岁以下人群,梅毒发病为散发,15-20岁人群,占梅毒病例总数的5.16%,20-45岁性活跃人群,占55.76%,>60年龄段,占12.23%。隐性梅毒占了报告病例的48%。
  结论:
  太仓市2008-2014年梅毒发病率较高。性活跃人群占了梅毒病例的绝大部分,高龄人群是梅毒发病率增长最快的群体。年轻人中,女性病例数多于男性,高龄组,男性病例多于女性。隐性梅毒发病数呈快速上升趋势。
[硕士论文] 杨慧
病原生物学 扬州大学 2016(学位年度)
摘要:细菌菌影(Bacterial Ghost)是革兰阴性菌通过噬菌体PhiX174裂解基因E的诱导形成不含核酸、核糖体等胞质内容物的细菌空壳。细菌菌影保留了天然细菌完整的外膜结构,不仅可作为疫苗诱导相关免疫应答,也可作为DNA、抗原和药物等的递送载体。
  淋病奈瑟菌是性传播疾病淋病(Gonorrhea)的病原菌。随着耐药菌株的增多,抗生素治疗效果并不理想。新型疫苗是新的淋病防治策略之一,淋病奈瑟菌外膜孔蛋白B(PorB)是研制淋病疫苗理想的候选抗原。然而,研究发现淋病DNA疫苗可能在体内转染效率不高导致诱导的免疫应答比较弱,无法满足机体相应的免疫保护需要。
  本研究旨在借助新型的递送载体细菌菌影来提高淋病奈瑟菌PorB DNA疫苗的免疫保护性。通过沙门菌菌影SE-ghost装载淋病奈瑟菌PorB基因疫苗制备淋病疫苗SE-ghost(PorB),并对其免疫原性及免疫应答机制进行研究。
  研究内容包括以下两部分:
  一、沙门菌菌影作为载体装载外源物质体外转染细胞的评价
  将含有温控系统的重组沙门菌HA2-EBOX进行诱导制备出沙门菌菌影SE-ghost。用扫描电镜和透射电镜对SE-ghost进行形态学观察。结果显示,重组沙门菌胞质内容物流出形成菌影。将异硫氰酸荧光素FITC装载入SE-ghost并在体外分别转染3LL细胞、HeLa细胞和RAW264.7细胞48h后,荧光显微镜和流式细胞仪检测转染细胞内的荧光;将SE-ghost冻干粉重悬于真核表达质粒pEGFP-N1缓冲液中,采用分光光度计检测样品离心后上清游离DNA含量分析装载效率,体外转染RAW264.7细胞48h后,荧光显微镜和流式细胞仪检测转染细胞内绿色荧光蛋白。结果表明,SE-ghost装载的FITC在3LL细胞、HeLa细胞和RAW264.7细胞中显示黄绿色荧光;SE-ghost装载的质粒pEGFP-N1在RAW264.7细胞中表达了绿色荧光蛋白。
  二、以沙门菌菌影为递送载体的淋病奈瑟菌PorB基因疫苗免疫应答特性研究
  将SE-ghost冻干粉重悬于真核表达质粒pVAX1-PorB缓冲液中制备沙门菌菌影装载的淋病疫苗SE-ghost(PorB)。经SE-ghost(PorB)刺激原代培养诱导的BALB/c小鼠骨髓树突状细胞(BMDC),流式检测BMDC表面分子CD86、CD80、CD40和MHC-Ⅱ的表达;间接ELISA检测BMDC上清的细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12p70的分泌。流式检测BMDC对同种异体CD4+T细胞增殖的情况。结果表明,成功制备出沙门菌菌影装载的淋病候选疫苗SE-ghost(PorB)。BMDC经SE-ghost(PorB)刺激后,高表达表面成熟分子CD86、CD80、CD40、MHC-Ⅱ;高分泌细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12p70;刺激同种异体T细胞增殖的能力显著提高。
  将40只6周龄左右BALB/c小鼠,随机分为4组:SE-ghost(PorB)组、pVAX1-PorB组、SE-ghost组和PBS对照组。通过灌胃口服的方式免疫接种。间接ELISA检测小鼠血清中IgG抗体水平和阴道洗液IgA抗体水平。用淋病奈瑟菌WHO-A菌株,检测第三次免疫小鼠血清中补体介导的抗体杀菌活性。结果表明,与对照组相比,SE-ghost(PorB)免疫组小鼠血清中IgG和阴道洗液IgA抗体水平明显提高,血清抗体具有补体介导的杀菌作用。
  流式检测第三次免疫小鼠外周血CD3+CD4+T、CD3+ CD8+T细胞频率变化,胞内染色检测脾脏CD4+T细胞亚群细胞因子IL-4、IFN-γ分泌情况。取第三次免疫小鼠脾细胞,经淋病奈瑟菌WHO-A刺激48h,流式检测脾细胞增殖情况。结果表明,与对照组相比,SE-ghost(PorB)免疫组小鼠外周血CD3+CD4+T和CD3+ CD8+T细胞频率上调;胞内染色脾脏CD4+T细胞细胞因子IL-4和IFN-γ含量增加。淋病奈瑟菌WHO-A刺激48h,SE-ghost(PorB)免疫组小鼠脾细胞明显增殖。
[博士论文] 于增照
皮肤病与性病学 青岛大学 2016(学位年度)
摘要:目的:探讨头孢曲松钠与水剂青霉素治疗早期神经梅毒前后脑脊液的变化差异及临床分析,为神经梅毒早期诊断、治疗及随访提供理论依据,为预防早期梅毒发展为神经梅毒提供临床依据。
  方法:将确诊的32例早期神经梅毒患者,随机分为两组,其中头孢曲松钠组17例,水剂青霉素组15例。所有患者均住院接受治疗,头孢曲松钠组予头孢曲松钠2.0g/d静脉滴注,1次/d,连续10~14d;水剂青霉素组予水剂青霉素400万U/次,每4 h1次,静脉滴注,连续10~14 d,继以苄星青霉素G240万U肌内注射,每周1次,共3次。分别于治疗后6、12、18个月进行血清学及脑脊液随访检查,观察比较两组治疗前后血清及脑脊液RPR滴度、脑脊液白细胞计数、脑脊液蛋白定量变化及不良反应发生情况。对数据采用SPSS17.0中文版统计软件包进行统计学处理。
