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[硕士论文] 周洋
妇产科学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:目的:采用转录组测序(ribonucleic acid-sequencing,RNA-Seq)实验方法分别对人正常和卵巢异位子宫内膜组织进行检测,一方面确定卵巢异位子宫内膜组织中明显差异表达的基因及可能影响子宫内膜异位症发病的生物学过程及信号通路,另一方面筛选出显著高表达的基因,作为受超级增强子(super-enhancers,SEs)调控的潜在基因。采用结合位点分析测序(chromatin Immunoprecipitation-Sequencing,ChIP-Seq)实验方法针对组蛋白乙酰化赖氨酸27(H3K27ac)细胞标记对人卵巢异位子宫内膜组织进行检测,结合第一部分RNA-Seq的结果进行数据联合分析,鉴定卵巢异位子宫内膜组织差异高表达致病基因位点附近潜在的SEs。
  方法:获取3对临床25-40岁之间育龄期卵巢子宫内膜异位症(巧克力囊肿)患者的囊壁组织,每个标本取相同质量混样作为实验组,同时取3对育龄期女性正常子宫内膜组织(术后病理排除子宫内膜异位症或子宫腺肌症疾病)混样作为对照组,利用Trizol法提取组织总RNA对RNA进行反转录合成cDNA后建库,高通量测序并进行生物信息学分析。同时取正常和异位子宫内膜组织混样标本,分别提取DNA后进行蛋白和DNA的交联、附上H3K27ac抗体免疫沉淀靶蛋白,解除蛋白交联,纯化DNA后进行高通量测序,通过ROSE(Rank Ordering of Super-Enhancers)算法鉴定出组织特异性超级增强子。将两组数据联合分析得到受SEs调控的相关关键基因。
  结果:RNA-Seq结果提示正常和异位子宫内膜组织基因存在明显差异表达,基因本体论(Gene Ontology,GO)分析结果提示异位内膜差异表达基因主要参与生物粘附、细胞粘附、解剖结构生成、细胞表面受体信号通路和细胞分裂调控等相关生物学过程,京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集结果提示细胞粘附组分,细胞因子交互作用以及细胞外机制受体交互作用均与子宫内膜异位症(ndometriosis,EMs)的发病有着显著相关性。ChIP-Seq结果提示异位子宫内膜中特异性SEs有81个,SEs相关基因为272个,将这些特异性SEs相关基因和RNA-Seq中差异基因联合分析得到43个共有基因。最后确定GATA4,NR5A1和FSHR基因附近分别存在SEs异常活化。
  结论:子宫内膜异位症是一个多基因疾病,其发病机制涉及多个生物学过程和细胞通路的改变,差异致病基因GATA4,NR5A1和FSHR基因的附近分别存在特异性SEs的异常活化,极有可能参与调控它们的高表达。
[硕士论文] 吴霜
生殖内分泌与妇科微创技术(妇产科学) 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:研究目的:
  早发性卵巢功能不全(Premature ovarian insufficiency,POI)指女性在40岁以前因各种原因出现卵巢功能减退,常表现为月经稀发或闭经,并伴随着持续血清高促性腺激素的水平(FSH>25U/L)和雌激素缺乏,生育力减退和不孕成为其常见临床表现。育龄期POI患者妊娠率较低,部分患者使用常规辅助生殖手段难以妊娠,而赠卵IVF-ET作为一种可供选择的方法却因中国女性卵子来源受限及伦理等问题难以实施。研究证明,这些POI患者的卵巢中仍保留着一定数目对促性腺激素无反应的原始卵泡,因此,如何激活这些残存的始基卵泡、促进其生长发育成熟,将成为部分POI患者获得成功妊娠的新突破口。
  体外激活技术(In vitro activation,IVA)是现阶段女性辅助生殖治疗新方法中的研究热点,通常是指在体外短期激活原始卵泡,再将激活后的卵巢移植回体内,结合促排卵和IVF-ET技术获得妊娠。研究发现,PI3K-AKT、Hippo信号通路等均与卵泡发育成熟相关,利用这些信号通路的相应激活手段,目前已成功获得了子代小鼠和人类健康婴儿的出生,但妊娠率较低。科学家们最新发现mTOR信号通路激活剂MHY1485可激活小鼠原始卵泡,但其对人卵泡激活的有效性和安全性并未所知。
  本课题旨在探索构建标准化人卵巢组织体外激活-异种移植小鼠模型,进而利用该模型验证mTOR信号通路激活剂MHY1485对人卵巢始基卵泡激活的有效性及安全性研究。本课题将首次探索卵巢组织体外培养、体外激活过程对卵巢组织的DNA甲基化水平影响,进而对其操作过程的安全性进行初步的评估,为IVA技术在POI患者生育力保存的临床应用方面提供的实验证据。
  研究方法:
  从长征医院妇产科收集因非卵巢因素切除附件的患者的正常卵巢组织,片段化处理后体外培养。不同浓度激活剂MYH1485短期体外培养卵巢组织后运用Western blot检测mTOR及其信号通路下游RPS6蛋白及其磷酸化蛋白水平;运用HE染色比较体外激活前后人卵巢组织形态及卵泡变化;对照组/激活组卵巢组织分别体外培养后移植到小鼠的肾被膜下,建立标准化人卵巢组织异种移植模型,一段时间后大体观察移植物生长情况;回收各组移植卵巢,比较各组卵巢组织重量,HE染色观察各组卵巢内卵泡发育情况;ELISA法检测小鼠去势前后、人卵巢组织移植前后激素水平变化。运用人类高通量甲基化芯片Illumina Infinium Methylation EPIC BeadChip(简称850k芯片)分析了正常卵巢组织、普通培养卵巢组织、激活剂培养卵巢组织全基因组DNA甲基化水平,进而从表观遗传学方面对人卵巢组织体外激活技术的安全性进行初步的评估。
  研究结果:
  1.激活剂MYH1485可增加下游p-mTOR、p-rps6蛋白水平,磷酸化蛋白水平随浓度增加(1μM、3μM、10μM)而增加,差异具有统计学意义,激活浓度达20μM下游磷酸化水平相比于10μM不再增加,总mTOR和总rps6不变。
  2.短期体外培养后激活剂培养卵巢组织与普通培养相比,组织形态无明显差异。
  3.小鼠血清FSH水平在去势后明显升高,人卵巢组织异种移植后一月FSH明显降低,差异均有统计学意义;AMH水平在去势后明显降低,异种移植后一月AMH轻微升高,差异均有统计学意义。
  4.移植术后一月,大体、卵巢切片HE染色观察移植卵巢组织在小鼠体内存活完好,未见明显的组织坏死,激活组卵巢与对照组卵巢相比可见较大的生长中的卵泡。回收各组移植卵巢块微量称重结果显示:激活剂培养卵巢重量明显高于普通培养卵巢,差异具有统计学意义。
  5.人卵巢组织DNA甲基化芯片检测结果:①正常卵巢组织、普通培养卵巢组织、激活剂培养卵巢组织三组间整体甲基化水平无明显差异;②以P<0.01为差异基因,Delta Beta≥0.12为甲基化程度升高,Delta Beta≤-0.12为甲基化程度降低。正常卵巢组织和普通培养卵巢组间共9个甲基化修饰差异位点,关联基因共5个;正常卵巢组织和激活培养卵巢组间共52个甲基化修饰差异位点,关联基因共43个;普通培养和激活培养卵巢组间共24个甲基化修饰差异位点,关联基因共18个。
  研究结论:
  1.激活剂MHY1485可以有效激活mTOR信号通路,激活残存的原始卵泡,促进卵泡生长发育,激活作用具有浓度依赖性。
  2.人卵巢组织体外培养、激活过程中卵巢组织未见组织坏死和形态学变化。
  3.利用人卵巢组织异种移植小鼠肾被膜下的方法可成功建立异种移植动物模型,人卵巢组织在小鼠体内存活完好并且具有激素分泌作用。
  4.卵巢组织体外培养、体外激活过程并未造成卵巢组织的异常DNA甲基化水平改变,进而从表观遗传学角度初步证实操作过程的安全性。
  5.卵巢组织体外激活结合卵巢组织移植术可为POI女性提供新的辅助生殖治疗方法。
[硕士论文] 张红红
生殖内分泌与妇科微创技术(妇产科学) 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  宫腔粘连指任何因素造成的子宫内膜基底层损伤,导致宫腔部分或全部堵塞,临床上可引起闭经、月经量减少、周期性腹痛、不孕、复发性流产、胎盘异常等一系列症状,对女性生育功能的影响十分严重。妊娠期刮宫是造成宫腔粘连的主要原因。宫腔粘连分离术是目前治疗宫腔粘连的主要方法,然而宫腔镜下宫腔粘连分离术后再粘连率高达62.5%,妊娠成功率仅22.5%~33.3%。目前临床上用于宫腔粘连分离术后预防再复发的方法多种多样,包括宫腔放置宫内节育器、球囊支架、透明质酸钠、羊膜、激素治疗等。然而重度宫腔粘连患者由于子宫内膜基底层受损严重,再生能力差,即使宫腔镜使宫腔解剖结构恢复且有多种治疗方式预防再粘连,但其术后由于子宫内膜再生修复障碍导致粘连的复发率仍较高。故寻求更有效的促进子宫内膜功能性再生的治疗方法在临床实践中已成为急需解决的困难。
  再生医学被认为是宫腔粘连患者的未来,干细胞治疗开启了再生医学修复子宫内膜损伤的新篇章,然而干细胞应用于临床有种种限制,阻碍了其发展。组织工程学为子宫内膜再生修复提供了一种新的选择,生物材料用于组织器官的再生修复在腹壁、口腔、皮肤、乳腺等领域已经取得良好的临床效果,但在子宫内膜的再生修复中尚处于起步阶段,仅有少量的动物试验报道。膀胱黏膜层基底膜(UBM)是一种衍生的ECM生物材料,保留有完整的基底膜,基底膜为隔离细胞与结缔组织、支撑上皮细胞、内皮细胞、肌细胞和雪旺氏细胞的特化ECM结构,基底膜的完整是机体实现自我功能性完全修复(子宫内膜/皮肤/肌肉/角膜)的基础,而且UBM与其他生物材料相比,免疫原性接近天然豁免、耐受感染、力学性能理想、有更高的生物活性和组织再生诱导能力。
  因此本研究将UBM生物材料植入子宫内膜受损的大鼠子宫中,评估UBM生物材料对损伤的子宫内膜的再生修复作用,为UBM应用于宫腔粘连的临床治疗提供一定的治疗依据。
  方法:
  1、切开子宫角,刀片损伤SD大鼠子宫内膜后,实验组将UBM生物材料植入大鼠宫腔后缝合子宫角,阳性对照组损伤内膜直接缝合子宫角,假手术组切开子宫角不损伤子宫内膜后缝合,阴性对照组不予任何处理。
  2、术后两周、四周收集各组子宫角标本,通过HE染色、Masson染色以及免疫组化观察比较子宫内膜组织学变化以及Ki67、微血管的改变;通过RT-PCR检测宫腔粘连相关因子在子宫中的表达;
  3、术后八周,通过RT-PCR检测,孕5天整合素αVβ3、LIF在子宫中的表达,评价子宫内膜容受性;于孕晚期观察大鼠子宫上胚胎数量及胚胎着床部位评价妊娠情况。
  结果:
  1、子宫大体外观:子宫内膜损伤术后两周、四周,UBM组的宫腔积液率明显低于损伤对照组。
  2、子宫内膜损伤术后四周子宫内膜厚度测量和腺体数量计数:UBM组的子宫内膜厚度和腺体数均明显高于损伤对照组,且与正常对照组、假手术组相近。
  3、Masson染色结果显示:损伤组大量胶原纤维沉积,瘢痕化严重,UBM材料修复组纤维化面积明显低于损伤对照组。
  4、免疫组化结果显示:UBM组的增殖细胞数目、微血管数量明显高于损伤对照组。
  5、RT-PCR结果显示:抗炎相关细胞因子(b-FGF)在UBM组的mRNA表达量高于损伤对照组;促炎性相关细胞因子(TNF-α)在UBM组的mRNA表达量低于损伤对照组;促纤维化相关的细胞因子TIMP、PDGFBB、TGF-B、COLIA1的mRNA表达量在UBM组中明显低于损伤对照组;而抗纤维化因子RUNX在UBM材料修复组的mRNA表达量明显高于损伤对照组。
  6、子宫内膜容受性:整合素αVβ3、LIF,在UBM组的mRNA表达量明显高于损伤对照组。
  7、妊娠结局显示:UBM组妊娠率接近正常对照组和假手术组,明显高于损伤组,胚胎着床数量UBM组高于损伤组,但少于正常对照组和假手术组。
  结论:
  1、UBM用于修复受损的子宫内膜能够减少子宫内膜组织的纤维化,促进新生血管的生成和细胞的增殖,减少促纤维化细胞因子增加抗纤维化细胞因子的分泌,能够在一定程度抑制纤维化,促进子宫内膜的再生修复。
