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[硕士论文] 赵志峰
特种经济动物饲养 中国农业科学院 2018(学位年度)
摘要:近年来,干细胞治疗在相关疾病中已经进入临床试验阶段,但免疫排斥现象如影随从,是干细胞治疗技术的绊脚石。半乳糖凝集素1(Galectin-1,GAL-1)在大多数间充质干细胞、多数肿瘤及鹿茸干细胞中被发现高表达,而相应的这些细胞中均出现免疫抑制现象。GAL-1作为免疫调控因子,推测其很可能参与了干细胞的免疫调控。
  鹿茸是唯一能够在失去后还能完全再生的哺乳动物器官。研究表明,鹿茸再生是一个基于干细胞的过程,鹿茸干细胞中高表达GAL-1基因,推测其是鹿茸再生中的一个重要调控因子。为研究GAL-1在鹿茸干细胞中的表达及可能的生物学功能,本论文以东北梅花鹿鹿茸的干细胞组织,即生茸区骨膜和角柄骨膜(致敏角柄骨膜与休眠角柄骨膜)以及对照组织面部骨膜为研究材料,克隆了梅花鹿的GAL-1基因CDS区序列,利用软件或网站,对GAL-1蛋白进行生物信息学分析;利于Western-blot及Q-PCR技术检测了GAL-1在鹿茸干细胞中的相对表达量。结果显示:梅花鹿GAL-1ORF全长为408bp,编码134个氨基酸;相对分子质量为14.69KDa,氨基酸序列与牛羊高度接近(95%>);主要定位于细胞外,无跨膜区,无糖基化位点,可能有两个磷酸化位点,二级结构主要为β-折叠与无规卷曲;三级结构与牛的结构相似;GAL-1在面部骨膜中表达量更高。本研究预测了梅花鹿GAL-1蛋白的结构特点,检测了GAL-1蛋白在鹿茸干细胞中的表达情况,为进一步研究鹿茸再生提供数据支持。
  鹿茸生茸区骨膜干细胞被归类为一种间充质干细胞,是鹿茸发生的基础。GAL-1蛋白在生茸区骨膜干细胞中发生异常表达。为探究GAL-1基因在干细胞中的具体功能,本实验采取了RNAi技术,经Q-PCR,Western-blot测定干扰效率约为62%。通过PI法与CCK8法分别检查细胞周期和增殖;Q-PCR检测IL-6和CMYC的表达量;与CFSE染色的外周血淋巴细胞共培养4d后,显微镜下观察并用流式细胞仪检测。结果干扰后的细胞S期占比上升,G1期占比下降;细胞增殖速度加快;IL-6被上调约1倍,CMYC被上调约5倍;淋巴细胞分裂速度加快。这表明干扰后,细胞中GAL-1含量降低,导致大部分细胞进入分裂期,分裂速度加快。IL-6和CMYC等免疫相关因子被上调,刺激免疫细胞活化增殖。推测GAL-1是鹿茸再生过程中细胞增殖与免疫调控的关键抑制因子。
[硕士论文] 罗阳
动物营养与饲料科学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:本研究采用体外发酵法比较不同组和比例的桑树叶和羊草的组合效应,在此基础上,再利用桑树叶与羊草的混合作为粗饲料饲喂绵羊,通过比较其在绵羊体内消化与瘤胃发酵特征、生产性能、脂肪代谢与沉积性能、肉品质等指标,确定桑树叶在绵羊饲粮中的最佳添加量,为桑树叶在绵羊饲养中的合理使用提供参考。研究内容主要包括以下三部分:
  试验一、本试验旨在利用体外瘤胃发酵法研究不同比例的桑树叶与羊草之间的组合效应,从而筛选出两者之间的最佳组合比例。将桑树叶和羊草分别以0∶100(T0组)、20∶80(T20组)、40∶60(T40组)、60∶40(T60组)、80∶20(T80组)、100∶0(T100组)的比例混合后作为底物,进行连续72h的体外产气培养和体外批次培养试验。结果表明:1)随着底物中桑树叶比例的提高,理论产气量、累积产气量、培养液微生物蛋白(MCP)浓度和体外有机物消化率(IVDOM)都有提高的趋势;2)在72h时,T100组的理论最大产气量、累积产气量和IVDOM都显著高于其他各组(P<0.05),T60和T100组的培养液MCP浓度显著高于其他各组(P<0.05);3)在48和72h时,T60、T80和T100组培养液pH显著低于其他各组(P<0.05);4)在72h时,T60、T80和T100组培养液的总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度都显著高于其他各组(P<0.05);5)在6、12和72h时,T60、T80和T100组的培养液氨氮(NH3-N)浓度显著高于其他各组(P<0.05);6)T60组的多项组合效应(MFAEI)要高于其他各组。综上所述,桑树叶与羊草的组合能够改善体外瘤胃发酵特性,即存在正组合效应,其中桑树叶与羊草的最佳比例为60∶40。
  试验二、本试验研究了不同比例的桑树叶对绵羊瘤胃发酵、消化代谢、血液生化和生长性能的影响。试验选用32只小尾寒羊公羊(25.15±1.03kg),随机分成4组,分别为对照组(Con组)、T20组、T60组和T80组,每组8只重复。试验饲粮的组成和营养水平参照NRC(2007)建议的肉绵羊饲养标准,预期日增重200g/d,干物质采食量0.83kg,ME为10MJ/kg。对照组饲粮中以羊草为单一粗饲料,T20组、T60组和T80组为添加桑树叶组,粗料中桑树叶和羊草的比例分别为20∶80,60∶40和80∶20,即各组饲粮中桑树叶的比例分别为0、8%、24%、32%。试验预饲期10天,正试期55天。结果表明:1)添加桑树叶组的终末体重和平均日采食量在数值上要高于对照组。2)添加桑树叶组的DM和OM表观消化率均显著高于对照组(P<0.05)。T20和T60组的CP表观消化率显著高于对照组和T80组(P<0.05)。T60组的NDF和ADF表观消化率显著高于其他各组(P<0.05)。T60和T80组的EE表观消化率均显著高于对照组和T20组(P<0.05)。3)对照组血清中尿酸的含量要显著高于其他各组(P<0.05),其他血清指标均没有显著差异。4)各组瘤胃液的pH、氨氮浓度、TVFA、乙酸、丙酸的浓度和乙酸/丙酸的值都没有显著差异(P>0.05)。T60组和T80组的MCP浓度显著高于对照组和T20组(P<0.05)。T60组丁酸的浓度显著高于对照组和T20组(P<0.05)。
  试验三、本试验研究了不同比例的桑树叶对绵羊屠宰性能、肉品质和脂肪沉积的影响。在正饲期结束后每组随机挑选4只小尾寒羊进行屠宰试验。结果表明:1)各组试验羊的屠宰性能指标均没有显著差异(P>0.05)。T60组的胴体重、屠宰率、净肉重和肉骨比在数值上要高于其他各组。2)添加桑树叶组背最长肌的肉色L和臀中肌的剪切力、蒸煮损失都显著低于对照组(P<0.05)。T60组背最长肌和股外侧肌的肉色a都显著高于对照组(P<0.05)。T60组背最长肌的pH24h和股外侧肌的pH24h都显著高于其他各组(P<0.05)。T60组和T80组背最长肌的滴水损失显著低于对照组和T20组(P<0.05)。T60组股外侧肌的滴水损失显著低于其他各组(P<0.05)。3)T60组和T80组的背膘厚显著高于对照组和T20组(P<0.05)。各组之问的胴体脂肪总重、腹脂重、内脏脂肪重、皮下脂肪重、尾脂重和肌内脂肪重没有显著差异(P>0.05),T60组的内脏脂肪重、皮下脂肪重和肌肉脂肪重在数值上要高于其他各组。T60组和T80组肌内脂肪的含量显著高于对照组和T20组(P<0.05)。4)T60组C15∶1、C18∶3n3、MUFA的含量和PUFA/SFA均显著高于其他几组(P<0.05),而SFA的含量要显著低于其他几组(P<0.05),C17∶1的含量显著高于对照组(P<0.05)。T80组C18∶1n9c的含量显著高于其他几组(P<0.05)。T60组和T80组C16∶1的含量显著高于其他两组(P<0.05),C16∶0的含量要显著低于其他两组(P<0.05)。5)T60和T20组背最长肌中ACC mRNA的表达量显著高于对照组和T80组(P<0.05),T60组和对照组AGPAT1mRNA的表达量显著高于T20组和T80组(P<0.05),T60组GPAT1和DGAT2mRNA的表达量显著高于其他各组(P<0.05),T20组ATGL mRNA的表达量显著高于T80组(P<0.05)。
[硕士论文] 甘丽娜
动物遗传育种与繁殖 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:肠道不仅是猪体内重要的消化吸收器官,同时也是机体抵抗病原菌侵袭的第一道防线。肠道屏障能够防止肠内的细菌和病毒产生的有害物质穿过肠粘膜进入机体血液循环中,肠道屏障的受损与众多疾病具有密切的相关性。猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)导致的一种高度接触性肠道传染病,尤其在仔猪中具有很高的发病率和死亡率,研究发现肠道屏障的受损是导致在仔猪中发病率较高的腹泻和肠道炎症等疾病的重要内因之一。PEDV毒株的基因变异导致变异株毒力增强以及现有疫苗难以有效免疫,从遗传本质上增强仔猪对PEDV的抗性,从长远来看可能是抵抗PEDV侵害的有效方法。因此,从分子遗传学角度出发筛选与仔猪肠道屏障相关的关键候选基因,对于猪抗PEDV育种工作具有重要的科学价值和应用前景。
  本研究以43头“杜×长×大”8日龄三元杂交猪为研究对象,其中腹泻仔猪个体28头,正常仔猪个体15头。首先进行PEDV经典毒株RT-PCR检测,然后利用血清D-乳酸和DAO的ELISA含量检测初步鉴定腹泻和正常仔猪个体的肠道通透性,同时屠宰仔猪采集各肠道组织并利用扫描和透射电镜直观观察结合石蜡切片的系列检测进一步验证仔猪肠道屏障完整性,以获得确证的肠道屏障完整和受损仔猪个体表型。对肠道屏障完整和受损仔猪个体肠道粘膜使用RNA-seq测序技术筛选重要调控通路及差异表达基因,并对重要候选基因进行个体和细胞水平的初步功能验证,主要试验结果如下:
  1、基于M基因的序列使用邻接法建立进化树发现腹泻病猪肠道内的毒株与目前国内外的PEDV流行株具有较高的同源性,由此确认本研究中的腹泻病猪均为PEDV病毒感染。然后采用血清D-乳酸和DAO含量检测从腹泻和正常个体中共剔除仔猪15头,初步将仔猪鉴定为肠道屏障完整组和受损组。扫描和透射电镜以及石蜡切片染色的结果显示,典型的肠道屏障完整仔猪肠黏膜结构完整,层次分明,绒毛长度和宽度均显著高于受损个体(P<0.05),黏膜上皮细胞的轮廓清晰,排列规则,杯状细胞数量较多。典型的肠道屏障受损仔猪肠道发生明显病变,肠道绒毛脱落,破损,固有层暴露,肠腺萎缩,杯状细胞数量较少。最终成功获得确证的肠道屏障受损仔猪10头,肠道屏障完整仔猪12头。本研究使用血清D-乳酸和DAO的ELISA含量检测、肠道组织扫描和透射电镜直观观察、石蜡切片检测等一系列实验建立了仔猪肠道粘膜屏障完整性的评价体系,最终成功获得了确证的肠道屏障受损和完整仔猪个体,为下一步仔猪抗腹泻病等肠道疾病的研究工作提供了宝贵的素材,同时为今后猪肠道屏障研究素材的获得提供了一个有效可行的方法和途径。
  2、使用RNA-seq技术对肠道屏障完整和受损仔猪空肠粘膜组织进行转录组测序,分别获得110.62、101.07、129.27、100.18和113.57、108.03、99.84、111.55百万个raw reads,采用HISAT2对过滤后的reads进行参考基因组的比对分析后发现Total mapped在90.75%~95.41%之间,超过70%的预期结果。3.11%~6.78%的reads在参考基因组序列上具有多处比对位置,85.43%~91.76%的reads比对位置唯一。根据p-adjust<0.05的原则,在肠道屏障完整组和受损组之间共筛选出差异表达基因(differentially expression genes,DEGs)3721个,其中受损组上调基因具有2151个,下调基因1570个。根据GO富集分析的结果筛选得到57条显著富集的GO分类(22条BP,11条CC,24条MF),CC主要包括细胞内部分(intracellular part)、细胞内细胞器(intracellular organelle)和细胞器(organelle)等,MF主要包括核苷酸结合域(nucleotide binding)、核苷磷酸结合(nucleoside phosphate binding)和小分子结合(small molecule binding)等。KEGG分析显示DEGs主要被富集到甘油酯代谢(Glycerolipid metabolism)、磷脂酰肌醇信号系统(Phosphatidylinositol signaling system)和肌醇磷酸盐代谢(Inositol phosphate metabolism)等通路中。
  3.基于基因的高表达差异倍数和生物学功能筛选了SELE、LRRK1、1TPR2、EDA、KIAA1429、PRAP1、ALPI、SDR16C5、CLDN10、ASAH、AGPAT3和KCNJ12等12个重要的候选基因,并利用实时荧光定量PCR验证转录组测序的分析结果,发现实时荧光定量的结果与转录组测序结果一致,表明转录组测序的结果准确度较高。进一步在细胞水平上通过PEDV感染IPEC-J2细胞检测这12个候选基因的表达变化,结果发现在感染PEDV病毒后这些候选基因没有发生显著的差异表达,进一步证实这些候选基因可能并不直接参与仔猪抗PEDV感染的免疫应答,而是通过维持或提高仔猪肠道屏障的完整性来抵抗PEDV感染。
[博士论文] 刘颖
动物遗传育种与繁殖 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:肠道微生物菌群变化和免疫应答在动物机体生长、发育过程中发挥重要的作用,为了系统地揭示猪从初生到成年阶段肠道微生物变化以及免疫调控的遗传基础和分子机制,本研究以中国地方代表性品种—梅山猪为试验对象,一方面利用16S rDNA测序技术,并结合OTU分析、物种分类和丰度分析、Alpha多样性分析、Beta多样性分析等一系列生物信息学技术分析了梅山猪在8个不同发育阶段(初生1日龄、7日龄、14日龄、21日龄、28日龄、35日龄、120日龄和180日龄)肠道6个区段(十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠)肠道微生物的分布情况;另一方面,利用长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)测序分析了以上不同日龄脾脏组织中lncRNA和mRNA表达水平,并通过加权基因共表达网络(Weighted Gene Co-Expression Network Analysis,WGCNA)筛选重要的lncRNA、免疫调控通路以及功能基因,在此基础上利用qPCR分析免疫调控通路中相关基因在不同生长发育阶段梅山猪免疫和肠道组织中的表达水平,其次结合cis和trans机制预测其lncRNA靶基因,并结合RNA immunoprecipitation(RIP)-PCR验证lncRNA与靶基因的相互作用关系,确定lncRNA调控的重要靶基因,进而利用焦磷酸测序技术分析了关键靶基因启动子甲基化修饰对其发育性表达水平的调控作用。主要结果如下:
  1.梅山猪不同发育时期肠道微生物变化分析
  (1)8个不同发育阶段肠道6个区段240个肠道消化物样本共检测到4465个OTU,肠道6个区段按照微生物组成结构和丰度可分为3个部分,分别为十二指肠和空肠组成一类,回肠单独一类,盲肠、结肠和直肠为一类。在十二指肠—空肠段乳酸杆菌(Lactobacillus)和拟杆菌(Bacteroides)为主要优势菌;在回肠中梭菌属(Fusobacterium)和埃希氏杆菌属(Escherichia)为优势菌;在盲肠—结肠段普氏菌属(Prevotella)含量最多。
  (2)仔猪出生第1天时,6个肠段中微生物组成十分相似,之后随着时间各自演变,肠道菌群在不同肠段表现出明显的时间和空间特异性,但是总体来说大肠(盲肠、结肠和直肠)肠道微生物的变化规律比小肠(十二指肠、空肠和回肠)更为明显。
  (3)追踪一些和采食以及免疫相关的菌种发现,在不同肠段中它们随时间变化巨大,表明日粮结构改变和免疫调节是影响肠道微生物菌群自出生开始变化最重要的两个因素。此外,不同肠段微生物组成不同,也暗示着不同肠段的消化功能不同。
  2.梅山猪不同发育时期免疫调控分子机制分析
  (1)8个不同发育阶段脾脏组织lncRNA测序总共获得251.8Gb clean reads,基于CNCI分析、CPC分析、PFAM分析和PLEK分析,筛选获得3200个候选lncRNAs;不同日龄间脾脏组织中差异表达lncRNA和mRNA分析显示,以1日龄为参照,7日龄、14日龄、21日龄、28日龄、35日龄、120日龄、180日龄分别与其存在123、53、146、35、129、310、276个差异lncRNA,存在2726、1067、2360、1015、2108、4860、4598个差异mRNA;WGCNA分析显示,lncRNA和mRNA转录本被划分成为13个模块,其中purple和grey模板与时间点存在显著的相关性。模块中基因参与KEGG通路富集分析显示,purple模块中免疫通路NF-kappa B signaling pathway高度富集,其中包括TLR4、IL-1β、IFN-α等免疫调控基因,以及TCONS_00112081、TCONS_00028679等2个关键lncRNA。靶基因预测发现TCONS_00028679下游10kb内存在一个免疫相关靶基因TNF-α,RIP-PCR验证发现,TCONS_00028679与TNF-α存在相互作用。
  (2)不同发育时期组织表达检测显示,TLR4、TNF-α、IL-1β和IFN-α基因在不同发育阶段梅山猪的免疫组织(脾、胸腺、淋巴)和肠道组织(十二指肠、空肠和回肠)中均有表达,其中TLR4基因在脾脏组织中表达水平较高,在其他组织中的表达水平较低,在7和35日龄阶段脾脏和淋巴组织TLR4表达水平明显低于其他不同日龄,在21和35日龄阶段肠道组织TLR4表达水平明显低于其他不同日龄。IFN-α、IL-1β和TNF-α基因在免疫和肠道组织中的表达水平变化随发育阶段的变化较大,IFN-α基因在21、120和180日龄的表达水平明显高于其他阶段,IL-1β在120和180日龄的肠道组织中的表达水平明显高于其他阶段,TNF-α在21和180日龄表达水平明显高于其他阶段;聚类分析发现,免疫组织(脾、胸腺、淋巴)中TLR4、TNF-α、IL-1β和IFN-α基因表达水平比较接近,肠道组织(十二指肠、空肠和回肠)中4种基因表达水平比较接近;表达水平相关性分析显示,TLR4、TNF-α、IL-1β和IFN-α在免疫和肠道组织中表达水平间均存在显著的相关性,表明TLR4、TNF-α、IL-1β和IFN-α在免疫调控中发挥了协同作用。
  (3)猪TNF-α基因启动子区存在1个CpG区域(417bp),甲基化检测发现,随着不同日龄增长,TNF-α基因启动子区甲基化水平表现为上升,其中35日龄梅山猪脾脏组织甲基化水平极显著高于其它不同日龄,其次21日龄和28日龄甲基化水平也较高;平均甲基化水平和mRNA表达的相关系数为-0.775,P值为4.87E-07,结合双荧光素酶验证,表明TNF-α基因启动子甲基化水平与mRNA表达水平表现为极显著负相关,其中4个CpG位点(CpG-6、CpG-8、CpG-11和CpG-15)均与mRNA表达水平呈显著负相关,并位于ELK4、Sp1、TFAP2B等转录因子结合域内。
  本研究利用16S rDNA和lncRNA测序揭示了梅山猪从初生到成年阶段肠道微生物变化以及免疫调控的遗传基础和分子机制,不仅构建了一个完整的梅山猪肠道微生物数据库,而且筛选出TLR4、IL-1β、IFN-α等功能基因,非编码RNA—TCONS_00028679及其靶基因TNF-α在梅山猪生长发育过程中发挥重要的免疫调控作用,为今后从肠道微生物和免疫调控层面来科学合理设计猪抗病育种策略奠定基础和提供理论依据。
[硕士论文] 高雯