  结果:治疗后6个月,头孢曲松钠组和青霉素组血清学 RPR滴度分别有16例(94.1%)、14例(93.3%)出现不同程度的下降,其中分别有7例(41.2%)、7例(46.7%)下降4倍及以上,差异无统计学意义(χ2=0.098,P=0.755)。脑脊液RPR滴度分别有9例(52.9%)、8例(53.3%)出现下降,差异无统计学意义(χ2=0.000,P=0.982);两组WBC计数分别有11例(64.7%)、10例(66.7%)降至10×106/L以下,差异无统计学意义(χ2=0.014,P=0.907)。两组血清学及脑脊液 RPR滴度变化均无统计学差异(分别Z=-1.106,P=0.269;Z=-1.140,P=0.254)。治疗后12个月两组分别有14例(82.3%)、13例(86.7%)血清学及脑脊液RPR同时转阴,差异无统计学意义(χ2=0.112,P=0.737);分别有15例(88.2%)、14例(93.3%)WBC降至10×106/L以下,差异无统计学意义(χ2=0.244,P=0.621);同时脑脊液RPR转阴、白细胞计数降至10×106/L以下分别有13例(76.5%)、13例(86.7%),差异无统计学意义(χ2=0.544,P=0.461);分别有6例(35.3%)、5例(33.3%)脑脊液蛋白定量降至500 mg/L以下,差异无统计学意义(χ2=0.014,P=0.907)。治疗后18个月两组分别有16例(94.1%)、14例(93.3%)血清学及脑脊液 RPR同时转阴,差异无统计学意义(χ2=0.008,P=0.927);同时脑脊液RPR转阴、白细胞计数降至5×106/L以下分别有11例(64.7%)、12例(80.0%),差异无统计学意义(χ2=0.922,P=0.337)。两组中同时血清RPR及脑脊液RPR转阴、脑脊液白细胞数降至10×106/L以下、脑脊液蛋白降至500 mg/L以下的分别有12例(70.6%)、12例(80.0%),差异无统计学意义(χ2=0.153,P=0.696)。青霉素组脑脊液白细胞计数水平低于头孢曲松钠组,差异有统计学意义(t=1.428,P=0.001)。各有1例血清及脑脊液RPR仍未转阴,后失访。所有患者治疗期间未发生吉海反应。
  结论:头孢曲松钠与水剂青霉素治疗早期神经梅毒相比,二者在血清学 RPR及脑脊液 RPR、白细胞计数、蛋白量变化方面无明显差异;血清学RPR可替代脑脊液RPP随访;脑脊液中白细胞计数为评价疗效的敏感指标,脑脊液蛋白在神经梅毒病程中的作用机制有待于进一步研究;临床工作需加强对早期梅毒即可发生神经梅毒的风险意识,对早期梅毒及时进行脑脊液检查可以减少神经梅毒的漏诊率,早期诊断及干预对预防神经梅毒的发生具有重要的临床意义。
[硕士论文] 冯恩强
卫生毒理学 青岛大学 2016(学位年度)
摘要:目的:本研究首次以社区为基础,通过定性和定量研究方法评估青岛市大龄(≥35岁)女性性工作者感染艾滋病和性病的高危险因素,旨在了解青岛市大龄女性性工作者(Old female sex workers,OFSWs)艾滋病和性病的感染状况及其危险因素,系统掌握目前青岛市大龄女性性工作者的基本人口学特征,为有针对性地开展行为干预工作以及针对该人群的防治措施提供依据。
  方法:按照纳入标准,于2014年在定性研究和以社区为基础的同伴推动调查中招募研究对象。统一培训有访谈经验的调查员;严格按标准纳入研究对象,同时避免研究对象重复参与研究;生物样品的采集和检测严格按照相应的标准进行。本研究采用定性和定量的研究方法来实现研究目标。定性研究过程中采用个体访谈和小组访谈的方式展开。同时,采用社区为基础的同伴推动抽样(Respondent driven sampling,RDS)调查,严格根据RDS要求完成研究对象的选择。最终纳入406名符合标准的调查对象。对符合纳入标准的调查对象进行问卷调查以及血液样本HIV和梅毒的检测。调查问卷采用自行设计,包括人口统计学资料及与艾滋病和性病有关的各种危害因素、危险行为。问卷设计完成后,科研人员对调查问卷的测量条目表观效度和内容效度进行评估,根据评估结果进行调整。并进行预试验研究,通过预试验,应用定性(认知访谈)和定量(心理评估)技术修改和完善调查问卷。调查结果应用Epidata3.1软件建立数据库,进行数据双录入及校对。应用SPSS19.0软件进行统计分析。计量资料采用均数和标准差(X±SD)进行统计描述,正态性检验采用单样本K-S拟合优度法,统计推断t检验分析比较不同组间各种均数的差异;计数资料采用百分比(%)统计表示,统计推断卡方检验分析比较不同组间各种率的差异。进行单因素和多因素logistic回归分析。统计分析采取双侧检验,检验水准取=0.05,P<0.05为差异具有统计学意义。
  结果:406名调查对象,平均年龄为44.8岁,汉族占98.3%;外省居多,占73.4%;婚姻状况以离异/丧偶居多,占62.6%,其次是已婚占34%;文化程度以中小学居多,占87%,其中初中占45.1%,小学占41.9%;吸毒者占17.7%。艾滋病病毒的感染率为0%,梅毒感染阳性患者人数为120人,占总调查对象的29.6%。通过对调查对象的社会人口学基本特征以及与梅毒感染相关的行为因素和梅毒感染阳性进行卡方检验,结果显示:年龄与户籍的差异与是否感染梅毒之间有统计学差异(P<0.05);大龄女性性工作者中,是否做过艾滋病/梅毒病毒检测与是否感染梅毒的差异有统计学意义(P<0.05)。单因素logistic回归分析发现年龄、户籍、个人月收入(5000-10000元组)、是否做过艾滋病检测与是否感染梅毒的差异有统计学意义(P<0.05);多因素 logistic回归模型分析结果显示是否做过艾滋病检测、户籍和是否吸毒与梅毒感染之间存在关联。
  结论:年龄与梅毒的感染有关,且随着年龄的增加,感染的可能性增加;户籍与梅毒的感染有关,且青岛户籍人群的感染率高于非青岛户籍人群的感染率;做过艾滋病检测的女性高危人群其梅毒的感染率相对较高;青岛OFSWs梅毒感染率高,感染和传播艾滋病的风险增加。
[硕士论文] 张丹妮
皮肤病与性病学 南昌大学 2016(学位年度)
摘要:目的:
  研究南昌大学第一附属医院皮肤性病科门诊早期梅毒的男女比例、高发年龄、婚姻状况、文化程度、职业构成、皮损部位、合并症等发病特征和临床特点;探讨皮损组织液荧光定量PCR检测结果与初始TRUST滴度的相关性,并与TPPA、TRUST试验对比阳性率,应用定量PCR方法帮助评估皮损部位的传染性。
  方法:
  收集2014.10-2016.4南昌大学第一附属医院皮肤性病科门诊具有早期梅毒典型皮损的103例患者的发病特征、实验室检查及临床特点等资料进行统计、分析及总结。取患者皮损处组织液进行实时荧光定量PCR检测,血清则进行TPPA、TRUST试验,分析及讨论相关性。
