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[硕士论文] 吴震中
影像医学与核医学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:本文主要从以下几个部分展开论述:
  第一部分 超声引导下微波热消融治疗cN0期甲状腺乳头状癌的临床随访评估
  目的:探讨超声引导下cN0期甲状腺乳头状癌微波热消融治疗的临床疗效。
  方法:收集2011年10月至2017年5月于上海长征医院超声科和上海国际医学中心接受微波消融治疗的cN0期甲状腺乳头状癌患者222例并对其随访,统计分析其结节吸收情况、并发症发生率以及复发率。
  结果:原消融灶均呈不同程度缩小,平均缩小率约87.34%,共56例消融灶完全吸收。除2例单侧腺体消融损毁后出现亚临床甲减,其余患者消融术后甲状腺功能指标正常。术后无严重并发症出现,随访共发现1例出现淋巴结转移灶,1例出现腺体内其他部位新生癌灶,予以了二次消融,后续随访未再出现复发。
  结论:微波热消融治疗cN0期甲状腺乳头状癌临床效果较好,可能是未来治疗甲状腺乳头状癌的重要手段。
  第二部分 cN1期甲状腺乳头状癌微波热消融治疗的临床疗效及其复发危险因素的研究
  目的:探讨cN1期甲状腺乳头状癌微波热消融治疗的临床疗效及其复发危险因素。
  方法:回顾性分析2013年7月至2017年4月于上海长征医院超声科和上海国际医学中心接受微波消融治疗的cN1期甲状腺乳头状癌患者共50例,其中临床淋巴结转移cN1a期32例、cN1b期18例。探讨cN1期甲状腺乳头状癌微波消融术后的临床疗效以及性别、年龄、原发肿瘤大小、肿瘤病灶数等与复发的关系。影响复发的单因素差异性比较采用log rank检验,并运用COX回归模型进行多因素分析。
  结果:随访过程中共发现9例出现淋巴结转移灶,3例出现腺体内其他部位新生癌灶,未见有远处转移的病例,总体复发率为24%。单因素分析显示了性别、肿瘤病灶数、淋巴结转移分期是甲状腺乳头状癌微波消融术后复发的危险因素。多因素分析显示肿瘤病灶数和淋巴结分期是甲状腺乳头状癌消融术后复发的危险因素。
  结论:微波热消融治疗cN1期甲状腺乳头状癌具有一定的临床效果,具有可重复性好的优点,但仅行一次消融复发率较高,重复消融并不增加并发症的发生率。
[博士论文] 卢兆莲
临床检验诊断学 中国人民解放军海军军医大学;海军军医大学 2018(学位年度)
摘要:甲状腺癌是常见的内分泌恶性肿瘤,其患病率逐年增加,其中乳头状癌占80%以上,已危害身体健康,增加了经济负担,是当今关注的热点问题。目前临床常用的诊断及辅助检查的方法有超声诊断检查、细针穿刺(FNA)细胞学检查、血清甲状腺素等。FNA细胞学检查是目前临床上区分甲状腺结节良恶性的最有效手段,但在临床中,约10%~20%的FNA细胞学难以做出准确诊断。鉴别诊断和监测手段的常规化一直是临床上的一大难题。近年来,利用蛋白质组学技术,多种肿瘤早期诊断的研究取得了可喜的进展,发现了一系列肿瘤相关蛋白和潜在的肿瘤标记物并初步应用于临床。国内外已有甲状腺癌的蛋白质组学研究,发现了一些与甲状腺癌相关的蛋白,然而这些成果尚处于初级阶段,尚没有可以应用于临床诊断的理想的肿瘤标记物。大部分研究也未进行良恶性肿瘤的鉴别分析,而且国内外对甲状腺癌的蛋白质组学研究报道较少。
  基于甲状腺癌的现状,首先对我院近几年来甲状腺癌发病情况作以回顾性分析。从性别、年龄、淋巴结情况及病理类型构成比等方面进行比较分析。其次利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)技术检测甲状腺乳头状癌患者、良性肿瘤和正常健康人血清中多肽,建立甲状腺乳头状癌的诊断预测模型,随后对差异血清多肽进行分离、鉴定及功能预测分析。最后,采用蛋白质谱成像原位分析甲状腺乳头癌蛋白质的表达,创建甲状腺乳头状癌的蛋白离子成像图。
  第一部分:甲状腺癌临床和病理学特点的回顾性分析
  回顾性分析2011年1月至2017年12月在济南军区总医院进行手术治疗的3567例甲状腺结节病患者临床病理资料。术后石蜡组织病理学显示:1392例患者为良性甲状腺肿瘤,2175例为甲状腺癌患者,其中2135例为甲状腺乳头状癌患者。应用SPSS19.0统计软件进行分析,统计结果以P<0.05作为差异具有显著性统计学意义为标准。结果发现:1、甲状腺良性肿瘤患者占所有甲状腺结节病患者的39.02%,结节性甲状腺肿和甲状腺腺瘤是甲状腺良性肿瘤的主要组成部分。2、甲状腺癌病例数逐年增加,其中以乳头状癌的增加为主。3、男女患者性别比为1∶3.22;2011年至2017年,甲状腺癌患者性别比年间变化不大,年间比较无显著性差异(P>0.05)。男女高发年龄段均为30~59岁,男性平均年龄为44.83±11.91岁,女性平均年龄为45.69±10.98岁,男女发病的平均年龄相近(P>0.05)。4、微小乳头状癌占乳头状癌的比例逐年上升(P<0.05)。甲状腺癌总的淋巴结转移率为54.39%,年间变化无明显差异(P>0.05)。由此可以看出,甲状腺良性肿瘤占甲状腺疾病较大的比重,而结节性甲状腺肿和甲状腺腺瘤是甲状腺良性肿瘤的主要组成部分。甲状腺乳头状癌的患病数量逐年增加,且乳头状微小癌的比例逐年上升。甲状腺癌的性别构成比及发病年龄年间并无明显变化。虽然总的淋巴结转移率较高,但年间并无明显差异。
  第二部分:甲状腺乳头状癌血清生物标志物的筛选
  通过第一部分及来自不同研究人员对甲状腺疾病的回顾性分析,我们发现甲状腺乳头状癌及良性结节性甲状腺肿是甲状腺疾病的主要病理类型。为了更好的鉴别诊断甲状腺乳头状癌,我们运用弱阳离子交换磁珠(MB-WCX)提取血清中的多肽/蛋白,MALID-TOF/TOF MS检测52例甲状腺乳头状癌(PTC)和48例非癌症对照(18例良性结节性甲状腺肿患者和30例健康查体者)血清多肽/蛋白图谱,应用ClinProTools3.0质谱软件中的快速算法(Quick Classifier,QC)建立PTC与非癌症对照的诊断预测模型。并用一个独立的验证组(36例PTC患者及19例良性结节性甲状腺肿患者和13例健康查体者)验证诊断预测模型的诊断能力。结果发现该诊断预测模型的识别能力(Recognition ability,RC)和交叉验证(cross validation,CV)分别为:90.95%和82.90%。通过独立样本的验证,该模型具有84.38%的敏感性和78.13%的特异性。同时发现PTC患者组与对照组之间存在差异多肽峰97个,其中6个多肽差异明显(P<0.05),且ROC曲线下的面积不小于0.75;4个峰m/z5905.22、2671.17、1464.68、1738.92在两组之间差异最大。因此基于MALDI-TOF MS技术建立的甲状腺乳头状癌的诊断预测模型具有较高的敏感性和特异性,能够较好的区分PTC患者和良性甲状腺结节患者及健康人群。6个具有较高诊断能力的多肽具有成为鉴别诊断PTC生物标志物的潜能。
