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[硕士论文] 马天宇
动物遗传育种与繁殖 华中农业大学 2018(学位年度)
摘要:分娩启动是一个复杂的生理过程,影响因素有很多,包括机体内部环境和外界环境两方面。外界因素包括摄入食物、不当的机械运动等;内在调节主要包括激素、免疫炎症以及细胞凋亡等。目前关于分娩启动过程具体分子机制的研究鲜有报道。在本实验室大白猪分娩前后胎盘组织转录本测序中筛选出GPX1差异表达基因,有研究表明GPX1可以缓解氧化应激反应,GPX1缺乏会导致非正常分娩。本试验旨在探究谷胱甘肽过氧化物酶GPX1在分娩启动的进程中的作用。
  为了探究GPX1是否在分娩启动中发挥作用,我们在怀孕15.5天孕鼠腹腔注射LPS构建小鼠早产模型,检测胎膜中ROS水平、氧化标志基因HSP90、炎症因子TNFα、IL1β以及分娩相关基因COX2的表达变化。在WISH细胞中分别转染干涉片段si-GPX1和超表达质粒,检测分娩相关基因HSP90、COX2、Caspase3、IL1β以及NFκB。为了判断GPX1发挥作用的通路,采用NFκB通路抑制剂CAPE处理WISH细胞,通过细胞免疫荧光检测NFκB以及COX2的表达变化。通过ELISA检测清平猪有无分娩征兆的羊水中PGE2的浓度。在WISH细胞中转染重组质粒pCMV-GPX124小时和48小时后,分别检测细胞上清液中的PGE2浓度。最后,通过PGE2处理WISH细胞,检测对GPX1、NFκB和COX2的影响。试验主要研究结果如下:
  1)小鼠早产模型中实验组小鼠胎膜ROS水平显著增强,氧化应激标志基因HSP90表达水平显著高于对照组,同时炎症因子TNFα、IL1β和COX2呈现高表达,蛋白结果表现一致。表明分娩启动时,氧化应激水平加剧,并出现炎症反应。在三类抗氧化标志基因GPX1、Catalase和SOD2中,实验组与对照组相比,表达水平分别是1.80、1.27和1.18倍。其中GPX1相对变化最剧烈,推断GPX1作为主要抗氧化基因。
  2)在长妊娠期及短妊娠期清平猪种中,有分娩征兆组羊水中PGE2浓度均显著高于无分娩征兆组,结果表明PGE2对分娩启动发挥重要作用。高水平GPX1可以降低HSP90的水平,表明GPX1可以降低氧化应激反应,同时激活NFκB通路上调COX2的表达,在24以及48小时后,PGE2水平均显著上升。低水平GPX1使HSP90水平升高,氧化应激水平加剧,上调炎症因子IL1β水平。GPX1从激素水平以及免疫炎症两方面参与妊娠以及分娩启动的调节。
  3)PGE2处理WISH细胞后,对GPX1产生促进作用,对NFκB以及COX2有负反馈抑制作用。这种机制可以防止PGE2水平通过NFκB通路进一步升高,避免PGE2高峰提前引发早产。GPX1的稳定表达是正常妊娠分娩的必要条件。
[硕士论文] 镇景开
公共卫生与预防医学 武汉科技大学 2018(学位年度)
摘要:目的:哺乳动物的精子相关抗原16(Spag16)有两种转录子Spag16L和Spag16S,它们编码的蛋白在纤毛/鞭毛形成和运动中发挥重要作用。生物信息学分析表明小鼠和人的SPAG16L启动子区均存在多个潜在的SOX5结合位点,而SOX5基因可编码48kD转录子(S-SOX5),本研究重点关注转录因子S-SOX5对精子相关抗原基因16L(SPAG16L)的转录调节作用,为全面了解精子发育过程中鞭毛的形成提供理论基础。
  方法:(1)用Consite方法分析人SPA G16L启动子区域的序列,查找潜在的SOX5结合位点。(2)质粒构建:以实验室留存的人睾丸组织cDNA为模版,构建含有SPA G16L启动子的荧光素酶报告转录融合质粒(SPAG16L/pGL3)、S-SOX5蛋白的表达质粒(S-SOX5/pcDNA3和S-SOX5/pTarget)以及抑制其表达的siRNA质粒。(3)SPAG16L和S-SOX5在真核细胞中的表达:将SPAG16L/pGL3转染至BEAS-2B细胞,以pGL3空载体为对照,荧光素酶报告系统比较两组荧光素酶的活性以评估SPAG16L表达;将S-SOX5/pcDNA3转染至BEAS-2B细胞,以pcDNA3空载体为对照,Western blot和real-time PCR分别检测内源性S-SOX5蛋白和SPAG16L mRNA的表达水平。(4)以转染了S-SOX5过表达质粒S-SOX5/pcDNA3的BEAS-20细胞为对象,用SOX5RNAi腺病毒感染细胞,以未感染SOX5RNAi的细胞为对照,检测S-SOX5表达降低是否会使SPAG16L的表达下调。(5)染色体免疫共沉淀(ChIP)实验验证S-SOX5是否直接结合SPA G16L启动子区域的SOX5结合位点,从而实现其对SPAG16L的调控作用。(6)对SPAG16L启动子区域的SOX5结合位点进行点突变,检测结合位点突变后S-SOX5对SPAG16L的激活作用是否消失。
  结果:生物信息学分析表明,人的Spag16L基因近端启动子区域存在多个转录因子SOX5的结合位点。而Spag16L启动子在BEAS-2B细胞中有活性,因此使研究S-SOX5对其的转录调节成为可能。RT-PCR实验表明在BEAS-2B细胞中S-SOX5是SOX5基因的主要表达亚型,WB实验进一步证实48kDa的S-SOX5蛋白在该细胞株中表达丰富。共转染实验表明外源性的S-SOX5能显著提高BEAS-2B细胞中Spag16L启动子的活性,腺病毒感染实验进一步证实,外源性的S-SOX5能提高SPAG16LmRNA的水平。SOX5RNAi转染BEAS-2B细胞后,S-SOX5的表达降低使SPAG16L的表达明显下降。ChIP和突变实验证实S-SOX5与SPAG16L的启动子区域的SOX5结合位点直接结合并激活SPA G16L的表达。
  结论:SPAG16L是S-SOX5的靶基因,S-SOX5对SPA G16L的转录调节是通过与SPAG16L启动子区域的SOX5结合位点直接结合而实现的。
[硕士论文] 张世阳
公共卫生与预防医学 武汉科技大学 2018(学位年度)
摘要:目的:研究鞭毛内转运蛋白172(Intraflagellartransportprotein172,IFT172)在小鼠生精细胞中的功能以及精子鞭毛形成过程和生育能力中的作用。
  方法:1、将成年的Ift172flox/flox雌性小鼠与Stra8-iCre雄性小鼠杂交,建立的Ift172生精细胞条件敲除小鼠为实验组小鼠,以野生型小鼠为对照。2、用10对六周以上的Ift172条件敲除雄鼠或野生型雄鼠分别与成年的野生型雌鼠交配两个月以上,评估其生育力及繁殖能力。3、收集附睾精子,精子计数,检测精子活力,光镜下观察精子形态。4、收集小鼠睾丸和附睾进行HE染色,观察精子发生过程的各个阶段。5、透射电镜(TEM)观察两组小鼠精子的超微结构。6、蛋白印迹(WesternBlot)检测IFT25、IFT27、IFT81、AKAP4、ODF2、SPAG16L等相关蛋白的表达水平。7、分离小鼠睾丸生精细胞,免疫荧光染色染色检测IFT172的定位以及Ift172条件敲除小鼠体内IFT172敲除水平,并观察精子中纤维鞘蛋白AKAP4和外周致密纤维蛋白ODF2的定位。
  结果:Ift172floJflox;Stra8-iCre条件敲除小鼠都能够生长至成年。1、与正常的小鼠相比较,Ift172flox/flox;Stra8-iCre条件敲除小鼠的睾丸重量/体重比例没有明显差别。其中有六成的成年雄性纯合子小鼠是不育的。2、组织学检测显示,与野生型小鼠相比,Ift172flox/flox;Stra8-iCre条件敲除小鼠的精子形成阶段发生异常。3、Ift172被敲除后,小鼠附睾中仅残存少量发育完全的精子,大部分精子出现精子尾卷曲。且精子数目比野生型小鼠减少了10倍左右,精子活力较野生型小鼠有明显降低。4、与野生型小鼠相比,在Ift172条件敲除小鼠的睾丸内,其他的几种IFT家族B复合物的成员IFT20、IFT25、IFT27和IFT81以及IFT家族A复合物中的IFT140的表达水平没有明显的变化。此外,轴丝蛋白SPAG16L的表达量也没有明显变化。但是外周致密纤维结构蛋白ODF2以及线粒体鞘蛋白AKAP4的表达量显著下降。5、免疫荧光染色结果显示,在野生型小鼠中IFT172定位在生精细胞中定位在长形精子细胞的精子领处,而AKAP4和ODF2在Ift172条件敲除小鼠精子中的定位与野生型小鼠相比没有明显改变。
  结论:IFT172在生精细胞中表达量减少导致小鼠精子数目、活力以及生育能力下降,IFT172是一个对于雄性小鼠的生育能力以及精子发生所必需的蛋白,它很可能参与精子发生过程中特殊的结构蛋白的运输和组装。
[硕士论文] 尹晓燕
化工过程机械 山东大学 2017(学位年度)