动物遗传育种与繁殖 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:湖羊是我国著名的多羔绵羊品种兼羔皮用绵羊品种。近年来,由于人们对湖羊肉用性能的重视,以及产区外部分外来品种的引入,导致湖羊羔皮品质逐渐下降。毛囊是由20多种细胞构成的皮肤附属器官,其中毛乳头细胞在毛囊生长发育过程中起着关键作用。microRNAs(miRNAs)是一类长约18-24nt,在转录后水平介导基因沉默的短单链非编码RNA。研究表明,大量miRNAs参与毛囊的发生发育和周期性生长。本研究以湖羊为研究对象,通过机械分离法和酶消化法成功培养了湖羊羔皮毛囊毛乳头细胞,并在课题组前期基因芯片和高通量测序结果的基础上,以在湖羊不同花纹羔皮毛囊中呈现差异表达的BMP7基因为研究线索,利用生物信息学软件预测并筛选出靶向BMP7的miRNAs,并与本课题组前期进行的湖羊不同花纹羔皮毛囊的miRNA测序数据取交集得到miR-148a和miR-10a,通过双荧光素酶报告基因检测、Western Blot和RT-qPCR技术验证其靶向关系,最后利用CCK-8和RT-qPCR检测miR-148a和miR-10a对湖羊毛乳头细胞增殖以及与毛囊相关信号通路(TGF-β/Smads通路)中部分基因(Smad1、Smad2、Smad3、Smad4、Smad5、Smad6、TGF-β1)的影响,以初步探讨miR-148a和miR-10a在毛囊发育中的调控作用。主要研究结果如下:
  1.体外分离并培养湖羊羔皮毛囊的毛乳头细胞,发现该细胞具备典型的凝集生长特征,经细胞组织化学染色发现细胞对PAS、AB-PAS以及甲苯胺蓝染色均呈阳性,且对甲苯胺蓝具有异染反应,经间接免疫荧光检测发现毛乳头细胞的特异性标记物α-SMA呈阳性表达,表明成功分离并获得湖羊毛乳头细胞,为后续在细胞水平进行基因功能验证奠定基础。
  2.双荧光素酶报告基因检测结果显示miR-148a和miR-10a可显著降低BMP7荧光素酶报告基因(WT)活性,初步证明BMP7为miR-148a和miR-10a的靶基因;为进一步验证miR-148a和miR-10a与BMP7的靶作用关系,利用Western Blot和RT-qPCR技术分别在蛋白水平和mRNA水平进行验证,发现miR-148a和miR-10a均通过促进BMP7mRNA的降解,进而降低BMP7蛋白表达水平,证实BMP7为miR-148a和miR-10a的靶基因。
  3.利用CCK-8检测过表达及抑制细胞内源性miR-148a和miR-10a后毛乳头细胞的增殖情况,结果显示miR-148a和miR-10a对湖羊毛乳头细胞的增殖起抑制作用。
  4.在湖羊毛乳头细胞中过表达miR-148a后,Smad1至Smad6基因表达上调,其中Smad3和Smad6的表达量显著高于对照组(P<0.05),Smad4和Smad5的表达量极显著高于对照组(P<0.01),然而TGF-β1的表达量却低于对照组,但差异不显著;抑制细胞内源性miR-148a后,Smad1至Smad6以及TGF-β1基因的表达量均低于对照组,其中Smad3和Smad4基因的表达水平显著低于对照组(P<0.05),而TGF-β1的的表达水平低于对照组水平(P<0.01)。过表达miR-10a后,Smad1至Smad6基因的表达量低于对照组,其中Smad2基因的表达量显著低于对照组(P<0.05),Smad1、Smad4及Smad5基因的表达水平极显著低于对照组水平(P<0.01),而TGF-β1的表达量显著上调(P<0.05);抑制细胞内源性miR-10a后,Smad1至Smad6,以及TGF-β1的表达水平低于对照组水平,其中Sm ad1表达显著下调(P<0.05),Smad2表达极显著下调(P<0.01)。以上结果表明,在湖羊毛乳头细胞中过表达或抑制miR-148a和miR-10a能够影响与毛囊生长发育相关的TGF-β/Smads通路中基因的表达。
[硕士论文] 穆琳
特种经济动物饲养 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:胱氨酸/谷氨酸转运蛋白(Solute carrier family7member11,Slc7a11)属于溶质转运第7家族的第11个成员,编码胱氨酸/谷氨酸xCT运载体,控制褐黑色素合成从而影响真黑色素与总黑色素的比例,改变动物的毛色和肤色。课题组前期研究中,发现Slc7a11基因在不同毛色獭兔皮肤中表达存在显著差异,推测其可能参与到獭兔皮毛色素沉积过程。为了进一步探究Slc7a11在色素沉积中的分子调控机制,本研究分离并鉴定了兔黑色素细胞,利用荧光定量及Wes全自动蛋白质印迹定量分析等技术手段分析了Slc7a11在獭兔不同毛色皮肤中的表达规律,并通过双荧光素酶和EMSA(Electrophoretic Mobility Shift Assays)实验验证了转录因子POU2F1又名Oct-1(Octamer Transcription factor-1)对Slc7a11基因启动子的转录激活有重要的调控作用。该研究结果为拓展Slc7a11在獭兔皮毛黑色素沉积中的功能,深入解析被毛色素沉积机理提供研究基础。
  主要研究结果如下:
  1、首次分离并鉴定了兔黑色素细胞,为本研究的开展提供实验素材。采集黑色獭兔背部皮肤,利用两步酶消化法分离兔黑色素细胞,发现其呈现特有的两极树突状,且具有特殊的生长晕、折光性强。Real-time-PCR检测黑色素细胞标志基因MITF、TYR、TYRP1,发现其均有表达。利用左旋多巴(L-DOPA)染色方法对分离的黑色素细胞进行染色,发现细胞中呈现棕色或者黑色颗粒。进行S-100、TYR、TYRP1的免疫细胞化学染色,发现3种标记物在黑色素细胞内均有表达,与阴性对照相比,S-100染色显示胞质及树突呈棕色阳性着色,TYR染色细胞核内为棕黄色,TYRP1呈现浅棕着色,均为阳性,说明成功分离和鉴定了兔黑色素细胞。
  2、利用RACE和克隆技术获得Slc7a11cDNA序列,包括31bp5'UTR、1509bp的开放阅读框(ORF)和132bp3'UTRs(含poly[A]tail),提交GenBank(登录号为KY971639.1)。通过免疫组织化学法分析Slc7a11蛋白在獭兔皮肤组织中的定位,结果显示Slc7a11在表皮、毛囊毛球部、毛根鞘均有蓝色阳性反应,着色深浅不等,表达部位较广泛。利用Real-time qPCR检测Slc7a11基因在不同毛色獭兔皮毛中的mRNA表达水平,发现其在蛋白黄色被毛皮肤中的表达量最高,是白色皮肤的3.7倍;利用Wes系统检测Slc7a11蛋白在各毛色皮肤组织中均有表达,但蛋白青色与蛋白黄色皮肤组织中的表达量高于其他毛色,提示Slc7a11与獭兔毛色形成相关。
  3、为进一步分析Slc7a11基因在黑色素生成过程中的作用机理,通过siRNA干扰与过表达技术,转染兔黑色素细胞,利用荧光定量PCR及Wes检测MITF、TYR等毛色相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果发现Slc7a11过表达或抑制时,色素生成密切相关的基因的mRNA和蛋白表达量也显著变化,mRNA和蛋白表达量呈显著正相关(P<0.05),与Slc7a11表达变化情况一致。通过酶标仪检测转染之后的黑色素细胞黑色素含量,发现Slc7a11过表达/抑制时,与对照组相比,黑色素含量增加/降低。由此得出,Slc7a11可影响TYR、MITF等色素沉积相关基因的表达,进而影响黑色素生成。
  4、为了进一步揭示Slc7a11基因的调控机制,克隆了Slc7a11起始密码子前2499bp的启动子序列,首先通过预测分析Slc7a11启动子区域内潜在的转录因子,并据此构建了10个系列缺失载体,转染RAB-9细胞,利用双荧光素酶报告系统检测发现Slc7a11启动子的核心区域为-769~-619bp,经预测发现该区域存在转录因子POU2F1结合位点。利用定点突变技术,将该结合位点进行有效突变,发现突变后Slc7a11启动子活性极显著上升(P<0.01),说明POU2F1对Slc7a11启动子活性有抑制作用。进一步利用竞争性EMSA实验,确认POU2F1蛋白可结合于Slc7a11启动子-713~-703bp区域调控Slc7a11启动子活性。
[硕士论文] 赵倩明
动物营养与饲料科学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:采用瘤胃尼龙袋法和饲养实验相结合的方法,研究了玉米胚芽粕和米糠在奶牛中的瘤胃降解特性及在泌乳奶牛日粮中添加玉米胚芽粕和米糠对奶牛生产性能、瘤胃发酵和血清生化指标的影响,试验方法与结果如下:
  试验一研究了玉米胚芽粕和米糠在泌乳奶牛瘤胃中的降解特性。选用4头安装永久瘤胃瘘管的泌乳中期荷斯坦奶牛,采用尼龙袋法评定玉米胚芽粕和米糠的干物质(DM)、粗蛋白(CP)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)的瘤胃降解率和有效降解率。结果表明:玉米胚芽粕的DM、CP、NDF和ADF的有效降解率分别为30.47%、31.87%、27.64%和20.70%;米糠的DM、CP、NDF和ADF的有效降解率分别为53.85%、55.61%、53.45%和52.86%。
  试验二研究了泌乳奶牛日粮中添加玉米胚芽粕和米糠对奶牛生产性能的影响。本试验选用24头胎次、产奶量及泌乳天数相近的健康荷斯坦奶牛,按完全随机区组设计分为4组,以NRC(2001)为参照依据,以奶牛饲粮干物质基础上添加0%玉米胚芽粕和0%米糠为对照组,以添加6.80%玉米胚芽粕和3.40%米糠、13.30%玉米胚芽粕和6.65%米糠、19.98%玉米胚芽粕和9.98%米糠为试验组,即试验A组、B组和C组。每天3次饲喂(7∶30、14∶30、20∶30),试验期共56天,其中预试期14天,正试期42天。结果表明:泌乳奶牛日粮中添加6.80%玉米胚芽粕和3.40%米糠组、13.30%玉米胚芽粕和6.65%米糠组极显著提高奶牛的DMI(P<0.01),明显提高产奶量和4%标准乳产量(P<0.1);泌乳奶牛日粮中添加玉米胚芽粕和米糠对奶牛饲料效率、乳脂率、乳糖率、乳总固形物、乳尿素氮和各养分表观消化率均无显著影响(P>0.1);添加6.80%玉米胚芽粕和3.40%米糠组经济效益最佳,每头牛每天净收入提高12.61元。