  第三部分:甲状腺乳头状癌血清生物标志物的鉴定
  为了进一步了解这些差异多肽的序列及相应蛋白质的性质、功能及在甲状腺乳头状癌发病机制中的作用,应用纳升液相电喷雾串联质谱(nano-LC/ESI-MS/MS)系统对4个差异最明显的多肽进行分离鉴定。首先取30个差异峰高表达的样本,运用MB-WCX富集多肽。收集富集的多肽液,运用nano-LC-MS/MS进行分离鉴定,数据分析软件BioworksBrowser3.3.1进行SequestTM(IPI Human(3.45)搜库。结果发现,峰位于m/z2671.17和1464.68处的多肽质谱分析确定其氨基酸序列为“K.SYKMADEAGSEADHEGTHS TKRGHA.K”和“A.DSGEGDFLAEGGGVR.G”,通过搜库发现都为血纤维蛋白原a链(Fibrinogen alpha chain)上的肽段。峰m/z1738.92的氨基酸序列为“R.NGFKSHALQLNNRQI.R”,搜库发现为补体C4A/B的肽段;而峰在m/z5905.22处的多肽未被鉴定出,但通过检索文献发现其也为纤维蛋白原a链上的一段肽段。因此,血纤维蛋白原a链和补体C4A/B上的肽段可能是潜在的甲状腺乳头状癌的特异性分子标志物而有望应用于血液学的检测。
  第四部分:甲状腺乳头状癌组织MALDI质谱成像原位蛋白质表达分析
  在本研究中,我们通过MALDI-TOF/TOF质谱成像17例甲状腺乳头状癌组织、15例癌旁正常组织及5例腺瘤组织,获得不同组织的蛋白图谱,把MALDI MSI图谱输入到SCiLS Lab(2014b)软件(质谱成像分析软件)中,比较来自不同组织的平均谱图。Kruskal-Wallis检验癌组织和腺瘤组织与癌旁正常组织之间的蛋白峰。发现m/z9278.369,4945.61,6847.11和4614.838的蛋白分子在不同组织中呈现不同的表达且具有明显差异(P<0.001)。m/z9278.369和4945.61蛋白分子富集于癌旁组织区域;m/z4614.838蛋白分子在腺瘤组织区最为丰富;而m/z6847.11蛋白分子特异地表达于癌组织区域。利用这4个差异蛋白进行质谱成像。从质谱成像图中可以看出,不同质荷比的蛋白分子在甲状腺组织中的分布明显不同。这项研究显示了MALDI MSI在分子水平上分析组织冷冻切片的临床应用。不同质荷比的蛋白质分子在甲状腺组织中分布的丰度及区域明显不同,那么这些在特定组织中差异表达的蛋白分子有望发展成为鉴别甲状腺乳头状癌、腺瘤与癌旁组织的潜在标志物。而且创建的不同蛋白离子的质谱成像图,可以发现肿瘤的边界,明确肿瘤的进展,为临床病理诊断提供理论依据和实践基础。同时可以建立组织病理与质谱成像相补充的系统诊断方法来解决临床病理诊断中的难题。
[博士论文] 武新宇
肿瘤学 郑州大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  分化型甲状腺癌(differentiated thyroid cancer,DTC)发病率逐年增高,DTC远处转移(Distant metastatic,DM)是甲状腺癌主要致死因素。早期诊断及治疗DTC远处转移是影响患者预后的重要因素。131I治疗是DTC远处转移的主要方法之一,尤其针对双肺弥漫性转移患者。本研究通过131I治疗疗效观察、影响因素探讨及患者预后分析,为患者选择有效治疗方法提供参考依据。
  本研究分为以下三个部分:一、通过对1026例DTC患者(含115例DTC合并远处转移)临床资料的对比分析,总结DTC远处转移的临床特征;二、回顾性分析98例DTC合并远处转移且转移灶摄取131I患者接受多次131I治疗的临床资料及治疗效果,评价DTC远处转移的131I治疗疗效及疗效影响因素;三、收集115例DTC合并远处转移患者的临床资料及长时间随诊结果,分析各个因素影响患者的疾病无进展生存率,筛选影响疾病进展的因素。
  方法:
  一、回顾性分析我科于2008.8-2016.12月接受131I治疗的DTC术后患者。排除标准:临床及病理资料不全患者。最终入选研究对象1026例(其中115例伴DM)。收集1026例患者的性别、确诊患病年龄、病理学类型、确诊时T分期(肿瘤大小及外侵情况)、淋巴结转移(N0,N1a,N1b)情况等。分为合并远处转移组及未见远处转移组,进行临床资料对比分析。
  二、回顾性分析2008年8月-2016年6月DTC远处转移患者于我科行多次131I治疗的98例DTC术后伴DM患者,收集患者131I治疗资料,通过相应的疗效评价指标观察治疗效果,以CR及PR为131I治疗有效。疗程间评估为CR及PD患者不再继续治疗,并对比第1-3次治疗间的治愈率,探讨131I多次治疗必要性;通过logistic回归分析找出可能影响131I治疗DTC远处转移灶疗效的因素。
  三、长期随诊115例DTC伴远处转移患者的疾病无进展生存时间,对比患者年龄(≥45岁及<45岁)、是否合并淋巴结转移、转移灶部位(单纯肺、肺+其它部位)、转移灶大小(≥1cm及<1cm)、转移灶是否摄取131I的无进展生存率曲线(Kaplan-Meier),并通过多因素COX比例风险回归分析,找出疾病进展影响因素。
  统计学分析:应用SPSS17.0软件,符合正态分布的计量资料比较采用两样本t检验;分类变量率的比较采用x2检验;多因素分析采用Logistic回归分析;应用Kaplan-Meier勾画疾病无进展生存曲线,应用log-rank进行单因素检验分析;多因素分析采用COX比例风险回归分析。P<0.05为有统计学意义。
  结果:
  一、DTC合并远处转移患者及DTC未见远处转移患者临床资料对比
  (1)1026例患者,男311例,女715例,年龄11-89(41.6±14.2)岁。其中伴远处转移115例,甲状腺乳头状癌93例,甲状腺滤泡癌22例;男36例,女79例,年龄18-86(51.7±18.5)岁;≥45岁69例,<45岁46例。未发现远处转移911例,男275例,女636例,年龄11-89(39.1±15.3)岁。
  (2)DTC远处转移患者确诊时平均年龄(51.7±18.5)岁,未见远处转移患者年龄(39.1±15.3)岁,差异有统计学意义(t=3.018,P<0.05)。确诊时T3/T4分期与T1-2期其远处转移发生率差别有统计学意义(x2=47.405,P<0.001);淋巴结转移N1b与N0/N1a组患者远处转移发生率差异有统计学意义(x2=8.880,P=0.003)。
  二、DTC合并远处转移患者131I多次治疗疗效观察及影响131I治疗疗效因素分析