  2、通过UBM修复宫腔粘连的子宫内膜能一定程度提高LIF和整合素αVβ3的表达,提高子宫内膜的容受性和生育能力。
[博士论文] 倪冬冬
妇产科学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  本研究通过检测人及大鼠正常子宫内膜、人纤维化子宫内膜和子宫内膜纤维化大鼠模型的子宫内膜中的赖氨酰氧化酶家族成员的表达水平变化,探索赖氨酰氧化酶家族的表达与与子宫内膜纤维化的相关性;通过给子宫内膜纤维化模型大鼠腹腔注射赖氨酰氧化酶家族的特异性抑制剂β-氨基丙腈(β-Aminoproprionitrile,β-APN或BAPN)后检测TGF-β1/Smad信号通路关键蛋白的表达来研究赖氨酰氧化酶家族和TGF-β1/Smad信号通路在子宫内膜纤维化中的关系,初步阐述赖氨酰氧化酶家族成员在子宫内膜纤维化中的作用机制,为子宫内膜纤维化的治疗寻找有效靶点。
  方法:
  一、检测赖氨酰氧化酶家族在正常人子宫内膜及纤维化子宫内膜中的表达特点
  1、采用免疫组织化学法检测正常人和宫腔粘连病人纤维化子宫内膜赖氨酰氧化酶家族的表达。
  2、蛋白免疫印迹实验检测正常人和宫腔粘连病人纤维化子宫内膜赖氨酰氧化酶家族蛋白表达量的变化。
  二、检测赖氨酰氧化酶家族在正常Wistar大鼠子宫内膜和机械刮宫后不同时间点大鼠子宫内膜中的表达特点
  1、24只Wistar大鼠通过机械搔刮子宫腔的方法建立纤维化子宫内膜大鼠模型,术后大鼠子宫自然愈合,并分别在术后24小时、48小时、72小时,7天各随机选取6只大鼠麻醉后取出双侧子宫标本。
  2、采用免疫组织化学法检测正常大鼠子宫内膜和机械刮宫后大鼠子宫内膜中赖氨酰氧化酶家族的表达。
  4、采用苏木素-伊红和masson染色法分别评估大鼠子宫内膜的组织形态学变化和胶原含量的变化
  5、采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分别检测正常大鼠子宫内膜和机械刮宫后术后24小时、48h小时、72小时和7天时大鼠子宫内膜中赖氨酰氧化酶家族mRNA和蛋白量的表达差异。
  三、β-氨基丙腈抑制赖氨酰氧化酶活性后对Wistar大鼠子宫内膜纤维化的作用以及对TGF-β1/Smad信号通路的影响
  1、实验组大鼠通过机械搔刮子宫腔建立子宫内膜纤维化大鼠模型,机械刮宫后,大鼠每天以200mg/kg/d的剂量腹腔注射赖氨酰氧化酶的特异性抑制剂β-氨基丙腈,并分别在术后24小时、48小时、72小时,7天各选取6只大鼠麻醉后取出双侧子宫标本。
  2、使用赖氨酰氧化酶活性检测试剂盒检测正常大鼠子宫内膜、机械刮宫后大鼠子宫内膜(对照组)、机械刮宫后给予200mg/kg/d剂量β-氨基丙腈治疗的大鼠子宫内膜(实验组)中赖氨酰氧化酶的活性。
  3、采用苏木素-伊红和masson染色法分别评估各组大鼠子宫内膜的组织形态学变化和胶原含量的变化。
  4、采用羟脯氨酸试剂盒检测各组大鼠子宫内膜中不可溶胶原的羟脯氨酸含量。通过羟脯氨酸的测定,可以反映胶原蛋白的含量。
  5、采用免疫组化法检测各组大鼠子宫内膜中TGF-β1、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3的表达。
  6、采用实时荧光定量PCR法分别检测各组大鼠子宫内膜在不同时间点TGF-β1、Smad2、Smad3在mRNA水平表达量的变化。
  7、采用蛋白免疫印迹法检测各组大鼠子宫内膜在不同时间点CollagenⅠ、TGF-β1、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达量的变化。
  四、统计学处理
  实验数据以平均值±标准差(mean±SD)的方式表示,使用SPSS16.0软件进行统计分析。两组间的数据比较,采取单因素方差分析,组内两两数据比较采用T检验方法。P<0.05具有统计学差异,P<0.01具有统计学显著差异。
  结果:
  一、赖氨酰氧化酶家族在正常人及人纤维化子宫内膜中均有表达,在正常Wistar大鼠子宫内膜和机械刮宫后不同时间点大鼠子宫内膜中均有表达,且其家族成员中的LOX、LOXL1在人和大鼠纤维化子宫内膜中的mRNA及蛋白表达量均显著升高,提示LOX、LOXL1与大鼠子宫内膜纤维化相关。
  1、免疫组织化学结果显示,在正常人子宫内膜组织、人纤维化子宫内膜组织、正常Wistar大鼠子宫内膜组织和大鼠纤维化子宫内膜中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3、LOXL4均有表达。
  2、实时荧光定量PCR检测结果显示,在机械损伤后的48小时、72小时、7天的大鼠子宫内膜中LOX、LOXL1的mRNA表达量均显著升高(P<0.01)。LOXL2mRNA的表达量在机械损伤后的72小时、7天的大鼠子宫内膜中均升高(P<0.05)。提示LOX、LOXL1与大鼠子宫内膜纤维化相关。
  3、蛋白免疫印迹实验结果提示,人粘连子宫内膜组织中LOX、LOXL1表达较正常人子宫内膜显著升高(P<0.01)。在纤维化大鼠子宫内膜中LOX、LOXL1表达量较正常组大鼠子宫内膜显著升高(P<0.01),LOXL2有一定程度升高但不显著(P<0.05)。提示LOX、LOXL1与人和大鼠子宫内膜纤维化相关。
  二、抑制赖氨酰氧化酶活性后子宫内膜纤维化程度减轻,提示赖氨酰氧化酶与大鼠子宫内膜纤维化关系密切。
  1、Masson染色结果显示:对照组大鼠在机械刮宫72小时、7天子宫内膜蓝染程度较正常组大鼠子宫内膜蓝染程度明显加重(P<0.01)。实验组大鼠子宫内膜在使用β-氨基丙腈治疗后72小时和7天的子宫内膜的蓝染程度较对照组大鼠子宫内膜的蓝染程度明显减轻(P<0.01)。表明机械刮宫可导致子宫内膜纤维化。使用β-氨基丙腈治疗后的纤维化大鼠子宫内膜胶原含量减少,纤维化程度降低(P<0.01)。提示子宫内膜纤维化大鼠模型建模成功,赖氨酰氧化酶与大鼠子宫内膜纤维化相关。
  2、羟脯氨酸试剂盒检测结果提示:对照组大鼠在机械刮宫后72小时和7天时其子宫内不可溶性胶原的羟脯氨酸含量显著增加(P<0.01)。实验组大鼠在β-氨基丙腈治疗72小时和7天时其子宫内不可溶性胶原的羟脯氨酸含量显著降低(P<0.01)。提示子宫内膜纤维化大鼠模型建模成功,β-APN可抑制大鼠子宫内膜纤维化,赖氨酰氧化酶与大鼠子宫内膜纤维化相关。
  3、蛋白免疫印迹实验检测CollagenⅠ蛋白结果显示:在对照组大鼠机械刮宫后48h、72h和7d大鼠子宫的CollagenⅠ蛋白表达量均较正常组大鼠显著上升(P<0.01)。提示大鼠子宫内膜机械损伤可导致内膜纤维化,子宫内膜纤维化大鼠建模成功。实验组大鼠在机械刮宫后给予β-APN治疗48小时、72小时和7天时大鼠子宫collagenⅠ蛋白的表达量较相应时间点对照组大鼠显著减少(P<0.01),提示子宫内膜纤维化大鼠模型建模成功,β-APN可抑制大鼠子宫内膜纤维化,赖氨酰氧化酶与大鼠子宫内膜纤维化相关。
  三、赖氨酰氧化酶可能是通过TGF-β1/Smad信号通路在子宫内膜纤维化中发挥作用
  1、赖氨酰氧化酶活性检测结果显示:机械刮宫后大鼠子宫赖氨酰氧化酶活性逐渐升高,机械刮宫后72小时后其活性显著升高(P<0.01)。β-氨基丙腈治疗48小时后各时间点实验组大鼠子宫赖氨酰氧化酶活性较相同时间点对照组大鼠子宫显著降低(P<0.01)。提示β-氨基丙腈可有效抑制大鼠子宫赖氨酰氧化酶活性
  2、HE染色结果显示:对照组大鼠子宫内膜机械损伤后7天,子宫内膜腺体数量减少,腺体扩张,子宫内膜组织形态差。与对照组相同时间点相比,实验组大鼠用β-氨基丙腈治疗子宫内膜组织形态,腺体形态,宫腔形态都恢复的更好。
  3、免疫组织化学结果显示:在正常大鼠子宫内膜组织和机械损伤后大鼠子宫内膜中TGF-β1、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3均有表达且集中表达在损伤子宫内膜组织及其腺体内。
  4、实时荧光定量PCR实验结果显示:对照组大鼠子宫TGF-β1mRNA在不同时间点均较正常组大鼠显著升高(P<0.01),Smad2和Smad3的mRNA表达量在刮宫后48小时后各时间点表达量均显著升高。β-氨基丙腈治疗后各时间点实验组大鼠子宫的TGF-β1mRNA的表达量均对照组显著下降(P<0.01),β-氨基丙腈治疗48小时后的各时间点实验组大鼠子宫的Smad2和Smad3的mRNA表达量均较对照组显著下降(P<0.01)。提示在大鼠子宫内膜纤维化形成过程中TGF-β1/Smad信号通路与赖氨酰氧化酶相关。
  5、蛋白免疫印迹实验结果显示:对照组大鼠子宫TGF-β1、Smad2、Smad3、p-Smad2和p-Smad3在机械刮宫后72小时和7天的蛋白表达量均显著高于正常大鼠子宫(P<0.01)。实验组大鼠子宫内膜中TGF-β1、Smad2、Smad3、p-Smad2和p-Smad3的蛋白表达量在刮宫72小时及7天时显著低于相应时间点对照组大鼠子宫(P<0.01)。提示在大鼠子宫内膜纤维化形成过程中TGF-β1/Smad信号通路与赖氨酰氧化酶相关。
  结论:
  1、赖氨酰氧化酶家族在正常人子宫内膜和宫腔粘连患者子宫内膜中均有表达。
  2、赖氨酰氧化酶家族在正常大鼠子宫内膜和纤维化大鼠子宫内膜中均有表达。
  3、LOX、LOXL1与人和大鼠的子宫内膜纤维化形成关系密切。
  4、LOX、LOXL1在大鼠子宫内膜纤维化形成过程中与TGF-β1/Smad信号通路关系密切。
[博士论文] 李冲
内科(内分泌) 郑州大学 2017(学位年度)
摘要:本文分为以下几个部分:
  第一部分:血清Irisin与多囊卵巢综合征的关系研究
  目的:
  多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄期妇女最常见的内分泌代谢异常和生殖功能障碍性疾病,通常表现为月经稀发、持续性不排卵或稀发排卵、高雄激素血症、胰岛素抵抗等,PCOS病因和发病机制尚不明确,高胰岛素血症和胰岛素抵抗被认为是PCOS发生的中心环节。近年来,越来越多的研究显示脂肪因子和肌肉因子在PCOS胰岛素抵抗中起了重要作用。Irisin是一种新近发现的肌肉因子,可将白色脂肪转化为米色脂肪或棕色脂肪,从而促进新陈代谢、加快能量释放、减轻体重,Irisin可能成为肥胖相关代谢性疾病治疗的新靶点,同时也为进一步研究PCOS的发病机制和治疗方案提供了新的思路和方向。通过检测PCOS患者和育龄期正常女性血清Irisin水平,探讨Irisin与糖脂代谢、身体成分、骨代谢和生殖激素的关系,揭示Irisin在PCOS能量代谢中的作用。
  方法:
  选取2013年1月-2016年1月在本院内分泌科初诊的育龄期PCOS患者180例,选择同期进行健康体检的育龄期女性40例作为正常对照组。检测并比较各组空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(HbA1C)、血脂、促卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH/FSH)、性激素结合球蛋白(SHBG)、睾酮(T)、硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)、血清Irisin,采用稳态模型评估法计算胰岛素抵抗指数HOMA-IR,应用超声定量肝脏脂肪含量的方法对肝脏脂肪含量(LFC)进行定量检测。运用双能X线吸收法测定四肢脂肪占全身脂肪百分比(LF%)、躯干脂肪占全身脂肪百分比(TL%)、男性型脂肪百分比(A%)、女性型脂肪百分比(G%),男性型脂肪百分比/女性型脂肪百分比(A/G)、体脂率(BF%)、瘦体重、内脏脂肪面积(VAT)。采用统计学软件SPSS19.0进行数据处理。
  结果:
  1.PCOS患者中超重和肥胖占66.7%,高血压占5.6%,脂代谢异常20%,DM占9.4%。