  试验三研究了在泌乳奶牛日粮中添加玉米胚芽粕和米糠对奶牛瘤胃发酵及微生物菌群的影响。试验设计同试验二,晨饲后2h采集奶牛瘤胃液。结果表明:泌乳奶牛日粮中添加玉米胚芽粕和米糠对瘤胃pH值、氨态氮(NH3-N)、微生物蛋白(MCP)和挥发性脂肪酸无显著差异(P>0.05);添加6.80%玉米胚芽粕和3.40%米糠组提高了黄色瘤胃球菌和溶纤维丁酸弧菌基因相对表达量(P<0.1)。
  试验四研究了泌乳奶牛日粮中添加玉米胚芽粕和米糠对奶牛血清生化指标的影响。试验设计同试验二,晨饲后2h尾静脉采集血样。结果表明:泌乳奶牛日粮中添加6.80%玉米胚芽粕和3.40%米糠组能够降低血清ALP、NEFA和BHBA浓度(P<0.05),提高血清CHO和HDL浓度(P<0.05),对其他血清生化指标无显著性影响(P>0.1)。
  结论:在泌乳中期奶牛日粮中添加6.80%玉米胚芽粕和3.40%米糠最有利于降低饲料成本,提高奶牛产奶量,提高经济效益。
[硕士论文] 郭海燕
农业推广(养殖) 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:长江三角洲白山羊是国内外唯一以生产优质笔料毛为特征的肉、皮、毛兼用型山羊品种,其所生产的优质笔料毛是制作高档毛笔的独特原料。在生产加工中,笔料毛的分类主要是凭经验鉴别,且各品种笔料毛的物理参数等数据不全面,因此行业内急需一套笔料毛的加工分类标准。本试验从笔料毛毛纤维的长度、细度、强度、以及鳞片层等方面着手,通过对笔料毛各个品种的物理性状进行详细的数据统计分析,从而为今后笔料毛的分类及相关标准的建立提供一定的数据支撑及科学理论依据。
  综合过去对长江三角洲白山羊优质笔料毛性状的研究情况来看,其研究内容主要是集中在宏观的研究领域,分子研究尚不深入,本课题组前期的研究结果表明CMTM3和DUSP1基因参与调控了优质笔料毛性状形成的过程。本试验使用BSP方法,研究了CMTM3与DUSP1基因的甲基化状况与笔料毛性状之间的关系。
  本试验得到以下结论:
  1、现在的笔料毛市场分类情况为一类毛:羊尾、羊须、上爪/粗爪峰;二类毛:白尖峰、细长峰、老光峰、脚爪峰;三类毛:中光峰、长光峰、短光峰、细光锋、粗光峰。在笔料毛中,一类毛为有髓毛,细度范围变化较大,一般在50~120μm之间,鳞片为非环状鳞片;二类毛为两型毛,细度在80~120μm之间,鳞片多为长方形;三类毛为无髓毛,细度在70~90μm之间,鳞片多为环状或鱼鳞状;
  2、在长江三角洲白山羊笔料毛中,DUSP1与CMTM3基因在非优质笔料毛中的表达量高于优质笔料毛;DUSP1基因-2000~+200位置含有1个CpG岛,但其在优质与非优质笔料毛中都未发生甲基化,CMTM3基因-2000~+200位置含有2个CpG岛,且其甲基化程度在优质笔料毛中高于非优质笔料毛;
  3、从本试验的结果,推测DUSP1基因不是通过甲基化的方式调节笔料毛性状的形成,而是通过基因表达量的改变从而影响上下游基因表达量的改变,进而间接影响笔料毛性状的形成;
  4、雄激素检测结果表明,优质笔料毛组雄激素水平显著高于非优质笔料毛组、母羊组以及去势公羊组;
  5、CMTM3基因通过甲基化抑制了基因在优质笔料毛中的表达,从而使AR活性及雄激素水平升高,而较高水平的雄激素有利于优质笔料毛性状的形成。
[硕士论文] 经语佳
动物营养与饲料科学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:生物节律普遍存在于机体细胞中且对细胞周期、增殖、凋亡均存在一定的调控作用。另外,有研究证实,生物钟基因和脂质合成之间有密切联系,但是,其具体的调控作用机理尚不明确。因此,本研究通过沉默生钟基因PER2的表达来探究PER2基因对细胞周期调控因子及细胞增殖、凋亡的调控作用,以及生物节律与奶牛乳腺上皮细胞乳脂肪合成的关系及其分子调控机制。
  试验一、奶牛乳腺上皮细胞PER2基因沉默效果及其对节律基因表达的影响
  本试验选择奶牛作为试验动物,采用胶原酶消化法对奶牛乳腺组织进行分离培养,得到的原代乳腺上皮细胞可为后续试验提供材料。本试验共构建三组siRNA干扰序列(siRNA-PER2-a/b/c)对奶牛乳腺上皮细胞进行转染,用Real-time PCR技术对不同序列的干扰片段及其在5个时间点的PER2mRNA表达量作为评价转染效率的依据,并筛选出沉默效果最佳的干扰片段和转染时间点,以此作为后续沉默处理的条件。同时,用Real-time PCR对其它生物钟相关基因的mRNA水平进行测定。结果显示,筛选出干扰片段siRNA-PER2-b在36h沉默效果最佳,PER2基因的沉默效率达到84.7%。另外,对生物钟网络基因的测定结果发现,PER2沉默显著下调了PER1、CLOCK、CRY2、BAML1、NR1D1和Timeless基因的mRNA表达量(P<0.05),但对CRY1和RORA的mRNA表达量的影响并不显著(P>0.05)。因此,PER2基因沉默在一定程度上千扰了奶牛乳腺上皮细胞的生物钟节律。
  试验二、节律基因PER2沉默对奶牛乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响
  本试验通过PER2干扰片段转染奶牛乳腺上皮细胞来比较PER2沉默对细胞增殖和凋亡的影响。用CCK8测定细胞增殖活性,用流式细胞仪检测各组细胞凋亡和细胞周期分布情况,,用RT-PCR检测各组细胞中细胞周期相关基因和凋亡通路基因的mRNA表达。结果显示,cck8测定细胞增殖活力结果并不显著(P>0.05)。流式细胞术测定细胞周期结果显示,PER2基因沉默后S期细胞数显著减少(P<0.05),G0/G1期细胞数目显著增加(P<0.05),细胞增殖指数显著下降(P<0.05)。此外,PER2基因沉默能够显著下调细胞周期基因CDK1、CDK2、CDK4、CyclinB1、CyclinD1、Cdc25B和C-cym的mRNA表达水平(P<0.05),对CDK6没有显著影响(P>0.05)。PER2沉默对细胞凋亡指数的影响不显著(P>0.05),但在细胞凋亡相关通路中,PER2沉默显著上调了Caspase8基因的mRNA表达(P<0.05),对于Caspase3和P53影响不显著(P>0.05)。
  试验三、节律基因PER2沉默对奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成的影响
  本试验旨在探究PER2沉默对脂滴、甘油三酯和乳脂代谢相关基因的影响。用油红O染色进行脂滴合成和脂滴光密度检测,用甘油三酯酶法测定乳腺上皮细胞甘油三酯含量,RT-PCR检测脂质代谢相关基因的mRNA表达。结果显示,PER2基因沉默显著降低了乳腺上皮细胞脂滴的积累(P<0.05),另外,PER2基因沉默显著降低了细胞甘油三酯含量(P<0.05)。同时,PER2基因沉默可以显著降低转录调节因子SREBF1和PPARG的mRNA表达量(P<0.05),并能够显著下调脂肪酸从头合成相关基因(ACC、ACACA、FAS)的表达(P<0.05),显著下调脂肪酸去饱和基因(SCD),甘油三酯合成基因(LPIN1、SCD),脂滴分泌基因(LPIN1)的mRNA表达(P<0.05),但对脂肪酸的摄取和转运基因(LPL)表达没有显著影响(P<0.05)。
  综上,1)PER2沉默能够下调部分生物钟相关因子和周期调控基因的mRNA表达,并主要通过抑制CyclinD1与CDK4的表达阻滞细胞从G0/G1期向S期转换,抑制有丝分裂的进行。2)PER2基因沉默显著抑制了细胞增殖指数,但对细胞凋亡指数的影响不显著,但在细胞凋亡相关通路中,PER2沉默显著上调了Caspase8基因的mRNA表达。3)PER2基因沉默可以通过抑制转录调节因子SREBF1和PPARG的表达来调控脂肪酸的从头合成、脂肪酸的去饱和、甘油三酯的生成以及脂滴的分泌。
[硕士论文] 赵斌
养殖 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:目前中国现有家兔品种很多,但因缺乏优良家兔种质资源遗传评价的技术标准,出现了优良品种保种效果欠佳等系列问题。微卫星(SSR)标记在不同家兔群体遗传结构中已经有一些应用,但在标记数选用上尚存在着较大的随机性,且样本容量大小缺乏明确的标准。为了有效地保护家兔的种质资源,开发、完善种质评价的各种遗传指标,本研究选取45个SSR标记,通过设立样本量和标记数的不同梯度,分析对群体遗传参数的影响,建立了家兔种质资源遗传评价方法,并以不同世代的家兔模型,利用该评价方法检测保种效果。该方法不仅为家兔优良种质的评估与建立提供一种快速、有效的参考,还为开发家兔优良种质评价提供技术和标准,促进中国家兔产业健康稳定、可持续发展。主要研究结果如下:
  1、利用45个SSR标记分析新西兰白兔种群的遗传多样性,寻找SSR标记最佳组合。在样本量和标记数上设置不同梯度,分析各种遗传参数(平均有效等位基因数Ae、平均期望杂合度Exp He、平均多态信息含量PIC)变化趋势。首先对45个SSR位点进行哈迪-温伯格平衡检验,结果发现其中显著或极显著偏离平衡的位点有33个;通过连锁不平衡方法计算有效群体大小为56.5。进一步分析得出Ae、Exp He、PIC分别位于1.798-1.960、0.380-0.451、0.310-0.382,在样本容量60以上且标记数目23以上时趋于稳定,Ae、Exp He、PIC分别为1.955、0.450、0.381。从节约资金、提高效率角度,建议在利用SSR标记对家兔进行有效遗传评价时,样本量在60以上且标记数在23以上时较为合适。并通过23个位点的30个组合比较分析,确定了23个位点的最佳组合方式,且此23个标记位点基本分布在不同染色体上。