摘要:马蹄蝙蝠有一个积极的超声波声纳系统,允许动物在结构丰富的自然环境中导航和捕捉猎物。这种生物声纳系统的组件包含一个不寻常的动态系统,在实现动物的优良的感官性能中起着关键性作用。马蹄蝙蝠生物声纳采用精心设计的挡板形状来对传出和传入的超声波进行衍射,超声从被鼻叶包围的鼻孔发出然后被大外耳接收。当超声衍射发生时,鼻叶和耳朵就被驱动。在发射端,两鼻叶即前叶和鞍,已被证明是与超声发射同步运动。在接收侧,外耳已显示在约100毫秒内发生高达20%的相对于耳朵总长度的形变。由于这些形变的产生,传入和传出超声的衍射变成了一个动态的过程。动态的衍射过程导致类似的动态装置特性,如果这种额外的动态维度被发现在本质上提高了感官信息的编码,那么马蹄蝙蝠生物声纳可以作为一个动态的过程应用于传感技术。本文将会介绍目前已知的关于蝙蝠生物声纳的动态效果,同时将会对生物声纳和类似工程的感官系统如声纳和雷达进行对比。
  蝙蝠种群中的马蹄蝠(Rhinolophidae)和相关的旧大陆鼻叶蝠(Hipposideridae)都显示出将明显的耳朵动作作为其生物体行为的一部分。在当前的工作中,通过耳朵上标记点的三维重建来定量分析这些耳朵运动。在两种物种中观察到的耳朵运动都分为两类:在“刚性旋转”运动中,耳朵的几何形状保持不变,仅仅改变在空间中的旋转方向。在“柔性运动”中,耳朵的几何形状发生变化,这在标记点之间的距离变化中是明显的。线性判别分析结果表明,两种类型的运动可以在分析的数据集中没有任何重叠的情况下分离。因此,来自两个物种的蝙蝠有两种独立类型的耳朵运动,它们之间显然没有过渡。两种不同运动在动物生物体行为中的作用仍有待确定。
  已知蝙蝠通过多普勒频移补偿机制来进行捕猎和追踪,本文将通过实验的方法来探究快速耳朵运动能否对回声产生较大的多普勒频移值,从而激发蝙蝠启动其多普勒频移补偿机制。
[硕士论文] 王耀新
生物化学与分子生物学 内蒙古大学 2017(学位年度)
摘要:哺乳动物的受精作用需要经历精子的获能、精子与透明带的结合、精子发生顶体反应和精卵细胞膜的融合四个过程。精卵细胞膜的融合是整个受精作用中最为关键的一步,此过程中精卵膜上都有大量的膜蛋白参与。目前已知精卵膜融合过程中最重要的蛋白相互作用是精子表面的精卵融合蛋白IZUMO1与卵子表面的精卵融合蛋白JUNO的结合。但仅仅IZUMO1-JUNO结合还不足以引起精卵膜融合,我们猜想应该还需要精子或卵子表面的其他蛋白之间的相互作用。
  本研究用免疫共沉淀和酵母双杂交技术探明绵羊精子表面的IZUMO1、PDIA3和TMEM190三个蛋白之间是否存在相互作用。以绵羊睾丸cDNA为模板首次克隆到779 bp的绵羊TMEM190 cDNA,包括543 bp的开放阅读框,并提交NCBI GeneBank获得登录号:KY914491。同时克隆了绵羊Izumo1和PDIA3的eDNA序列。将克隆得到的三个基因的cDNA分别与pGEX-4T-1连接构建了原核表达载体,转入大肠杆菌表达TMEM190-GST(43.9 kDa)、IZUMO1-GST(60.2 kDa)和PDIA3-GST(80.6 kDa)融合蛋白。以纯化的IZUMO1-GST蛋白为抗原免疫家兔得到兔抗羊IZUMO1抗血清;以纯化的PDIA3-GST蛋白为抗原免疫小鼠得到鼠抗羊PDIA3抗血清。Western Blot检验证明得到的两种抗血清均能识别GST和GST融合蛋白。为了进行免疫共沉淀实验,我们用pCMV-HA-C、pCMV-Flag-C构建了真核表达载体:pCMV-IZUMO1-HA、pCMV-IZUMO1-Flag、pCMV-PDIA3-HA、pCMV-PDIA3-Flag、pCMV-TMEM190-HA和pCMV-TMEM190-Flag。将pCMV-IZUMO1-HA与pCMV-PDIA3-Flag、 pCMV-TMEM190-HA与pCMV-PDIA3-Flag、pCMV-TMEM190-HA与pCMV-IZUMO1-Flag分别共转染293T细胞,用兔抗HA多克隆抗体为IP抗体,用自制的鼠抗羊PDIA3抗血清检测IZUMO1-HA与PDIA3-Flag和TMEM190-HA与PDIA3-Flag的相互作用,出现预期共沉淀蛋白条带。用自制的兔抗羊IZUMO1抗血清检测TMEM190-HA与IZUMO1-Flag的相互作用,没有出现预期共沉淀蛋白条带。为了进行酵母双杂交实验,我们用pGAD-T7、pGBK-T7构建了酵母双杂交载体:pGAD-IZUMO1、pGBK-IZUMO1、pGAD-PDIA3、pGBK-PDIA3、pGAD-TMEM190和pGBK-TMEM190,并将连pGAD的载体转化Y2H Gold,连pGBK的载体转化Y187,将IZUMO1(Y187)与PDIA3(Y2H Gold)、IZUMO1(Y2HGold)与TMEM190(Y187)和PDIA3(Y2H Gold)与TMEM190(Y187)杂交。出现了三叶草结构的杂交体后,涂SD/-Trp-Leu二缺平板, IZUMO1(Y2HGold)与TMEM190(Y187)杂交平板生长一个蓝色菌落,另外两组大部分为蓝色菌落。继续涂SD/-Ade-His-Leu-Trp四缺平板后,IZUMO1(Y2H Gold)与TMEM190(Y187)杂交平板没有菌落生长,另外两组有大量蓝色菌落生长,表明IZUMO1与TMEM190不能发生相互作用,而IZUMO1与PDIA3、PDIA3与TMEM190存在相互作用。最后免疫共沉淀实验和酵母双杂交实验得到了一致的结论,即在酵母和293T细胞中,IZUMO1和PDIA3、PDIA3和TMEM190存在相互作用,而IZUMO1和TMEM190不存在相互作用。
[硕士论文] 许铁龙
动物学 贵州师范大学 2017(学位年度)
摘要:本研究至2016年12月止共对贵州省包括毕节市、大方县、盘州市、威宁彝族回族苗族自治县、纳雍县、水城县、兴义市、道真仡佬族苗族自治县、务川仡佬族苗族自治县、绥阳县、赤水市、习水县、金沙县、遵义县、凤冈县、兴仁县、惠水县、关岭布依族苗族自治县、开阳县、修文县、安顺市、长顺县、清镇市、贵阳市花溪区、贵阳市乌当区、贵定县、织金县、息烽县、龙里县、平坝县、黔西县、余庆县、荔波县、榕江县、从江县、三都水族自治县、独山县、丹寨县、江口县、印江土家族苗族自治县、松桃苗族自治县、施秉县、黎平县、雷山县、凯里市、沿河土家族自治县、思南县、安龙县、贞丰县、望谟县、罗甸县在内的共计51个县、市、区进行了野外翼手目动物标本采集,采集翼手目动物标本共计2036号,结合文献记录,现贵州省共有翼手目动物7科18属59种。与《贵州兽类志》相比增加19种。其中,中国特有种8种。经过实地调查,贵州省分布最为广泛的大蹄蝠Hipposiderideros armiger,其在贵州省的分布地共计47个县市。在贵州高原山区省的5个动物地理亚省中均有分布的翼手目物种分别为:托氏菊头蝠Rhinolophusthomasi、菲菊头蝠Rhinolophus pusillus、皮氏菊头蝠Rhinolophuspearsonii、贵州菊头蝠Rhinolophusrex、云南菊头蝠Rhinolophusyunanensis、大蹄蝠Hipposiderosarmiger、黄大蹄蝠Hipposiderospratti、三叶蹄蝠Aselliscusstoliczkanus、西南鼠耳蝠Myotisaltarium、中华鼠耳蝠Myotischinensis、中华山蝠Nyctalusplancyi、南蝠Iaio、印度伏翼Pipistrelluscoromandra、东亚伏翼Pipistrellus abramus,共计14种。五个动物地理亚省之中,翼手目种类最多的是黔东南低山丘陵盆地亚省,共计48种,占贵州省总数59种的81.4%;另黔西高原中山亚省共有翼手目动物31种,占贵州省总数59种的52.54%;黔北中山峡谷亚省的翼手目种类为31种,占贵州省总数59种的52.54%;黔中山原丘陵亚省的翼手目共计38种,占贵州省总数59种的64.41%;黔南低山河谷亚省的翼手目种类共计33种,占贵州省总数59种的55.93%。贵州省翼手目分布型以东洋型为主要类型,为27种,南中国型13种排列第二,云贵高原及附近山地型6种,东亚季风区型4种,旧大陆热带-亚热带型3种,古北型2种,东北型、岛屿型、喜马拉雅-横断山区分布型各1种,不易归类的分布型1种(由于其分布比较广泛,不能视为某一类),即大耳黄蝠Nycticeiusemarginatus。
[硕士论文] 赵焕乐
动物学 内蒙古大学 2017(学位年度)
摘要:机场及其周边鸟类种类调查及其多样性研究对于新建机场开展鸟击防范工作具有重要意义。2015年1-12月,采用样线法和固定半径样点法对内蒙古扎兰屯成吉思汗机场及其周边8km范围内的区域进行鸟类多样性调查。调查结果如下:
  (1)调查期间共记录到鸟类有15目31科82种。
  (2)扎兰屯成吉思汗机场围界内麻雀、喜鹊、家燕、白鹊钨为主要鸟类。鸟类四季活动的共同高峰期为早晨6点到8点,其中春季4点到6点的鸟类种类最高,为6种,夏季的6点到8点鸟类数量最多,为363只。