  结果:
  1.103例患者中男性63例(61.17%);女性40例(38.83%),男女之比为1.575∶1;2.~20岁者1例(0.97%),21~35岁者51例(49.51%),36~50岁者31例(30.10%),51~65岁者13例(12.62%),65~岁者7例(6.80%),各年龄段及性别分布情况有统计学差异;3.已婚者82例(79.61%),未婚者16例(15.54%),离异者5例(4.85%);有80例(77.67%)承认有非婚不洁性行为;4.有20例(19.41%)病例同时伴发其它性传播疾病;5.早期梅毒各期临床表现形式各异;6.PCR、TPPA、TRUST检测的阳性率各异;7.一期梅毒和二期梅毒TRUST滴度有统计学差异;8.PCR结果与TRUST滴度有相关性。
  结论:
  1.早期梅毒患者男性多于女性;2.早期梅毒高发年龄以21~35岁的青年人为主;3.感染途径以婚外性接触为主;4.工人、农民、服务业等行业占比例大;5.梅毒可伴发其它性病;6.梅毒临床表现形式各异,由于皮疹不痛不痒,常常被患者及医生忽略,导致误诊、漏诊;7.应加强联合应用PCR及血清学试验,如TRUST和TPPA,以减少漏诊、误诊,阻断传播;8.病期与初始TRUST滴度有关,二期梅毒初始TRUST滴度高于一期梅毒;9.一期梅毒阶段中,PCR与TRUST滴度呈正相关,而病程跨越一期到达二期时,PCR与TRUST滴度开始呈负相关;10.PCR检测在梅毒未经干预的情况下,可帮助评定皮损部位的传染性。
[硕士论文] 吴开奇
临床检验诊断学 温州医科大学 2016(学位年度)
摘要:背景:
  梅毒是由梅毒螺旋体感染引起的慢性、性传播疾病。梅毒螺旋体能够侵袭人体全身多个器官和系统,给患者带来巨大伤害。二期梅毒为梅毒螺旋体感染的急性期,会出现皮疹、脱发、粘膜斑、全身淋巴结肿大,甚至出现内脏、眼和神经系统损害等;梅毒螺旋体感染会侵犯骨骼、心血管、中枢神经等系统,引起被侵犯器官的不可逆性损害。侵犯神经中枢系统引起的神经梅毒带来的危害巨大,而目前对于其诊断仍然存在挑战,值得关注。很多研究表明miRNAs在多种疾病的发生发展中有重要调控作用,并在疾病的诊断以及预后中有重要的应用价值。目前,没有关于梅毒患者外周血单个核细胞miRNA表达谱及其临床应用的报道。本研究采用miRNA芯片检测二期梅毒和神经梅毒患者外周血单个核细胞的miRNAs表达谱,筛选出若干差异表达显著的miRNAs,并通过real-time qPCR技术验证结果的准确性,为深入研究miRNAs在梅毒的发病机制中的作用以及进一步研发miRNAs作为神经梅毒的诊断标记物奠定基础。
  目的:
  探讨miRNAs在梅毒感染中的调控作用及在其分子分型中的潜在应用价值。
  方法:
  1.采用miRNA表达谱芯片技术检测8例二期梅毒患者、6例神经梅毒患者和5例健康体检者的外周血单个核细胞的miRNAs的差异表达,结合生物信息学技术筛选出显著差异表达的miRNAs;
  2.采用美国ABI公司设计合成的miRNA逆转录引物和表达分析探针,通过Real-time qPCR方法在30例正常人、31例二期梅毒和33例神经梅毒患者中验证芯片筛选的差异表达的miRNAs,鉴定芯片的可靠性;
  3.通过targetscan、miRDB、RNA22三个数据库预测差异表达miRNAs的靶基因,并选择三个数据库共同支持的靶基因进行GO分析和KEGG pathway分析,为深入研究其生物学功能奠定理论基础。
  结果:
  1.通过microRNA基因芯片检测三组样本中miRNAs表达谱,以及生物信息差异基因分析和聚类分析共筛选出39条在神经梅毒中显著差异表达的miRNAs(P<0.05),其中18条miRNAs上调,21条miRNAs下调,二期梅毒中此39条miRNAs表达水平介于两者之间,提示可能存在特异性的miRNA可以作为诊断神经梅毒的分子标记物;
  2.实时荧光定量PCR验证13条差异表达的miRNAs,13条差异表达的miRNAs表达趋势在各组之间与芯片结果一致,因此芯片结果的验证率为100%,芯片结果具有较高的可靠性;
  3.利用targetscan、miRDB和RNA22三个miRNA靶基因数据库预测靶基因,取靶基因交集后发现39条miRNAs共有靶基因5489个;
  4.对预测的靶基因进行GO分析后发现miRNA调控的靶基因在生物进程上主要参与转录调控、RNA代谢过程调控、细胞内信号转导、蛋白结合、细胞凋亡、程序性死亡等过程;而在细胞组成上,靶基因主要定位于细胞膜、细胞质以及细胞内的细胞器等部位;其参与的分子功能主要集中于金属离子的结合、核苷酸分子的结合、转录调节因子的激活等方面;
  5.针对预测的靶基因进行KEGG pathway分析后,发现miRNA调控的靶基因主要参与细胞凋亡、B细胞信号通路、内吞作用、焦点粘连、白细胞经内皮迁移通路、趋化因子信号通路、T细胞信号等通路;
  6.预测miR-21-3p靶基因参与机体重要的免疫调节信号通路,下调机体免疫,推测其在梅毒感染过程中协助梅毒螺旋体的长期潜伏,形成慢性感染。
  结论:
  本研究通过miRNA芯片技术在二期梅毒和神经梅毒患者PBMC中筛选出39条差异表达的miRNAs,并且通过荧光定量PCR探针法扩大检测临床样本后验证芯片结果具有较高的可靠性;39条差异表达的miRNAs在三组之间差异明显,可以有效区分神经梅毒,提示miRNAs可能可以用于梅毒的分子分型,为进一步寻找外周血的miRNAs作为神经梅毒的诊断和预后的标记物奠定了重要基础;生物信息学预测了了差异表达的miRNAs靶基因,并分析其潜在的生物学功能及相关的分子机制。初步预测miR-21-3p在梅毒螺旋体感染时下调机体免疫,可能协助梅毒螺旋体长期潜伏于机体内形成慢性感染。这些预测结果为深入研究miRNA在梅毒的发病机制过程中的调控作用奠定了理论基础。
[硕士论文] 张绍基
公共卫生 山东大学 2016(学位年度)
摘要:目的:
  探索胶州市FSWs人口行为学特征,艾滋病知识知晓情况,艾滋病相关行为特征及其影响因素;了解胶州市FSWs艾滋病梅毒感染情况及其流行因素,为制定艾滋病防治策略和干预措施及效果评价提供依据。
  方法:
  将FSWs所在场所绘制场所分布图,按照场所分布图上的场所类别抽取调查场所,后再抽取调查对象。调查员一对一问卷调查,问卷内容涉及调查目标人群的社会人口学特征、性病艾滋病知识、性行为、吸毒行为、性病感染情况、求医行为、接受干预情况等。所有的调查数据均双录入Epidata数据库,应用SPSS17.0统计软件将2006-2013年8年间所得的变量进行频率描述,分层分析。包括人口学和行为学结果分析,梅毒分层分析,吸毒行为分层分析,梅毒感染多因素分析,吸毒行为多因素分析。
  结果:
  1、人口行为学结果:年龄方面,最大的56岁,最小的15岁,平均年龄为23.9±6.29岁。18-19岁年龄组占23.2%;20-年龄组占45.4%;25-年龄组占16.4%;30-年龄组占15.0%。年龄组各年之间差异具有统计学意义,>30岁年龄组所占比例呈逐年增长趋势(P<0.001,P Trend<0.001)。
  婚姻方面,未婚/离异者居多,共计2749例,占85.6%;已婚/同居者共计456例,占14.2%。婚姻状况各年之间差异具有统计学意义,已婚/同居所占比例随着年份呈增长趋势(P<0.001,PTrend<0.001)。
  户籍方面,本省户籍占多数,共计2148人,占66.9%,外省户籍1061人,占33.0%。户籍各年之间差异具有统计学意义(P<0.001,P Trend<0.95)。
  文化程度方面,中学占84.2%,小学占8.2%,高中及以上7.4%。文化程度各年之间差异具有统计学意义,高中及以上文化程度所占比例随着年份呈增长趋势(P<0.001,PTrend<0.001)。
  招募场所方面,理发店/美容院站街占26.1%;夜总会/KTV/酒吧占60.9%;桑拿/酒店占4.1%;应招占8.2%。招募场所各年之间差异具有统计学意义(P<0.001,PTrend<0.001)。
  艾滋病知识知晓方面,得分<6分占18.3%,得分≥6分占81.7%。艾滋病知晓率各年之间差异具有统计学意义(P<0.001,PTrend<0.001)。
  最近一年接收过HIV干预服务方面,接收者占81.4%,未接收者占18.6%。最近一年接收HIV干预服务各年之间差异具有统计学意义(P<0.001,P Trend<0.001)。
  最近一次商业性行为安全套使用方面回答是者占69.5%,回答否者共占30.2%,最近一次商业性行为安全套使用各年之间差异具有统计学意义,安全套使用率随着年份呈降低趋势(P<0.001,PTrend<0.001)。
  最近一个月坚持使用安全套回答是者占22.9%,回答为否者占76.9%。最近一个月安全套使用率各年之间差异具有统计学意义,坚持安全套使用率随着年份呈降低趋势(P<0.001,P Trend<0.001)。
  梅毒检测方面,阳性的占9.4%,检测阴性的占90.6%。梅毒感染率呈逐年增长趋势(P<0.001,PTrend<0.001)。
  吸毒方面,有吸毒行为的占34.5%,无吸毒行为的占65.5%。吸毒行为各年之间差异具有统计学意义,目标人群吸毒比例呈逐年增长趋势(P<0.001,PTrend<0.001)。
  2、梅毒单因素与多因素分析结果:
  单因素分析结果显示:梅毒感染率与招募场所、婚姻状况、吸毒行为、HIV检测史、最近一个月是否坚持使用安全套情况相关,差异具有统计学意义。有吸毒行为的FSWs梅毒感染率相对较高;应召FSWs梅毒感染率比其它招募场所FSWs高;最近一年做过HIV检测比未做检测FSWs梅毒感染率相对较高;婚姻状况为已婚/同居者较单身/离异者感染率较高;最近一个月未坚持使用安全套较坚持使用安全套感染率高。按年份多因素分析结果显示:2008-2013年吸毒行为均是梅毒感染的重要危险因素;2008-2011年最近一年做过艾滋病检测的FSWs梅毒感染率高;2009-2013年,应召小姐梅毒感染率均高于夜总会KTV/酒吧FSWs;2010年和2013年显示最近一个月未坚持安全套使用是梅毒感染的重要危险因素。
  3、吸毒行为单因素与多因素结果:
  单因素分析结果显示:吸毒行为与招募场所、年龄、HIV检测、婚姻状况、最近一个月坚持使用安全套情况及梅毒感染状况相关,差异具有统计学意义。<20岁年龄段较≥30岁年龄段、婚姻状况为未婚/离异、梅毒感染的FSWs有更高比例吸毒行为;招募场所为/KTV/酒吧以及应召FSWs吸毒率比理发店/美容院/站街及桑拿/浴池高;最近一年做过HIV检测和最近一个月未坚持使用安全套的FSWs有更高比例吸毒行为。不同年份多因素分析结果显示:2008-2013年梅毒感染是吸毒行为重要关联因素;2006-2010年最近一个月与客人发生性行为未坚持使用安全套的FSWs有更高的吸毒行为;2006、2012和2013年显示未婚/离异FSWs有更高比例吸毒行为;2010、2011和2013年显示招募场所为夜总会/KTV/酒吧和应召FSWs有更高比例吸毒行为。
  结论:
  1、胶州市FSWs人群HIV抗体阳性率目前总体仍处于较低水平,但是梅毒感染率较高,并呈逐年上升趋势;
  2、胶州市1/3以上女性性工作者存在新型毒品滥用行为,吸食新型毒品与不安全性行为并存,将加重性病艾滋病在该类高危人群中传播;
  3、女性性工作者艾滋病知晓率及最近一年接受干预服务率较高,但是安全套使用率呈下降趋势,存在知识行为分离现象;
  4、未婚/离异以及应召小姐有更高比例吸毒行为,应针对不同人口学特征的高危人群制定不同的干预措施。
[硕士论文] 李敬
皮肤病与性病学 郑州大学 2016(学位年度)
摘要:背景:
  梅毒(Syphilis)是由梅毒螺旋体(Treponema Pallidum,TP)感染引起的一种常见的性传播疾病(sexually transmitted disease,STD),本病不但有皮肤黏膜损害,也可侵犯全身多器官,产生多种多样的临床表现。梅毒临床上根据其传染途径的不同可分为后天梅毒,又称获得性梅毒(Acquired Syphilis,AS)和先天性梅毒(Congenital Syphilis,CS),又称胎传梅毒(Prenatal Syphilis)。先天性梅毒的发生是由梅毒孕妇通过胎盘传给胎儿所致,近年来因梅毒发病率逐年增高,临床上先天梅毒并不少见,但由于临床医师对本病认识不足、警惕性不高或临床表现不典型等因素,常常造成先天性梅毒在临床上漏诊、误诊,导致治疗不及时或治疗不当,造成严重后果。