  2、对比分析利用45个和23个SSR标记对新西兰白兔和青紫蓝獭兔遗传多样性的监测效果,结果显示新西兰白兔45个SSR标记下等位基因数(A)、Ae、Exp He、观测杂合度(Obs He)、PIC分别为3.333、2.093、0.473、0.504、0.400;23个SSR标记下A、Ae、ExpHe、Obs He、PIC分别为3.565、2.185、0.480、0.513、0.412。新西兰白兔45个和23个SSR标记位点各遗传多样性参数均值较为接近,均不显著(P>0。05);同样,青紫蓝獭兔45个和23个SSR标记位点各遗传多样性参数均值较为接近,均不显著(P>0.05)。因此,无论从建系的肉兔品种新西兰白兔,还是从间隔较远的皮用青紫蓝獭兔均证实了利用23个位点建立的家兔遗传评价方法可行。
  3、利用最佳SSR标记位点组合评价青紫蓝獭兔3个世代间的保种效果。结果显示青紫蓝獭兔第一世代、第四世代、第五世代的A分别为3.174、3.087、3.174差异最小,三个世代的Ae、Exp He、Obs He、PIC差异较大;而青紫蓝獭兔3个世代间各遗传多样性参数差异均不显著(P>0.05),说明余姚欣农种兔场有效的保存了青紫蓝獭兔的种质遗传特性,同时,也验证了建立的遗传评价方法可用于评价家兔种质资源的保种效果。
[硕士论文] 黄正旺
养殖 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:本论文使用体外模拟消化法和动物试验法评定不同谷物及其副产物饲料原料对生长猪饲粮养分和能量的消化率,研究实验室前期筛选的外源酶制剂对谷物及其副产物饲粮养分和能量消化率的影响,探讨体外法评定外源酶制剂效价的可行性,为酶制剂体外快速评估提供方法参考,也为谷物副产物的合理利用提供数据支撑。
  研究一不同谷物及其副产物饲料原料对生长猪饲粮养分和能量消化率的影响研究。在玉米—豆粕型基础饲粮中分别添加19.3%的小麦、麦麸、大米和米糠饲料原料。首先利用体外法分别模拟生长猪“胃——小肠”、“胃——小肠——大肠”消化过程,测定饲粮干物质和能量的体外回肠消化率、体外全肠消化率和体外后肠消化率。采用5×2不完全拉丁方设计,将15头回肠末端安装“T型”瘘管的荷术猪分为5组,分别饲喂试验饲粮,测定饲粮养分的表观回肠消化率、表观全肠消化率和后肠发酵率。并对体外法和动物试验法测定结果进行相关性分析。
  结果表明:(1)不同谷物及其副产物饲粮干物质(DM)体外回肠和全肠消化率不同,大米饲粮>小麦饲粮>基础饲粮>米糠饲粮>麦麸饲粮(P<0.05);大米饲粮能量(GE)体外回肠消化率最高,小麦饲粮次之,基础饲粮再次,米糠和麦麸饲粮最低(P<0.05);大米饲粮能量全肠体外消化率和体外消化能最高,小麦饲粮和基础饲粮次之,米糠饲粮再次,麦麸饲粮最低(P<0.05)。(2)小麦饲粮和大米饲粮干物质、能量回肠表观消化率(AID)显著高于麦麸饲粮和米糠饲粮(P<0.01),基础饲粮干物质AID显著高于麦麸饲粮(P<0.01);不同谷物及其副产物干物质全肠表观消化率(ATTD)不同,大米饲粮最高,基础饲粮和小麦饲粮次之,米糠饲粮再次,麦麸饲粮最低(P<0.01);基础饲粮和大米饲粮能量ATTD显著高于麦麸饲粮和米糠饲粮(P<0.01),小麦饲粮显著高于米糠饲粮(P<0.01);大米饲粮的消化能(DE)显著高于小麦饲粮(P<0.01),麦麸饲粮显著低于其他四个饲粮(P<0.01);(3)体外法和动物试验法在测定谷物及其副产物饲粮干物质AID(R2=0.92)、能量AID(R2=0.94),干物质ATTD(R2=0.91)及DE(R2=0.85)时具有显著的相关性(P<0.05)。
  研究二外源酶制剂对谷物及其副产物饲粮养分和能量消化率的影响研究。在研究一饲粮中分别添加复合酶制剂(木聚糖酶5g/kg、淀粉酶3g/kg、植酸酶0.5g/kg),分别利用体外法和动物试验法研究外源酶制剂对谷物及其副产物饲粮养分和能量消化率的影响,并相关性分析两种方法评价酶制剂的效果。
  结果表明:(1)添加外源酶后,谷物及其副产物饲粮DM体外回肠和全肠消化率不同,大米饲粮>小麦饲粮>基础饲粮>米糠饲粮>麦麸饲粮(P<0.01);大米饲粮GE体外回肠消化率最高,小麦饲粮和基础饲粮次之,米糠饲粮和麦麸饲粮最低(P<0.01);大米饲粮GE体外全肠消化率最高,小麦饲粮次之,基础饲粮再次,米糠和麦麸饲粮最低(P<0.01);大米和小麦饲粮体外DE最高,基础饲粮次之,米糠饲粮再次,麦麸饲粮最低(P<0.01)。(2)添加外源酶后,大米饲粮组干物质AID显著高于麦麸和米糠饲粮(P<0.01),小麦饲粮显著高于麦麸饲粮(P<0.01);谷物及其副产物干物质ATTD不同,大米饲粮最高,小麦饲粮和基础饲粮次之,米糠饲粮再次,麦麸饲粮最低(P<0.01);大米饲粮能量ATTD显著高于基础饲粮、麦麸饲粮和米糠饲粮(P<0.01),小麦饲粮和基础饲粮都显著高于麦麸和米糠饲粮(P<0.01);谷物及其副产物DE不同,大米饲粮最高,米糠饲粮、小麦饲粮和基础饲粮次之,麦麸饲粮最低(P<0.01)。(3)体外法和动物试验法在测定加酶谷物及其副产物饲粮干物质(R2=0.89)和能量(R2=0.86)的AID和干物质(R2=0.96)和能量(R2=0.98)的ATTD时具有显著的相关性(P<0.05)。
  综上所述,高精确度和低变异度的体外法可用于快速评定谷物及其副产物饲粮效价和外源酶制剂作用。
[硕士论文] 魏涛
农业推广(养殖) 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:本论文首先评估杏鲍菇菌糠的饲料安全性;然后优化杏鲍菇菌糠的发酵条件、研究发酵菌糠的营养水平变化以及其饲喂安全性,最后通过饲养试验,研究杏鲍菇菌糠及发酵杏鲍菇菌糠代替30%的精料对肉牛生产性能、健康情况、经济效益的影响。本文共分为五个部分。
  试验一:测定杏鲍菇菌糠的饲料安全性:重金属、霉菌毒素、抗营养因子、有害微生物、农药残留水平。结果表明:各测定项目指标均符合中国饲料卫生标准规定。
  试验二:优化杏鲍菇菌糠的发酵条件:考察不同发酵剂组合(乳酸菌、乳酸菌-酵母菌、乳酸菌-酵母菌-枯草芽孢杆菌)及不同水分含量(50%、60%、70%)对发酵菌糠的有氧稳定性、营养水平的影响,并测定最优发酵组的霉菌毒素水平。结果表明:选用乳酸菌-酵母菌-枯草芽孢杆菌复合发酵剂进行发酵时,有氧稳定性和营养水平指标最优,水分含量为60%和50%时有氧稳定性和营养水平分别最优,且发酵杏鲍菇菌糠中的霉菌毒素含量符合中国饲料卫生标准。
  试验三:研究杏鲍菇菌糠和发酵杏鲍菇菌糠分别代替30%精料且对肉牛生产性能、经济效益、血液生理和生化指标的影响:选取20头体重相似的6~7月龄雄性日本和牛三代牛,按照任意两组间体重相对偏差<5%且差异不显著(P>0.05)的原则,分为三组:第一组饲喂含30%发酵杏鲍菇菌糠的精料(n=7);第二组饲喂含30%杏鲍菇菌糠的精料(n=7);第三组饲喂牛场原基础日粮(n=6)。预饲期为7天,试验期为70天。结果表明:用发酵杏鲍菇菌糠和杏鲍菇菌糠分别代替30%精料可以明显提高经济效益;对肉牛的血液生理生化指标不存在负面影响,同时发酵杏鲍菇菌糠可提高肉牛的免疫水平,TP、ALB、GLO分别较对照组高出8.00%、4.95%和11.00%。
  试验四:在粗饲料自由采食情况下,考察杏鲍菇菌糠和发酵杏鲍菇菌糠分别代替30%精料对肉牛日增重和经济效益的影响,结果表明采用杏鲍菇菌糠代替30%精料结合粗饲料自由采食的饲喂方式时,生产水平和经济效益最优。
[硕士论文] 隋雁南
动物营养与饲料科学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:本试验研究了添加不同水平碳酸钴(CoCO3,cobalt carbonate)对泌乳奶牛瘤胃发酵、生产性能及血清生化指标的影响。本试验选择36头体况、胎次、泌乳天数及产奶量相近的健康荷斯坦泌乳奶牛,随机分为6组,每组6头,分别在日粮中以干物质基础添加碳酸钴0(对照组)、6(0.5倍)、12(推荐剂量组)、30(2.5倍)、60(5倍)和120mg(10倍),预试期14d,正试期42d。试验结果如下:
  1.日粮中添加不同水平碳酸钴对泌乳奶牛生产性能及各养分表观消化率的影响。结果表明:(1)日粮中添加不同水平的碳酸钴对泌乳奶牛采食量(DMI)无显著性影响(P>0.10);60mg组产奶量呈现下降趋势。(2)碳酸钴对乳脂率、乳总固形物和乳尿素氮无显著性影响(P>0.10);正试期第14d和第28d时,30mg组乳蛋白率和乳糖率显著高于对照组(P<0.05),60mg组乳糖率和乳蛋白率均处于下降趋势,且在第42d时,60mg组乳糖率显著低于其他各处理组(P<0.05)。(3)14~42d时,在泌乳奶牛日粮中添加不同水平的碳酸钴对乳中维生素B12(VB12)含量无显著性影响(P>0.10)。(4)EE和NDF的表观消化率不受日粮中碳酸钴添加水平的影响(P>0.10);添加30mg碳酸钴水平组的CP和ADF的表观消化率显著高于对照组(P<0.05),且ADF的表观消化率显著高于其他各处理组(P<0.05)。
  2.日粮中添加不同水平碳酸钴对泌乳奶牛瘤胃发酵及瘤胃细菌区系的影响。结果表明:(1)不同水平碳酸钴对瘤胃液pH值、氨态氮(NH3-N)和总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度无显著性影响(P>0.10);丙酸浓度显著高于对照组(P<0.05);微生物蛋白(MCP)含量随碳酸钴添加量的增加而增加,30mg和60mg组显著高于对照组(P<0.05)。(2)12~60mg组瘤胃液维生素B12(VB12)含量显著高于对照组和6mg组(P<0.05)。(3)日粮中添加不同水平碳酸钴对泌乳奶牛瘤胃液Chao1、ACE、Shannon指数无显著影响(P>0.10);门水平上,Bacteroidetes、Proteobacteria、Firmicutes为优势菌群;属水平上,Prevotella、Succinivibrionaceae为优势菌属。