  (3)根据对鸟类的群落结构分析:机场围界内春季的鸟类多样性指数(0.740)和均匀度指数(0.819)最高;冬季的优势度(0.683)最高;夏季的平均密度(2.826ind· hm-2)最高。机场围界外:夏季湿地的多样性指数最高,为1.576;冬季的草地均匀度指数最高,为0.902;冬季的居民区优势度最高,为2.113;春季的湿地平均密度最高,为28.600 ind·hm-2。
  (4)本文在前人研究的基础上综合鸟类的体积、数量、出现次数、飞行高度、与机场的距离、出现的样带数以及是否集群7个因子对鸟类的危险值重新赋值并计算得出危险值。严重危险鸟类有普通鸬鹚Phalacrocorax carbo、麻雀、赤麻鸭Tadorna ferruginea等14种。
  根据调查结果提出不同季节,不同区域以及不同鸟种的针对性防范措施以及机场管理对策,为今后的扎兰屯机场鸟击防范工作提供重要的科学依据。
[硕士论文] 宋如昕
动物学 山西大学 2017(学位年度)
摘要:为了研究低温胁迫对中华鳖(Pelodiscus sinensis)早期炎性因子IL6肠道表达的影响,本论文首先细致划分了中华鳖的肠道。采用形态学观察、组织切片的方式研究了中华鳖的九段肠道。使用已经在哺乳动物和鱼类的肠道中报道的9个基因,从功能上区分中华鳖肠道各区段。其次,为研究肠道部分的免疫功能,聚焦于免疫因子il6,在克隆了中华鳖il6的cDNA全长后,从启动子、基因结构、共线性关系、相似性分析、系统发育和蛋白结构等方面对其进行生物信息学分析;采用 qPCR手段进行了组织表达模式分析。最后,为了探究il6免疫功能,利用免疫刺激剂(LPS、Con A和PolyI:C)在体外刺激脾脏原代细胞的实验;为了探究低温胁迫对il6的影响,我们采用两个温度(25℃,15℃)、两种细菌(革兰氏阴性与阳性菌)体内攻毒的方式从5个时间点(6h,12h,24h,72h和7d)来检测il6在肠道以及脾脏中的表达变化情况。
  实验结果如下:
  1.传统手段与分子生物学方法相结合对中华鳖肠道的划分
  根据标记分子在各区段的表达情况,对比形态学、组织学观察分析得到,从S1到 S3(从肠道起始占总长度的29.9%的位置,29.9%)的区域相当于哺乳动物十二指肠,而S4(40.2%)到S5(65.4%)、S8(92.7%)与 S9分别相当于哺乳动物回肠和大肠。而对于S6(81.3%)和S7(87.3%),其功能多样,并且取决于功能基因。它们可能是小肠和大肠之间的过渡区或者属于大肠部分。
  2.中华鳖il6的克隆及组织表达模式分析
  启动子分析显示,il6的启动子含有保守的转录因子结合位点。il6 cDNA全长为2069bp,开放阅读框长度为663bp,而il6ns cDNA全长为2194bp,开放阅读框长度为615bp,两者差异仅限于信号肽位置(il6编码信号肽的序列中插入了一段125bp的序列导致il6ns不编码信号肽)。中华鳖il6与鸟类、哺乳类相比均有保守的共线性关系,且相似性一致性较高。中华鳖il6与哺乳类、鱼类的基因结构类似,而中华鳖il6ns与鸟类的基因结构相似。蛋白二级结构主要包括α-螺旋、延伸链、无规则卷曲、β-转角。三级结构包含IL-6/G-CSF/MGF家族特征序列(C–X(9)–C–X(6)–G–L–X(2)–Y–X(3)–L),序列末端还具有aataaa加尾信号等。系统进化分析显示,与鸟类首先聚类,其次是哺乳类,最后是鱼类。同时,以人 IL6蛋白为模型构建了中华鳖 IL6蛋白的3D结构模型。组织表达模式分析结果则显示,两个il6在体内的分布差异较大。
  3.低温胁迫对中华鳖肠道免疫因子il6 mRNA表达的影响
  il6/il6ns两个转录本在金黄色葡萄球菌或嗜水气单胞菌胁迫后,表达量随时间推移整体均呈现先升后降的趋势,且 il6的表达受低温胁迫的影响表现出“应答延迟”和“表达增强”的现象。此外还发现,在受到细菌入侵后,il6的mRNA表达量对细菌的应答反应要强于 il6ns的。体外实验表明,脾脏细胞在 PolyI: C的刺激下6h il6/il6ns表达极显著上调(P<0.01),在24h和48h表达量迅速回落。但是,在Con A和LPS的刺激下,两个基因在各个时刻均没有显著性变化。
  综合以上研究结果得出如下结论:
  1.通过检测中华鳖中一些与哺乳类以及斑马鱼同源的标记分子,可以得到一个与传统形态学及组织学不同的、更为精确的中华鳖肠道划分结果。
  2.克隆得到了两个中华鳖的il6的cDNA序列,并对其进行了生物信息学分析。弥补了爬行类il6研究的空白,证实了两个基因在组织内的分布情况不同。
  3.低温胁迫会对中华鳖il6应对细菌的免疫应答造成影响。且发现il6的两个转录本在胁迫后的表达模式不同。提示它们在体内有不同的功能。
[硕士论文] 王晨
动物遗传育种与繁殖 华中农业大学 2017(学位年度)
摘要:FHL2(Four and a half LIM domains protein2)是FHL蛋白家族成员之一,可作为转录因子共结合因子,参与细胞增殖、迁移、凋亡、信号转导和基因转录等诸多过程。目前,基于FHL2的研究主要集中在心脏、骨骼和癌症中,对生殖发育方面的研究较少。研究表明,FHL2在小鼠卵巢颗粒细胞中表达,可通过结合NR5A1,调控抑制素α基因的转录,提示FHL2对生殖具有重要调控作用,但调控作用及作用机制尚不清楚。因此,本实验以昆明小鼠卵巢颗粒细胞(mGCs)为模型,研究FHL2对小鼠颗粒细胞的调控作用及作用机制,旨在为阐明哺乳动物卵泡发育调控机制提供理论基础。主要研究结果如下:
  (1) FHL2在小鼠卵巢中的时空表达与定位规律:收集新生小鼠(1-6天)及3周和10周的小鼠卵巢,免疫组化实验结果表明,FHL2的表达量随着卵泡组装和原始卵泡池的形成逐渐升高,在颗粒细胞和卵母细胞中均有表达;Western Blot检测结果显示,出生后1天、4天和7天小鼠卵巢FHL2表达量逐渐上升;
  (2) FHL2在颗粒细胞细胞核和细胞质中表达:Western Blot和免疫荧光方法证明,FHL2在mGCs细胞核和细胞质中均有表达,定位与细胞所处的分裂周期有关;
  (3) FHL2促进小鼠颗粒细胞的增殖:体外培养小鼠颗粒细胞,分别转染FHL2小干扰RNA或过表达质粒,CCK-8、细胞计数,流式细胞分析方法结果表明,敲低FHL2后,细胞活力显著降低,S期细胞比例显著降低,细胞凋亡显著增加;过表达FHL2,则可以显著促进小鼠颗粒细胞生长,提高细胞活力,抑制细胞凋亡;
  (4) FHL2通过结合转录因子AP-1和NF-κB调控EGF和EGFR转录:转染FHL2 siRNA后,敲低组EGF和EGFR的mRNA表达量和蛋白表达量显著降低,而超表达FHL2则显著提高EGF和EGFR的表达量;进一步利用Co-IP和CHIP方法证明,FHL2分别结合转录因子AP-1和NF-κB,在转录水平上调控EGF和EGFR的表达;
  (5) EGF对小鼠颗粒细胞生长的调控依赖于FHL2表达量:EGF(20 ng/mL)可显著促进mGCs增殖、提高细胞活力,提高S期细胞比例;敲低FHL2后,EGF对颗粒细胞的促增殖作用受到抑制,提示EGF对小鼠颗粒细胞的调控依赖于FHL2表达量;此外,EGF处理可诱导颗粒细胞EGF和EGFR的表达量显著上升;敲低FHL2后再用EGF处理,EGF对其自身和其受体的诱导作用被显著抑制;
  (6) EGF可促进FHL2表达,尤其是诱导细胞核内FHL2表达量上调:上述实验说明,EGF通路可能与FHL2存在互作,为进一步验证该假设,利用EGF处理小鼠卵巢颗粒细胞,结果表明,EGF(20 ng/mL)处理可诱导mGCs FHL2表达;而分别添加EGFR抑制剂(AG1478)、MEK抑制剂(UO126)和PI3K抑制剂(LY294002)则可以阻断EGF对FHL2表达的调控,说明EGF可通过结合EGFR,激活MEK和PI3K信号通路,参与小鼠颗粒细胞FHL2的表达调控;免疫荧光检测结果显示,EGF可诱导颗粒细胞核内FHL2表达量显著上调;Western Blot结果进一步表明,随EGF处理时间的增加,FHL2在核内表达的表达量逐渐增加,呈时间依赖模式。
  在本研究中,发现FHL2在小鼠卵巢颗粒细胞中表达,并参与颗粒细胞的生长调控。EGF与EGFR在细胞膜上结合,激活MEK和PI3K信号通路,调控FHL2表达,并促进FHL2在细胞核内聚集,而核内FHL2可作为转录因子共激活子,通过结合转录因子AP-1和NF-κB,促进EGF和EGFR的表达,从而形成EGF/EGFR/FHL2自分泌通路,调控颗粒细胞的生长与增殖。研究结果阐明了FHL2对颗粒细胞生长的调控作用及作用机制,有助于我们更好的理解哺乳动物生殖发育调控网络,并为提高家畜繁殖力新技术研发提供科学依据。
[硕士论文] 史一然