  2.与正常对照组相比,PCOS组体重、BMI、WHR、2hPG、FINS、2hINS、HOMA-IR、TG、LDL-C、LH/FSH、T、DHEAS、AND、FAI、LF、TF、BF、Android fat%(A)、A/G、VAT、瘦体重、LFC、Irisin均明显升高(P<0.05),SHBG、G、HDL-C明显下降(P<0.05),骨密度和骨转换指标无明显差异(P>0.05)。
  2.与PCOS体重正常组相比,超重和肥胖组血清Irisin、2hPG、FINS、2hINS、HOMA-IR、LFC、LH/FSH、FAI、瘦体重、TF、BF、LFC、A/G明显升高(P<0.01或P<0.05),G、SHBG下降(P<0.05),VAT、HDL-C、LDL-C、TG无显著性差异;
  3.随着BMI的增加,育龄期PCOS患者月经异常或排卵障碍、高雄激素血症或临床表现、卵巢多囊样改变发生率逐渐升高;
  4.在育龄期PCOS患者中,血清Irisin与BMI、HOMA-IR、FINS、FAI、瘦体重、Android fat%、体脂率呈正相关(P均<0.05)
  5.多元线性回归分析显示,HOMA-IR、BMI、FAI、体脂率、Android fat%是影响血清Irisin的主要因素。
  结论:
  育龄期PCOS患者的糖脂代谢异常发生率升高,尤其是肥胖PCOS患者。随着BMI的增加,育龄期PCOS患者月经异常、高雄激素血症的生化和/或临床表现、卵巢多囊样改变发生率升高。Irisin与BMI、HOMA-IR、FAI、体脂率、Android fat%呈正相关,提示irisin参与了PCOS的胰岛素抵抗、生殖代谢紊乱和身体成分的重新分布。Irisin可能通过调控多种组织的能量代谢参与了PCOS的发生和发展。
  第二部分:艾塞那肽联合二甲双胍对多囊卵巢综合征的干预作用
  目的:
  艾塞那肽(EXA)是一种胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂,可通过抑制下丘脑的摄食中枢、降低食欲、延缓胃排空等作用减少摄食、减轻体重,目前主要用于治疗肥胖型糖尿病患者,但由于艾塞那肽促进胰岛素释放的方式呈葡萄糖依赖性,因此发生低血糖的几率较小,近年来GLP-1受体激动剂和GLP-1类似物在临床上被用于治疗肥胖型PCOS,但样本量较少。我们通过比较不同疗程艾塞那肽(EXA)单用或联合二甲双胍(MET)对育龄期糖耐量正常的肥胖多囊卵巢综合征(PCOS)患者Irisin、糖脂代谢、生殖激素、体脂分布的影响,探讨EXA单独或联合MET对PCOS患者的有效性和安全性。
  方法:
  1.本研究为随机对照试验,通过了我院医学伦理委员会审批,采用随机序号法进行分组,所有患者充分了解试验过程并签署知情同意书;
  2.所有患者为20-40岁糖耐量正常的育龄期妇女,均符合2003年鹿特丹会议推荐的诊断标准,且体质指数≥24kg/m2;
  3.研究分组:
  MET组:二甲双胍(格华止)500mg Bid po,1周后加至1000mg Bid;
  EXA组:艾塞那肽(百泌达)5ug Bid iH,4周后加至10ug Bid;
  COM组:二甲双胍联合艾塞那肽,方法同上。
  4.观察治疗12周和24周前后血清irisin水平、糖脂代谢指标、生殖激素、每年月经频次、排卵率、受孕率及不良反应。
  5.统计学处理采用SPSS19.0统计学软件。
  结果:
  1.共有156例(156/180,86.7%)患者完成12周的治疗观察,其中MET组60例(60/64,93.8%),EXA组40例(77.5%,40/48),COM组56例(82.1%,56/68);共有82例完成24周治疗观察,其中MET组36例,EXA组22例,COM组24例;
  2.治疗前,三组基线资料无明显差异(P>0.05);
  3.治疗12周后,三组BMI、FINS、HOMA-IR、2hPG、TG水平显著减低(P<0.01);血清Irisin、DHEAS、LH/FSH均降低(P<0.05); HDL-C、每年月经频次较前升高(P<0.05);COM组WHR、FAI、LFC、BF较前下降(P<0.05),TF、LF无明显变化;三组在恢复月经方面没有显著性差异(P>0.05),但COM组排卵率和受孕率明显高于MET组和EXA组(P<0.05)。
  4.治疗24周后,三组FINS、BMI、WHR、2hPG、HOMA-IR、TG、血清Irisin、LH/FSH、FAI、DHEAS水平显著降低(P<0.01);COM组TF、LFC、BF均降低(P<0.05);HDL-C、SHBG、每年月经频次较前升高(P<0.05);MET组和EXA组排卵率和受孕率明显高于治疗12周(P<0.05),COM组在排卵率和受孕率上优于MET组和EXA组,差别具有统计学意义(P<0.05)。
  5.三组治疗中均无低血糖发生,胃肠道反应是最常见的不良反应,多可耐受。均在2周后消失或缓解;两例因不能耐受退出。
  结论:
  短期单用艾塞那肽、二甲双胍或两者联用能够降低血清Irisin水平,改善育龄期肥胖PCOS患者糖脂代谢指标、恢复规律月经。提示,血清Irisin可能在艾塞那肽和二甲双胍改善PCOS及其相关代谢紊乱方面发挥一定作用。联合治疗组在改善排卵率、受孕率方面优于单药治疗组。延长治疗周期可带来更大的临床获益,尤其是对内分泌代谢指标的改善。艾塞那肽联合二甲双胍用于治疗肥胖PCOS患者安全有效,由于样本较少,仍需要大样本多中心的临床试验来证实该方案的可行性及可推广性。
[博士论文] 陈泰来
妇产科学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:本文主要从以下几方面进行论述:
  第一章 空卵泡综合征致病突变的定位研究
  目的:空卵泡综合征(EFS)是指在促排卵周期或自然周期中,超声监测下卵泡大小、数目及血清雌激素水平均在正常范围,但经反复抽吸、冲洗均无法获得卵母细胞。目前临床上对于反复发生EFS的患者尚无有效助孕方法,为获得妊娠,这部分不孕女性只能借助于供卵。关于EFS的发病机制至今尚未明确,有研究者认为与卵泡提早闭锁、卵巢老化等因素有关。对于EFS的遗传学发病机制,既往研究包括LHCGR基因突变和2号染色体倒位,但均为单个病人或单个小家系的研究,缺少令人信服的大家系研究。笔者前期收集了一个有六个不孕症患者的大家系(家系Ⅰ),先证者及其姐姐的各三个体外助孕周期获得的卵冠丘复合物几乎全部为空黏液团,仅极少数存在退变的卵母细胞,表现为EFS;先证者的两个姑姑与两个堂姐妹也同样为不明原因不孕症患者。本章研究拟通过此大家系,定位EFS的致病突变。
  方法:为明确EFS的致病基因,首先对家系Ⅰ进行全基因组连锁分析,找到连锁不平衡区域。该家系为常染色体显性遗传,致病突变由父亲传递。为进一步明确致病突变,选择家系Ⅰ中的三个患者、两个突变携带者和两个正常女性对照进行全外显子组测序。对全外显子组测序数据进行生物信息分析并对候选位点进行验证、常用数据库过滤和正常生育女性对照过滤。将最终筛选出的位点在另一个EFS大家系(家系Ⅱ)和EFS散发病人中验证,并追溯携带此突变的散发病人的家族史,明确变异的来源。最后综合上述结果,得到导致EFS的致病突变位点。
  结果:经全基因组连锁分析发现该家系的连锁不平衡区域位于7p12.3-q21.13。全外显子组测序结果经过生物信息分析及验证、常用数据库和正常生育女性对照中过滤后,得到候选位点:ZP3 c.400 G>A(p.Ala134Thr)杂合错义突变。该突变位于家系Ⅰ的连锁不平衡区域中,与疾病状态共分离。在家系Ⅱ中,该突变亦与疾病状态共分离。经连锁分析证实,在这两个大家系中,此突变为独立发生,不存在同源性。在21例EFS散发病例中,有2例携带同一位点相同的突变,追溯家族史发现其中一位患者的突变为新发突变(de novo)。
  结论:本研究是EFS的首个大家系研究,通过两个EFS大家系和EFS散发病例研究发现ZP3 c.400 G>A(p.Ala134Thr)杂合错义突变可能为EFS的致病突变。本研究也为EFS提供了潜在的诊断靶点:对于取卵呈现空黏液团无法获卵的不孕症患者可早期进行ZP3 c.400 G>A的突变筛查,若患者携带此突变,则应避免反复促排卵尝试,尽早转换助孕策略,从而减轻患者的经济负担和精神压力,获得更好的助孕结局。
  第二章 致病突变的体外功能研究
  目的:ZP3基因编码的ZP3糖蛋白是卵母细胞透明带的重要组分。透明带是包绕卵母细胞的结构,是卵母细胞的“外衣”,在卵母细胞发育、受精及早期胚胎发育过程中起到重要的作用。p.Ala134Thr突变位于ZP3的ZP功能域,ZP功能域在透明带组装过程中发挥重要的作用。本章将通过体外实验对p.Ala134Thr进行功能研究。
  方法:首先通过卵母细胞免疫荧光染色和卵巢活检组织石蜡切片染色等方法,对空卯泡综合征患者卵母细胞的具体异常进行表征。用PyMol软件预测突变对ZP3糖蛋白分子三维结构的影响。随后通过构建野生型、突变型表达载体,并转染至中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)中,裂解细胞获得总蛋白,利用免疫共沉淀技术探究突变型蛋白对蛋白互作的影响。
  结果:家系Ⅰ先证者穿刺取卵获得的绝大多数为空黏液团,极少数包含无透明带的退变卵母细胞。免疫荧光显示卵母细胞核物质完全崩解,且卵外周无ZP3信号聚集。卵巢活检石蜡切片示卵泡中的卵母细胞无透明带结构且呈退变状态。免疫共沉淀实验证实野生型ZP3可与ZP2结合,突变型ZP3不与ZP2结合,但野生型、突变型ZP3同时存在时,突变型ZP3通过与野生型ZP3结合以阻止野生型ZP3与ZP2的结合,发挥显性负效应的作用,妨碍透明带的形成。
  结论:p.Ala134Thr突变发挥显性负效应的作用,抑制ZP3与ZP2的结合,妨碍透明带的形成,引起卵母细胞退变,表现为空卵泡综合征。
  第三章 致病突变的小鼠模型研究
  目的:透明带的结构在哺乳动物中具有很高的保守性。小鼠透明带由Zp1、Zp2、Zp3基因编码的糖蛋白构成,由Zp2和Zp3相互连接成纤维状结构,Zp1连接这些纤维构成三维网状结构。在既往的报道中,Zp3基因敲除小鼠完全不孕,超数排卵实验获得的卵冠丘复合物大多为空黏液团,少数取到的卵母细胞无透明带,这与本研究中空卵泡综合征患者的表型极为相似。人和小鼠的ZP3均包含424个氨基酸,氨基酸序列同源性达67%。除外小鼠、大鼠等啮齿类动物,ZP3糖蛋白的第134位氨基酸位点在各物种中均为丙氨酸(Ala)。小鼠Zp3糖蛋白在此位点为性质与丙氨酸类似的缬氨酸(Val)。因此,在构建点突变小鼠模型时,我们将小鼠Zp3基因一条链突变为苏氨酸(Thr),另一条链保持不变,仍为缬氨酸,即获得p.Val134Thr小鼠。本章将对p.Val134Thr点突变小鼠进行研究,进一步验证该突变的功能。
  方法:利用CRISPR-Cas9编辑的“类精子细胞”单倍体细胞系制备p.Val134Thr点突变小鼠,与性成熟的野生型雄鼠合笼观察生育力;对21天的小鼠行超数排卯,统计获卯数;分别取21天和6周龄小鼠卵巢组织脱水、石蜡包埋,对组织切片行HE染色、ZP3免疫组织化学(IHC)和过碘酸-雪夫染色(PAS),观察组织切片中各级卵泡中卯母细胞的形态。
  结果:p.Val134Thr点突变纯合小鼠完全不孕,杂合子小鼠生育力与野生型相比虽略有降低,但无统计学差异。超数排卵实验中,杂合子、纯合子小鼠获卵数与野生型小鼠相比均存在显著差异。杂合子小鼠获卵数约为野生型小鼠的1/2-2/3,卵母细胞透明带比野生型小鼠薄;纯合子小鼠绝大部分的卵冠丘复合物为空黏液团,少数获得的卵母细胞无透明带且大小不一,为退变裂解卵。卵巢切片HE、IHC、PAS染色示杂合子小鼠卵母细胞形态大致正常,但透明带相比于野生型小鼠略薄;纯合小鼠卵母细胞缺乏透明带。
  结论:p.Val134Thr纯合突变小鼠不孕,超数排卵大多数为空黏液团,仅获得少数无透明带的退变卵母细胞,表型与空卵泡综合征患者一致。
[博士论文] 张慧辉