  目的:
  本研究通过先天性梅毒的皮肤表现、血清学检查、系统损害、误诊情况及原因、治疗和预后等情况进行分析,以提高临床医师对先天梅毒的认识,减少本病的漏诊误诊,使本病能够正规及时治疗。
  材料和方法:
  收集2005年1月~2015年12月先天梅毒患者48例,病例均来自郑州大学第一附属医院皮肤科和儿科临床确诊的先天性梅毒患者,入选患者诊断均符合先天性梅毒的诊断标准。对入选患者的皮肤表现、血清学检查、系统损害、误诊情况、误诊原因、治疗及预后等数据资料进行整理及统计分析。
  结果:
  1.性别:48例先天性梅毒患儿中,男性患者19例,女性患者29例,女性多于男性,男女之比为0.66:1。
  2.年龄:在入选的48例先天性梅毒患儿中,确诊时年龄最小者1天,最大者18个月,其中年龄1个月以内的有20例,1至2个月患者有4例,2至3月者有5例患者,大于3个月者有19例。
  3.皮肤损害:48例先天性梅毒患儿中,没有皮损损害的21例,有皮肤损害的27例,皮肤损害主要表现为红斑、丘疹、脱屑、水疱、脓疱、大疱、扁平湿疣、脱发、口周与肛周放射性皲裂。皮损主要位于口、鼻周、躯干、尿布区、掌跖部。
  4.误诊情况:27例出现皮肤损害的患儿中16例被误诊,误诊情况如下:4例误诊为湿疹,4例误诊为银屑病,2例误诊为新生儿脓疱疮,1例误诊为新生儿红斑狼疮,1例误诊为葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征,1例误诊为先天性大疱性表皮松解症,1例误诊为色素失禁症,1例误诊为Letterer-Siwe病,1例误诊为新生儿水痘;21例无皮损而出现其他症状的患儿中3例被误诊,误诊情况如下:1例误诊为新生儿出血症,1例误诊为新生儿败血症,1例误诊为血小板减少性紫癜。
  5.系统损害:肝脏肿大者33例,脾脏肿大者17例,淋巴结肿大8例,肝酶升高21例,血常规异常者37例,黄疸12例,水肿12例,血尿10例,蛋白尿5例,有出血表现者2例,神经系统异常2例,眼损害3例。
  6.梅毒血清学检查:48例先天梅毒患儿TPPA及RPR均为阳性,其中7例RPR滴度≥1:64,11例RPR滴度1:32,12例RPR滴度1:16,13例RPR滴度1:8,5例RPR滴度1:4。
  7.母亲情况:48例患儿母亲TPPA及RPR均为阳性,其中7例RPR滴度≥1:16,14例RPR滴度1:8,19例RPR滴度1:4,8例RPR滴度1:2。36例患儿母亲未接受过治疗,12例接受过不规范治疗。
  8.治疗:48例患儿中青霉素皮试阴性者43例,均给青霉素肌注治疗,其中应用苄星青霉素者23例,水剂青霉素G者20例;5例青霉素皮试阳性者给予红霉素口服。
  9.预后:48例患儿9例失访,39例经过治疗后临床症状和体征消失,一般情况较好。血清学检查结果:TPPA阳性者39例;RPR转阴者34例,RPR滴度1:4者2例,RPR滴度1:2者3例。
  结论:
  1.先天性梅毒为患者母亲胎传所致,应加强孕前梅毒筛查,预防先天性梅毒的发生。
  2.先天性梅毒临床并不少见,因其皮肤和内脏临床表现的复杂性,容易误诊,临床医师应提高对先天性梅毒的认识。
  3.先天性梅毒的危害极大,但患儿如能早期诊断、正规治疗,预后一般较好。
[硕士论文] 张巧
临床检验诊断学 厦门大学 2016(学位年度)
摘要:梅毒是由梅毒螺旋体引起的性传播疾病。梅毒螺旋体可侵入人体各个组织器官,引起各种临床表现。目前机体对梅毒螺旋体的免疫机制尚不清楚。本课题分别从体内和体外实验分析梅毒螺旋体引起的初始Th细胞分化,初步探讨梅毒螺旋体细胞免疫机制。我们分析32例梅毒患者外周血辅助性T细胞(Th)亚群含量变化;通过兔皮内接种模型,分析梅毒螺旋体感染后局部炎症反应中IFN-γ和IL-4 mRNA的表达随时间变化情况。体内研究发现梅毒螺旋体感染后细胞免疫应答在人外周血和兔皮损中IFN-γ含量明显升高,Th1型细胞增多。为了更好的从体外实验研究梅毒免疫机制,本文通过GM-CSF和IL-4诱导人单核细胞来源的树突状细胞。研究发现,梅毒螺旋体能诱导树突状细胞成熟,且梅毒患者来源的树突状细胞的CD86分子比健康人低(P<0.01),吞噬功能比健康人高(P<0.01)。体外进行树突状细胞与初始Th细胞共培养,研究Th细胞的分化方向和机制。研究表明,树突状细胞将梅毒螺旋体抗原肽提呈给初始Th细胞,使Th细胞活化克隆增殖,并产生大量的Th1型细胞,也有少量的调节性T细胞(Treg)和Th2型细胞产生并伴随mTOR通路的激活。说明在梅毒感染后,细胞免疫激活。
  综上所述,本研究表明,梅毒螺旋体能诱导健康人树突状细胞成熟,并通过树突状细胞的提呈作用活化初始Th细胞,使其向Th1方向分化并伴随mTOR通路的激活。这也是首次通过体外共培养实验验证梅毒螺旋体对初始Th细胞分化的影响,为基于Th细胞和树突状细胞的梅毒免疫治疗提供了实验基础。
[硕士论文] 王建
流行病与卫生统计学 北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院中国医学科学院 2016(学位年度)
摘要:性传播疾病(简称性病)为全球和我国重要的公共卫生问题之一,因其传播途径特殊,具有伦理和社会敏感性,性病患者常承受心理压力,生活质量遭受损害。国内外已开展了性病患者生活质量的研究,主要是针对 对梅毒、淋病和生殖道沙眼衣原体感染患者调查少见,且缺乏用于各种性病的专用量表。如何编制性病专用生活质量量表,并评估5种性病患者生活质量,探讨影响因素,是本课题需要研究的问题。
  目的:
  通过应用普适性量表、专用量表和自行编制的性病生活质量调查问卷等工具对5种性病患者开展调查,评价其生活质量,探讨影响因素,为提高性病患者生活质量、改进性病临床服务等提出建议,同时为今后发展适于我国不同性病患者生活质量评估量表提供数据。
  方法:
  应用美国12条目简明健康测量量表(SF-12)(普适性量表)、皮肤病生活质量指数(DLQI)(专用量表)、医院焦虑抑郁量表(HAD)、医学应对问卷(MCMQ)、家庭社会支持问卷和自行编制的性病生活质量调查问卷(QOL-STD)等对梅毒、淋病、生殖道沙眼衣原体感染、生殖器疱疹和尖锐湿疣5种性病患者生活质量开展调查,采用SPSS19、Stata12、MLwiN2.28统计软件对数据进行分析,包括量表得分、信度与效度分析、因子分析、多层模型、多重线性回归、Logistic回归分析等方法,分析性病患者的生活质量及其影响因素,评价自制性病生活质量调查问卷的有效性。
  结果:
  在中国南京、沈阳和广州3个城市性病门诊共调查5种性病875例,有效样本849例(97.03%);其中梅毒233例(27.44%)、淋病24例(2.83%)、生殖道沙眼衣原体感染123例(14.49%)、生殖器疱疹156例(18.37%)、尖锐湿疣295例(34.75%)、2种以上性病18例(2.12%)。在所采用的量表和调查问卷中,除医学应对问卷中面对和回避2个亚量表、SF-12量表中生理维度的信度与效度欠佳外,其他量表均有较好的信度(Cronbachα>0.7)和内容效度(Spearman相关系数>0.5)。
  DLQI量表调查结果分析显示,5种性病患者生活质量均分为9.66±5.46,受影响的平均水平为“中度”;其中生活质量无影响者占7.30%,受轻度影响者占18.26%,中度影响者30.39%,重度影响者41.70%,极重度影响者2.36%。3个地区间性病患者生活质量得分存在显著的统计学差异(P=0.002),受影响程度:广州>沈阳>南京;不同性病病种间患者的生活质量得分也存在显著的统计学差异,受影响程度:病毒性性病(生殖器疱疹、尖锐湿疣)>细菌性性病(梅毒、淋病和生殖道沙眼衣原体感染)(P=0.000)。多重线性回归分析和两层次线性模型对生活质量影响因素总变异的解释分别为30.07%和31.05%。两层次线性模型分析结果表明,女性、复发、对疾病的自我感觉越严重、告诉家人、减少和朋友接触、较高的面对和屈服得分、较低的社会支持得分者,生活质量较差。
  SF-12量表调查结果分析表明,5种性病患者生理评分和心理评分均数分别为50.00±6.79和50.00±9.41(与国内外常模接近,如成都居民调查生理评分51.2±6.6,心理评分49.9±7.7)。量表解释生活质量影响因素总变异的比例很低(生理评分13.13%,心理评分22.94%)。
  对HAD量表调查数据分析显示,5种性病患者焦虑和抑郁情绪阳性率较高,分别为55.71%和51.00%。不同性病患者间焦虑情绪有显著的统计学差异(P=0.000),而抑郁情绪无显著的统计学差异(P=0.554)。焦虑情绪的影响因素包括复发(OR=2.02,95%CI:1.42~2.87)、减少和朋友接触(OR=2.18,95%CI:1.43~3.30)、“屈服”得分较高(OR=1.06,95%CI:1.05~1.08)、家庭社会支持得分较低(OR=1.01,95%CI:1.01~1.02)、对疾病的自我感觉严重(OR=5.05,95%CI:1.74~14.6)等;抑郁情绪的影响因素包括复发(OR=1.58,95%CI:1.15~2.18)、减少和朋友接触(OR=2.01,95%CI:1.38~2.94)、“屈服”得分较高(OR=1.04,95%CI:1.03~1.05)、家庭社会支持得分较低(OR=1.01,95%CI:1.01~1.03)、已婚(OR=1.52,95%CI:1.06~2.18)、月收入较低(OR=2.11,95%CI:1.11~4.02)等。
  对自行编制的QOL-STD调查问卷进行评价,Cronbachα系数为0.870,内在信度良好;问卷各条目与总得分的Spearman相关系数均>0.5(P<0.01),内容效度良好;问卷可提取1个主成分,解释变异的46.98%,结构效度可以接受;与DLQI量表得分的相关系数r=0.716,有显著的统计学意义(P=0.000),效标效度良好。对生活质量影响因素总变异的解释优于专用量表。
  应用QOL-STD调查问卷对5种性病患者生活质量进行评价,并依据与DLQI量表相关性划分受影响程度,生活质量评分的均分为23.06±7.76,受影响的平均水平为“中度”;其中生活质量无影响者占6.47%,受轻度影响者占12.01%,中度影响者42.99%,重度影响者34.39%,极重度影响者4.12%。多重线性回归分析和两层次线性模型对总变异的解释分别为32.50%和33.16%,略高于DLQI量表。两层次线性模型分析结果显示,性病患者生活质量影响因素与DLQI量表基本一致。
  结论:
  5种性病患者总体生活质量较差,焦虑抑郁情绪严重。在性病临床诊疗工作中,医生应重点关注患者的心理问题,尤其是具有焦虑和抑郁症状者,要加强心理咨询与健康教育,鼓励患者与家人朋友接触交流;针对女性、疾病复发、对疾病采取“屈服”应对方式的患者要实施有针对性的心理干预。同时,做好患者家属的沟通,获得其对患者的理解和支持。
  采用普适性量表评价性病患者生活质量应慎重,尽可能使用专用量表。自行编制的生活质量调查问卷QOL-STD优于普适性量表SF-12和专用量表DLQI,具有良好的信度和效度;但因子分析显示仅有一个维度,今后需要扩展问卷内容。
[硕士论文] 王娜
皮肤病与性病学 安徽医科大学 2016(学位年度)
摘要:研究目的:
  第一部分
  1.了解正规治疗后非梅毒螺旋体(Treponema pallidum。TP)血清学试验持续阳性梅毒患者的神经梅毒发生情况;
  2.分析神经梅毒发生的相关危险因素,探索指导非TP血清学试验持续阳性梅毒患者行脑脊液(cerebrospinal fluid。CSF)检测的科学依据。
  第二部分
  1.了解神经梅毒患者和非神经梅毒患者脑脊液IgG浓度、IgG指数特点,探讨其在神经梅毒诊断中的应用价值;
  2.分析神经梅毒患者治疗后随访脑脊液IgG浓度、IgG指数变化特点,评估其在疗效判断方面的意义。
  研究方法:
  第一部分回顾性分析248例正规治疗后非TP血清学试验持续阳性梅毒患者的临床资料。根据患者住院期间的脑脊液检测结果明确有无神经梅毒,统计神经梅毒发生率。收集患者性别、年龄、治疗方案、血甲苯胺红不加热血清试验(tolulized red unheated serum test。TRUST)入院时滴度、病程中有无神经系统症状、梅毒分期、血TRUST下降程度等资料。应用单因素分析、多因素Logistic回归分析及受试者工作特征(receiver operating characteristic。ROC)曲线法分析可用于预测神经梅毒的临床指标。
  第二部分回顾性分析192例住院行脑脊液检测梅毒患者的临床资料。收集患者性别、年龄、临床表现、血生化、脑脊液常规、脑脊液生化、脑脊液及血清TRUST、脑脊液及血清梅毒螺旋体明胶凝集试验(treponema pallidum particle agglutination test。TPPA)、脑脊液及血清IgG浓度、神经梅毒治疗方案等资料。根据脑脊液检测结果明确是否为神经梅毒。采用t检验分析神经梅毒组和非神经梅毒组间、脑脊液TRUST阳性神经梅毒组和脑脊液TRUST阴性神经梅毒组间脑脊液IgG浓度的差异。计算出IgG指数诊断神经梅毒的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确性。收集神经梅毒患者正规治疗后随访复查的脑脊液情况,分析脑脊液IgG浓度、IgG指数在正规治疗后的变化特点。
  研究结果:
  第一部分
  1.248例患者男65例,女183例,平均年龄33.8岁(18~73岁)。初次就诊时一期梅毒11例,二期梅毒29例,早期潜伏梅毒19例,晚期潜伏梅毒65例,病期不明的潜伏梅毒124例。血TRUST初次就诊时滴度1:1~1:256,中位数1:8。入院时滴度1:1~1:128,中位数1:4。经苄星青霉素治疗的患者232例,非青霉素方案治疗的患者16例。达到治疗有效、血清固定、治疗失败标准的患者分别为107例、131例、10例。病程中有神经系统症状15例。
  2.根据脑脊液检查结果,248例患者中共25例患者诊断神经梅毒,发生率10.1%。单因素分析显示血TRUST下降程度(?2=20.663。P<0.05)、血TRUST入院时滴度(Z=-7.021。P<0.05)与神经梅毒发生有关,而性别、年龄、梅毒分期、治疗方案及有无神经系统症状与神经梅毒无显著相关性(均P>0.05)。多因素Logistic回归分析显示血TRUST入院时滴度是神经梅毒的相关危险因素(OR=4.685,95%CI=2.552~8.601。P<0.05)。绘制血清TRUST入院时滴度的ROC曲线下面积为0.907,最佳临界滴度为1:8。
  第二部分
  1.192例患者男61例,女131例,平均年龄37.4岁(16~69岁)。其中神经梅毒组患者38例,非神经梅毒组患者154例。神经梅毒患者按临床类型分,包括无症状神经梅毒14例、脑膜神经梅毒4例、脑膜血管梅毒8例、麻痹性痴呆7例、脊髓痨4例和树胶肿型神经梅毒1例。按脑脊液TRUST是否阳性分,包括脑脊液TRUST阳性组23例和脑脊液TRUST阴性组15例。35例神经梅毒患者予大剂量青霉素治疗,另3例患者因青霉素过敏者予头孢曲松治疗。共21例神经梅毒患者治疗后至少复查了一次脑脊液。
  2.与非神经梅毒患者[(26.71±11.31)mg/L]相比,神经梅毒组患者脑脊液IgG浓度[(148.12±121.08)mg/L]明显升高(t=6.175。P<0.05);且脑脊液TRUST阳性神经梅毒患者[(204.23±126.07)mg/L]高于脑脊液TRUST阴性神经梅毒患者[(62.10±25.88)mg/L](t=4.288。P<0.05)。38例神经梅毒患者中有31例脑脊液IgG指数>0.7,154例非神经梅毒组患者中有29例脑脊液IgG指数>0.7,两组间差异有统计学意义(?2=55.857。P<0.05)。计算出IgG指数诊断神经梅毒的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为51.7%、94.7%、81.6%、81.2%和81.3%。
  3.至少复查一次脑脊液的21例神经梅毒患者在最近一次复查时,脑脊液IgG浓度除1例麻痹性痴呆患者和1例无症状神经梅毒患者变化不明显外,其余均降至治疗前浓度的1/2以下,且IgG浓度变化程度与白细胞计数变化程度呈正相关经(rs=0.478。P<0.05)。7例治疗前脑脊液白细胞计数正常、蛋白浓度增高的患者仅2例患者蛋白浓度降至正常,但脑脊液IgG浓度均降至治疗前浓度的1/2以下。至少复查一次脑脊液的21例神经梅毒患者中有17例患者治疗前IgG指数>0.7,在最近一次的复查时均降至≤0.7。
  结论:
  第一部分正规治疗后血清TRUST滴度高低对于预测神经梅毒有一定意义。
  第二部分脑脊液IgG浓度、IgG指数对神经梅毒诊断及疗效判断有一定的应用价值。
[硕士论文] 邱馨慧
微生物学 厦门大学 2016(学位年度)
摘要:研究目的:梅毒是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)引起的性传播疾病。巨噬细胞为主的细胞免疫在机体对Tp免疫中起主要作用,巨噬细胞的极化方向影响梅毒病程进展。AKT/mTOR/NF-κB通路参与了调控细胞增殖、分化、凋亡,在炎症、肿瘤、代谢中也发挥关键作用。我们以AKT/mTOR/NF-κB通路为切入点,研究其在Tp感染巨噬细胞极化中的调控作用,从巨噬细胞极化方面研究Tp的致病机制,为Tp感染的防治提供理论和实验依据。
  方法:本研究分别以IFN-γ+LPS和IL-4为刺激剂,在体外构建经典活化巨噬细胞(M1型)和选择性活化巨噬细胞(M2型);采用Western blotting方法确认巨噬细胞不同极化状态AKT/mTOR/NF-κB通路的活化情况以及通路抑制剂的抑制情况。以Tp感染巨噬细胞,采用Real Time-PCR方法检测感染后巨噬细胞在12h、24h、48h和72h的细胞因子表达情况,确认Tp感染后巨噬细胞极化状态;采用Western blotting方法检测Tp引起AKT/mTOR/NF-κB通路的激活情况;最后用Western blotting和Real Time-PCR方法检测抑制剂对Tp引起通路活化的抑制情况以及炎症因子表达的作用情况。