生态学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:城市化建设改变了鸟类的栖息地结构,增加了人类对鸟类的干扰程度,极大地影响鸟类的群落结构,因此研究城市化建设对鸟类群落的影响对于城市建设和鸟类保护都具有非常重要的作用。扬州地处亚热带和温带气候过渡区,有丰富的湿地生态环境,是许多鸟类繁殖或者迁徙中转的最佳场所。本论文采用直接观察法和图片样本收集法对扬州市区的鸟类种类进行调查,分析城市化建设过程对鸟类群落结构的影响;在扬州市区选择城市居民区、城市公园和临近城市的乡镇3种典型区域,调查不同区域内的鸟类种类和数量及其各类环境因子,分析环境因子与鸟类群落组成的关系,探讨城市建设过程中影响鸟类群落的主要因素,为扬州市的城市化建设和鸟类保护提供资料。实验结果如下:
  1)扬州地区现记录鸟类140种,分别隶属于53科14目。其中雀形目物种75种(53.57%),非雀形目65种(46.43%);留鸟49种(35.00%),夏候鸟35种(25.00%),冬候鸟29种(20.71%),旅鸟27种(19.29%);鸣禽75种(53.57%),涉禽26种(18.57%),游禽20种(14.29%),攀禽10种(7.14%),猛禽5种(3.57%),陆禽4种(2.86%)。
  2)本次调查结果与1980年鸟类调查数据进行比较,历史上出现过、但本次调查未记录的消失鸟类共计50种,历史上未出现过、但本次调查发现的新增鸟类共计51种。其中,新增鸟类物种中雀形目23种,非雀形目28种;消失鸟类物种中雀形目13种,非雀形目37种。新增鸟类物种中夏候鸟13种,冬候鸟7种,留鸟17种,旅鸟14种;消失鸟类物种中夏候鸟11种,冬候鸟16种,留鸟4种,旅鸟19种。新增鸟类物种中鸣禽23种,涉禽13种,游禽9种,攀禽4种,猛禽2种;消失鸟类物种中游禽14种,鸣禽13种,猛禽11种,攀禽6种,涉禽5种,陆禽1种。鸮形目和夜鹰目无新增物种,鹳形目和鸻形目的新增物种数较多。旅鸟的物种组成变化较大,消失物种种类较多;冬候鸟消失物种较多但新增物种较少,夏候鸟部分物种消失但数量与新增夏候鸟物种数基本一致,留鸟的消失种类少且新增种类多,其中鸣禽种类最多且新增物种数最多,猛禽消失物种数占该分类比重较大,涉禽新增物种数大于消失物种数,除鸣禽和涉禽外,其他生活型鸟类消失物种数均大于新增物种数。
  3)居民区鸟类群落的多样性指数、均匀度指数和优势度指数均与城市公园和乡镇存在极显著差异,但城市公园和乡镇的多样性指数、均匀度指数、优势度指数之间均无显著差异。城市公园为城市生存鸟类和本地留鸟提供栖息环境,而乡镇为迁徙性候鸟提供更丰富的栖息地环境。
  4)鸟类的群落的特征参数与环境因子的相关性分别表明,样区面积、样线面积、样方距市中心距离和噪音指数在三种生境类型中均存在显著性差异。居民区中的树冠层高度、树冠层密度、灌木层密度、草本层密度和建筑指数均与城市公园和村镇生境有显著性差异,但这些因子在城市公园和村镇生境之间均无显著性差异。人为干扰在居民区和城市公园之间无显著性差异,但与乡镇生境存在显著性差异。群落特征参数与环境因子的多元线性回归分析表明,多样性指数、均匀度指数和丰富度均与样区面积、样线面积、树冠层密度、灌木层密度、草本层密度、距市中心距离有正相关关系,与人为干扰和建筑指数有负相关关系;优势度指数与样线面积、树冠层密度、灌木层密度、草本层密度有正相关关系,与建筑指数有负相关关系;个体数与样线面积、树冠层高度、树冠层密度有正相关关系,与建筑指数有负相关关系。
  5)鸟类群落特征参数与样区面积存在显著的相关性,多元线性回归分析表明,样区面积越大,鸟类群落的多样性指数、均匀度指数和丰富度(物种数)越高,符合岛屿地理学假定的预测。
  以上结果说明,扬州市区现有鸟类140种,近三十年来鸟类群落在雁形目、隼形目、鸻形目、鹳形目物种中有较大变化;城市公园和乡镇具有较高的生物多样性,城市公园为更多本地留鸟提供了丰富的食物资源和栖息环境,乡镇生境为迁徙性候鸟提供了生存空间;植被是影响鸟类生物多样性的主要原因,保证乔木-灌木-草本层次的连续性和丰富度有助于提高鸟类的生物多样性。
[硕士论文] 林志灯
海洋生物学 汕头大学 2017(学位年度)
摘要:长链多不饱和脂肪酸(Long-chain polyunsaturated fatty acids,LC-PUFA)一般指的是双键数≥3且碳链长度≥20的多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFA)。其中具有重要生理功能的LC-PUFA主要有二十二碳六酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)和花生四烯酸(ARA),它们都是生物体正常生长发育所必需的脂肪酸。一般认为,海蟹不具有将亚油酸和α-亚麻酸转化为LC-PUFA的能力。因此,DHA和EPA等LC-PUFA被认为是海蟹的必需脂肪酸。近年来,本课题组在拟穴青蟹(Scylla paramamosain)脂肪需求以及植物油替代鱼油方面开展了相关研究。研究结果发现,在饲喂紫苏籽油和红花油的青蟹的肌肉中,脂肪酸20:4n-6和20:5n-3的含量有轻微的提高。据此结果,我们推测青蟹自身可能具有合成LC-PUFA的能力。为验证我们的推测,本研究对青蟹合成LC-PUFA的关键酶基因进行了克隆,并对基因的组织表达和营养调节进行了研究。主要结果如下:
  1.采用RT-PCR和RACE-PCR方法,从青蟹中克隆到一个脂肪酸去饱和酶基因(GenBank登录号:KU975033),命名为Δ6 Fad-like。该基因的cDNA序列全长为1973bp,包含201bp的5’非翻译区,443bp的3’非翻译区以及1329bp的开放阅读框,共编码442个氨基酸。氨基酸序列与其它已克隆的甲壳类Δ6脂肪酸去饱和酶具有53%~80%的相似性,且具有典型的脂肪酸去饱和酶的结构特征。RT-qPCR结果显示:Δ6 Fad-like基因主要在肝胰腺中表达,而在其它组织中的表达量相对较低。养殖试验结果表明,随着大豆油替代鱼油比例的升高,Δ6 Fad-like基因在肝胰腺中的表达显著上调,说明了大豆油能促进该基因的表达。
  2.克隆到一个碳链延长酶4基因(GenBank登录号:KX454537),命名为Elovl4-like。该基因的cDNA序列全长为1119bp,包含58bp的5’非翻译区,44bp的3’非翻译区以及1017bp的开放阅读框,共编码338个氨基酸。氨基酸序列与已克隆的其它物种的延长酶4具有42%~47%相似性,且具有典型的延长酶的结构特征。RT-qPCR结果显示:Elovl4-like基因主要在肝胰腺中表达,而在其它组织中的表达量相对较低。养殖试验结果表明,随着大豆油替代鱼油比例的升高,Elovl4-like基因在肝胰腺中的表达显著上调,说明了大豆油能促进该基因表达。
  3.克隆到一个碳链延长酶基因,命名为Elovlm,又因该基因有两个亚型,故又分别命名为Elovlm1和Elovlm2。Elovlm1和Elovlm2 cDNA序列全长均为1529bp,包含75bp的3’非翻译区,389bp的5’非翻译区以及1065bp的开放阅读框,共编码354个氨基酸。RT-qPCR结果显示:Elovlm基因主要在胃中表达,而在其它组织中的表达量相对较低。养殖试验结果表明,随着大豆油替代鱼油比例的升高,Elovlm基因在胃中的表达显著上调,但对肝胰腺中的Elovlm基因的表达影响不显著。
  综上所述,本研究从青蟹中克隆到三个LC-PUFA合成关键酶基因,即Δ6 Fad-like、Elovl4-like和Elovlm。这些基因在肝胰腺和胃等组织中的表达水平较高,说明这些组织可能是青蟹LC-PUFA合成的主要部位。饲料中的大豆油能够显著提高青蟹LC-PUFA合成关键酶基因的表达水平。该研究结果对于丰富甲壳类营养学,特别是分子营养学内容等具有较重要的理论意义和学术价值,为进一步研究甲壳类LC-PUFA合成的分子机制提供了基础。
[硕士论文] 陈晓乾
凝聚态物理 山东建筑大学 2017(学位年度)
摘要:蝙蝠作为唯一具有真正飞行能力的哺乳动物,它的翼是由前肢在进化过程中演变而来的,翼膜将前肢、身体和尾巴连接成一个整体。蝙蝠的飞行过程离不开翼膜,翼膜能够为蝙蝠的飞行提供升力。马铁菊头蝠属于小蝙蝠亚目中的菊头蝠科,在低速飞行过程中具有很强的机动性。本文通过对马铁菊头蝠模型翼膜所受升力的实验测量,对数据进行拟合,得到翼膜的升力系数,探究马铁菊头蝠翼膜的空气动力学特性。
  研究工作主要包括以下三个方面:
  (1)获取蝙蝠样本三维数字结构
  首先捕捉蝙蝠样本,对其形态学结构进行测量和拍照。然后将蝙蝠罹体样本进行一系列地处理,处理过程包括固定蝙蝠的形状、重塑蝙蝠体型、喷显像剂和贴标记点。然后使用三维光学扫描系统对蝙蝠样本进行表面扫描,通过计算机的自行处理得到原始表面结构的三维数字模型,利用图形处理软件处理原始三维数字模型,得到完整结构和无翼膜结构的模型,通过三维打印技术得到蝙蝠的实物模型。