妇产科学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:本文主要从以下几个部分展开论述:
  第一部分 955例早发性卵巢功能不全基于病因分类的临床特征分析
  背景:
  早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI),过去也被称为卵巢早衰(premature ovarian failure,POF),指女性40岁之前出现闭经,伴随雌激素缺乏、促性腺激素升高。POI导致一系列生殖内分泌及健康问题,患者丧失生殖能力,生殖器萎缩,长期低雌激素增加骨质丢失、增加心血管疾病等风险。近年来,随着不断加重的环境问题、经济和社会压力、生育推迟和肿瘤患者放化疗后生存时间延长,POI发生率逐渐增高,引起了越来越多的关注。POI的临床表型和病因高度异质,不同病因所致的POI临床表现及疾病进程是否存在差异,目前缺乏相关研究报道。
  目的:
  本文通过分析955例POI患者临床数据,探讨不同病因POI患者的临床表型特征及疾病发展进程,进而总结出中国汉族POI患者的临床表型与病因之间的关系,为POI的预防、诊治提供参考和依据。
  方法:
  募集2006年-2015年于山东大学附属生殖医院就诊的POI患者共955例,通过填写调查问卷的方式,详细询问患者的病史并进行各项相关检验指标和体征的检查,详细收集患者的相关资料。包括月经特征、激素水平测定、盆腔超声、卵巢组织活检、妊娠史、POI家族史等,对遗传、自身免疫、以及医源性因素进行评估并根据不同病因分组比较其临床特征。根据月经来潮方式,分为原发闭经(primary amenorrhea,PA)和继发闭经(secondary amenorrhea,SA)。在继发闭经患者中根据月经持续时间(月经初潮到闭经的时间)分为4组:≤5年(G1组,n=182);6-10年(G2组,n=243);11-15年(G3组,n=220);>15years(G4组,n=176)。比较不同组间的临床特征和表型差异。
  结果:
  在955例POI患者中,原发闭经患者134例(14.0%),继发闭经患者821例(86.0%),原发闭经患者基础雌二醇水平显著低于继发闭经患者[10.0(5.0-17.6)vs.14.0(5.4-29.0)pg/ml,P<0.001],染色体异常率(30.7%vs.11.6%,P<0.001)显著高于继发闭经患者。
  继发闭经患者中,大多数患者(69.2%,568/821)在出现月经不规律后1年内发生闭经,提示卵巢功能的衰退非常迅速。超声检测发现仅28.4%患者存在超声可见的卵泡。在继发闭经患者中,有POI家族史的患者染色体异常率显著低于无家族史患者(2.9%,2/70vs.13.0%,67/516,P<0.001),既往妊娠率高于无家族史患者(32.4%,33/102vs.21.6%,155/719,P=0.015)。继发闭经患者月经持续时间越长,既往妊娠率越高(G1:4.4%,G2:12.0%,G3:24.5%,G4:55.7%;P<0.001),有POI家族史的比率也越高(G1:9.3%,G2:9.9%,G3:13.2%,G4:18.2%,P=0.036)。按病因分类,继发闭经POI的常见病因包括遗传因素(13.2%)、免疫因素(12.0%)、医源性因素(7.3%),近68%的患者病因不清楚,为特发性POI。不同病因的POI患者临床表型有显著差异,其中遗传因素引起的POI卵巢功能衰竭最为严重。
  结论:
  通过最大样本的POI临床特征分析与病因分类研究,本研究发现POI患者病因复杂多样,半数以上患者病因不明。不同病因临床表现差异显著,遗传异常导致卵巢功能衰竭最为严重。POI家族史提示相对较好的卵巢功能状态和妊娠结局。本结果为临床POI的病因分类、生育指导和遗传咨询提供重要参考和依据。
  第二部分 MicroRNAs在生化异常POI患者颗粒细胞中的差异表达分析
  背景:
  MicroRNA(miRNA),是长度为21-24核苷酸的非编码RNA,广泛存在于人体各种组织和体液中,通过转录后调控基因表达。大量研究证实miRNAs在很多疾病发病过程中发挥重要作用,可以作为诊断多种癌症、糖尿病等的有效标志物。MiRNAs参与调控卵巢颗粒细胞的增殖、分化和凋亡并参与控制类固醇激素的分
  泌,从而影响和调控卵巢功能。随着miRNAs在生殖领域中的作用不断得到证实,miRNAs作为女性生殖系统的重要调控因子越来越受到关注。目前关于miRNAs在
  POI中的研究较少,尚不能全面阐明miRNAs在POI发病过程中的变化及作用。
  目的:
  本课题通过miRCURYTM芯片技术筛选生化异常期POI(biochemichal premature ovarian insufficiency,bPOI)患者与正常对照女性颗粒细胞中差异表达的miRNAs,选择差异显著的miRNAs在生化异常期POI患者和健康女性对照者的颗粒细胞中进行验证,并进行GO分析和KEGG分析,归纳靶基因的功能和所在分子通路,进而探讨miRNAs在bPOI患者颗粒细胞中的表达情况及其意义。
  方法:
  募集2014年6月至2015年9月在山东大学附属生殖医院行IVF-ET/ICSI-ET助孕的患者共102例,其中生化异常阶段POI患者40例,因男方因素或输卵管因素就诊的卵巢功能正常对照女性62例。长方案或短方案促排卵,取卵时留取患者颗粒细胞,提取颗粒细胞中的RNA。通过miRCURYTM芯片在10例生化异常期POI(biochemichal premature ovarian insufficiency,bPOI)患者与10例对照女性颗粒细胞中筛选出75条差异表达的miRNAs[差异指数(Fold Change,FC)>2;P<0.05],从中选择表达差异显著的26条miRNAs,扩大样本进行Real-Time PCR验证表达趋势及变化。
  结果:
  根据前期通过miRCURYTM芯片技术在10例生化异常期的POI患者与10例卵巢功能正常的对照女性颗粒细胞中筛选出表达有差异的miRNAs共75个(FC>2;P<0.05),其中与对照组相比在生化异常期POI患者的颗粒细胞中表达下调的miRNAs共有45个,上调的miRNAs共有30个。选择表达差异显著的26条miRNAs(表达上调的13条:miR-410-3p、miR-493-5p、miR-4301、miR-4791、miR-875-3p、miR-136 5p、miR 451b、miR-376c-3p、miR-376c-5p、miR 487b-3p、miR-376b-5p、miR-889-3p和miR-944;表达下调13条:miR-3197、miR-4434、miR-5584-5p、miR-758 5p、miR-4747-3p、miR-4476、miR-4650-5p、miR-3945、miR-4326、miR-4697-3p、miR-3648、miR-4673和miR-4694-5p),通过Real-Time PCR在16例生化异常期POI患者(bPOI组)和16例卵巢正常对照患者(CON组)颗粒细胞中进行验证,结果显示6条miRNAs(miR-493-5p、miR-4301、miR-4747-3p、miR-4650-5p、miR 3648、miR 4673)在bPOI患者的颗粒细胞中表达显著下调(P<0.05)。其中miR-4747-3p、miR-4650-5p、miR-3648和miR-4673与芯片筛查结果一致,而miR-493-5p和miR-4301与芯片筛查结果相反。随后,我们进一步在40例bPOI和62例CON患者的颗粒细胞中验证这6条具有显著差异的miRNA。扩大样本验证结果显示:与对照组相比,5条miRNAs(miR 493-5p、miR-4747-3p、miR-4650-5p、miR-3648和miR-4673)在生化异常期POI患者颗粒细胞中表达存在显著下调(P<0.05),而miR-4301表达无显著差异(P=0.534)。
  结论:
  本研究首次发现miR-493-5p、miR-4747-3p、miR-4650 5p、miR3648和miR-4673在生化异常期POI患者颗粒细胞中的表达显著下调,调控机制有待进一步研究,本结果为探讨非编码RNA参与POI的发生发展过程提供线索和方向。
[硕士论文] 王汝倩
中医妇科学 中国人民解放军海军军医大学;第二军医大学 2017(学位年度)
摘要:背景:
  子宫内膜异位症(Endometriosis,EM)是指子宫内膜组织腺体和间质在子宫以外的部位生长的雌激素依赖性妇科疾病。EM在生殖年龄妇女中的发病率为10~15%;不孕妇女中有20%~50%患有EM,而30%~50%的EM妇女患有生殖能力低下或者不孕。EM性不孕症发病机制复杂,目前尚无理想的治疗方案,严重影响了患者的生活质量,越来越受到医学研究者们的关注。内异方是导师俞超芹教授临床治疗EM性不孕症的有效中药复方,在多年来的临床实践中取得了良好的疗效,但其确切的作用机制目前尚不明确。
  目的:
  1、采用模拟经期的内膜组织,腹腔注射方式建立EM小鼠模型。
  2、观察EM模型小鼠的生殖能力,探讨影响EM小鼠生殖能力的可能机制。
  3、探讨内异方对EM模型小鼠生殖能力的影响,并从卵泡发育、盆腔微环境、盆腔粘连的角度探讨内异方的作用机制,为内异方的临床推广应用奠定基础。
  方法:
  1、采用5只C57BL/6小鼠和4只增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)转基因小鼠作供体,20只C57BL/6小鼠作受体。模拟供体小鼠的月经周期,将其经期子宫内膜组织剪碎后分别注射入受体小鼠的腹腔。普通模型组接受C57BL/6供体小鼠的子宫内膜碎片,EGFP模型组接受EGFP供体小鼠的子宫内膜碎片。3周后模型建立成功。通过小动物活体成像、大体解剖、病理形态学观察的方式,了解此造模方法的成模情况;将2组模型小鼠内异灶大小、数量和盆腔粘连评分进行统计学比较,选择最优造模方式。
  2、建立EM小鼠模型,设为模型组(n=21),并设立假手术组(n=21),空白组(n=15),共3组。通过阴道脱落细胞学方法对小鼠动情周期进行观察,于动情前期随机处死模型组和假手术组各6只小鼠,取其卵巢组织进行组织形态学观察;于动情间期对剩余3组小鼠行眶静脉采血。将3组小鼠与性成熟雄鼠随机2∶1比例合笼,进行交配实验,合笼至出现阴栓,见栓记为妊娠第1天。孕鼠于妊娠18天脱颈处死,处死后取腹腔冲洗液;模型组不孕小鼠行阴道涂片,于动情间期采血,脱颈处死后取腹腔冲洗液。通过大体解剖法,观察3组小鼠妊娠情况、胚胎情况,以及模型组小鼠内异灶、盆腔粘连情况。通过酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测动情间期小鼠血清性激素(FSH、LH、E2、PRL)水平和糖类抗原125(carbohydrate antigen125,CA125)水平,以及腹腔液中白介素-2(interleukin-2,IL-2)水平。通过动情周期、交配实验、大体解剖、卵巢组织形态学观察结果和ELISA检测结果,了解EM模型小鼠的生殖能力及盆腔微环境、盆腔粘连的状况,探讨其生殖能力下降的可能机制。
  3、建立EM小鼠模型78只,按随机数字法将其分为内异方组(n=26)、孕三烯酮组(n=26)、模型组(n=26)3组,并设立假手术组为正常对照组(n=26)。连续药物干预15天,同时停药。药物干预结束后每组随机选择6只小鼠,于动情前期处死,取其卵巢组织行组织形态学观察。药物干预第15天傍晚行交配实验,雌雄比4∶1,连续合笼15天。大体解剖观察4组小鼠妊娠结局和胚胎情况,以及EM模型小鼠的内异灶、盆腔粘连情况。对4组小鼠肝、脾、肾脏进行组织形态学观察。ELISA方法检测腹腔液中炎症因子IL-2、IL-6和IL-10的水平。通过交配实验、大体解剖和卵巢组织形态学的观察结果和ELISA检测结果,了解内异方对EM模型小鼠生殖能力的影响,及对卵泡发育、盆腔微环境和盆腔粘连的改善作用。