  (1)98例远处转移均得到2次及2次以上131I治疗,治愈21例,好转58例,总体有效率80.61%(79/98),无效19例。最小累积剂量9.25GBq,最大累积剂量49.95GBq,平均剂量23.13GBq;患者最少治疗2次,最多治疗8次。统计第1-3次治疗后治愈率分别为7.14%(7/98)、16.33%(16/98)和19.39%(19/98),差异有统计学意义(x2=6.500,P=0.039)。
  (2)对9个可能影响131I治疗DTC远处转移疗效因素的单因素分析。计量资料的分析结果如下:131I治疗DTC远处转移有效组平均年龄(41.8±16.9)岁,无效组年龄(59.3±19.5)岁,差异有统计学意义(t=3.832,P=0.002);131I治疗DTC远处转移有效组及无效组血清Tg水平分别为(62.26±17.61)和(138.03±30.28)ng/ml,差异有统计学意义(t=6.156,P<0.01)。通过x2检验提示转移灶大小、转移灶部位、病理学类型及首次清甲治疗Rx-WBS显像远处转移灶是否显影在131I治疗有效及无效组间差别有统计学意义(P=0.001,0.031,0.028,0.004)。
  (3)影响131I治疗疗效多因素回归分析:将6个可能影响131I治疗DTC远处转移疗效因素引入,通过Binary Logistic回归分析,显示疗效受清甲治疗后Rx-WBS显像远处转移灶是否显影、转移部位、确诊时Tg水平、转移灶大小及患者年龄等因素影响。Logistic回归方程为:logitP=2.159+2.756×清甲时转移灶显影+3.263×转移灶部位(单存肺转移)-2.291×Tg水平-2.721×转移灶大小-1.934×患者年龄。
  三、长期随诊DTC远处转移患者疾病无进展生存时间,分析影响DTC远处转移灶进展的因素
  (1)发现DTC远处转移灶开始,转移灶进展结束,平均随访时间4.5±3.8年(中位随访时间3.5年)。随访期间疾病进展37例(29.56%,37/115)。
  (2)患者年龄(≥45岁及<45岁)、是否合并淋巴结转移、转移灶部位(单纯肺、其它)、转移灶大小(≥1cm及<1cm)、转移灶是否摄取131I的疾病无进展生存率曲线(Kaplan-Meier),通过log-rank检验分析患者年龄、转移灶部位、转移灶大小及转移是否摄取131I差异有统计学意义(P=0.030,<0.001,0.031,0.001)。
  (3)将患者年龄、转移灶部位、转移灶大小及转移灶是否摄取131I等4个可能影响DTC远处转移灶进展的因素引入,通过多变量COX比例风险回归分析,表明患者转移灶部位(RR=0.280,95%CI0.119-0.659,P=0.004)及131I摄取情况(RR=2.189,95%CI1.048-4.571,P=0.037)与DTC患者远处转移的疾病进展有关。
  结论:
  1.DTC远处转移的发生率约为11.2%,其好发部位以肺、骨为多见,年龄较大(>45岁),肿瘤分期为T3/T4期及侧颈部淋巴结转移患者应警惕远处转移可能。Rx-WBS/SPECT-CT是发现远处转移的有效方法。
  2.131I是治疗DTC远处转移灶的有效方法。部分患者需要接受多次131I治疗才能获得治愈或好转。清甲治疗后Rx-WBS或SPECT-CT显像远处转移灶是否显影、转移灶大小、患者年龄、转移部位及Tg水平是是影响治疗效果的独立因素。
  3.DTC远处转移患者大部分可以通过规范治疗达到疾病无进展生存。转移灶部位及转移灶是否摄取131I是影响DTC伴远处转移患者疾病进展独立影响因素。
[博士论文] 杜伟
耳鼻咽喉科学 郑州大学 2017(学位年度)
摘要:背景和目的:
  甲状腺乳头状癌(PTC)是最为常见的内分泌恶性肿瘤,近年来在世界上多个地方的发病率呈快速上升趋势[1-4]。PTC相对惰性,如果早期发现并经过正规的治疗,多数可以治愈。但是在临床工作中我们又发现,有些微小癌在发现时已经出现了广泛的转移,预后较差。那么,如何能更精准的早期诊断,寻找与肿瘤外侵、转移、复发等高危行为相关的因素,寻找潜在的更有效的治疗靶点,成为亟待解决的问题。
  本研究的目的包括以下两方面:1.通过BRAFV600E突变检测和miRNA363表达水平检测,明确BRAFV600E突变是否与高危肿瘤行为相关;明确双分子检测在甲状腺微小乳头状癌的早期诊断中的价值;2.以甲状腺乳头状癌细胞株(TPC-1细胞)为研究对象,探讨miRNA363对TPC-1细胞的增殖、分化、转移的影响,并进一步研究其作用机制,寻找潜在的治疗甲状腺乳头状癌的新靶点。
  第一部分 miRNA363、BRAFV600E在甲状腺微小乳头状癌中的表达研究
  目的:
  探讨甲状腺微小乳头状癌中BRAFV600E突变情况与各高危因素分析;分析甲状腺微小乳头状癌和癌旁正常组织及甲状腺良性结节中miRNA363表达差异及BRAFV600E突变情况,分析miRNA363及BRAFV600E用于甲状腺微小乳头状癌早期诊断的价值。
  方法:
  收集研究自2016年1月至2017年2月入院的同一医师收治手术的甲状腺乳头状癌患者的石蜡病理标本62例,肿瘤最大直径均小于lcm,患者最后诊断结果均经病理证实为甲状腺微小乳头状癌,登记患者性别、年龄、家族史、是否多灶、是否有包膜侵犯、是否有淋巴结转移,并进行肿瘤TNM分期;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测标本中BRAFV600E突变情况,并进行统计学分析。另收集患者49例新鲜手术标本,其中26例为甲状腺微小乳头状癌患者标本,23例为甲状腺良性肿瘤及癌旁正常组织标本,登记甲状腺微小乳头状癌患者性别、年龄、家族史、是否多灶,是否有包膜侵犯、是否有淋巴结转移,并进行肿瘤TNM分期; PCR检测标本中miRNA363表达水平及BRAFV600E突变情况,并进行统计学分析。
  结果:
  自2016年1月至2017年2月,收集由同一医师完成手术的PTMC患者病理标本进行检测,共62例;其中男13例,女49例;最低年龄20岁,最高年龄64岁,平均年龄45.8岁;通过PCR检测BRAF基因状态,BRAFV600E突变患者44例,野生型患者18例,突变率为71%。统计学分析显示,在BRAFV600E突变与未突变的患者中,除了45岁以上和45岁及以下患者对比,有统计学差异;在性别、家族史、病灶数目、包膜侵犯情况、淋巴结转移情况和肿瘤分期等高危因素不同的患者中均未见统计学差异。收集用于检测miRNA363和BRAF突变的新鲜标本49例,26例甲状腺微小乳头状癌标本,23例甲状腺良性肿瘤及癌旁正常组织标本。miRNA363表达水平在甲状腺微小乳头状癌组织中出现均一性降低;这种变化在BRAF突变型及野生型患者中未显示差异性。进一步分析两种分子检测的准确度,BRAFV600E检测为87.8%,miRNA363检测为100%。
  小结:
  1.在甲状腺微小乳头状癌中,BRAFV600E突变率较高;但BRAF600E突变与甲状腺微小乳头状癌除年龄之外的高危生物学行为没有相关性,指导预后证据不足。
  2.miRNA363在甲状腺微小乳头状癌中的表达水平出现均一性降低,表达水平与BRAF是否突变无相关性;miRNA363表达差异在甲状腺微小乳头状癌的辅助诊断中具有高准确度,联合BRAFV600E突变检测,可使甲状腺微小乳头状癌的早期诊断率提高。
  第二部分 miRNA363对甲状腺乳头状癌进展机制研究
  目的:
  研究miRNA363对甲状腺癌细胞(TPC-1)增殖、分化及转移的影响;并探讨其对TPC-1细胞产生影响的机制,为miRNA363作为甲状腺乳头状癌治疗的靶向基因提供理论基础。
  方法:
  1.以甲状腺癌细胞系TPC-1为研究对象,构建过表达miRNA363慢病毒质粒,通过慢病毒转染的方法将TPC-1细胞系高表达miRNA363,以空白质粒为对照,建立高表达miRNA363的稳定细胞株。
  2.实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测高表达miRNA363稳定细胞株(TPC-1-miRNA363)、空白质粒对照细胞株(TPC-1-LV)、空白细胞株(TPC-1-NC)中miRNA363的表达情况。
  3.MTT检测miRNA363对TPC-1细胞增殖能力的影响。
  4.通过Transwell小室模型验证miRNA363对TPC-1细胞侵袭能力的影响。
  5.通过划痕实验证实miRNA363对TPC-1细胞迁移能力的影响。
  6.通过克隆形成实验验证miRNA363对TPC-1细胞群体依赖性和增殖能力的影响。
  7.经过生物信息学预测,筛选出了miRNA363的两个靶基因:Ca离子信号通路中CACNA1C基因和MAPK信号通路中DUSP10;构建miRNA363过表达质粒、CACNA1C3-UTR、DUSP103-UTR、CACNA1C3-UTR-Mu、DUSP103-UTR-Mu的荧光素酶质粒,转染细胞后,经过处理,测定并计算各组相对luciferase活性。
  8.Western-Blot方法检测实验组和对照组CACNA1C、DUSP10蛋白表达情况。
  结果:
  1.RPMI1640+10%FBS培养基培养TPC-1细胞,利用慢病毒成功建立miRNA363高表达细胞株TPC-1-miRNA363,空质粒对照细胞株TPC-1-LV。
  2.qPCR检测结果显示,miRNA363在TPC-1-miRNA363组表达明显增高。
  3.慢病毒感染TPC-1细胞,培养5天后,经MTT处理4小时,记录各组细胞在490nm的吸光率相对于第一天的变化倍数随时间的变化。相比TPC-1-NC和TPC-1-LV对照组,TPC-1-miRNA363组细胞增殖倍数经T-test分析P<0.05,出现细胞增殖的明显抑制;而两个对照组之间对比,P>0.05,细胞增值未见明显差异。
  4.Transwell实验显示,在200x显微镜视野细胞计数,TPC-1-NC和TPC-1-LV对照组平均为193和185,TPC-1-miRNA363组计数为81,在实验组细胞数目减少。
  5.划痕实验,将感染细胞进行培养,按照实验方法进行划痕,相比对照组,TPC-1-miRNA363组细胞在划痕24h时迁移能力下降。
  6.克隆形成实验显示,TPC-1-NC和TPC-1-LV对照组克隆形成数为202和198,TPC-1-miRNA363组克隆形成数为188,在高表达miRNA363基因的实验组形成的克隆数目减少。
  7.荧光素酶实验显示,结果表明miRNA363特异性下调了CACNA1C及DUSP10基因表达。
  8.Western-Blot结果表明,在TPC-1-miRNA363细胞中,miRNA363特异性降解了CACNA1C及DUSP10蛋白表达。
  小结:
  (1)miRNA363在TPC-1中是肿瘤抑制基因,高表达可以抑制TPC-1的生长,对肿瘤细胞的转移有一定的影响。
  (2)miRNA363是通过特异性靶向Ca离子信号通路中的CACNA1C基因及MAPK信号通路中的DUSP10基因的3'端非翻译区,导致mRNA的降解,致使蛋白翻译的失败,起到肿瘤抑制作用的。
  (3)在TPC-1中作为肿瘤抑制基因, miRNA363有可能作为甲状腺乳头状癌治疗的潜在靶向基因。
  结论:
  1.在甲状腺微小乳头状癌中, BRAFV600E突变率较高,但该突变与除年龄之外的高危生物学行为没有相关性,指导预后证据不足;miRNA363在甲状腺微小乳头状癌中的表达水平出现均一性降低,表达水平与BRAF是否突变无相关性;联合BRAFV600E突变检测,可使甲状腺微小乳头状癌的早期诊断率提高。
  2.miRNA363作为肿瘤抑制基因,是通过特异性靶向Ca离子信号通路中的CACNA1C基因及MAPK信号通路中的DUSP10基因的3'端非翻译区,导致mRNA的降解,致使蛋白翻译的失败,进而抑制甲状腺乳头状癌细胞的生长,有可能作为甲状腺乳头状癌治疗的潜在靶向基因。
[硕士论文] 王会
公共卫生 山东大学 2017(学位年度)
摘要:目的:通过对接受经鼻中隔粘膜下入路和经鼻直接蝶窦入路垂体腺瘤切除术的两组患者进行嗅觉测试、相关量表评估,结合临床资料,分析比较两组患者的嗅觉功能、鼻部症候及生活质量的变化,探讨其对临床的指导意义。
  方法:收集2016年1月至2017年1月在我院神经外科收治的垂体瘤患者,纳入接受经鼻中隔粘膜下入路垂体腺瘤切除术的患者作为观察组,纳入接受直接经蝶窦入路垂体腺瘤切除术的患者作为对照组。本研究用五味试嗅液法评估患者的嗅觉,用疾病特异性量表即SNOT-20量表评估患者的鼻部症状,用生存质量普适性量表即SF-36量表评估患者的生存质量。分别于术前,术后1个月、术后3个月、术后6个月对患者进行嗅觉测试和SNOT-20评估;术后1个月、术后3个月、术后6个月对患者进行SF-36评估。利用重复测量资料的方差分析对两组患者的嗅觉功能、鼻部症候和生活质量进行分析。采用SPSS19.0软件进行统计分析。