  (2)蝙蝠模型的风洞实验
  对实物模型进行风洞实验,实验仰角范围为0°~20°,每次以1°的变化量增加,风洞的风速控制在0m/s~6/s的范围内,风速变化值为0.5m/s。记录风洞实验的数据,
  (3)数据的处理及分析
  根据空气动力学的相关理论,得到实验中蝙蝠翼膜受到升力,从而得到升力系数。由于实验测量的数据量较大,无法直接从数据中得出蝙蝠翼型的气动特性,因此需要整理数据并进行数据拟合,将升力与升力系数、风速之间以图表的形式表示出来。然后分别分析升力与风速、迎角的关系,升力系数与迎角的关系,分析得出数据中存在的一般规律,根据现有物理理探讨论蝙蝠具有的气动特性与进行。
  通过分析数据,得到的结论有:
  (1)在平稳非拍翼状态下,马铁菊头蝠翼膜所受升力随迎角和风速的变化而变化。在相同迎角情况下,升力随风速的增加而增加,变化趋势由缓慢逐渐增加变为线性增加。在相同风速条件下,实验中的飞行最佳迎角为12°,此时升力为最大,超过该迎角之后的升力缓慢下降。
  (2)升力系数随迎角的变化同样发生改变,升力系数在小角度时与迎角的关系近似线性关系,同样在迎角为12°时,升力系数值最大,之后随着迎角的增加,升力系数缓慢降低。在相同迎角的条件下,1m/s时的升力系数最大,而其它风速时的的升力系数主要集中在1~1.9之间。
  (3)马铁菊头蝠是一种主要以丛林中的昆虫为食的蝙蝠,在低速飞行时,他能够灵敏的躲避障碍物完成捕食过程,该特点说明在此条件下,其具有很强的机动性,该现象与其升力系数在低速时较高的情况相符合。
[硕士论文] 李运强
动物学 内蒙古大学 2017(学位年度)
摘要:达里诺尔湖是我国北方干旱区的重要湿地,也是我国中西部地区众多水鸟的繁殖地、迁徙途中停歇地。2016年4月至2016年10月,对保护区6种典型生境中不同季节鸟类的种类组成、种群数量及群落结构进行了系统调查,并根据历年调查数据分析其种类组成年际动态变化,研究结果如下:
  调查期间记录到120种鸟类,属于15目,35科,其中留鸟15种,候鸟105种。国家级重点保护鸟类20种,其中一级保护鸟类3种,二级保护鸟类17种。鸟类组成以非雀形目为主,有14目23科,88种。古北界鸟类最多,繁殖鸟类以北方型为主,同时反映出各成分相互渗透的过渡性特征。
  河口湿地生境食物丰富,是各种游禽、涉禽的优质觅食场所,春季、夏季和秋季鸟类数量都很多,尤其是秋季,大量南迁雁鸭类陆续抵达后,河口湿地鸟类数量明显多于其他生境。
  春季鸟类种类最多,密度最小;秋季鸟类密度最大,种类最少。鸻形目鸟类有33种,是种类最多的类群,其次为雁形目,有22种,鸻形目和雁形目候鸟的迁徙活动对保护区鸟类群落变化影响很大。
  1983年至1985年调查记录107种鸟类,隶属于15目,32科;1999年至2001年调查记录鸟类78种,隶属于12目,30科;2012年至2016年调查记录193种鸟类,隶属于17目,40科。2013年出版的《达里诺尔野鸟》收录鸟类296种,隶属于18目,48科。
  在过去的30多年,保护区繁殖鸟类区系成分出现明显变化,高地型、季风区型种类扩散至保护区,并出现了南中国型、喜马拉雅-横断山型成分;雁形目繁殖鸟种类稳定,鸻形目繁殖鸟种类增多。鸻鹬类的增多与达里诺尔湖湖面退缩,浅水沼泽面积增加相关,是鸟类对达里诺尔湖生境变化的响应。
[硕士论文] 张丽娟
细胞生物学 安徽师范大学 2017(学位年度)
摘要:蛙科动物(Ranidae)是两栖动物无尾目(Anura)下新蛙亚目(Neobatrachia)中一个物种数量繁多的大科。对于蛙科的系统关系存在争议,蛙科内属的关系也未得到很好的解决。这是因为大部分研究采取的分子遗传标记数据较少,所以系统发生关系差异明显。本研究测得了花臭蛙(Odorrana schmackeri)的线粒体基因组全序列后,联合NCBI网站发布的现有的蛙科动物的线粒体全序列构建系统发生树,以期为蛙科的系统发生关系提供更多证据。
  本研究根据Oligo7.0软件设计出能扩增出花臭蛙(Odorrana schmackeri)线粒体全序列的17对引物,然后采用PCR及LA-PCR方法扩增序列并进行测序。得出花臭蛙线粒体基因组全序列长为18610bp,包含36个基因,分别为2个rRNAs基因、13个蛋白编码基因、21个tRNAs(缺少tRNA-His),还有一个控制区外加几个非编码空隙。通过跟石川臭蛙控制区对比,花臭蛙控制区终止相关序列区(TAS)的序列为:TATACTATGTATAATCATCATTAATCTATATAGTT;保守区(CSB):三个短的序列框CSB-1 (TAAATGAATGCTCGAATGACATA),CSB-2 (TACCCCCCCCCTTTACCCCC),CSB-3 (CCTTAAAACCCCCCCCGA);没有识别到中央保守区(CD)。在花臭蛙控制区5'和3'两端分别找出长为468 bp、195 bp的两个串联重复序列VNTRs1和VNTRs2,5'端的VNTRs1为62 bp,重复6次:5'-ATATAGATATAGGTACTATATCATACTATGTATAATCACCATTAATCTATATGGTTACATTC-3',而在3'端发现了15 bp长的重复13次的VNTRs2:5'-TAGATATACCTATAA-3'。花臭蛙线粒体基因排列方式跟新蛙亚目的基本一致,除了花臭蛙的线粒体基因组中缺失tRNA His,推测tRNA His在线粒体中的消失是直接丢失或是转移到了细胞核中。
  本文选择了15个属共70种蛙科动物,外加蟾蜍科的两种蟾蜍隐耳蟾蜍(Bufo cryptotympanicus)和史氏蟾蜍(Bufo stejnegeri)作外群,构建了基于线粒体全序列的系统发生树。结果显示:系统发生树高度支持将文中选取的70种蛙类动物分为两个进化枝:分支A和分支B。分支A包括倭蛙属、棘蛙属、大头蛙属、虎纹蛙属(Hoplobatrachus)、陆蛙属(Fejervarya)和水栖蛙属(Euphlyctis)6个属。分支B由湍蛙属(Amolops)、侧褶蛙属(Pelophylax)、拇棘蛙属(Babina)、臭蛙属(Odorrana)、蛙属(Rana)、腺蛙属(Glandirana)、水蛙属(Hylarana)七个属组成。所以分支A和分支B分别代表叉舌蛙亚科和蛙亚科。另外,跟大部分研究结果不同的是,圆舌浮蛙(Occidozyga martensii)聚到了叉舌蛙亚科和蛙亚科之外。从系统发生关系看,支持将叉舌蛙亚科和蛙亚科两个亚科升级为两个科:叉舌蛙科和蛙科。
  新蛙亚目有区别于典型脊椎动物的特定线粒体基因排列方式,但新蛙亚目中常常发生线粒体基因重排现象。在选取的物种中,重排的方式主要有:控制区下游的LTPF基因簇、NDII和COI之间的WANCY基因簇、tRNA His和ND5的易位及tRNA Met和控制区CR的复制等。线粒体基因重排跟系统发生树分类基本一致。进化枝B中虎纹蛙属和六趾蛙都复制了另一个CR,并且ND5基因位移到了复制的CR区下游,从而拥有两个控制区;而在系统发生树中,虎纹蛙属和六趾蛙聚合在一起,说明基因重排能反映出系统关系。所以在系统发生关系研究中,可以将线粒体基因的重排作为探究系统发生的一个有力的分子标记。
[博士论文] 吕伟华
生物学;发育生物学 东北农业大学 2017(学位年度)
摘要:鲤鱼(Cyprinus carpio)作为世界性的经济鱼类,其年产量超过445万吨,约占全球淡水养殖年产量的10%,在全球水产养殖业中占据重要地位。我国是最大的鲤鱼生产和消费国,产量约占全球的75.3%。同时,我国也是培育出鲤鱼优良品种最多的国家,在过去的几十年里大大促进了我国水产养殖业的发展,满足了市场“量”的需求,为人们提供了优质的动物蛋白。随着消费者生活水平的不断提高,水产品品质越来越受到人们重视。鲤鱼肉质、口感、营养价值等已远不能满足市场日益增长的“质”的需求。利用与肌肉品质性状紧密连锁的基因,培育肉质优良、营养价值高的品种是解决此问题的有效技术途径之一。
  肉质性状为复杂的经济性状,受诸多因素影响。鱼类中,肌肉脂肪酸组成及含量、脂肪含量等是影响肌肉品质的重要因素。本研究以镜鲤全同胞F2家系为材料,利用鲤鱼250 K高密度SNP芯片对肌肉脂肪酸、脂肪含量等肌肉脂肪性状进行全基因组关联分析(GWAS),获得肌肉脂肪性状显著相关的SNP位点;利用鲤鱼全基因组注释信息,获得肌肉脂肪性状候选基因。采用克隆、mRNA表达、基因多态性与性状关联分析等手段对部分候选基因进行了验证,确定基因与性状的关系。利用基因敲除手段,构建了鲤鱼和斑马鱼LPL基因突变体,探讨了LPL基因敲除对脂肪沉积的影响及其作用机制。本研究结果将为鲤鱼肌肉脂肪性状的遗传机制解析和品质提升的分子选育奠定基础。主要结果如下:
  1)采用全同胞家系设计,应用混合线性模型,开展了肌肉脂肪酸、脂肪含量等性状全基因组关联研究。获得了C22∶0、C24∶ln9、C18∶3n6、C20∶3n3、C22∶2n6、EPA、DHA、EPADHA、HUFA和n-3PUFA等10个脂肪酸性状,5%基因组水平显著性SNP位点54个,注释基因34个。获得背部肌肉脂肪含量(MFdo)、腹部肌肉脂肪含量(MFab)、腹部脂肪重(AbFW)和腹部脂肪占净重比例(AbFP)等4个脂肪含量相关性状,基因组潜在关联显著性水平SNP位点18个,注释基因10个,其中,carp089419达到5%基因组水平显著性,且与AbFW和AbFP均显著相关。利用荧光定量PCR(RT-qPCR)对8个已注释基因(ANKRD10A、TANC2、FJX1、CHKA、ADAM8A、FASN、LPL-a和LPL-b)在脂肪含量极高、极低样本中进行了初步验证,结果表明:ANKRD10A和TANC2在脂肪含量高的肌肉样本中表达量低于脂肪含量低的样本,且差异极显著;而FJX1、CHKA、FASN、LPL-a和LPL-b在脂肪含量高的样本中表达量显著高于低脂肪含量样本,其中CHKA、FASN、LPL-a和LPL-b在两组样本间表现出极显著差异。因此,可将ANKRD10A、TANC、FJX1、CHKA、FASN、LPL-a和LPL-b作为候选基因进一步研究。
  2)克隆了FASN、 LPL-a和LPL-b3个候选基因cDNA全长,并对基因序列、生物学信息及基因表达规律进行分析。FASN基因(KY378913) cDNA全长为8927 bp,编码2511个氨基酸,5'非编码区(5'-UTR)为202 bp,3'非编码区(3'-UTR)为1192 bp; LPL-a基因(KM213240.1)cDNA全长2631 bp,编码507个氨基酸,5'-UTR为162 bp,3'-UTR为945 bp; LPL-b基因(KM213241.1)cDNA序列全长2413bp,编码507个氨基酸,5'-UTR为158bp,3'-UTR为732 bp。同源性及系统进化分析发现,FASN与其它鱼类氨基酸同源性为68%-96%; LPL-a和LPL-b氨基酸同源性为95%,两者与其它鱼类氨基酸同源性为61%-93%;进化树显示,鲤鱼与金线鲃FASN基因的进化关系最近,鲤鱼与鲫鱼LPL基因的进化关系最近。蛋白生物信息学分析显示,FASN蛋白质相对分子量274.1456 kD,理论PI值为6.10,其不稳定系数为41.14,说明该蛋白不稳定。FASN蛋白以无规则卷曲结构为主,占44.66%。LPL-a和LPL-b蛋白质的相对分子量分别为57.6688kD和57.5877kD。蛋白均以无规则卷曲为主,分别占50.10%和51.87%。两者均含有脂肪酶和PLAT/LH2两个结构域。不同组织中RT-qPCR结果显示,3个基因在多个组织中均广泛表达,FASN在脑组织中表达量最高,在背部肌肉与腹部肌肉中表达差异不显著;LPL-a在腹部肌肉中表达量最高,LPL-b在脂肪组织中表达量最高,LPL-a和LPL-b在腹部肌肉和背部肌肉组织中表达量均具有极显著性差异。不同发育时期RT-qPCR结果显示,FASN在囊胚晚期表达量最高,囊胚时期相对受精卵期表达量显著增加; LPL-a和LPL-b均在在开口期的表达量达到最高,在7体节时期的表达量最低。
  3)开展了FASN、 LPL-a和LPL-b基因多态性与肌肉脂肪性状相关性研究。根据FASN、 LPL-a和LPL-b基因在鲤鱼基因组中的位置和鲤鱼SNP数据库,寻找到基因所含的SNP位点22个;采用测序法获得22个SNP位点在鲤鱼群体中基因型数据,其中5个SNP位点(carp165086、carp165090、carp165099、carp076700和carp076701)为单态,17个多态性SNP位点有效等位基因为1.0195-1.9998,平均值为1.8094;观测杂合度为0.0145-0.7374,平均值为0.5070;期望杂合度为0.0192-0.5012,平均值为0.4216。基因型与性状相关性分析显示:8个SNP位点与脂肪性状显著相关。FASN基因上,carp165088(A>T)与AbFW和SFA显著相关;carp165093(G>A)与MFdo和n-3PUFA显著相关;carp165096(A>T)和carp005641(G>A)与EPA显著相关;carp005638(C>T)与MFdo和n-6PUFA显著相关。LPL-a基因上的carp076703(T>C)与MFab显著相关;LPL-b基因上carp076738(T>G)和carp076740(T>C)与MFab显著相关;且carp076740也与SFA显著相关。综上,FASN、 LPL-a和LPL-b基因可作为鲤鱼脂肪性状的候选主效基因。
  4)利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,制备了鲤鱼LPL基因突变F0代,获得鲤鱼LPL-a和LPL-b基因突变F0个体分别为203尾和197尾。并以斑马鱼为模型,探索了LPL基因敲除对斑马鱼肌肉脂肪沉积的影响。构建了斑马鱼LPL基因突变纯系2个,即1号突变系(-13 bp)和2号突变系(+11/-7 bp),形态结果显示:LPL-/-斑马鱼在胚胎和出苗20天没有明显异常,2月龄检测发现2个突变系LPL-/-斑马鱼生长速度显著慢于野生型;解剖发现LPL-/-斑马鱼腹腔肠系膜脂肪沉积减少,甚至无脂肪沉积;肌肉脂肪酸测定结果显示:对照野生型,LPL-/-斑马鱼SFA、MUFA和PUFA含量降低,且SFA和PUFA差异显著;而三酰甘油(TG)含量增加,且差异极显著。荧光定量PCR检测显示:LPL基因mRNA表达量在LPL-/-斑马鱼中显著降低。同时,LPL基因突变导致其所在的糖代谢通路和PPAR通路中,其上下游基因mRNA表达量呈现不同程度下调。本结果将为LPL基因在鲤鱼脂肪沉积中的作用机制研究提供参考。
[博士论文] 易少奎
水产养殖 华中农业大学 2017(学位年度)
摘要:泥鳅属(Misgurnus)隶属于鲤形目(Cypriniformes),鳅科(Cobitidae),花鳅亚科(Cobitinae)。泥鳅属鱼类作为一类营底层生活鱼类,广泛分布于河流、湖泊以及稻田等水体中,具有较强的适应性。近年来,由于环境污染,不合理捕捞等因素,泥鳅属鱼类的自然群体显现出种群减少、体型小型化等趋势。本研究通过对我国泥鳅属鱼类物种资源开展调查与样本采集,系统地揭示了我国泥鳅属鱼类的自然分布格局,并结合形态学与DNA条形码方法对泥鳅属鱼类及其邻近种开展物种鉴定研究;基于已有鳅超科鱼类线粒体基因组,深入探讨了泥鳅属的进化地位以及属内物种系统进化关系;同时,基于分子标记探讨了我国泥鳅属物种主要分布区域的群体遗传结构;通过转录组数据,从基因水平阐明了我国3种泥鳅属鱼类的环境适应性与其特异的地理分布格局的关系;并从基因组层面探讨了泥鳅属物种的密码子偏好性,进一步揭示了物种进化关系以及密码子偏好性与基因表达量的相关性。本研究主要结果如下:
  1.我国泥鳅属鱼类分布、种间形态差异以及DNA条形码研究
  在我国各个水系中分布的泥鳅属鱼类包括以下3种:泥鳅(M.anguillicaudatus)广泛分布于我国除青藏高原外的大部分地区,以长江流域物种资源最为丰富,在松辽流域少量分布;北方泥鳅(M.bipartitus)分布于我国黄河以北地区各个水系,主要分布于松辽流域,海河流域部分水体中也有少量分布;黑龙江泥鳅(M.mohoity)的分布范围较为局限,仅分布在东北地区松花江部分水系。本研究基于资源调查结果,选取我国北方地区15个自然群体开展了4个物种(包括大鳞副泥鳅Paramisgurnus dabryanus)的12个形态学参数测量与比较分析。结果显示,4个物种的形态学参数十分接近,仅尾柄长存在显著性差异(P<0.05),相较而言,北方泥鳅的尾柄最长,黑龙江泥鳅与大鳞副泥鳅次之,泥鳅尾柄最短;相比其余3个物种,黑龙江泥鳅则表现出更长的前躯长(DPR);此外,3个泥鳅属物种的尾柄高与体宽存在显著差异(P<0.05);聚类结果表明泥鳅与大鳞副泥鳅的外部可量性状更为接近,而北方泥鳅与黑龙江泥鳅形态学更为相近。形态学性状的相似性使得泥鳅属物种以及邻近种的鉴定存在难度,因此本研究基于cox1基因开展了泥鳅属物种与邻近种共计186尾样本的DNA条形码研究。结果表明,基于遗传距离方法、贝叶斯法以及特征值法均能有效进行泥鳅属物种及其邻近种的物种鉴定。
  2.基于线粒体基因组研究泥鳅属鱼类的进化关系及适应性进化