  结果:
  1、用模拟经期内膜组织腹腔注射的方法可成功建立EM小鼠模型(成模率达100%)。荧光穿透性较差,小动物活体成像对皮下内异灶标记敏感,对腹盆腔深部病灶的观察仍需剖腹后再行拍摄。普通模型组和EGFP模型组两组小鼠建模情况比较,无统计学差异(P>0.05),故后续实验采用普通模型组的EM小鼠作为实验研究对象。
  2、EM模型小鼠的妊娠率明显下降(P<0.05),动情间期模型组不孕鼠血清中FSH、PRL水平发生异常改变(P<0.01),LH、CA125水平未见明显变化(P>0.05),腹腔液中IL-2水平显著升高(P<0.01)。EM模型小鼠动情周期规律,模型组小鼠无论妊娠与否,其内异灶个数、体积、粘连评分的比较均无统计学意义(P>0.05)。组织形态学观察显示模型组小鼠的卵巢颗粒细胞间有较多炎性细胞浸润;与假手术组比较,模型组小鼠始基卵泡、窦前卵泡、窦状卵泡构成比明显下降,闭锁卵泡构成比显著升高(P<0.01)。
  3、内异方组小鼠的妊娠率明显提高(P<0.05)。内异方组小鼠内异灶个数减少、体积缩小,粘连评分降低(P<0.01)。卵巢组织形态学观察显示内异方组始基卵泡、窦前卵泡、窦状卵泡构成比高于模型组、孕三烯酮组,闭锁卵泡构成比低于模型组和孕三烯酮组。在改善EM模型小鼠卵巢各级卵泡构成比方面,内异方优于孕三烯酮(P<0.05),孕三烯酮并不能改善EM小鼠各级卵泡构成比(P>0.05)。模型组小鼠腹腔液中IL-2、IL-6水平均发生异常升高(P<0.01),IL-10水平发生明显降低(P<0.05)。药物干预作用下内异方组和孕三烯酮组小鼠的腹腔液中IL-2、IL-6水平均显著下降,孕三烯酮组小鼠的腹腔液中IL-10水平明显升高,有统计学意义。孕三烯酮组小鼠妊娠率未能改善,且药物处理后体重、肝脏湿重、肾脏湿重均减轻。与孕三烯酮相比,内异方药物毒副性极小,未见肝脾肾损害。
  结论:
  1、用模拟经期内膜组织成功地建立了EM小鼠模型。
  2、EM模型小鼠的生殖能力明显下降。EM模型小鼠卵巢功能受损,各级卵泡发育受到影响,盆腔微环境发生改变,盆腔粘连形成,这些均可能是造成EM小鼠生殖能力低下的重要病机。
  3、内异方通过抑制内异灶的生长,减少盆腔粘连,改善盆腔微环境,改善各级卵泡发育,提高了EM小鼠的生殖能力,且无毒副作用,安全性好。
[硕士论文] 张毅
药理学 郑州大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  1.系统评价先前诊断为抑郁症的不育女性是否影响辅助生殖技术(ART)的成效。
  2.选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SelectiveSerotoninReuptakeInhibitor,SSRI)用于接受ART治疗的抑郁症妇女时,对其生殖安全性进行系统评价,为临床合理应用SSRI提供循证参考。
  方法:
  1.计算机检索PubMed,Medline,Embase,PsycINFO,PsychNET,ISI Web of Science,检索时限均为1985年至2016年6月,检索词包括:“[(in vitro fertilization OR IVF)OR assisted reproduction OR(assisted reproductive techniques OR ART)OR(intracytoplasmic sperm injection OR ICSI)]AND(depression OR depressive disorder OR psychological stress OR psychosomatic medicine OR anxiety OR anxiety disorder OR adjustment disorder OR emotions OR psychological adaptation OR distress).”所使用的分类术语没有限制,但搜索仅限于人类研究。然后,对包含研究的参考文献和参考书目进行了搜索,以获得其他相关的信息。依据纳入与排除标准,先筛选文献,再提取相关内容,然后进行质量评价后,运用Rev Man5.3统计软件进行Meta分析。
  2.计算机检索Cochrane图书馆、PubMed、Medline、EMBase、中文科技期刊数据库和万方数据库、中国生物医学文献数据库、中国期刊全文数据库。检索词包括:中文:((体外受精联合胚胎移植术)或者(体外受精)或者(卵母细胞单精子显微注射))并且((选择性5-羟色胺再摄取抑制剂)或者(精神类药物)或者(抗抑郁药物));英文“[(assisted reproductive techniques OR ART)OR(in vitro fertilization OR IVF)OR(intracytoplasmic sperm injection OR ICSI)]AND(《selective serotonin reuptakeinhibitor OR SSRI)OR(antidepressant)OR(psychosomatic medicine)).”文献语种限定为中文或英文。检索时间限定为1985年至2016年12月,将纳入文献的参考文献也一并检索。纳入SSRI(试验组)对比不接受药物或安慰剂(对照组)治疗的研究,依据纳入与排除标准,先筛选文献,再提取相关内容,然后进行质量评价后,运用Rev Man5.3统计软件进行Meta分析。
  结果:
  1.总共有22项研究被采纳,一共93780例患者参与。连续变量研究(16项研究;n=4186)的Meta分析显示,抑郁与怀孕率下降有关[RR=-1.22,95%CI(-1.90--0.53),p=0.0005]。抑郁率研究(6项研究;n=89594)的Meta分析有相似的结果,其中妊娠率[RR=0.59,95%CI(0.41-0.85);n=28994;p=0.005)]。对于使用抑郁症评分的研究,统计学异质性(I2)为84%(P<0.00001),抑郁率为85%(P<0.00001)。具体来说,在使用连续变量的研究中,情绪评估时间(I2=67.7%,P=0.08)和情绪困扰测量(I2=54%,P=0.09)之间的亚组之间观察到显著性差异。
  2.一共4项研究被纳入,共计2122例患者参与其中。PP分析结果显示,SSRI组患者的流产率与对照组相当[RR=0.90,95%CI(0.61,1.35),P=0.62],同时受孕率[RR=1.03,95%CI(0.73,1.45),P=0.87]、胎儿出生率[RR=1.03,95%CI(0.65,1.63),P=0.91]均相当。其结果与对照组的数据相比,差异没有统计学意义。
  结论:
  1.在ART之前,发现抑郁症与怀孕机会减少之间有明显关联。相比无抑郁症病史的不孕症妇女,存在抑郁症病史患者其ART治疗结局的成功率显著降低。
  2.体外受精联合胚胎移植术伴抑郁症妇女行SSRI治疗未见流产率增加,受孕率和胎儿出生率减少,对其成效也未见显著影响。
[硕士论文] 赵莹莹
影像医学与核医学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:目的:子宫腺肌病是育龄期女性临床发病率较高的良性妇科疾病之一,对子宫腺肌病治疗惯例为临床用药和外科切除方式,随着医学模式转变,微创或无创等保守治疗方法渐渐被人们认知并接受。其中超声引导下经皮穿刺微波消融治疗子宫腺肌病可明显缩小病灶体积,目前主要应用增强磁共振成像(dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging,DCE-MRI)和超声造影评价微波消融治疗的效果,本文旨在探讨超声造影与动态增强磁共振成像(DCE-MRI)观察经皮穿刺微波消融治疗局限性子宫腺肌病消融治疗效果及对照分析。
  方法:42例患者均来自2013年1月至2016年7月期间在山东省聊城市肿瘤防治院超声诊疗中心接受经皮穿刺微波消融治疗的病例,全部为单发局限性子宫腺肌病患者,42例患者在微波消融术前及术后1~2d均行盆腔DCE-MRI检查,并且在治疗前及治疗后1~2d行静脉超声造影检查。分别对局限性子宫腺肌病的部位、大小、血流信号及术前病灶体积及术后无增强区进行测量,根据以下公式计算消融率:消融率=术后子宫腺肌病无增强区体积/术前病灶体积×100%。局限性子宫腺肌病消融后超声造影和DCE-MRI无增强区体积及消融率以(-x)±s表示,超声造影和DCE-MRI计算的消融率比较采用配对t检验及相关与回归。
  结果:微波消融治疗后,超声造影及DCE-MRI显示42例局限性子宫腺肌病消融灶无造影剂增强。42例局限性子宫腺肌病治疗后超声造影显示微波消融灶内无造影剂灌注,无灌注区体积为(49.0±29.5)cm3,病灶消融率为(91.6±7.1)%;其中3例消融不完全病例行即刻超声造影计算消融率分别为56.3%、53.7%、49.3%,根据病灶造影强化范围准确定位补充消融,于术后1~2d再次行超声造影,计算消融率分别为84.3%、87.4%、92.6%。DCE-MRI显示消融病灶内无增强区,无增强区体积为(49.4±29.9)cm3,病灶消融率为(91.9±6.7)%。结果显示微波治疗局限性子宫腺肌病效果好,超声造影和DCE-MRI两种检查测量的各组数据有显著相关性,计算无灌注区的消融率一致性相近。
  结论:超声造影检查可准确评价微波消融治疗局限性子宫腺肌病的消融率,与DCE-MRI评价消融率一致性较好,对造影显示消融不完全的病灶可即刻补充消融。
[硕士论文] 李文婷
妇产科学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  通过对需氧菌性阴道炎(aerobic vaginitis,AV)诊断方法及影响因素的探究,比较不同诊断方法的检出结果、明确高危因素及保护因素,从而提高临床医生对需氧菌阴道炎的认知,加强诊断能力、规避危险因素,降低感染情况的发生,提高女性的生活品质。
  方法:
  收集2016年4月—12月在山西医科大学附属第一医院妇科住院的患者,术前常规行阴道分泌物检查共934例,筛除与本实验无关的阴道炎疾病528例,剩余406例样本分别采用Donders湿片法和五项酶联合试剂盒对需氧菌性阴道感染做出诊断。根据实验室结果,对试剂盒法诊断出的无异常发现和单一需氧菌阴道炎患者进行调查,内容包括年龄、学历、个人卫生习惯、性生活习惯等方面,同时就影响AV的危险因素与临床症状进行相关性分析。
  结果:
  1.采用Donders湿片法诊断为单一需氧菌性阴道炎患者共198例,采用五项酶联合试剂盒诊断为单一需氧菌性阴道炎212例。通过SPSS17.0统计学软件分析,两种方法对于检出单一需氧菌性阴道炎方面不存在差异,差别无统计学意义(P=0.065,P>0.05),在检出AV方面较为一致,Kappa=0.754。
  2.50岁以上女性(OR4.896,95% CI2.452–9.777),长期使用护垫(OR4.389,95%CI2.277-8.459),频繁的阴道冲洗习惯(OR1.727,95%CI1.049-2.845)是AV的独立危险因素。
  3.大专学历以上(OR0.594,95%CI0.370–0.954),单独清洗内衣裤(OR0.126,95%CI0.059-0.267)是AV的独立保护因素。
  4.AV的危险因素与临床症状严重程度有显著相关性,呈正相关(r=0.608,P<0.001)。
  结论:
  1.两种诊断方法对于需氧菌性阴道炎的诊断基本一致,可根据需要选择合适的方法进行诊断。
  2.在妇科住院的患者中,50岁以上、频繁的阴道冲洗以及长期使用护垫人群更容易发生需氧菌性阴道炎。
  3.影响AV的危险因素越多,其临床症状可能越严重,应尽可能规避危险因素,建立优质生活。
[硕士论文] 尚艳芳
公共卫生 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  分析煤矿已婚女职工阴道炎的感染特征,探讨阴道炎的影响因素,为制定疾病早期预防措施、提高女职工健康水平提供科学依据。