  结果:研究期间纳入观察组患者150例,其中男性60例,女性90例,平均年龄44.46±10.81岁。纳入对照组患者81例,其中男性36例,女性45例。平均年龄46.20±12.65岁。统计结果显示:①嗅觉测试:组内比较发现,术后1个月所有患者较术前均有不同程度的嗅觉障碍,与术前差异有统计学意义(P<0.05);术后3个月、术后6个月时患者嗅觉较术前有所恢复,与术前差异有统计学意义(P<0.05)。两组间分析比较发现:术前两组患者的嗅觉阈值差异无统计学意义(P>0.05);术后1个月时两组患者的嗅觉阈值差异有统计学意义(P<0.05),且粘膜组较直接组的患者嗅觉察觉阈值和识别阈值低;术后3个月、术后6个月时两组患者之间的嗅觉阈值差异有统计学意义(P<0.05),且观察组患者的察觉阈值和识别阈值低于对照组。②SNOT-20评估显示:两组病人中,术后1个月时各维度得分最高,且分别与术前得分差异有统计学意义(P<0.05)。术后3个月在术后1个月基础上持续恢复,其中观察组的患者的鼻部症候和睡眠障碍与术前已无明显差异,而对照组的患者,只有睡眠障碍这个维度与术前无差异,其它维度仍有显著差异;术后6个月时两组病人的4个维度与术前已无显著差异。两组间分析发现:术前、术后1月、术后6月差异无统计学意义(P>0.05),术后3月时鼻部症状这个维度差异有统计学意义(P<0.05),且对照组患者评分高于观察组。③SF-36量表评估显示:两组患者在术后1个月、术后6个月时生存质量评分与术前差异无统计学意义(P>0.05);术后3个月时只有生理机能项差异有统计学意义(P<0.05),且观察组患者的评分较对照组患者高。
  结论:(1)五味试嗅液嗅觉测试、疾病特异性量表即SNOT-20量表、生存质量普适性量表即SF-36量表可以较好的评估垂体腺瘤切除术患者的嗅觉、鼻部症状及生存质量的变化。
  (2)两种术式均可以使患者的嗅觉功能降低,且在术后6个月时嗅觉功能仍不能恢复到术前水平。相比之下,经鼻中隔粘膜下入路垂体腺瘤切除术对患者的嗅觉功能影响小。
  (3)两种术式均可以使患者的鼻腔鼻窦相关症状显著增加,这些症状可以在术后6个月时恢复到术前水平。相比之下,接受经鼻中隔粘膜下入路垂体腺瘤切除术的患者鼻腔鼻窦相关症状恢复更快。
  (4)两组患者在术后6个月时生活质量基本能恢复到术前水平;两种术式对患者术后总体生活质量影响差别不大。
[博士论文] 张永红
内科学(内分泌学) 山东大学 2017(学位年度)
摘要:甲状腺癌(thyroid carcinoma,TC)是常见的内分泌相关恶性肿瘤之一,也是全球范围内发病率上升速度最快的恶性肿瘤,其中甲状腺乳头状癌(PTC)占80%以上。虽然PTC肿瘤被看作是生长缓慢的肿瘤,主要治疗方式为甲状腺的部分或完全切除,其次通过用放射性碘(131I,RAI)消除残余甲状腺癌细胞组织,这可治愈大多数TC患者。甲状腺癌患者术后需要终身服用甲状腺激素替代治疗,约20-30%的患者发展为局部复发或远处转移,特别是当肿瘤失分化并变的失去摄碘能力,以及原发灶很小就已发生远处转移时,其死亡风险大大增加。当然,有一部分微小癌生长非常缓慢可能生长很多年未被发现。目前,甲状腺癌的发病机制并不清楚,积极寻找致病原因及危险因素深入探讨其发病机制对本病的防治至关重要。
  已有研究表明雌激素对甲状腺癌的发生和发展具有重要作用。课题组的前期研究也表明具有雌激素活性的环境内分泌干扰物双酚A也可以影响甲状腺癌细胞的增殖。但雌激素及双酚A对甲状腺乳头状癌细胞迁移及细胞周期有何影响?这种作用是通过何种受体及信号传导通路发挥作用的?二者的作用有无差异?这些问题是我们的兴趣所在。研究提示双酚A和雌二醇与甲状腺癌的关系将为该病的防治提供一定的理论基础。
  第一部分 双酚A和雌二醇对甲状腺乳头状癌细胞的增殖能力的影响
  背景:
  流行病学调查表明,甲状腺乳头状癌的患病率在育龄期女性比同年龄段的男性高出3-4倍,表明甲状腺癌的发生可能受到女性性激素,特别是雌激素的影响。甲状腺肿瘤发病机制复杂,常见原因可能与家族史、碘的摄入量,电离辐射以及BRAF,RET,NTRK等基因突变有关。而放射线暴露史和甲状腺癌家族史,以及BRAF,RET/PTC和NTRK等常见的体细胞突变并不能解释甲状腺癌的发病的显著性别差异,碘是甲状腺激素合成重要原料,缺乏将会引起甲状腺功能减退、智力低下、身材矮小。目前国际上普遍认为,甲状腺癌的病理类型与碘的摄入量无关,但也有研究显示碘摄入量高的地区甲状腺癌的发病率增高,尤其是甲状腺乳头状癌,本课题组前期动物实验研究也表明,高碘饮食可诱发大鼠甲状腺组织发生乳头状甲状腺癌,但这也并不能解释女性甲状腺癌患病人数的增多,而性激素参与了甲状腺乳头状癌的发生似乎是解释显著性别差异的合理假说。以前的研究已经清楚地表明,雌激素可以影响癌细胞生长,由于在女性月经周期,怀孕和哺乳期间,甲状腺较长时间的暴露于较高的雌激素水平环境中,被认为容易患甲状腺癌。17β-雌二醇(E2)是人类中最有效的雌激素之一,并且对存在于良性和恶性甲状腺细胞中的雌激素受体具有很高的亲和力。E2还促进雌激素靶器官如乳腺和子宫内膜组织的癌性病变。已有研究表明,乳腺癌患者中甲状腺结节性肿大发生率较高,表明对于雌激素相关的器官,有一种共刺激生长因素参与了甲状腺肿瘤的病理过程。
  随着社会的发展、环境污染的加重,环境因素对甲状腺肿瘤的影响越来越受到人们关注。具有雌激素特性的内分泌干扰物质(EDCs)也可能参与了甲状腺癌的发生发展。双酚A(BPA)是环境内分泌干扰物的代表物,由聚碳酸酯塑料和环氧树脂的化合组成,存在于塑料,农药,药物,洗涤剂和化妆品等数千种消费品中。
  目的:
  1.检测不同浓度的双酚A和雌二醇对甲状腺乳头状癌细胞(BHP10-3)增殖活力的影响;
  2.检测最佳浓度的双酚A和雌二醇对BHP10-3细胞迁移和细胞周期的影响;
  3.检测双酚A和雌二醇对BHP10-3细胞增殖的影响是否是基于雌激素核受体(ERα/ERβ)和膜受体(GPR30)的表达。
  方法:
  1.采用不同浓度的双酚A(10-3-10-8M)和雌二醇(10-4-10-9M),干预人甲状腺乳头状癌细胞(BHP10-3),在不同时间点(24h、48h、72h)采用CCK-8实验方法检测BHP10-3细胞增殖活力,观察细胞生长曲线,检测BHP10-3细胞活细胞数的变化,确定BPA和E2促进细胞增殖的最佳浓度和时间。
  2.采用细胞划痕实验判断双酚A和雌二醇对BHP10-3细胞迁移能力的影响。
  3.利用最佳浓度的双酚A和雌二醇干预BHP10-3细胞,分别在不同时间点(24h、48h、72h)采用流式细胞术检测细胞DNA含量及计算细胞增殖指数,分析BPA及E2对细胞周期相的影响;
  4.采用免疫荧光法确定雌激素核受体(ERα/ERβ)和膜受体(GPR30)在人甲状腺乳头状癌BHP10-3细胞内的表达和定位;
  结果:
  1.不同浓度的BPA和E2刺激甲状腺乳头状癌细胞(BHP10-3),BPA和E2的促增殖作用表现为倒置的“U”型曲线,呈浓度和时间依赖性,最佳增殖浓度分别为10-7M和10-8M,活细胞数随着时间延长而增多;
  2.细胞划痕实验显示BHP10-3细胞在双酚A和雌二醇的作用下,促进其运动和迁移。
  3.流式细胞细胞周期相显示,双酚A和雌二醇均可促进BHP10-3细胞从G0/G1进期展到S期,24h为G0/G1进展到S期的最佳时间。
  结论:
  1.双酚A具有显著的雌激素活性,低剂量的双酚A(BPA,10-7M)和雌二醇(E2,10-8M)即可发挥其生物学活性,促进甲状腺癌细胞增殖、迁移。