  本研究基于59种鳅超科鱼类线粒体基因组构建鳅超科系统发育树,探讨泥鳅属及其邻近物种的物种进化关系;同时,从基因与密码子层面揭示泥鳅属物种的环境适应性进化。结果如下:基于最大似然法与贝叶斯法构建鳅超科系统发育树的拓扑结构一致,鳅超科鱼类明显分为四大类群,其分类关系为(沙鳅亚科+(平鳍鳅科+(花鳅亚科+条鳅亚科))),花鳅亚科中的泥鳅属鱼类没有形成一个单系类群,其中泥鳅属的黑龙江泥鳅,俄罗斯泥鳅(M.nikolskyi)与副泥鳅属(Paramisgurnus)以及高丽鳅属(Koreocobitis)鱼类聚为一支,泥鳅与北方泥鳅则跟花鳅属(Cobitis)鱼类聚为一支;PAML的自由比模型分别计算各个基因的替代速率显示,泥鳅属鱼类PCGs的Ka/Ks显著低于花鳅属与副泥鳅属的鱼类,基于分支位点模型分析结果显示cox2在泥鳅与北方泥鳅这一分支受到强烈的正向选择(ω=10.92,P<0.01),其中BEB分析结果显示在其起始密码子ATG后的137 bp与217 bp位点为正向选择位点;基于21种花鳅亚科鱼类线粒体PCGs的RSCU值进行聚类分析结果显示,泥鳅属的黑龙江泥鳅,俄罗斯泥鳅以及副泥鳅属的大鳞副泥鳅聚为一支,且与高丽鳅属鱼类关系更近;泥鳅与北方泥鳅聚为一支,与花鳅属鱼类关系更近。
  3.泥鳅、北方泥鳅与黑龙江泥鳅群体结构
  本研究基于简化基因组测序技术对长江流域15个泥鳅群体开展群体遗传结构分析,结果表明在大部分群体中SNP标记的主要基因型占主导(>90%),杂合度分布范围在0.031到0.097;长江流域泥鳅群体可分为两个亚群,长江上游群体与中下游的群体差异明显;FST计算结果显示,长江流域群体间遗传关系较远,存在一定程度的遗传分化,尤其是在上游群体与下游群体间存在遗传分化;基于遗传距离矩阵构建NJ树的结果显示,长江流域泥鳅分为了两大支系,其中上游群体构成了一大分支,中下游群体汇为了一支,与群体结构分群结果相吻合;主成分分析结果表明,除ZY群体外长江上游与中下游群体有着较为明显地区分,ZY群体与中下游的群体存在一些重叠交叉。同时,基于线粒体标记探讨了松辽流域北方泥鳅与黑龙江群体的遗传结构,在北方泥鳅与黑龙江泥鳅个体中分别鉴定出19与21个单倍型,北方泥鳅群体中除FUJ群体外,其余群体均表现出低核苷酸多样性与高单倍型多样性;黑龙江泥鳅则表现出高核苷酸多样性与单倍型多样性;AMOVA分析显示北方泥鳅与黑龙江泥鳅群体间均存在着显著的群体分化,错配分布与中性检验结果表明二者均未发生群体迅速扩张事件。
  4.泥鳅、北方泥鳅与黑龙江泥鳅适应性进化
  我国泥鳅属物种分布具有物种特异性,为探究泥鳅属物种的环境适应性,本研究基于转录组序列,通过与蛋白数据库比对,RPKM值过滤以及编码潜力计算,共鉴定出51个物种孤儿基因;同时筛选到1392个单拷贝直系同源基因,基于自由比模型计算Ka/Ks值,结果显示黑龙江泥鳅Ka/Ks值要显著高于北方泥鳅(P<3.39×10-7)与泥鳅(P<9.28×10-8);其中,289个基因在黑龙江泥鳅中Ka/Ks值显著高于泥鳅与北方泥鳅(P<0.05)。为阐明3个特定谱系分支的特异性进化,通过分支位点模型鉴定出各个分支快速进化基因与正向选择基因。在3个泥鳅属物种中筛选到191~205个快速进化基因与50~63个正向选择基因;选取快速进化基因与正向选择基因二者交集后,共筛选到61个共有基因,GO富集分析显示这些基因在膜与膜组分两个条目中(P=0.033)显著富集。这些基因功能可以归纳为四类:(1)能量代谢;(2)膜;(3)信号转导;(4)细胞凋亡与增殖。在泥鳅分支中,cldn15lb与iscal基因分别鉴定出10个与6个正向选择位点,二者分别与细胞间钠离子转运以及铁硫簇组装功能相关。
  5.泥鳅、北方泥鳅与黑龙江泥鳅密码子偏好性
  基于3种泥鳅属鱼类CDS序列对物种密码子与密码子对使用偏好性进行了分析。结果表明,这3种泥鳅属鱼类的密码子使用偏好性十分相似;中性作图显示在3个泥鳅属物种中,自然选择对密码子偏好性占主导作用。在3个物种中均识别出了4个高频密码子,以及9~19个偏好密码子对;在泥鳅属鱼类中NUA和NCG密码子使用频率较低,nnUAnn为避免使用的cP3-cA1二碱基。同时,高表达基因中密码子GC3要显著高于低表达基因GC3;与之相反,ENC在高表达基因中显著低于低表达基因;基于每个氨基酸S/C值,统计高表达与低表达基因组中高S/C值氨基酸频率,结果显示在泥鳅属物种中高表达的基因显著偏向使用低S/C值的氨基酸。选取已有的24个脊椎动物基因组,分别提取CDS序列并计算RSCU后,聚类与主成分分析结果表明,相比哺乳类与鸟类,鱼类明显分为了两个分支,推测其原因为鱼类物种间存在较大的遗传变异。
[硕士论文] 蒋连玉
神经生物学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:单宁酸作为一种重要的多酚类植物次生代谢物,通过影响动物的摄食中枢和奖赏中枢从而改变动物的摄食行为。但单宁酸味觉信息是否通过传统味觉通路到达摄食和奖赏中枢以及单宁酸是否影响味觉传导通路相关基因的表达,至今鲜有研究。谷氨酸(glutamate,Glu)和γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)分别是中枢系统重要的兴奋性和抑制性神经递质,在味觉信息传递中起着重要作用;即刻表达基因fos家族的表达是神经元被激活标志。本实验以捕捉自内蒙古草原并室内配对繁殖的布氏田鼠为研究对象,以不同浓度的单宁酸溶液(0 mg·mL-1、30 mg·mL-1和60 mg·mL-1,分别为对照组、低剂量组和高剂量组)连续不同时间(1d、5d、10d和20 d)滴灌500μL到布氏田鼠的口腔中,用实时荧光定量PCR法(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测布氏田鼠孤束核(nucleus of the solitary tract,NTS)、臂旁核(parabrachial nucleus,PBN)和中央杏仁核(central amygdala,CeA)三个脑区的fosB/△fosB、谷氨酸囊泡型转运体3(vesicular glutamate transporter3,Vglut3)和GABA囊泡型转运体(vesicularGABA transporter,Vgat) mRNA的表达量,用免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)检测三个脑区FosB/△FosB、VGLUT3和VGAT蛋白的表达量,并隔天测定布氏田鼠20 d内的体重变化,以分析单宁酸对布氏田鼠味觉传导腹侧通路相关基因表达的影响,探讨单宁酸影响植食性动物摄食行为的神经机制,为单宁酸味觉信息的传导通路研究提供依据。研究结果如下:
  1、RT-qPCR检测fosB/△fosB mRNA表达量的结果显示,在NTS、PBN和CeA中,TA处理1d、5d和10d后,低剂量组和高剂量组的表达量均显著高于对照组;但处理20 d后,各剂量组之间无显著性差异。IHC检测FosB/△FosB表达量的结果发现,在三个脑区,TA处理5d和10d后,高剂量组均显著高于对照组;而处理1d和20 d后,各剂量组之间无显著性差异。表明TA能够激活布氏田鼠味觉传导腹侧通路相关脑区神经元,但长期处理后,动物会产生一定的适应。
  2、RT-qPCR检测Vglut3 mRNA表达量的结果显示,TA处理1d、5d和10d后,高剂量组三个味觉相关脑区的表达量均显著高于对照组;而处理20 d后,各剂量组之间无显著性差异。IHC检测VGLUT3表达量的结果发现,在三个脑区,TA处理5d和10d后,低剂量组和高剂量组的表达量均显著高于对照组;而处理1d和20 d后,各剂量组之间均无显著性差异。说明一定时间内一定剂量的TA溶液促进布氏田鼠味觉相关脑区Vglut3基因和蛋白水平的表达。
  3、与Vglut3转录和翻译水平相反,RT-qPCR检测Vgat mRNA表达量的结果显示,在三个味觉相关脑区,TA处理1d、5d和10d后,高剂量组的表达量均显著低于对照组;而处理20 d后,各剂量组之间无显著性差异。IHC检测结果表明,TA处理5d和10d后,高剂量组三个脑区的VGAT表达量均显著高于对照组;而处理1d和20 d后,各剂量组之间无显著性差异。说明一定时间内一定剂量的TA溶液抑制布氏田鼠味觉相关脑区Vgat基因和蛋白水平的表达。
  4、雌雄布氏田鼠口腔滴灌不同剂量TA溶液连续20 d,每隔一天称量布氏田鼠的体重共11次,结果发现在每个时间点各剂量组之间布氏田鼠的体重没有显著性差异,说明口腔滴灌一定剂量TA溶液没有影响布氏田鼠的体重。
  结果表明,一定剂量的TA溶液能够激活布氏田鼠味觉传导腹侧通路相关脑区神经元,并通过促进相关脑区Vglut3 mRNA和蛋白水平以及抑制Vgat mRNA和蛋白水平来传递单宁酸的味觉信息并影响动物的摄食行为。
[硕士论文] 张淑熠
生物学 河南师范大学 2017(学位年度)