  方法:
  本研究选取来自晋城煤业集团寺河煤矿2011-2014年接受健康体检的已婚女职工为研究对象,共1711人,收到有效问卷1564份。对煤矿已婚女职工阴道分泌物进行快速革兰氏染色后,在光电显微放大器下寻找病原微生物,进行感染特征分析。进一步根据阴道炎的患病情况将研究对象分为病例组及对照组,分析阴道炎的相关因素。采用卡方检验进行单因素分析,选取单因素分析有统计学意义的影响因素进行多因素非条件logistic回归分析,通过计算OR及其可信区间(95%CI),衡量影响因素与疾病之间关联程度大小。选定P<0.05为差异有统计学意义。
  结果:
  1.1564名煤矿已婚女职工中,阴道炎患病人数为572人,患病率为36.57%。2011-2014年阴道炎的患病率分别为27.18%、29.10%、32.78%、52.25%,呈逐年上升趋势。
  2.2011-2014年混合性阴道炎感染的人数最多,构成比分别为42.04%、37.86%、42.33%、41.80%。滴虫性阴道炎感染人数最少,外阴阴道假丝酵母菌病的构成比逐年下降,分别为18.18%、27.18%、16.79%、15.98%。阴道炎的临床表现中有39.69%的患者有分泌物异味、24.30%的患者有阴道灼痛感,17.83%的患者有外阴瘙痒,白带增多的患者有18.18%,可看出分泌物异味、阴道灼痛感、外阴瘙痒为阴道炎的常见临床症状。
  3.煤矿女工中31-40岁组患病率最高(42.18%),已生育人群、洗煤作业人群、初中及以下文化的人群、家庭人均月收入水平较低、集体宿舍居住人群患病率较高。
  4.影响因素分析结果表明:年龄较低,岗位为洗煤作业,文化程度低,居住环境为集体宿舍,性行为前不清洗外阴为阴道炎的危险因素,每次性生活均用避孕套、使用妇科洗液每周≤3次是阴道炎的保护因素。
  结论:
  1.煤矿已婚女职工阴道炎患病率为36.57%,2011-2014年呈逐年上升趋势。
  2.混合性阴道炎感染人数最多,滴虫性阴道炎感染人数最少。阴道分泌物异味、阴道灼痛感、外阴瘙痒为阴道炎的主要临床症状。
  3.31-40岁人群患病率最高,洗煤作业的人群较其他岗位的人群患病率高,初中及以下文化的人群阴道炎的患病率高,居住家庭的人群较居住宿舍的人群患病率低。应重点加强该人群的健康教育,提高其卫生保健意识。
  4.每次都用避孕套、使用妇科洗液每周≤3次是阴道炎的保护因素,而年龄低于40岁,洗煤作业女工,文化程度低,居住环境为集体宿舍,性行为前不清洗外阴为阴道炎的危险因素。建议相关卫生部门尽可能地宣传正确的阴道炎防治知识,使得广大女职工能够提前预防,降低阴道炎患病率。
[博士论文] 孔祥薇
动物学 内蒙古大学 2017(学位年度)
摘要:研究背景:随着环境的恶化和生活节奏与方式的改变,世界范围内人类生殖的能力下降早已成为国际社会共同关注的问题,不孕不育症已然成为世界医学界亟待解决的重要难题。尽管人类辅助生殖技术(Assisted ReproductiveTechnology, ART)为不孕不育症患者带来了福音,但诸如卵母细胞体外成熟率及受精率低、配子染色体异倍性高;胚胎发育潜能低下等问题,仍是造成早期胚胎流产或后代出生缺陷的主要原因。在卵母细胞减数分裂成熟过程中,染色体倍数减半是保证后代正常发育的关键因素之一。大量的研究表明,许多分子参与并调控了染色体和纺锤体动力学过程,这些分子发挥正常功能离不开物质运输这一重要的细胞功能。驱动蛋白是1985年发现的一类细胞内单体分子马达,它能利用三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)水解所释放的能量,驱动自身及所携带的货物分子沿微管进行运动。虽然大多数驱动蛋白都具有相同的酶促反应区域,但每一种驱动蛋白都有自已独特的亚细胞定位与功能。D4Mil1e也被称作驱动蛋白家族成员1B(kinesin family member1B,KIF1B),它作为一种重要的微管依赖性顺式分子马达,是驱动蛋白超家族重要的成员之一。在体细胞中,它主要负责线粒体等膜性细胞器及突触囊泡的胞内运输;并且作为一个潜在的肿瘤抑制因子,通过调控细胞凋亡参与多种恶性肿瘤及其他疾病的发生。
  研究目的:本研究以小鼠卵母细胞为对象,使用体外成熟、体外受精、显微注射、蛋白免疫印迹、免疫荧光染色及染色体铺片等技术,深入地研究了D4Mil1e在小鼠卵母细胞减数分裂成熟过程中的精确表达、定位及其功能,以及它在受精后合子第一次有丝分裂时的作用。本论文系统全面地展示了卵母细胞减数分裂成熟及早期胚胎发育过程中9个连续的时期内D4Mil1e的精确定量及精细亚细胞定位情况,进一步探索出在配子、胚胎多个重要时期内,D4Mil1e与纺锤体、染色体以及线粒体的相关作用及其机理。这不仅首次全面地阐明了D4Mil1e对哺乳动物卵母细胞减数分裂成熟及早期胚胎发育的调控机制,更为治疗人类不孕不育症和改进辅助生殖技术提供了有价值的理论基础。
  研究方法:
  (1)本研究通过孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)联合人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrop,hCG)的超数排卵技术、体外受精技术(in vitro fertilization,IVE)获得GV期(germinal vesicle)、生发泡破裂期(germinal vesicle breakdown,GVBD)、第一次减数分裂中期(metaphaseⅠ,MⅠ)、第一次减数分裂后-末期(anaphaseⅠ/telophaseⅠ,AⅠ-TⅠ)、第二次减数分裂中期(metaphaseⅡ,MⅡ)、第二次减数分裂后-末期(anaphaseⅡ/telophaseⅡ,AⅡ-TⅡ)、原核期(pronucleus,PN)、1细胞胚胎后期(Late1-cell)、2细胞胚胎期(2-cell),这9个连续时期的卵母细胞及早期胚胎。通过蛋白免疫印迹(Western blotting)、免疫荧光染色(immunofluorescence)、激光共聚焦显微镜(laser scanning confocalmicroscope)扫描技术,检测D4Mil1e在卵母细胞成熟和早期胚胎发育各阶段的精确定量和精细亚细胞定位。
  (2)在上述实验结果的基础上,进一步使用纺锤体干扰药物紫杉醇(taxol)和诺考达唑(nocodazole)分别处理MⅡ期卵母细胞,通过免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜扫描技术检测微管破坏后D4Mil1e的定位情况。进一步确证D4Mil1e与微管的关系。
  (3)在确定D4Mil1e与微管蛋白有相互作用的基础上,采用特异性和稳定性更强的吗啉基寡核苷酸(Mopholino,MO)敲减方法,在GV期卵母细胞中以显微注射的方式敲减D4Mil1e,抑制D4Mil1e的mRNA翻译。通过Western blotting和免疫荧光染色技术检测其敲减效率;统计GVBD率,在解除米力农抑制4小时、8小时、12小时、16小时后分别统计第一极体(the first polar body, PB1)排放率;使用CellSens Standard软件测量中期板厚度,分析解除米力农抑制12小时、16小时后卵母细胞中纺锤体-染色体复合体(spindle-chromosome complex,SCC)动力学;使用染色体铺片技术统计染色体异倍性。
  (4)更进一步,为验证D4Mil1e在早期胚胎发育中的作用,使用特异性MO,在合子启动有丝分裂时的PN期以显微注射的方式敲减D4Mil1e,通过Westernblotting检测其敲减效率;追踪统计后续胚胎发育情况;通过免疫荧光染色技术分析胚胎发育质量。
  (5)为了进一步验证D4Mil1e在合子基因组激活前后(zygotic genomeactivation,ZGA)对胚胎发育的影响,我们使用冲胚技术获取体内发育的2-cell期胚胎,在合子基因组激活的2-cell胚胎阶段,首次采用“同一胚胎不同卵裂球差异敲减技术”,进一步确证D4Mil1e对胚胎有丝分裂的影响。在两个卵裂球中使用特异性MO以显微注射的方式,分别注射Ctrl MO+Ctrl MO,Ctrl MO+D4mil1eMO和D4mil1e MO+D4mil1e MO,通过免疫荧光染色技术检测纺锤体的组装和染色体的排列情况,分析胚胎发育质量,追踪统计后续胚胎发育情况。
  (6)在已经获得MO敲减数据的基础上,为进一步确证D4Mil1e的功能,使用特异性D4Mil1e抗体,分别在GV及MⅡ期卵母细胞中以显微注射的方式,直接在蛋白水平抑制D4Mil1e的表达后,统计GVBD率,在解除米力农抑制4小时、8小时、12小时、16小时后统计PB1的排放率;使用CellSens Standard软件测量纺锤体尺寸并计算其长宽比,使用染色体铺片技术统计染色体异倍性;追踪统计受精后各时期的胚胎发育情况。
  (7)在确证D4Mil1e的缺失导致小鼠卵母细胞和胚胎发育异常的基础上,进一步对其可能发挥功能的下游机理进行了探讨。使用特异性MO,在GV期卵母细胞中敲减D4Mil1e以介导其功能失调,通过免疫荧光染色技术和NISElements Viewer软件检测成熟卵母细胞在线粒体分布和总ATP水平上的变化。
  研究结果:
  (1)本研究首次全面系统的证明了D4Mil1e的定量、定位与卵母细胞成熟和胚胎发育进程均具有很高的相关性。结果首次完整地展示了在卵母细胞(GV期、GVBD期、MⅠ期、AⅠ-TⅠ期、MⅡ期)和早期胚胎(AⅡ-TⅡ期、PN期、Late1-cell期、2-cell期)连续的9个时期内,D4Mil1e的蛋白表达水平、趋势及亚细胞结构定位。western blotting结果显示,在卵母细胞最重要的GV期到2-cell胚胎期中,D4Mil1e蛋白水平呈现间期低、中期高的表达趋势。免疫荧光染色结果显示,在减数分裂和第一次有丝分裂进程中,D4Mil1e的积累显示出动态的定位模式。
  (2)本研究进一步阐述D4Mil1e与微管动力学之间的相关性。结果显示经抑制微管解聚的药物taxol处理后,大部分D4Mil1e与异常的纺锤体共定位,少部分弥散分布于胞质;经促进微管解聚的药物nocodazole处理后,微管完全解聚,D4Mil1e随之弥散分布于胞质中。
  (3)本研究继续揭示D4Mil1e生物学作用对卵母细胞成熟的影响及其机制。Western blotting结果显示,在GV期卵母细胞中注射D4mil1e MO后,D4Mil1e的表达量下降了81.8%(P<0.01);免疫荧光染色结果显示,D4Mil1e定位异常,证明该方法具有很高的敲减效率;虽然D4mil1e MO注射组卵母细胞的GVBD率不受影响;但在成熟过程中PB1的排放率显著降低;卵母细胞成熟时中期板厚度增加了2.2倍;纺锤体染色体复合体(spindle chromosome complexus,SCCs)出现成球期阻滞、纺锤体极形态改变、染色体错排的情况,且与对照组相比(成球期阻滞:3.5±1.2%,纺锤体极形态改变:9.8±1.0%,染色体错排6.3±1.7%),这些异常类型的比例分别升高至15.5±2.6%、37.1±2.0%及26.7±2.6%(P<0.01);培养至成熟后,染色体异倍性发生率较对照组相比增加了14.4倍(control MO:2.9±1.8%,D4mil1e MO:44.6±5.2%,P<10-5)。