  3.日粮中添加不同水平碳酸钴对泌乳奶牛血清生化指标的影响。结果表明:(1)日粮中添加不同水平的碳酸钴对谷氨酰胺基转肽酶(GGT)浓度无显著性影响(P>0.10);6mg组和30mg组谷丙转氨酶(ALT)浓度逐渐降低,谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)浓度逐渐升高,碱性磷酸酶(ALP)浓度升高后趋于稳定。(2)不同水平碳酸钴对总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、肌酐(CREA)尿素氮(BUN)、尿酸(UA)浓度和A/G无显著性影响(P>0.10)。(3)不同水平的碳酸钴对总胆固醇(CHO)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)和非酯化脂肪酸(NEFA)含量均无显著性影响(P>0.10),但在14~42d时,各组NEFA浓度逐渐增加,其中60mg组NEFA浓度逐渐增加到最大值为1046.18μmol/L;6~60mg组血糖(GLU)浓度逐渐提高,其中30mg组血糖浓度显著高于对照组和60mg组(P<0.05);6~60mg组甘油三酯(TG)浓度先升高后趋于稳定。(4)不同水平的碳酸钴对血清中IgG和IgA浓度无显著性影响(P>0.10);14~28d时,6~30mg组IgM浓度逐渐增加,但60mg组IgM浓度逐渐降低至最低值90.87μg/mL,其中在第14d时,60mg组IgM浓度显著高于6和12mg组(P<0.05)。(5)不同水平碳酸钴对MCV、MCH和MCHC浓度无显著性影响(P>0.10)。在14~42d时,各组RBC、HCT和HGB浓度逐渐降低,其中在第42d时,各处理组RBC、HCT和HGB浓度均显著高于对照组(P<0.05)。(6)不同水平碳酸钴对维生素B12(VB12)含量无显著性影响(P>0.10)。
  结论:综上所述,泌乳期奶牛日粮中添加30mg碳酸钴最有利于提高奶牛生产性能和养分的吸收利用以及改善机体健康。故建议泌乳奶牛全混合日粮中碳酸钴适宜添加量为30mg,安全系数为2.5倍,最高限量为60mg。
[硕士论文] 于国升
养殖 河北农业大学 2018(学位年度)
摘要:深县猪是我国的优良地方品种,也是河北省唯一地方猪种。历史上由于一些原因,深县猪群体曾一度受到灭亡的威胁。现存深县猪的提纯复壮工作正在进行中。本研究是以现有的深县猪保种群为研究对象。通过GBS、SPSS、SAS等软件对生产性能和选育效果作出全面分析,对深县猪的保种、选育过程中存在的问题进行探讨研究,进而对深县猪的保种和选育工作提出合理化的建议。研究结果如下:
  1.对深县猪保种群系谱信息分析结果如下:深县猪共有10个家系,深县猪群体有效含量为126头,理论近交增量为0.004,平均近交系数为0.93%,群体状况良好。
  2.对深县猪现有群体繁殖性能、生长肥育性能和屠宰性能进行描述性统计分析。研究得出,深县猪猪总产仔为12.2头,平均活仔为10.66头。深县猪体重位于30kg-90kg全程日增重为0.505kg,日采食量为1.99kg,料肉比为3.98。深县猪体重达90kg进行屠宰,屠宰率为65.88%,腿臀比为28.17%,平均膘厚为34.29mm,眼肌面积20.83cm2肌肉剪切力为2.98kg,肌内脂肪为11.18%。其中,深县猪繁殖性能总体上遗传稳定性较差,生长肥育性能和屠宰性能遗传稳定性较好。
  对深县猪其中5个家系生长肥育性能测定,结果表明各家系在日增重指标和日采食量指标存在差异。其中日增重以3家系最高(0.52kg),6家系最低(0.49kg),两家系差异极显著(P<0.01)。日采食量以3家系最高(2.09kg),10家系最低(1.93kg),两家系差异显著(P<0.05)。
  对深县猪其中的5个家系进行屠宰测定。结果表明,各家系间在腿臀比、皮厚、平均膘厚和剪切力指标上存在差异(P<0.05)。其中3、5家系腿臀比最高,与其他家系差异极显著(P<0.01),3家系与19家系在皮厚指标上差异显著(P<0.05),5家系与7家系的平均背膘差异显著(P<0.05),5家系与11家系剪切力指标存在差异(P<0.05)。
  深县猪1世代繁殖性能较0世代有所下降,但无显著差异(P>0.05)。深县猪1世代生长肥育性能和屠宰性能与2世代均无显著差异(P>0.05)。
  深县猪五花头类群和黄瓜嘴类群在繁殖性能和生长肥育性能测定结果无显著差异(P>0.05),深县猪五花头类群腿臀比指标优于黄瓜嘴类群(P<0.05)。
  3.应用SPSS对深县猪中后期体重与体尺性状进行分析,深县猪中后期体重与体尺性相关性极显著(P<0.01)。对测定结果进行线性回归,得出了深县猪中后期体重(W)与体长(X1)、体高(X2)、胸围(X3)、管围(X4)、腿臀围(X5)的回归方程为:W=-123.938+0.01X1+0.172X2+1.175X3+1.779X4+0.622X5。
  4.应用软件1st0pt对测定数据进行统计分析。结果表明,logistic模型、compertz模型和brody模型对深县猪体重在55kg至95kg区间内的生长曲线拟合效果较好,其拟合优度R2均大于0.9。其中logistic模型R2最高,更适合深县猪生长曲线的拟合。结合对校正系数C的计算得出深县猪达75kg体重日龄校正公式为,公猪:校正日龄=实测日龄×3.6892×ln(102.0547-W实/14.436×W实)。母猪:校正日龄=实测日龄×2.8329×ln(121.5212-W实/10.5415×W实)。
  同理,利用线性模型,应用软件SPSS20.0对深县猪达75kg体重背膘厚进行回归分析,得出深县猪达75kg体重背膘厚的校正公式为:Bf校正=Bf实+(75-W实)×Bf/W实+F。其中F=K/a,为达75kg体重背膘校正因子。由回归模型公式得:深县猪公猪F=97.4797;深县猪母猪F=61.4130。
  5.应用GBS育种软件,使用BLUP法初步估计出深县猪达75kg日龄EBV、背膘EBV及产仔数EBV的年度进展。结果表明3种主要经济性状遗传进展上改进比较缓慢,特别是父系指数几乎处于未改进状态。
  综合以上结果,得出结论:深县猪现有群体状况良好,繁殖性能遗传稳定性较差,但生长肥育性能和屠宰性能遗传稳定性较好。深县猪3家系生长肥育性能优越。深县猪两世代间在繁殖性能、生长肥育性能和屠宰性能无显著性差异。深县猪两类群在繁殖性能和生长肥育性能无显著差异。深县猪五花头类群腿臀比指标优于黄瓜嘴类群。通过对深县猪生长发育规律的研究得出了深县猪中后期体重与体尺的回归模型和深县猪达75kg体重-日龄和背膘厚的校正公式。本研究为深县猪的保种选育提供了基础数据。
[硕士论文] 孙方兴
养殖 河北农业大学 2018(学位年度)
摘要:随着我国养兔业规模扩大和数量增加,蛋白质饲料资源供不应求且价格较高,是饲料配方品质优劣的决定性因素,评定獭兔四种蛋白质饲料生物学价值对实际生产具有重要指导意义,同时,家兔饲料原料评定资料较少,鲜见关于家兔蛋白质饲料真消化代谢率、真消化代谢能的研究,此试验结果可以为基础日粮配制提供理论基础,因此,对家兔蛋白质饲料的生物学价值进行评定具有重要意义。
  本次试验旨在通过饲养和消化试验来评定四种蛋白质饲料的生物学价值。本试验选择60只18月龄平均体重为(3.28±0.29)kg的健康状况良好的白色獭兔,随机分为6组,每组10个重复,公母各半。分别饲喂无氮日粮、基础日粮、试验日粮(85%的基础日粮+15%被测饲料原料)。采用全收粪(尿)法进行消化代谢试验,测定獭兔对四种蛋白质饲料能量、养分的表观、真消化、代谢率。
  试验结果及结论如下:
  大豆粕能量及养分的表观消化率:GE:70.12%,DM:78.75%,Ash:35.11%,CP:87.17%,CF:26.32%,NDF:27.39%,ADF:24.74%,EE:81.55%,Ca:48.16%,P:47.87%,NFE:79.25%;
  棉籽粕能量及养分的表观消化率:GE:50.84%,DM:55.47%,Ash:33.29%,CP:64.72%,CF:28.26%,NDF:32.77%,ADF:29.94%,EE:82.21%,Ca:59.29%,P:50.59%,NFE:71.36%;
  菜籽饼能量及养分的表观消化率:GE:61.73%,DM:65.39%,Ash:44.19%,CP:85.27%,CF:23.55%,NDF:34.16%,ADF:28.06%,EE:83.42%,Ca:53.93%,P:37.17%,NFE:75.00%;
  花生粕能量及养分的表观消化率:GE:82.72%,DM:80.03%,Ash:39.31%,CP:91.51%,CF:27.21%,NDF:28.39%,ADF:19.62%,EE:85.870%,Ca:57.12%,P:49.15%,NFE:77.58%。
  结合无氮日粮试验,计算四种原料粗蛋白质、能量真消化代谢率及真消化能、真代谢能。
  大豆粕、棉籽粕、菜籽饼、花生粕的粗蛋白质真消化率依次分别为:88.11%、66.09%、79.85%、94.51%,真代谢率依次分别为61.96%、53.87%、62.38%、54.13%;
  能量真消化率依次分别为:75.98%、51.10%、76.34%、97.62%,真代谢率依次分别为70.47%、58.59%、73.63%、93.09%;
  真消化能依次分别为:14.08MJ/kg、8.85MJ/kg、16.37MJ/kg、18.56MJ/kg;
  真代谢能依次分别为:12.46MJ/kg、8.11MJ/kg、15.79MJ/kg、17.47MJ/kg。
  综合能量、蛋白质含量及消化代谢率评价四种蛋白质原料,以花生粕对獭兔生物学价值最优,其次分别为大豆粕、菜籽饼、棉籽粕。
[硕士论文] 齐聪岩
微生物与生化药学 河北农业大学 2018(学位年度)
摘要:本研究主要目的是探讨复合菌剂发酵全价日粮对獭兔促生长作用,并对其机理进行初步探究,以期为其促生长提供理论依据,同时为益生菌剂的应用开发奠定科学基础。以本实验室提供的复合益生菌剂(主要功能是产生消化酶与益生物质、同时可拮抗常见肠道病原菌)为试验材料,对兔全价日粮进行发酵,选取7周龄、体重(1463.54±185.51)g獭兔24只,将其随机分成对照组(饲喂基础日粮)和试验组(饲喂全价发酵日粮),每组12个重复。预试期3d,正式试验期18d。本研究主要分为以下三部分:
  1.利用复合益生菌剂发酵全价日粮,并对菌剂发酵前后兔日粮的营养品质进行评定。结果表明,复合菌剂发酵作用可显著提升日粮品质:发酵前后日粮中的含菌量由4.36×106CFU/g提高到了1.04×109CFU/g;其纤维类物质含量均有不同程度的降低,其中酸性洗涤纤维、中性洗涤纤维、粗纤维含量分别下降了30.34%、42.86%、23.91%,差异显著(P<0.05);且粗蛋白、粗脂肪、淀粉含量呈现小幅度增加;乙酸、丙酸、乳酸含量分别由0增加至0.92%、2.67%、4.16%,差异显著(P<0.05);且发酵日粮具有明显酸香味。
  2.利用发酵日粮对獭兔进行饲喂试验,比较发酵日粮对其生长性能的影响。结果表明,与对照组相比,试验组供试兔平均日增重提高了11.73%(P<0.05),日采食量提高了2.31%(P<0.05),料重比降低了9.32%(P<0.05);且发酵日粮使试兔的腹泻率由2.16%下降至0.23%,死亡率由8.33%下降至0。
  3.从血液指标、免疫器官指数、肠道形态结构、表观消化率、消化酶活力及基因表达变化及试兔肠道菌群多样性等几方面探讨发酵日粮对供试兔的促生长机理。
  结果表明,①发酵日粮可改善试兔血液生化指标:试验组供试兔血清中高密度脂蛋白(HDL-C)含量高于对照组,而甘油三酯(TG)和尿素氮(BUM)均呈下降趋势,门冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)含量无变化,差异不显著(P>0.05)。②发酵日粮可促进试兔免疫器官发育:试验组供试兔免疫器官指数高于对照组,肝、胆、肾、胸腺、脾指数分别提高了6.88%、16.27%、20.19%、30.85%(P<0.05)、35.69%。③发酵日粮对试兔肠道形态结构无显著影响:试验组回肠和盲肠绒毛长度与对照组无显著差异。④发酵日粮可提高试兔对营养物质的表观消化率:与对照组相比,粗脂肪、粗蛋白、淀粉、粗纤维分别提高了4.78%、3.07%、2.32%(P<0.05)、10.67%(P<0.05)。⑤发酵日粮可增加兔肠道消化酶活力,且试兔对益生菌的采食促使纤维素酶基因在空肠和回肠中的表达量增加,但使胰腺消化酶基因的表达下降:发酵日粮使试兔肠道中的脂肪酶、蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶活力分别提高了14.07%、8.21%、0.54%、27.25%(P<0.05)。RT-PCR技术探明,发酵日粮使供试兔胰腺消化酶基因的表达量下降;但在空肠和回肠中,纤维素酶基因表达量呈现上调趋势,分别增加了35.66%、74.11%,差异极显著(P<0.01)。⑥发酵日粮可调节试兔肠道菌群结构:为探究发酵日粮对试兔肠道菌群多样性的影响,本研究采用高通量测序技术对肠道菌群16SrDNA高变区进行测序,对获得的原始数据进行数据过滤及Tags拼接、OTU聚类分析、Alpha多样性分析。结果表明,试兔盲肠中微生物丰度最高,物种分布最均匀;小肠中的优势菌群为厚壁菌门、变形菌门、放线菌门和拟杆菌门,而盲肠中含量较多的菌群为厚壁菌门、变形菌门、拟杆菌门和疣微菌门;发酵日粮增加了试兔肠道内的厚壁菌门(Firmicutes)数量,降低了拟杆菌门(Bacteroidetes)和变形菌门(Proteobacteria)丰度;根据Alpha多样性指标测定结果显示,发酵日粮增加了供试兔回肠和盲肠中的细菌丰度。此外,经活菌计数发现发酵日粮可提高试验组供试兔肠道中的乳酸杆菌、双歧杆菌、芽孢杆菌数量(P<0.05),降低大肠杆菌数量。
  结论:复合益生菌剂发酵作用可改善全价兔日粮品质,提高獭兔生长性能,降低其腹泻率与死亡率,改善血液生化指标,促进免疫器官发育。发酵日粮促进试兔生长的机理除日粮利用率提高外,还在于发酵日粮中富含大量的功能菌株,它们随采食进入动物体内可调节机体肠道菌群结构,提高消化酶活力,从而提高试兔免疫器官指数,增强机体免疫力,促使试兔健康生长。
[硕士论文] 解佑志
养殖 河北农业大学 2018(学位年度)
摘要:本试验旨在研究发酵稻壳粉对经产母猪生产性能的影响及其机制,试验选取30头胎次相同(4胎长白×大白)、健康状态和体况相似的母猪,然后随机将母猪分成3组,每组10个重复,每个重复1头猪,即对照组、发酵稻壳粉组和稻壳粉组,其中对照组为基础日粮,发酵稻壳粉组在基础日粮的基础上补饲20%发酵稻壳粉(按风干样计算),稻壳粉组在基础日粮的基础上补饲20%稻壳粉(风干状态)。从母猪配种持续到母猪断奶再发情,分别测定发酵稻壳粉和稻壳粉对母猪繁殖性能、母猪妊娠期体况、母猪妊娠期养分消化率、母猪妊娠期血液生化指标和血清激素含量变化、母猪妊娠期肠道微生物的影响,以及母猪哺乳期泌乳量和初乳成分的影响。试验结果如下:
  1发酵稻壳粉对母猪繁殖性能的影响:发酵稻壳粉组和稻壳粉组母猪总产仔数显著高于对照组(P<0.05),发酵稻壳粉组和稻壳粉组之间总产仔数差异不显著(P>0.05)。发酵稻壳粉组产活仔数和健仔数显著高于对照组和稻壳粉组(P<0.05),稻壳粉组产活仔数和健仔数显著高于对照组(P<0.05)。发酵稻壳粉组母猪产程显著低于对照组和稻壳粉组(P<0.05),稻壳粉组母猪产程显著低于对照组(P<0.05)。发酵稻壳组和稻壳粉组断奶活仔数显著高于对照组(P<0.05)。三组之间母猪断奶发情间隔差异不显著(P>0.05)。三组之间仔猪初生重差异不显著(P>0.05)。对照组仔猪初生窝重显著高于发酵稻壳粉组和稻壳粉组(P<0.05),发酵稻壳粉组仔猪出生窝重显著高于稻壳粉组(P<0.05)。三组之间21日龄个体重差异不显著(P>0.05),发酵稻壳粉组21日龄断奶窝重显著高于对照组和稻壳粉组(P<0.05),稻壳粉组21日龄断奶窝重显著高于对照组(P<0.05)。三组之间仔猪日增重差异不显著(P>0.05)。
  2发酵稻壳粉对妊娠期母猪体况的影响:对照组母猪妊娠期增重显著高于发酵稻壳粉组和稻壳粉(P<0.05),发酵稻壳粉组母猪妊娠期增重显著高于稻壳粉组(P<0.05)。发酵稻壳粉组和稻壳粉组母猪哺乳期减重显著低于对照组(P<0.05),稻壳粉组母猪哺乳期减重与发酵稻壳粉组之间差异不显著(P>0.05)。对照组母猪妊娠期被膘增加量显著高于发酵稻壳粉和稻壳粉组(P<0.05),发酵稻壳粉组和稻壳粉组母猪哺乳期背膘厚降低值显著低于对照组(P<0.05)。
  3发酵稻壳粉对妊娠期母猪养分消化率的影响:母猪妊娠前中期,从干物质,钙,粗纤维表观消化率指标上,发酵稻壳粉组和稻壳粉组显著低于对照组(P<0.05),发酵稻壳粉干物质表观消化率要高于稻壳粉(P<0.05)。对照组和发酵稻壳粉组粗脂肪表观消化率显著高于稻壳粉组(P<0.05),对照组和发酵稻壳粉组差异不显著(P>0.05)。发酵稻壳粉组和稻壳粉组粗蛋白表观消化率显著低于对照组(P<0.05),稻壳粉组和发酵稻壳粉组差异不显著(P>0.05)。三组之间粗灰分表观消化率差异不显著(P>0.05)。母猪妊娠后期,从干物质,粗脂肪,粗蛋白,钙表观消化率指标上,发酵稻壳粉组和稻壳粉组显著低于对照组(P<0.05),发酵稻壳粉组显著高于稻壳粉组(P<0.05)。发酵稻壳粉组和稻壳粉组粗纤维表观消化率显著低于对照组(P<0.05)。在粗灰分表观消化率指标上三组之间差异不显著(P>0.05)。
  4发酵稻壳粉对妊娠期血液生化指标和血清繁殖激素的影响:母猪妊娠前期,发酵稻壳粉组母猪血清雌二醇浓度显著高于对照组和稻壳粉组母猪(P<0.05),发酵稻壳粉组和稻壳粉组母猪妊娠21日龄血清孕酮浓度显著高于对照组(P<0.05)。但是母猪到了妊娠后期,稻壳粉组母猪血清雌二醇浓度分别高于对照组和发酵稻壳粉组(P<0.05)。母猪血清孕酮,催乳素浓度随着妊娠日龄的增加而显著降低(P<0.05),而对照组雌二醇浓度随着日龄的增加逐渐升高,发酵稻壳粉组雌二醇浓度随着日龄的增加逐渐降低,稻壳粉组雌二醇浓度随着日龄的增加先升高后降低。妊娠前期,发酵稻壳粉组和稻壳粉组母猪血清谷丙转氨酶含量相比较对照组极显著降低(P<0.01),在总蛋白指标上,对照组显著高于发酵稻壳粉组和稻壳粉组(P<0.05),在总胆固醇和甘油三酯指标上,对照组显著高于稻壳粉组(P<0.05)。妊娠后期在白蛋白指标上,对照组和发酵稻壳粉组显著高于稻壳粉组(P<0.05),在总胆固醇和甘油三酯指标上,对照组和发酵稻壳粉组显著高于稻壳粉组(P<0.05)。
  5发酵稻壳粉对母猪哺乳期泌乳量及初乳成分及体况的影响:从母猪哺乳期采食量指标来看,发酵稻壳粉组显著高于对照组和稻壳粉组(P<0.05),稻壳粉组显著高于对照组(P<0.05)。从母猪哺乳期总产奶量指标来看,发酵稻壳粉组母猪产奶量显著高于对照组和稻壳粉组(P<0.05),稻壳粉组显著高于对照组(P<0.05)。母猪哺乳期初乳营养成分含量指标来看,三组初乳乳腊含量差异不显著(P>0.05)。发酵稻壳粉组乳蛋白含量显著高于对照组和稻壳粉组(P<0.05),稻壳粉组显著高于对照组(P<0.05)。发酵稻壳粉组和稻壳粉组非脂固形物含量显著高于对照组,发酵稻壳粉和稻壳粉组两组之间差异不显著(P>0.05)。三组之间乳糖含量差异不显著(P>0.05)。发酵稻壳粉组总固体含量显著高于对照组和稻壳粉组(P<0.05),对照组和稻壳粉组两组之间差异不显著(P>0.05)。
  6发酵稻壳粉对妊娠母猪肠道微生物菌群的影响:在妊娠21d、95d收集的粪样中,发酵稻壳粉组母猪肠道乳酸杆菌显著高于对照组和稻壳粉组(P<0.05),对照组和稻壳粉组之间差异不显著(P>0.05)。发酵稻壳粉母猪肠道大肠杆菌数量显著低于对照组和稻壳粉组(P<0.05),对照组和稻壳粉组之间差异不显著(P>0.05)。在妊娠95d收集的粪样中,发酵稻壳粉组和稻壳粉组大肠杆菌数量显著低于对照组(P<0.05),发酵稻壳粉组显著低于稻壳粉组(P<0.05)。
  结论:发酵稻壳粉可显著提高母猪的产仔数并降低母猪的产程,增加仔猪断奶窝重;在改善妊娠期母猪体况方面会降低哺乳期母猪减重情况;会显著降低母猪对于干物质,粗脂肪,粗蛋白,等的表观消化率;对于妊娠期母猪血液生化指标和血清激素浓度有明显的影响;可提高母猪哺乳期泌乳量,提高初乳中各种营养成分含量,具有改变肠道微生物菌群的功能。