摘要:圆线虫是马属动物体内最重要的寄生虫,严重危害宿主的健康,使其患病乃至死亡,对畜牧养殖业造成较大损失。大量使用驱虫药使盅口线虫出现抗药性,增加了患病率。马属动物寄生圆线虫的分类鉴定和系统发育学研究,对于有针对性地控制圆线虫病具有重大意义。目前,国外学者为圆线虫的研究提供了丰富的数据资料,国内对于圆线虫的研究较少,且主要是形态学方面的研究,缺乏相关分子资料。本研究以采自河南新乡地区的35种圆线虫为研究对象,经光学显微镜初步鉴定后,通过PCR技术扩增其线粒体COⅠ和nad1基因,探究马圆线虫的系统发育关系。35种圆线虫的扩增产物经测序共获得39条COⅠ序列和32条nad1序列。通过使用多种生物学软件,对所得目的片段进行了碱基组成、遗传距离等分析。采用最大似然法(ML)和贝叶斯法(BI)分别基于COⅠ和nad1序列构建系统发育树,并且构建基于COⅠ和nad1联合数据集的系统树。发现BI法更适合马圆线虫的系统发育学研究。
  本研究主要内容包括:⑴所测样品的COⅠ序列长度均为393 bp,通过多序列比对显示,其中保守位点、变异位点、简约信息位点、单核苷酸位点分别占总位点的64.63%、35.37%、29.52%、5.85%。A+T平均含量(67.3%)明显高于G+C(32.7%),表现出明显的AT碱基偏好性。从氨基酸密码子来看,第三位点的A+T平均含量最高(78.6%),第二位点(63.1%)稍高于第一位点(61.2%)。转换和颠换比值R最大的是第1密码子位点,其次是第3密码子位点,进化最快,第2密码子位点没有发生碱基替换,进化最慢。基于COⅠ序列构建的系统树显示,种内个体均聚为独立分支,对于属以上分类阶元的区分结果不够理想,但仍有一定的参考价值。⑵测序所得32条nad1序列的总长度均为354 bp,对序列进行多序列比对分析,其中保守位点218个,变异位点136个,简约信息位点115个,单核苷酸位点21个。A、C、G、T四种碱基的平均含量为25.4%、9.8%、21.7%、43.1%,A+T平均含量(68.5%)明显高于G+C(31.4%),表现出AT碱基偏倚性。就氨基酸密码子来看,A+T平均含量最高(74.2%)的是第3位点,第1位点(66.1%)和第2位点(65.1%)相差不大。三个密码子位点的转换和颠换比值R最小的为第3密码子位点,进化最快,其次是第1密码子位点,第2密码子位点的R值最大,进化速率最慢。在构建的系统树中,31种圆线虫形成两大类群:一个大类群包括圆形属、三齿属和卡拉干斯齿线虫、不等齿杯口线虫以及伊氏双齿口线虫;另一大类群包括杯冠属、杯环属、冠环属、盅口属和杯状彼得洛夫线虫、拉氏杯口线虫、双冠双冠线虫、头似辅首线虫。其中冠环属、盅口属和杯冠属的亲缘关系较近;长形杯环线虫和外射杯环线虫与杯环属的亲缘关系较远。基于COⅠ+nad1序列构建的系统发育树拓扑结构与之类似,仅支持率存在差异。采用ML法重建圆线虫的系统进化关系自展支持率较低,BI法构建的系统树支持率高,说明依据COⅠ和nad1序列进行圆线虫的系统发育分析时,BI法更加适合。⑶在河南省发现卡拉干斯齿线虫(Skrjabinodentus caragandicus),对其进行了形态学观察和分子序列测定与分析。结果表明:卡拉干斯齿线虫中等大小,口囊壁呈“S”状,前端极度膨大,厚10~12μm,后端稍薄,约4~6μm,外叶冠由8个长而宽的小叶组成,内叶冠由16~18个短而宽的小叶组成,食道漏斗发达,雄虫生殖锥长337μm,引器长245μm;所测核糖体DNA(rDNA)内转录间隔区(ITS)及5.8S片段长度为853 bp,其中ITS1长369 bp,ITS2长331 bp,从GC含量上看,ITS1区(47.2%)明显高于ITS2区(40.7%);线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因长度为393 bp,A、T、G、C碱基含量分别为25.2%、42.7%、21.4%、10.7%; nad1序列长354 bp,其中A、T、G、C碱基的含量分别为24.9%、43.5%、21.5%、10.2%。卡拉干斯齿线虫在河南省属首次报道,为河南省新记录种。
[硕士论文] 崔荣
动物学 内蒙古大学 2017(学位年度)
摘要:本研究在前期实验研究中获得一种由四因子c-Myc,Klf4,E-cadherin,Glis1诱导的,形态、体外增殖和体内外分化能力类似于胚胎干细胞,但不具有嵌合能力的部分重编程细胞,KMEG-prCs。该细胞虽具有一定多能性,但oct4,sox2,nanog,AKP并不表达,且SSEA1只在部分细胞中被激活。经转录物组分析显示,KMEG-prCs处于重编程的中间状态。该细胞可以作为一个新的细胞模型来研究重编程过程中内源多能性信号网络激活的分子机制。本研究旨在利用KMEG-prCs细胞,筛选可激活该细胞中内源多能性基因表达的小分子化合物或组合,为进一步探讨内源多能性调控网络的激活和发现新的小分子化合物组合建立新的小分子诱导体系奠定理论和技术基础。通过流式细胞分析显示,重编程不同阶段的表面标记蛋白Thy1(CD90)完全下调,CD54(ICAM-1)完全上调,CD44和SSEA1分别部分上调,CD31仅少数上调。结合转录物组的分析,进一步确定KMEG-prCs是一个处于重编程中段的中间态细胞。分选获得SSEA1+KMEG-prCs和SSEA1-KMEG-prCs,并用含有不同小分子化合物的培养液进行培养,内源多能性基因激活显示,加入HDAC抑制剂TSA、VPA、Oct4激活剂(OAC1)与腺苷酸环化酶活化剂(Forskolin)后激活了多能性基因AKP的表达,并且使一部分SSEA1阴性细胞转变为SSEA1阳性细胞。随后加入EZH2蛋白胞内增强子抑制剂(DZNeP)进一步诱导后,在小分子组合PCA+FD处理下, SSEA1+KMEG-prCs和SSEA1-KMEG-prCs内源oct4均被激活,SSEA1+KMEG-prCs中oct4高水平表达。获得了一个新的细胞状态,KMEG-prCs-O+,该细胞仍然保持体内外分化能力。随后,虽然将PCA+FD中的A-83-01替换为E-616452,并联合LiCl,构成PCE+FD+Li小分子化合物组合可有效激活nanog的表达,但oct4的表达被下调。综上所述,KMEG-prCs是一个处于重编程中段的中间态细胞,通过小分子化合物的处理其内源多能性调控网络可以被激活。该研究为探讨小分子化合物对重编程的作用机理以及进一步获得完全重编程的iPSCs奠定了基础,同样对于细胞在重编程过程中信号通路,代谢途径,表观遗传修饰等的研究提供依据。
[硕士论文] 高群
动物学 聊城大学 2017(学位年度)
摘要:本研究通过对2015.2016年夏季多个站位沉积物的分析,对胶州湾小型底栖动物生态学和自由生活线虫的群落结构、多样性和分类进行研究。结果表明,胶州湾小型底栖动物的平均丰度为2651±707(ind/10cm2),生物量为1284.8±423.5(μgdwt/10cm2),该区域共有11个小型底栖动物类群被分选出来,自由生活线虫的丰度最占优势,可达95.7%。各站位自由生活海洋线虫的平均丰度和生物量分别为2538±6768(ind/10cm2)和1015.1±270.6(μgdwt/10cm2)。自由生活线虫的生物量同样最占优势(79.2%),其次为底栖桡足类(10.8%)、多毛类(5.9%)和双壳类(2.0%)等。垂直分布上,小型底栖动物和自由生活线虫的丰度在沉积物表层(0-2cm)分别占总量的56.5%、53.1%。本研究海区,包含4个潮间带站位,16个浅水站位(5.5-22.5米),多数站位位于人种养殖点附近,底栖环境相对不稳定,线虫在0-2cm表层和2-8cm底层的分布相差不大。从2015、2016年夏季胶州湾采集的多个站位样品中,共鉴定出198种自由生活海洋线虫,隶属于87个属,27科,4目。不同站位种类数差别较大:站位JZW-8最多(85种),站位JZW-10最少(26种)。整个研究海域主要的优势种有Parodontophora marina Zhang,1991,Terschellingia longicaudata De Man,1907,Dorylaimopsis turneri Zhang,1992, Setosabatieria coomansi Huang et Zhang,2006, Leptolaimus sp1, Sphaerolaimus gracilis De Man,1884。建立了1个新属(Ptycholaimelloides gen. nov.),描述了5个新种(青岛拟折咽线虫 Ptycholaimelloides qingdaoensis sp. nov.,异带矛咽线虫 Dorylaimopsis hetoroapophysis sp. nov,关节萨巴线虫Sabatieria articulata sp.nov.,大交接刺萨巴线虫Sabatieria macrospicula sp.nov.,周氏韦氏线虫Wieseriazhoui sp.nov.),20个新记录,列出了胶州湾自由生活线虫的种名录。
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