  (4)本研究揭示了D4Mil1e对合子发育有重要影响。Western blotting结果显示,在PN期合子中用MO敲减D4Mil1e后,D4Mil1e的表达量下降了74.1%(P<0.001);与control MO注射组相比(2-cell期:94.8±1.2%,4-cell期:81.3±7.1%,桑椹胚期:73.5±5.9%,囊胚期:57.0±7.2%),D4mil1e MO注射组2-cell期、4-cell期、桑椹胚期(Morula)及囊胚期(Blastocyst)的胚胎发育率分别下降至85.6±3.6%,27.7±3.8%,19.5±2.5%及5.7±4.4%(P<0.05);免疫荧光染色结果显示,在敲减D4Mil1e后,PN期合子启动第一次有丝分裂时,纺锤体的组装以及染色体的排布都发生了异常;桑椹胚期细胞数比对照组减少了56.5%;囊胚质量降低,不能形成正常的囊胚腔,胚胎发生碎片化及2-cell阻滞。
  (5)本研究进一步通过首创的“同一胚胎不同卵裂球差异敲减技术”,证明D4Mil1e对早期胚胎发育的具有调控作用。Western blotting结果显示,在2-cell期胚胎中用MO敲减D4Mil1e后,在Ctrl MO+D4mil1e MO注射组中D4Mil1e的表达量下降了61.8%(P<0.001),在D4mil1e MO+D4mil1e MO注射组中D4Mil1e的表达量下降了90.8%(P<10-4),证明该方法所介导的敲减是高效的;Ctrl MO+D4mil1e MO注射组4-cell期、桑椹胚期及囊胚期的胚胎发育率分别下降至44.5±2.5%,35.0±2.9%及23.6±1.2%(P<10-4),D4mil1e MO+D4mil1e MO注射组4-cell期、桑椹胚期及囊胚期的胚胎发育率分别下降至30.9±3.2%,14.3±2.7%及8.7±0.4%(P<10-5),与Ctrl MO+Ctrl MO注射组(4-cell期:85.6±2.3%,桑椹胚期:77.1±1.8%,囊胚期:70.8±2.8%)相比均具有统计学差异;免疫荧光染色结果显示,在Ctrl MO+D4mil1e MO注射组中,注射D4mil1e MO的卵裂球发生明显的纺锤体异常和染色体错排;Ctrl MO+D4mil1e MO和D4mil1e MO+D4mil1eMO注射组桑椹胚期细胞数分别减少40.0%和57.2%;囊胚质量随卵裂球D4Mil1e敲减程度的加剧而显著下降。
  (6)本研究利用抗体封闭技术进一步证明D4Mil1e生物学功能对卵母细胞成熟及胚胎发育的作用。结果发现在GV期卵母细胞中,使用D4Mil1e特异性抗体在蛋白水平抑制D4Mil1e后,虽然不影响GVBD率,但卵母细胞成熟时PB1的排放率显著下降;MⅠ及MⅡ期卵母细胞纺锤体长宽比显著下降;且SCCs出现成球期阻滞、纺锤体极形态改变、染色体错排的情况,与对照组相比(MⅠ期卵母细胞成球期阻滞:4.0±0.8%,纺锤体极形态改变:10.0±1.2%,染色体错排7.7±0.9%; MⅡ期卵母细胞成球期阻滞:2.9±1.0%,纺锤体极形态改变:8.7±2.0%,染色体错排5.8±1.5%),在MⅠ期卵母细胞中这些异常类型的比率分别升高至13.4±1.4%,30.5±1.3%及25.6±1.3%(P<0.01),在MⅡ期卵母细胞中这些异常类型的比率分别升高至11.0±1.3%,25.2±2.8%及21.4±2.2%(P<0.01);培养至成熟后,染色体异倍性发生率较对照组相比增加了6倍(IgG注射组:3.8±2.4%,D4Mil1e抗体注射组:26.6±1.3%,P<0.01)。在MⅡ期卵母细胞中使用抗体封闭技术后,与对照组相比(2-cell期:56.3±4.1%,4-cell期:34.6±5.1%,桑椹胚期:27.9±4.2%,囊胚期:18.9±4.5%),D4Mil1e抗体注射组卵母细胞受精后的2-cell期、4-cell期、桑椹胚期及囊胚期的胚胎发育率分别下降至47.4±2.4%,19.5±1.8%,13.7±1.1%及7.3±2.5%(P<0.05)。
  (7)本研究进一步从能量代谢角度揭示D4Mil1e生物学功能对卵母细胞成熟的影响及其机制。结果发现在GV期卵母细胞中用MO敲减D4Mil1e后,在M期卵母细胞中,胞质中线粒体凝集现象消失,线粒体分布异常;MⅠ期卵母细胞中总ATP水平下降至0.3±0.1,与对照组(1.0±0.1)相比下降了72.0%(P<10-3);MⅡ期卵母细胞中总ATP水平下降至0.7±0.02,与对照组(1.0±0.1)相比下降了34.0%(P<0.01)。
  结论:本论文首次证明:(1) D4Mil1e蛋白表达水平及其亚细胞定位与小鼠卵母细胞减数分裂成熟及早期胚胎发育进程高度相关;(2)在卵母细胞及早期胚胎中干扰D4Mil1e的功能,会导致卵母细胞减数分裂成熟失败及后续胚胎发育受损;(3)在卵母细胞中干扰D4Mil1e的功能,会导致线粒体分布异常及ATP水平下降;(4)本研究首次系统全面的阐述了D4Mil1e通过微管依赖机制在卵母细胞的纺锤体组装及染色体中板集合过程中起重要作用。为配子发生的机理和临床染色体异倍性疾病的发生提供了理论依据。
[硕士论文] 靳云晶
皮肤病与性病学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  1、初步了解本地区女性患者感染VVC的情况并对其致病菌的菌种的类型及分布进行分析;
  2、初步探究VVC患者中白念珠菌对常见唑类药物和卡泊芬净的敏感性;
  3、探究卡泊芬净联合阿司匹林、维拉帕米作用于游离态白念珠菌是否产生增敏现象。
  方法:
  将2016年3月至2016年10月期间,就诊于山西省妇幼保健院门诊疑似VVC患者纳为研究对象,收起真菌镜检为阳性的分泌物标本共103株,对其进行连续真菌培养、传代后,分别采用科玛嘉显色培养基、API20C AUX及分子生物学方法对获得的念珠菌属进行菌种鉴定,最终得到了白念珠菌79株。采用 M27-A3微量液基稀释法,将抗真菌药物单药应用对其中42株白念珠菌进行体外药敏实验,分别将白念珠菌对四种抗真菌药物的MIC50值进行记录,计算并比较白念珠菌对四种抗真菌药物的耐药率;将卡泊芬净与阿司匹林、维拉帕米联合应用对42株白念珠菌进行体外药敏实验,观察卡泊芬净单独用药和联合用药后卡泊芬净的MIC50值,分析其MIC50值的改变与联合用药的关系,进一步探究卡泊芬净联合阿司匹林、维拉帕米分别作用于游离状态下的白念珠菌时是否会产生增敏现象。
  结果:
  1、本实验共收集疑似VVC患者的分泌物标本103例,最终获得实验所需临床菌株101株,其中白念珠菌占79株(78.22%),光滑念珠菌占12株(11.88%),热带念珠菌占4株(3.96%),近平滑念珠菌占3株(2.97%),克柔念珠菌占1株(0.99%),其它菌占2株(1.98%)。
  2、卡泊芬净及常见唑类药物对42株白念珠菌体外药敏试验结果为:有20株菌对氟康唑产生耐药现象,耐药率约为47.6%;有24株菌对伊曲康唑产生耐药,耐药率约为57.1%;有18株菌对伏立康唑产生耐药,耐药率约为42.8%;有13株菌对卡泊芬净产生耐药,耐药率约为30.9%。
  3、卡泊芬净与阿司匹林、维拉帕米联合应用于游离态白念珠菌后,卡泊芬净的MIC50值均由0.0156-8μg/mL降至0.0156-4μg/mL。联合用药前后MIC50值统计学分析显示:卡泊芬净与阿司匹林、维拉帕米联合用药前后卡泊芬净的MIC50值,经正态性检验,数据均符合正态分布,采用t检验,结果用均数±标准差(x?s)表示。
  (1)卡泊芬净单独用药组(2.47±2.97)高于卡泊芬净与阿司匹林联合用药组(0.75±1.08),t=3.536,P=0.01,差异具有统计学意义。
  (2)卡泊芬净单独用药组(2.47±2.97)高于卡泊芬净与维拉帕米联合用药组(0.68±1.09),t=3.677,P=0.01,差异具有统计学意义。
  结论:
  1、念珠菌属是是VVC患者的主要病原菌,白念珠菌仍占主要比例,白念珠菌对卡泊芬净的敏感性高于常见唑类药物。
  2、白念珠菌对卡泊芬净的耐药率低于氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑。
  3、阿司匹林、维拉帕米与卡泊芬净联用均可以增加卡泊芬净对游离态白念珠菌的敏感性,两种药物均可以做为卡泊芬净的增敏剂,为VVC治疗提供新策略。
[硕士论文] 刘小连
妇产科学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  通过回顾性分析三种不同促排卵方案对卵巢反应不良不孕症患者再次控制性超促排卵治疗后的获卵结局及卵母细胞受精发育能力的差异,探究卵巢反应不良患者首选的促排卵治疗方案。
  方法:
  收集2014年01月-2016年03月既往体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕治疗时发生卵巢反应不良且再次助孕治疗的不孕患者,共98个周期。记录入选患者的一般情况,包括月经期基础性激素水平。根据治疗时所采取促排卵方案的不同将所有入选周期分为三个组:黄体中期降调节长方案组30个周期、短方案组32个周期以及拮抗剂方案组36个周期。统计三组不同促排卵方案的促排卵天数(Gn天数)、促性腺素剂量(Gn剂量)、绒毛膜促性腺素注射日(HCG日)黄体生成素(LH)、雌激素(E2)、孕激素(P)水平、子宫内膜厚度(En)及获卵数、不同形态学分型卵母细胞数、卵母细胞受精数、正常受精数(2PN数)、不同级别卵裂期胚胎数、优质胚胎数。
  结果:
  1)各组不孕症患者的一般资料:年龄、不孕年限、窦卵泡数(AFC)、基础卵泡刺激素(FSH)间比较差异无统计学意义。
  2)对既往卵巢反应不良的促排卵周期,采用不同促排卵方案再次控制性超促排卵后,共23个周期出现卵巢低反应,包括拮抗剂方案组6个周期,发生率为16.7%,短方案组9个周期,发生率为28.1%,长方案组8个周期,发生率为26.6%。但三组间卵巢低反应发生率差异无统计学意义。且三组方案均无周期取消发生。
  3)排除卵巢低反应型卵巢反应不良周期,剩余75个卵巢反应不良周期中, Gn天数、Gn剂量三组间比较差异有统计学意义,长方案组显著较高。HCG日黄体生成素(LH)水平短方案组较长方案组和拮抗剂方案组显著增高(4.42±1.17 vs1.31±1.22 vs2.52±1.95),差异有统计学意义(P<0.05)。
  4)短方案组获卵数显著高于长方案组(6.65±1.72 vs5.18±1.36),差异有统计学意义。不同形态学卵母细胞成熟度分析,生发泡期(GV期)、第一次减数分裂期(MI期)、退化卵母细胞数三组间差异无统计学意义,短方案组第二次减数分裂期卵母细胞数(MII期)显著高于长方案组(5.52±1.53 vs4.04±1.25)。但不同组间各期卵母细胞占总获卵数的比例差异无显著统计学意义。
  5)三组方案间卵母细胞受精数、2PN数、卵裂期胚胎数及优质胚胎数间差异有统计学意义,而拮抗剂方案组与短方案组间差异无统计学意义。长方案组受精率、优质胚胎率低于短方案和拮抗剂方案组,但2PN率和卵裂期胚胎率三组方案间差异无统计学意义。
  结论:
  1)长方案使卵巢反应不良患者发生卵巢低反应的概率增加。
  2)长方案的获卵数和MII期卵母细胞数低于短方案和拮抗剂方案,但各期卵母细胞占获卵数的比例三组方案间无差异。
  3)短方案和抗剂方案的卵母细胞受精数、正常受精数、胚胎数和优胚数高于长方案,且受精率和优胚率高于长方案。
  4)拮抗剂方案和短方案可作为卵巢反应不良患者促排卵治疗时首选方案,但短方案需密切监测 LH水平。
[硕士论文] 刘苗
妇产科学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  1.通过测定不同级别宫颈上皮组织中P16、Ki67及ΔNp63蛋白的表达情况,初步了解P16、Ki67及ΔNp63的表达水平与不同级别宫颈病变之间的关系;
  2.进一步探讨单独或联合检测上述生物学标记物对高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)的辅助诊断价值。
  方法:
  选择2015年1月-2015年12月就诊于山西医科大学第二医院患者,依据常规HE染色病理诊断结果,分为宫颈正常组(60例)、低级别鳞状上皮内病变组织(LSIL组,即CINI级组60例)、高级别鳞状上皮内病变组织(HSIL组120例,其中CIN II及CIN III各60例)及宫颈早期浸润癌组(30例),共270例。采用免疫组织化学检查S-P法分别检测P16、Ki67及ΔNp63蛋白在四组中的表达情况。研究数据采用 SPSS20.0软件进行统计学分析。
  结果:
  1.P16、Ki67及ΔNp63的表达与宫颈病变级别均存在相关性;
  2.P16、Ki67及ΔNp63在正常组、LSIL组、HSIL组及宫颈癌组的阳性表达情况:P16阳性率分别为18.33%、73.33%、95.83%、100%,Ki67阳性率分别为10.00%、63.33%、87.50%、100%,ΔNp63阳性率分别为6.67%、81.67%、96.67%、100%,三个指标的阳性表达率随宫颈病变级别的升高而呈上升趋势,且四组阳性率之间存在差异;
  3.P16、Ki67及ΔNp63在HSIL组的阳性表达与正常组、LSIL组均有统计学差异,与宫颈癌组差异无统计学意义;
  4.单独检测ΔNp63蛋白阳性诊断HSIL的灵敏度和特异度分别为95.0%和96.7%,均高于单独使用Ki67(87.5%和90.0%);其特异度与P16相当,但灵敏度相对较高;
  5.ROC曲线结果分析:单独应用ΔNp63免疫组化检测HSIL的曲线下面积为0.958(95%CI为0.924-0.993),高于P16和Ki67检测曲线下面积,与Ki67曲线下面积比较差异有统计学意义,而与P16曲线下面积比较差异无统计学意义;在包含ΔNp63的多种联合检测方式中,以ΔNp63与P16并联方式的曲线下面积最大(0.950),与单独检测ΔNp63的曲线下面积(0.958)相比较,差异无统计学意义。
  结论:
  1.P16、Ki67、ΔNp63在一定程度上可以客观的反映CIN病变的程度;
  2.ΔNp63是一种高潜力的宫颈癌相关性的标记物;
  3.三种生物学指标,对有效筛选及提升HSIL病理诊断准确率,均有一定临床的指导意义。
[硕士论文] 周雨佳
中医学(中西医结合) 南京中医药大学 2017(学位年度)
摘要:目的:探讨并阐述针药联合治疗肾虚痰瘀型多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)伴胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的临床疗效与单纯使用西药以及中西药结合治疗肾虚痰瘀型PCOS-IR的临床疗效的对比;证实针药联合治疗肾虚痰瘀型PCOS-IR具有良好的效果与优势。
  方法:按诊断标准收集肾虚痰瘀型PCOS-IR患者,分为三组,即对照组、治疗1组、治疗2组,分别给予二甲双胍,首乌僵芪汤加减联合二甲双胍,首乌僵芪汤加减联合针灸、二甲双胍治疗,分别治疗3个月经周期。观察三组患者治疗前后的月经周期、多毛及痤疮情况,血清T、LH、FSH、E2值的变化,空腹血糖、空腹胰岛素及胰岛素抵抗情况,体重指数(body mass index,BMI)变化,基础体温(basal body temperature,BBT)的变化。
  结果:
  (1)在改善中医证候方面,治疗1组与治疗2组疗效相当,但都优于对照组。
  (2)治疗1组、治疗2组治疗后月经周期、多毛、痤疮情况较治疗前均有明显改善(P值均<0.05),对照组治疗前后对比均无明显改善(P值均>0.05)。在改善月经周期、多毛方面,治疗1组与治疗2组疗效相当(P>0.05);在改善痤疮方面,治疗2组的疗效优于治疗1组(P<0.05)。
  (3)三组均能降低T、LH水平(P值均<0.05),但三组的FSH、E2值治疗后均无明显改善(P值均>0.05)。在降低T、LH水平方面,治疗2组的疗效优于另外两组,另两组疗效相当。
  (4)三组的空腹血糖治疗后均无明显改善(P值均>0.05),但三组均能降低空腹胰岛素水平及HOMA-IR(P值均<0.05)。在降低空腹胰岛素水平及HOMA-IR方面,治疗2组的疗效优于治疗1组,且治疗1组优于对照组。
  (5)三组均能降低BMI(P值均<0.05)。在降低BMI方面,治疗2组的疗效优于治疗1组,且治疗1组优于对照组。
  (6)三组均能改善BBT情况(P值均<0.05)。在改善BBT方面,治疗2组的疗效优于治疗1组,且治疗1组优于对照组。
  (7)三组总疗效比较,治疗2组的疗效优于另外两组,另两组疗效相当。
  结论:首乌僵芪汤联合二甲双胍及针刺的方法治疗肾虚痰瘀型PCOS-IR,能有效改善中医症候、月经周期、多毛及痤疮情况,调节性激素水平,改善胰岛素抵抗,降低体重指数,恢复BBT双相,效果显著。表明针药联合治疗肾虚痰瘀型PCOS-IR疗效确切,效果优于中西药结合治疗或单纯使用西药治疗肾虚痰瘀型PCOS-IR。
[硕士论文] 汤梦雨
中医学(中西医结合) 南京中医药大学 2017(学位年度)
摘要:目的:观察联合运用夏桂成教授的补肾促排卵汤加减及针刺治疗肾虚血瘀型未破裂卵泡黄素化综合征(Luteinized Unrupture Follicle Syndrome,LUFS)的临床疗效,通过对比三组患者治疗前后外周血激素促黄体生成素(Luteotropic Hormone,LH)、雌二醇(Estradiol,E2)、孕酮(Progesterone,P)水平的差异及基础体温的变化情况,探讨补肾促排卵汤加减联合针刺是否在肾虚血瘀型LUFS的治疗中具有优势,提高妊娠率,进一步指导临床应用。
  方法:选择符合本课题纳入标准的肾虚血瘀型未破裂黄素化综合征患者90例,随机将其分为三组,西药组(HCG组)、中西药组(补肾促排卵方+HCG组)、针药组(针刺+补肾促排卵方+HCG组),所有患者各治疗三个月经周期。观察各组患者BBT类型及HPS评分,HCG日各组患者的E2、LH值以及排卵一周后的P值,并从排卵率、妊娠率等方面进行比较。
  结果:①中医临床症候积分:中西药组及针药组的治疗后平均积分对比治疗前均有所降低(P<0.05),西药组的中医临床症候治疗后未获得明显的改善(P>0.05)。且从治疗后下降的差值比较,针药组显著优于中西药组(P<0.05)。②HPS评分:中西药组及针药组的治疗后平均积分对比治疗前均有所上升(P<0.05),西药组的HPS评分治疗后未获得明显的改善(P>0.05)。且从治疗后上升的差值比较,针药组上升更多(P<0.05)。③激素水平:中西药组及针药组的治疗后E2水平对比治疗前均有所提高(P<0.05),且针药组明显优于中西药组(P<0.05)。西药组的E2水平治疗后未获得明显的提高(P>0.05)。三组患者的LH、P水平治疗后均有不同程度的改善(P<0.05),且改善程度针药组>中西药组>西药组(P<0.05)。④排卵率、妊娠率:针药组的排卵率为59.21%,中西药组为46.91%,西药组为36.05%,同样针药组的妊娠率为63.33%,中西药组为36.67%,西药组为13.33%,三组比较有显著差异性(P<0.05)。
  结论:针刺联合药物及补肾促排卵汤联合HCG的治疗方式,相比于单纯使用HCG治疗能明显提高患者的排卵率,妊娠率,改善患者的临床症状,且针药联合的治疗效果优于补肾促排卵汤联合HCG。研究结果表明运用针刺联合夏桂成教授的补肾促排卵汤加上HCG治疗肾虚血瘀型LUFS的效果相比传统单一的药物疗法具有一定的临床优势。
[硕士论文] 张玲玲
中西医结合临床 南京中医药大学 2017(学位年度)
摘要:目的:通过观察内服补肝肾清湿毒方及外用清热解毒、化湿止痒方治疗宫颈HR-HPV感染的临床疗效,来寻求能有效治疗宫颈HR-HPV感染的中医辨证思路及理法方药。
  方法:选取符合本研究要求的肝肾亏虚兼湿热毒邪内蕴型宫颈人乳头瘤病毒感染患者31例,随机将31例患者分为中药组(15例)和干扰素组(16例)。根据导师临床经验,将1个疗程设定为1个月,持续治疗3个月后评判疗效。通过对比两组患者治疗前后临床症状积分、中医证候积分、HC-Ⅱ检测等来评判治疗的成效,并监测宫颈HR-HPV感染伴或不伴宫颈病变(ASC-US、LSIL)患者在药物干预前后宫颈局部细胞因子IL-2、IL-4、IFN-α的变化。
  结果:
  1.中药组、干扰素组在治疗后HPV DNA病毒载量较各自治疗前的差异都无统计学意义(P>0.05)。中药组在降低HPV DNA病毒载量幅度上优于干扰素组(302.65±448.39→66.46±131.48;410.34±709.01→210.41±478.93)。
  2.中药组转阴8例(53.33%),干扰素组转阴5例(31.25%),两组转阴率相比无统计学差异(P>0.05),但中药组转阴率高于干扰素组。
  3.中药组、干扰素组治疗后的临床症状积分较各自治疗前都有明显降低,且两组变化都具有显著统计学意义(P<0.01; P<0.01)。
  4.中药组、干扰素组治疗后的中医证候积分较各自治疗前都有明显降低,且两组变化都具有显著统计学差异(P<0.01;P<0.01),中药组在降低中医证候积分明显优于干扰素组(P<0.01)。
  5.中药组与干扰素组总有效率分别为93.33%、81.25%,两组总有效率相比无统计学差异(P>0.05),中药组总有效率高于干扰素组。
  6.治疗前宫颈HR-HPV感染伴或不伴宫颈病变(ASC-US、LSIL)患者阴道冲洗液中IL-4、IL-2、IFN-a浓度均无统计学差异(P>0.05)。但IL-4浓度与宫颈局部病变存在正的线性相关。
  7.在药物干预前后阴道冲洗液中细胞因子IL-2/IL-4比值变化存在统计学差异(P=0.026,P<0.05)。
  结论:
  1.内服外用中药在治疗肝肾亏虚兼湿热毒邪内蕴型宫颈HR-HPV感染疗效确切,不仅能够显著降低HPV DNA滴度,还能明显改善患者的临床症状及中医证候。因此内服外用中药值得运用于以肝肾亏虚兼湿毒内蕴为证型的宫颈HR-HPV感染。
  2.IL-4浓度与宫颈病变程度存在正的线性相关,可将IL-4作为检测宫颈病变程度的一个新指标加以研究。
  3.内服外用中药能够使HPV感染宫颈局部免疫从失衡状态向平衡状态转变。
[硕士论文] 李素
中医妇科学 南京中医药大学 2017(学位年度)
摘要:目的:观察清心滋肾汤加味联合文拉法辛缓释片对心肾不交肝郁型围绝经期抑郁症的临床疗效。
  方法:临床收集60例符合诊断标准、纳入标准的围绝经期抑郁症患者,随机分为2组,各30例,对照组予盐酸文拉法辛缓释片,治疗组在对照组的基础上予清心滋肾汤加味。两者疗程均为8周。观察并比较两组患者治疗前后血清雌二醇(E2)、促卵泡生成素(FSH)水平,血小板5-羟色胺(5-HT)浓度及17项汉密尔顿抑郁量表(HAMD-17)、中医证候量表、改良Kupperman评分表评分变化情况。此次研究以HAMD-17抑郁量表作为疾病疗效评价,中医症候量表评分作为主要疗效指标,改良Kupperman评分表评分作为次要疗效指标。
  结果:①两组围绝经期抑郁症患者治疗后三组评分均较用药前有明显的降低,差异显著(P<0.05);中药联合抗抑郁药组与单用抑郁药组疗效比较,前者明显优于后者(P<0.05)。②治疗后两组血清E2水平均较治疗前明显升高,治疗组较对照组显著(P<0.05);两组血清FSH水平相比治疗前均有所下降,治疗组下降更显著(P<0.05)。③治疗后两组患者血小板5-HT浓度均较用药前明显增加(P<0.05),治疗组血小板5-HT浓度增加较对照组明显,差异有统计学意义(P<0.05)。④治疗后,治疗组、对照组总有效率分别为93.33%、73.33%,中药联合抗抑郁药组优于单用抗抑郁药组(P<0.05)。⑤中药联合抗抑郁药、单用抗抑郁药组不良反应发生率分别为23%、50%,差异有统计学意义(P<0.05)。
  结论:清心滋肾汤加味治疗心肾不交肝郁型围绝经期抑郁症临床有效;对围绝经期抑郁症患者生殖内分泌水平及单胺类神经递质含量有一定调节作用;清心滋肾汤加味与抗抑郁药盐酸文法拉辛缓释片联合应用能够提高其疗效且能预防和减少其不良反应的发生,亦能有效缓解围绝经期相关不适症状。
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