  2.雌激素受体ERα、ERβ和GPR30共同表达于人甲状腺乳头状癌细胞(BHP10-3)中,双酚A和雌二醇一样促进甲状腺乳头状癌细胞(BHP10-3)的增殖可通过雌激素受体依赖性途径。
  第二部分 双酚和雌二醇诱导甲状腺乳头状癌细胞产生mERα和GPR30及对AKT/mTOR通路的影响
  背景:
  PI3K/Akt通路在致癌过程中的作用已经被广泛的探索和报道,最近的研究证实这一途径与TC,尤其是与FTC和ATC的发病机制关系密切。关于PI3K/Akt/mTOR通路的激活有多重方式,越来越多的亚临床或临床数据支持这一途径可能代表一种治疗TC潜在目标,而针对PI3K/Akt/mTOR的口服药物已成功的治疗多种恶性肿瘤,正逐渐被广泛应用。特别是当甲状腺肿瘤对传统的放射性碘治疗产生抵抗的时候,即难治性甲状腺癌的治疗,需努力去确定这些途径中可能的治疗目标。研究表明雌激素促进雌激素反应性器官恶性肿瘤的发生发展可能是通过结合ERs而激活PI3K/Akt/mTOR通路的激活而致。由于甲状腺乳头状癌显著的性别差异,我们推测雌激素受体参与了其发病,而具体哪种受体参与PI3K/Akt/mTOR通路的激活尚不清楚。由于BPA在结构上类似于E2,它是否也可通过雌激素受体依赖性途径激活该通路仍有待确定。而运用单独靶向或双重受体抑制剂是否可抑制该通路的激活也是本文关注的重点。
  目的:
  1.检测双酚A(10-7M)和雌二醇(10-8M)干预BHP10-3细胞后,BHP10-3细胞中ERα、ERβ、GPR30等雌激素相关受体基因和蛋白表达水平的变化。
  2.明确PI3K/Akt/mTOR通路在甲状腺乳头状癌发病中的作用,以及明确双酚A是否类似于雌二醇可激活PI3K/Akt/mTOR通路。
  3.了解选择性雌激素受体拮抗剂ICI182,780和特异性GPR30拮抗剂G15是否可通过抑制雌激素受体的表达而阻断BHP10-3细胞PI3K/Akt/mTOR(PAM)通路的激活。
  4.比较双酚A和E2在促进肿瘤进展中的作用差异。
  方法:
  1.通过Real-time PCR和Western blot实验技术分别在24h和48h检测双酚A(BPA)和雌二醇(E2)干预后的人甲状腺乳头状癌细胞(BHP10-3)中ERα、ERβ、GPR30等雌激素相关受体基因和蛋白表达水平的变化;
  2.通过Real-time PCR和Western blot实验技术明确选择性或特异性雌激素受体拮抗剂ICI(10-6M)、G15(10-8M)预处理BHP 10-3细胞1h后,是否可抑制雌激素相关受体基因和蛋白的表达。
  结果:
  1.运用Real-time PCR和Western blot实验技术再次证实双酚A(10-7M)和雌二醇(10-8M)可明显增强ERα、ERβ和GPR30在BHP10-3细胞中的表达。
  2.双酚A(10-7M)和雌二醇(10-8M)均可迅速刺激甲状腺乳头状癌细胞(BHP10-3)中Akt/mTOR发生磷酸化,最佳时间均为30分钟。
  结论:
  1.Akt/mTOR信号通路参与了甲状腺乳头状癌的发生发展,促进了肿瘤细胞的生长。
  2.Akt/mTOR通路的激活可能是基于上游雌激素受体(mER和GPR30)的过表达而完成。
  3.ICI可显著抑制BPA和E2诱导的BHP10-3中ERα的表达,由于ERα和ERβ的不同作用特点,单独应用ICI,其拮抗作用表现为不确定性。
  4.G-15能显著抑制E2诱导的雌激素受体及下游通路分子的表达,从而达到抗肿瘤细胞增殖作用,但对于BPA无抑制作用;ICI和G15对于E2诱导的GPR30及下游通路分子的表达具有协同性。
  5.BPA和E2类似于特异性激动剂G1的作用均可显著促进甲状腺乳头状癌细胞的增殖,二者之间比较无显著性差异。
  6.BPA可以通过基因组转录途径或非基因组途径促进甲状腺乳头状肿瘤的进展,但激活雌激素受体的方式不完全相同于E2,也可能不完全通过雌激素受体依赖性途径激活下游通路。
[硕士论文] 王征
外科学(神经外科) 山东大学 2017(学位年度)
摘要:目的:探讨并且评价神经内镜在经鼻-蝶入路垂体腺瘤切除术中的临床操作技巧及其使用价值。
  方法:选取2012年3月至2016年3月,济宁市第一人民医院神经外科收治的经鼻-蝶垂体腺瘤手术的患者一共253例,其中采用神经内镜辅助下下经鼻-蝶入路垂体腺瘤切除术的患者有183例,定为神经内镜组(观察组);采用显微镜辅助下经鼻-蝶入路垂体腺瘤切除的患者有70例,定为显微镜组(对照组)。通过回顾性分析两组患者术前、术后的临床症状及激素水平变化、影像学资料、病历资料、术后并发症、随访资料等,比较两组患者在肿瘤切除率,症状改善情况,及术后主要并发症方面的差别,来判断哪种治疗方式治疗效果更好。
  结果:两组不同辅助工具下手术的患者在性别、年龄、病史、分类等基本情况方面差异无统计学意义(P>0.05)。神经内镜下经鼻蝶入路组患者共有183例,经过手术后肿瘤达到全切的患者为147例,全切率达到80.3%,次全切除的患者有36例(19.7%);显微镜组的患者共有70例,经过手术治疗后肿瘤达到全部切除的患者为44例,全切除率为62.9%,达到次全切除的患者有26例(37.1%),两组患者在肿瘤全切除率方面存在差异,差异不具有统计学意义(P=0.271>0.05)。神经内镜组各种并发症出现的概率为26.8%(49/183);显微镜组各种并发症出现的概率为58.6%(41/70),两组患者差异具有统计学意义(P=0.0384);两组在术后激素恢复情况上没有明显差异(P值均>0.05);神经内镜组患者在术后症状改善方面优于显微镜组,并有显著统计学意义(P=0.0437);神经内镜组在术后肿瘤复发率上明显低于显微镜组(P=0.0213)。
  结论:神经内镜辅助下经鼻-蝶入路切除垂体腺瘤的手术方式具有手术安全性高、创伤小、术后并发症出现几率低、复发率低等优势,是一种比较安全、微创、有效可靠的方法。
[博士论文] 鲁东
影像医学与核医学 山东大学 2017(学位年度)
摘要:本文主要从以下几方面进行论述:
  第一部分 MRI与CT引导胰腺病变穿刺活检的比较研究
  目的:
  胰腺癌的高死亡率归因于对癌前病变和早期浸润性胰腺癌缺乏可靠的早期筛查方法以及全身化疗治疗的相对疗效不佳。病理组织学诊断是确诊的金标准,然而只有不到40%被诊断为胰腺癌的患者有组织学验证。
  本研究回顾性分析MRI和CT引导下穿刺活检的胰腺病变患者资料,比较MRI和CT引导下胰腺穿刺活检的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和并发症的发生率,旨在探讨磁共振引导胰腺病变穿刺活检的准确性与安全性。
  方法:
  回顾性分析2015年1月~2016年6月间因胰腺占位性病变行CT或MRI引导下穿刺活检以取得病理组织学诊断的73例患者资料,其中CT引导穿刺活检患者来源为安徽省立医院介入放射科,MRI引导穿刺活检患者来源为山东省医学影像研究所MR介入室。CT引导组42例,MRI引导组31例。
  分析观察指标:以外科手术后病理结果、随访12个月以上的影像学和/或临床病程为最终诊断参考,记录真阳性或假阳性、真阴性或假阴性。分别计算CT及MRI引导下穿刺活检诊断的敏感性、特异性、阳性预测值(Positive predictive value,PPV)、阴性预测值(Negative predictive value,NPV)和组织病理学结果的准确率。
  统计学指标:数据收集和统计分析使用SPSS软件22.0。分类数据以频率和百分比表示,并用卡方检验或Fisher精确检验进行比较。连续数据被描述为均数±标准差((X)±S),用两样本t检验比较,或Wilcoxon秩和检验。P<0.05为结果有显著性差异。
  结果:
  73例患者均完成了CT/MRI引导胰腺穿刺活检操作,穿刺活检技术成功率100%。MRI引导下穿刺路径多数通过脏器间隙到达胰腺病灶,减少了对相邻脏器的损伤,与CT引导相比较差异显著(x2=25.130,P=0.001)。MRI引导平均穿刺操作时间较CT引导延长,分别为(31.2±4.38)min、(25.5±5.85)min,两者比较差异有统计学意义(t=8.882,P=0.001)。所有患者均无主要并发症发生,8例(10.96%)出现次要并发症。MRI并发症的发生率较CT引导低,但两者比较无明显统计学差异(x2=4.444,P=0.108)。
  穿刺活检病理组织学及最终诊断结果:73例患者获得病理诊断,临床成功率100%。MRI引导穿刺活检病理组织学结果恶性肿瘤25例(80.65%,25/31),良性肿瘤或非肿瘤6例(19.35%,6/31)。最终诊断胰腺恶性肿瘤27例,良性病变4例。CT引导穿刺活检病理组织学结果恶性肿瘤37例(88.10%,37/42),良性肿瘤或非肿瘤5例(11.9%,5/42),最终诊断胰腺恶性肿瘤41例,良性病变1例。
  结论:
  1.MRI及CT引导下经皮穿刺胰腺活检术均可获得充分的诊断样本,并发症发生率低,是微创、安全、有效的的引导方式。
  2.MRI能对可疑胰腺病变区域精准定位,准确指导穿刺活检的取材部位,使其有望在诊断准确性及敏感性上高于CT引导,是潜在的更安全有效的经皮穿刺胰腺活检的影像引导手段。
  3.MRI的血管流空效应及任意方位成像的优势,有利于选择更短的经背侧穿刺路径及经胃肠等脏器间隙穿刺到达靶病灶,减低并发症的发生率。
  第二部分 CT引导125I粒子组织间内照射联合动脉化疗灌注治疗进展期胰腺癌临床评价
  目的:
  本研究回顾性分析CT引导下125I粒子植入术行组织间内照射联合RIAC治疗的进展期胰腺癌(advanced pancreatic cancer,APC)临床疗效,通过与单纯行RIAC治疗的患者临床疗效进行对比,分析进展期胰腺癌在不同治疗方式下的客观缓解率(Objective Response Rate,ORR)、临床受益率(Clinical benefit rate,CBR)、疾病无进展生存期(Progression-Free Survival,PFS)、总生存期(Overallsurvival,OS)、疼痛缓解程度及术后并发症情况。
  方法:
  回顾性分析2012年1月~2016年7月间在安徽省立医院确诊为进展期胰腺癌的有完整随访记录的患者资料。采用CT引导125I粒子植入行组织间内照射治疗的患者50例,肿瘤分期Ⅲ期27例,Ⅳ期23例。这些患者随后均联合施行了胰腺癌RIAC治疗,先后接受125I粒子植入治疗1~3次,RIAC1~6次。对照组选择同期单纯行RIAC治疗的患者43例,Ⅲ期21例,Ⅳ期22例。接受RIAC1~6次,两次之间间隔3~4周。两组患者的年龄、性别、病灶大小、肿瘤分期及有无远处转移等均无显著差异。
  CT引导下125I粒子植入术:根据计划及病灶的范围,选取并确定最适当的粒子植入穿刺的层面和穿刺途径,确保粒子的三维分布与病灶范围相适应。在间断的CT扫描确认下,适时调整植入针,直至插入病灶最远侧边缘。由深到浅间隔5~15 mm植入一颗125I粒子,保证植入粒子数与TPS治疗计划间误差<10%。
  随访:术后分别于1、2、6、12个月行上腹部CT增强扫描检查,进行临床血液学指标检查,包括CA19-9、血常规、血生化、凝血功能等检测。采用疼痛视觉模拟评分(the visual analog scale,VAS)评估患者疼痛缓解情况。并详细记录术后2个月内的症状和并发症。
  判定疗效:根据WHO实体瘤疗效评价标准(RECIST1.1),统计分析客观缓解率(ORR)及临床受益率(CBR)。本研究确定的主要指标为总生存期(OS),研究的次要指标为疾病无进展生存期(PFS)。
  统计学分析指标:数据收集和统计分析使用SPSS软件22.0。分类数据以频率和百分比表示,并用x2检验或Fisher精确检验进行比较。连续数据被描述为均数±标准差((x)±S),用两样本t检验比较,或Wilcoxon秩和检验。采用Kaplan-Meier分析和绘制生存曲线估计生存率,用对数秩(Log-rank)检验对生存曲线进行比较。P<0.05被认为差异有统计学意义。
  结果:
  50例患者共接受125I粒子植入术操作54次,技术成功率100%,1例接受125I粒子植入治疗3次,2例2次。设定处方剂量(PD)110~140 Gy,D90平均值为128 Gy。术后验证靶区达到处方剂量的百分数D100>95%PD,D90>90%PD,被处方剂量100%覆盖的靶体积百分比>90%(V100>90%),V200<50%。无腹腔感染、肠瘘、胰瘘等严重不良反应出现,4例患者术后即刻CT扫描发现粒子移位。
  两组患者均顺利完成相应治疗干预措施,随访12~54个月并完成疗效评估。统计分析125I粒子植入联合RIAC与单纯RIAC治疗两组患者的ORR与CBR,同时按照肿瘤分期分层比较,粒子植入组全组患者及Ⅲ期、Ⅳ期患者术后2个月及6个月的ORR分别为62.0%、88.9%、30.4%和61.4%、80.0%、31.6%,CBR分别为76%、96.3%、52.2%和77.3%、92.0%、52.6%; RIAC组全组患者及Ⅲ期、Ⅳ期患者术后2个月及6个月的ORR分别为39.5%、47.6%、31.8%和36.7%、46.7%、26.7%,CBR分别为53.5%、61.9%、45.5%和46.7%、60.0%、33.3%。在进展期胰腺癌全组及Ⅲ期患者中125I粒子植入联合RIAC治疗临床疗效高于单纯RIAC(P<0.05),而在Ⅳ期患者中两组之间临床疗效比较无显著性差异(P>0.05)。