  结果:THP-1来源的M0型巨噬细胞,在刺激剂IFN-γ和LPS作用下细胞变成长梭形,高表达IL-1β、TNF-α、iNOS,低表达MRC-1等,向M1型巨噬细胞极化;在IL-4作用下细胞形状近圆形,低表达IL-1β、TNF-α、iNOS,高表达MRC-1等,向M2型巨噬细胞极化。巨噬细胞极化过程中AKT、mTOR、IκBα、p65磷酸化,激活了AKT/mTOR/NF-κB通路,M1型的通路磷酸化水平高于M2型。AKT通路抑制剂LY290442同时抑制M1和M2型巨噬细胞极化,mTOR通路抑制剂雷帕霉素能够促进M1型巨噬细胞极化,抑制M2型巨噬细胞极化,NF-κB通路抑制剂PDTC能显著抑制M1型巨噬细胞极化,而对M2型巨噬细胞无显著作用。Tp感染M0型巨噬细胞产生较为强烈的炎症反应,高表达IL-1β、TNF-α、IL-6、iNOS等,随着时间延长炎症反应逐渐减缓,发现Tp感染初期巨噬细胞主要向M1的炎症反应方向极化;在此过程中AKT、mTOR、IκBα、p65磷酸化,AKT/mTOR/NF-κB通路激活,抑制剂使AKT、mTOR、IκBα、p65磷酸化程度减弱,炎症因子IL-1β、TNF-α表达受到影响,这与实验前期经典极化模型的结果基本一致,进一步证明Tp通过激活AKT/mTOR/NF-κB通路,引起巨噬细胞向M1极化。
  结论:Tp感染巨噬细胞初期,激活了AKT/mTOR/NF-κB通路,巨噬细胞向M1极化,产生大量的炎症因子如IL-1β、TNF-α等,低表达MRC-1,IL-10等抑制性细胞因子,炎症因子受AKT/mTOR/NF-κB通路抑制剂作用变化,确定了AKT/mTOR/NF-κB在梅毒感染巨噬细胞初期对巨噬细胞极化的影响,为进一步阐明梅毒的致病机制奠定了一定基础。
[博士论文] 张颂
皮肤病与性病 华中科技大学 2016(学位年度)
摘要:目的:
  研究孕激素对淋球菌诱导的NLRP3炎症蛋白复合体的调控
  方法:
  构建去卵巢化与正常BALB/c雌性小鼠淋球菌感染模型,将20只BALB/c小鼠随机分为4组:
  1.假手术+淋球菌接种组(intact);
  2.卵巢摘除+淋球菌接种组;
  3.卵巢摘除+孕激素(1mg/d)+淋球菌接种组;
  4.假手术+生理盐水接种组(control)。分别记录4组模型小鼠感染天数并检测接种后每日阴道排出的菌量、阴道内中性粒细胞数量,ELISA法检测接种后小鼠阴道内IL-1β、TNF-α及IL-6细胞因子表达水平,接种后第5日取小鼠阴道及宫颈组织,HE染色检测阴道及宫颈组织病理改变,免疫荧光法检测阴道组织NLRP3和caspase-1 p20水平。
  体外实验分为5组:
  1.THP-1细胞组(空白对照);
  2.THP-1细胞+淋球菌组;
  3.THP-1细胞+淋球菌+10 ng/mL孕激素组;
  4.THP-1细胞+淋球菌+100 ng/mL孕激素组;
  5.THP-1细胞+淋球菌+1000 ng/mL孕激素组。ELISA法检测孕激素作用后淋球菌感染的THP-1细胞分泌IL-1β水平,western-blot法检测细胞内NLRP3及caspase-1水平,RT-PCR法检测细胞内IL-1β及NF-κB的mRNA水平,western-blot检测细胞核内NF-κB p65核转位,荧光探针法检测细胞内ROS含量。
  结果:
  1)体内实验:孕激素降低小鼠模型的淋球菌感染菌量,抑制感染淋球菌小鼠阴道及宫颈组织内炎症细胞浸润,降低IL-1β、TNF-α、IL-6等炎性因子及NLRP3、caspase-1 p20的表达;
  2)体外实验:孕激素抑制淋球菌诱导的THP-1细胞内NLRP3、caspase-1及NF-κB的活化,减少了细胞的IL-1β分泌及ROS的释放。
  结论:
  孕激素通过减少NF-κB的转录及ROS的产生抑制淋球菌诱导的NLRP3炎症体活化,从而减轻感染淋球菌小鼠生殖道中炎症细胞浸润,减少炎症因子的表达。该研究从另一个角度阐述女性淋病无症状感染机制,为淋病防治提供了新的策略。
  目的:
  研究淋球菌表面的脂寡糖LOS中的可变糖链结构(α寡糖链)对淋球菌表面Opa蛋白与中性粒细胞表面的癌胚抗原相关细胞黏附分子3的结合能力的影响。
  方法:
  本试验通过同源重组法将lgtA'CDΔ(CD),lgtABCDΔ(Δ5),lgtABCDEΔ(Δ4),和lgtFΔ(lgtF)的质粒转染进入野生株MS11 varC得到4种MS11 LOS突变株。研究5种长度不同的α寡糖链淋球菌突变株对中性粒细胞的呼吸爆发的影响,对HeLa-CEACAM3细胞的粘附及侵袭能力的影响;在荧光显微镜下观察孵育5(6)-CFDA/SE分子探针的细菌被HeLa-CEACAM3细胞黏附及吞噬的情况。正常人类血清杀伤实验评估5种α寡糖链淋球菌突变株对补体的结合能力,糜蛋白酶消化实验评估淋球菌表面Opa蛋白结构可能发生的改变。
  结果:
  LOS中的α寡糖链影响淋球菌Opa与CEACAM3结合能力,表达OpaI的α寡糖链完全缺失的淋球菌突变株(lgtF突变株)丧失与中性粒细胞及HeLa-CEACAM3细胞表面的CEACAM3结合能力及刺激中性粒细胞化学发光反应的能力。荧光显微镜观察HeLa-CEACAM3细胞内OpaI淋球菌野生株的绿色荧光的强度明显高于OpaI淋球菌lgtF突变株,表明OpaI淋球菌野生株比OpaI淋球菌lgtF突变株对HeLa-CEACAM3细胞侵袭能力强。血清杀伤实验表明除OpaI LOS野生株,lgtA'CDΔ(CD)突变株和lgtF突变株仍然保持血清敏感性,而Δ5和Δ4突变株则表现出血清抵抗性。糜蛋白酶法鉴定lgtF突变株Opa蛋白结构,结果显示Opa蛋白的功能丧失是由于Opa的特定部位丢失或结构变化。
  结论:
  淋球菌LOS中的α寡糖链通过减弱奈瑟淋球菌非透明蛋白与中性粒细胞表面的癌胚抗原相关细胞黏附分子3的结合能力参与淋病发病机制。
  (已选择0条) 清除
公   告

北京万方数据股份有限公司在天猫、京东开具唯一官方授权的直营店铺:

1、天猫--万方数据教育专营店

2、京东--万方数据官方旗舰店

敬请广大用户关注、支持!查看详情

手机版

万方数据知识服务平台 扫码关注微信公众号

学术圈
实名学术社交
订阅
收藏
快速查看收藏过的文献
客服
服务
回到
顶部