[硕士论文] 李宇敏
养殖 河北农业大学 2018(学位年度)
摘要:本试验旨在研究不同水平玉米赤霉烯酮(ZEA)对后备母兔生产性能、血清生化指标、免疫性能、抗氧化性能、生殖器官组织病理学及ZEA粪便和尿液残留的影响。试验选择3月龄后备母兔60只,随机分为五组,每组12个重复,每个重复1只。对照组饲喂基础日粮,试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别饲喂ZEA添加水平为250μg/kg、500μg/kg、750μg/kg和1000μg/kg的试验日粮。预试期5天,正试期40天。正试期分两期进行:前期1~20d,后期21~40d。采集不同阶段血清、内脏组织,试验前期和试验后期分别记录采食量,计算平均日采食量。试验第20d和40d以重复为单位空腹称重,用于测定生产性能。试验前期(20d)和后期(40d)每组随机选取5只后备母兔,心脏采血分离血清后,常规屠宰取内脏组织(肝脏、肾脏、脾脏)、免疫器官(胸腺、脾脏)和生殖器官(子宫和卵巢),用于测定血清生化指标、器官指数、组织病理学变化和毒素残留。试验结果表明:
  (1)日粮中添加250~1000μg/kg ZEA对后备母兔试验前期(20d)和试验后期(40d)生产性能均无影响,主要表现为屠宰率、采食量、日增重各组之间差异均不显著(P>0.05)。
  (2)日粮中添加250~1000μg/kg ZEA可导致后备母兔肝脏代谢酶活异常:与对照组相比,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组谷丙转氨酶、谷草转氨酶和碱性磷酸酶极显著升高(P<0.01)。
  (3)摄入ZEA可导致后备母兔抗氧化能力降低:试验后期(40d)超氧化物歧化酶呈下降趋势,差异不显著(P>0.05),500~1000μg/kg ZEA极显著提高血清中丙二醛(MDA)含量(P<0.05),1000μg/kg ZEA极显著降低血清中谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)的含量(P<0.01)。
  (4)摄入ZEA可影响后备母兔的体液免疫能力,使其血清中IgG含量显著降低(P<0.05),IgA、IgM虽呈下降趋势,但差异不显著(P>0.05)。
  (5)摄入ZEA(750~1000μg/kg)可显著降低后备母兔脾脏指数(P<0.05),对肝、肾、胸腺、脾脏、子宫、卵巢器官指数无显著影响;在试验前期(20d)对器官指数无影响。
  (6)ZEA可引起子宫和卵巢发生不同程度的组织形态学变化,其中高剂量组(750~1000μg/kg)子宫肌层明显增厚,子宫腺腺体明显增多,子宫腺毛细血管发生扩张并明显增加;卵巢发生卵泡性囊泡。
  (7)尿液中ZEA的含量占食入量的11%~21%,α-/β-ZOL占食入量的15~27%;粪便中ZEA的含量占食入量的8%~11%,α-/β-ZOL占食入量的16~26%。尿液中ZEA及其代谢物的残留要高于粪便中的残留。
  250~1000μg/kg ZEA可导致后备母兔肝脏代谢酶活异常,破坏其抗氧化能力,影响其免疫能力;750~1000μg/kg ZEA可影响后备母兔脾脏指数,破坏其生殖器官(子宫、卵巢)组织形态。
[硕士论文] 冯佳婷
养殖 河北农业大学 2018(学位年度)
摘要:本试验旨在通过测定獭兔对四种能量饲料能量、营养物质表观消化率、能量和粗蛋白质的真消化率、表观代谢率、真代谢率,评定四种能量饲料的生物学价值。
  试验选用6只健康状况良好的18月龄成年白色獭兔饲喂无氮日粮,分析计算得到獭兔的代谢粪氮为1.72g/kg DMI;内源尿氮为0.32g/d·BW-0.75;代谢粪能为0.20MJ/d·BW-0.75;内源尿能0.0025M J/d·BW-0.75,为得到獭兔对四种能量饲料粗蛋白质和能量的真消化率和真代谢率提供基础数据。
  试验选取健康状况良好的50只18月龄的成年白色獭兔,公母各半,随机分为5组,每组10个重复,试验日粮为15%试验原料+85%基础日粮,5组獭兔分别饲喂基础日粮、玉米日粮、小麦日粮、大麦日粮和高粱日粮。全收粪法进行消化试验,预饲期7d,试验期7d。套算法计算獭兔对四种能量饲料原料营养物质的表观消化率。试验结果如下:
  1.獭兔对四种能量饲料原料粗蛋白质的消化率:
  獭兔对玉米中粗蛋白质的消化率:表观消化率79.18%,真消化率86.67%,表观代谢率75.67%,真代谢率85.74%。
  獭兔对小麦中粗蛋白质的消化率:表观消化率76.82%,真消化率83.23%,表观代谢率73.90%,真代谢率81.60%。
  獭兔对大麦中粗蛋白质的消化率:表观消化率76.15%,真消化率84.36%,表观代谢率73.23%,真代谢率83.10%。
  獭兔对高粱中粗蛋白质的消化率:表观消化率73.76%,真消化率82.74%,表观代谢率70.09%,真代谢率79.93%。
  2.獭兔对四种能量饲料原料能量的消化率以及消化能:
  獭兔对玉米能量的消化率以及消化能:表观消化率73.92%,真消化率83.23%,表观代谢率69.60%,真代谢率83.49%;表观消化能12.51MJ/kg,真消化能15.20MJ/kg,表观代谢能11.78MJ/kg,真代谢能12.51MJ/kg。
  獭兔对小麦能量的消化率以及消化能:表观消化率72.93%,真消化率89.46%,表观代谢率67.68%,真代谢率82.88%;表观消化能12.15MJ/kg,真消化能14.90MJ/kg,表观代谢能11.28MJ/kg,真代谢能13.81MJ/kg。
  獭兔对大麦能量的消化率以及消化能:表观消化率72.89%,真消化率85.30%,表观代谢率66.49%,真代谢率83.31%;表观消化能11.95MJ/kg,真消化能14.00MJ/kg,表观代谢能10.90MJ/kg,真代谢能13.67MJ/kg。
  獭兔对高粱能量的消化率以及消化能:表观消化率70.52%,真消化率87.25%,表观代谢率67.31%,真代谢率83.24%;表观消化能11.78MJ/kg,真消化能14.58MJ/kg,表观代谢能11.25MJ/kg,真代谢能13.91MJ/kg。
  3.獭兔对四种能量饲料原料其他营养物质的表观消化率。
  獭兔对玉米中其他营养物质的表观消化率:DM71.01%、CF21.16%、NDF37.77%、ADF26.74%、EE83.01%、Ash51.99%、Ca51.36%、P21.97%、NFE75.78%。
  獭兔对小麦中其他营养物质的表观消化率:DM72.76%、CF21.84%、NDF37.37%、ADF23.13%、EE80.87%、Ash53.26%、Ca52.50%、P21.60%、NFE76.44%。
  獭兔对大麦中其他营养物质的表观消化率:DM70.94%、CF20.78%、NDF36.06%、ADF24.22%、EE80.07%、Ash51.71%、Ca51.54%、P21.56%、NFE75.97%。
  獭兔对高粱中其他营养物质的表观消化率:DM70.22%、CF20.04%、NDF37.39%、ADF24.75%、EE80.69%、Ash49.87%、Ca50.05%、P22.12%、NFE77.48%。
  通过对四种能量饲料原料的主要养分含量及獭兔对四种原料能量、粗蛋白质消化代谢率的测定,系统评价了四种能量原料生物学价值,为家兔饲料生产过程中精确、合理应用提供了数据基础。综合能量、蛋白含量及消化代谢率评价四种能量饲料原料,以玉米对獭兔生物学价值最优,其次分别为小麦、大麦、高粱。
[硕士论文] 赵张晗
养殖 河北农业大学 2018(学位年度)
摘要:本试验以小尾寒羊断奶羔羊为研究对象,通过饲养试验、消化代谢试验和屠宰试验研究去势对小尾寒羊羔羊育肥期生长性能、营养消化代谢以及羊肉品质的影响,为今后小尾寒羊羔羊育肥提供技术指导。试验选取健康状况良好,体重15kg左右,3月龄的断乳羔羊48只,公母各半。每12只为一组,按性别随机分为4组。公母各选一组进行手术去势作为试验组,未去势组为对照组。各组日粮营养水平一致,通过生长性能、消化代谢和肉品质测定,研究去势对小尾寒羊羔羊生长性能和羊肉品质的影响。试验结果表明:
  (1)小尾寒羊公羔对照组平均日干物质采食量高于试验组,对照组平均日增重显著高于试验组(P<0.05)。母羔平均日干物质采食量试验组高于对照组,对照组和去势组平均日增重差异不显著(P>0.05),但前者有高于后者的趋势;
  (2)小尾寒羊羔羊各组总能消化率、总能代谢率、氮消化率及其他营养物质表观消化率均无显著差异(P>0.05),试验组和对照组净蛋白利用率虽无显著差异(P>0.05),但前者有高于后者的趋势;
  (3)在两个不同的屠宰时期(6月龄和8月龄),小尾寒羊试验组和对照组的屠宰率、胴体净肉率、肉骨比、脏器重、瘤胃重等均无显著差异(P>0.05)。但8月龄屠宰时公羔试验组屠宰率和母羔试验组胴体净肉率均有高于对照组的趋势,同时,试验组相比对照组而言,肝脏和小肠重量均有增加的趋势;
  (4)不同屠宰时期的小尾寒羊羔羊试验组和对照组的背最长肌肌内脂肪、蛋白、灰分含量和pH、肉色评分等均无显著差异(P>0.05),但8月龄屠宰的母羔试验组蒸煮损失显著低于对照组(P<0.05);
  (5)不同屠宰时期的小尾寒羊羔羊试验组和对照组背最长肌中氨基酸含量差异不显著(P>0.05),6月龄屠宰的公羔试验组中亚油酸、二十一碳酸、花生四烯酸、二十三碳酸、二十四碳酸和DHA的含量显著低于对照组(P<0.05),其余脂肪酸含量无显著差异(P>0.05);8月龄屠宰的公羔试验组中亚油酸、二十一碳酸、二十三碳酸、二十四碳酸和DHA的含量显著高于对照组(P<0.05),其余脂肪酸含量差异不显著(P>0.05);母羔不同屠宰时期试验组和对照组背最长肌中脂肪酸含量基本无显著差异(P>0.05)。
  综上,小尾寒羊羔羊3月龄去势,影响了其生长性能,不利于羔羊的育肥,但改善了公羔的羊肉品质。
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