  粒子植入组全组患者及Ⅲ期、Ⅳ期患者的PFS分别为8.7、8.8、4.4个月,而单纯RIAC组全组患者及Ⅲ期、Ⅳ期患者的PFS分别为5.2、5.7、3.2个月。粒子植入组均高于对照组,两者差异有统计学意义(P<0.05)。
  根据术前CT三维重建图像通过TPS制定治疗计划,CT引导下精准穿刺植入粒子,可确保D90>90% PD,V100>90%,V200<50%。粒子植入术后患者腹痛得到不同程度缓解,进展期胰腺癌患者无论Ⅲ期Ⅳ期,术后1个月粒子植入组VAS评分均下降显著,较对照组疼痛缓解更明显(P=0.001)。
  结论:
  1.CT引导125I粒子组织间内照射联合RIAC治疗进展期胰腺癌,术后2个月及6个月的客观缓解率和临床受益率优于单纯RIAC治疗。
  2.CT引导125I粒子组织间内照射联合RIAC治疗进展期胰腺癌,疾病无进展生存期及总生存期均较单纯RIAC治疗为高,Ⅲ期患者获益更多。对于Ⅳ期患者,亦可延长无进展生存期,缓解疼痛症状,改善生存质量。
  3.CT引导125I粒子组织间内照射联合RIAC治疗进展期胰腺癌安全有效,可达到较好的局部控制率,改善患者生存质量,是进展期胰腺癌临床有力的综合治疗手段之一。
[博士论文] 方汝亮
外科学(普通外科) 山东大学 2017(学位年度)
摘要:本研究首次探讨TIPE3对胰腺导管腺癌(Pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)增殖、侵袭、转移的影响,有助于深入理解PDAC恶性进展的分子生物学机制。本研究初步探讨胰腺癌细胞中TIPE3和MMP-9基因表达,以及在该过程中二者的关系,是否协同参与以及在胰腺癌侵袭、转移过程中各自的作用。
  本文主要从以下几方面进行论述:
  第一部分 TIPE3蛋白在PDAC中的表达及临床病理学意义
  目的:
  分析PDAC组织与癌旁正常组织标本中TIPE3蛋白的表达情况,并结合患者的临床病理资料分析TIPE3蛋白在PDAC中的表达特征,探讨其在PDAC发生、发展过程中的作用。
  方法:
  应用免疫组化2-step plus(@)法分别检测78例PDAC及78例相应癌旁组织中TIPE3蛋白的表达情况,观察其与患者临床病理参数之间的关系,采用SPSS计算机统计软件分析肿瘤及癌旁正常组织中TIPE3蛋白的表达差异,并结合临床病理特征分析TIPE3蛋白的表达与病人年龄、性别、肿瘤分化程度、肿瘤分期、淋巴结转移及远处转移的关系。
  结果:
  TIPE3蛋白在PDAC组织中的表达显著高于相应癌旁正常组织,差异具统计学意义;TIPE3蛋白在不同年龄、性别患者的PDAC组织中表达差异无统计学差异;TIPE3蛋白在Ⅰ、Ⅱ期PDAC组织中的表达显著低于Ⅲ、Ⅳ期PDAC组织,在无淋巴结转移的PDAC组织中表达显著低于有淋巴转移的PDAC组织,差异有统计学意义。
  结论:
  1、PDAC组织TIPE3蛋白表达水平显著高于相应癌旁正常组织,且与PDAC淋巴转移、TNM分期相关;
  2、提示TIPE3可能参与了PDAC的发生、发展过程。
  3、进一步基因水平的研究有助于寻找PDAC更佳的诊断和治疗方法。
  第二部分 TIPE3对PDAC细胞增值、侵袭及转移的影响
  目的:
  探讨TIPE3对PDAC细胞增值、侵袭及转移在mRNA和蛋白质水平上表达的影响。
  方法:
  1、首先用quantitative Real-time PCR技术在8种胰腺癌细胞株中筛选出TIPE3高表达细胞株和低表达细胞株,为后续实验做好准备;
  2、quantitative Real-time PCR技术检测在mRNA水平上TIPE3的表达效果;
  3、western blot实验检测在蛋白质水平上TIPE3的表达效果;
  4、CCK8实验检测对PDAC细胞增殖能力的影响;
  5、Transwell实验检测对PDAC细胞迁移能力及侵袭能力的影响;
  结果:
  1、TIPE3在胰腺癌细胞系PANC-1、Capan-1、CFPAC-1及AsPC-1中的表达检测
  通过quantitative Real-time PCR技术检测8种胰腺癌细胞系中TIPE3的表达情况,选取TIPE3表达最高的两种细胞系PANC-1及Capan-1和TIPE3表达最低的两种细胞系CFPAC-1及AsPC-1,为后续TIPE3高表达胰腺癌细胞系和TIPE3低表达细胞系分别进行TIPE3干扰实验TIPE3过表达实验做准备。
  2、在高表达TIPE3的胰腺癌细胞PANC-1及Capan-1中干扰TIPE3的表达,可显著抑制肿瘤细胞的恶性生物学行为。
  干扰TIPE3后,quantitative Real-time PCR技术检测在mRNA水平上TIPE3的表达效果,与正常胰腺细胞相比,可见胰腺癌细胞TIPE3表达明显减少;而干扰TIPE3后,western blot实验检测在蛋白质水平上TIPE3的表达效果,与正常胰腺细胞相比,可见胰腺癌细胞T1PE3表达明显减少。此两项实验从mRNA水平和蛋白质水平上均验证了干扰TIPE3后,均可明显降低胰腺癌细胞TIPE3的表达水平。干扰TIPE3后,CCK8实验检测对PANC-1细胞和Capan-1细胞增殖能力的影响,结果表明,与正常胰腺细胞相比较,干扰TIPE3可显著抑制PANC-1细胞和Capan-1细胞的增殖能力。干扰TIPE3后,Transwell实验检测对PANC-1细胞和Capan-1细胞迁移能力及侵袭能力的影响,结果表明,与正常胰腺细胞相比较, PANC-1细胞和Capan-1细胞的迁移及侵袭能力明显减弱。
  3、在低表达TIPE3的胰腺癌细胞CFPAC-1及AsPC-1中过表达TIPE3,可显著促进肿瘤细胞的恶行生物学行为。
  过表达TIPE3后, quantitative Real-time PCR技术检测在mRNA水平上TIPE3的表达效果,与正常胰腺细胞相比,胰腺癌细胞TIPE3表达显著增加;而过表达TIPE3后, western blot实验检测在蛋白质水平上TIPE3的表达效果,与正常胰腺细胞相比,胰腺癌细胞TIPE3表达明显增加。过表达TIPE3后,CCK8实验检测对CFPAC-1细胞和Capan-1细胞增殖能力的影响,结果表明,与正常胰腺细胞相比较,过表达TIPE3可显著增加CFPAC-1细胞和AsPC-1细胞的增殖能力。过表达TIPE3后,Transwell实验检测对CFPAC-1细胞和AsPC-1细胞迁移能力及侵袭能力的影响,结果表明,与正常胰腺细胞相比较,过表达TIPE3后CFPAC-1细胞和AsPC-1细胞的迁移及侵袭能力明显增强。
  结论:
  本部分旨在研究TIPE3对PDAC细胞增值、侵袭及转移在mRNA和蛋白质水平上表达的影响,首先通过quantitative Real-time PCR技术在8种胰腺癌细胞系中选取TIPE3表达最高的两种细胞系PANC-1及Capan-1进行TIPE3干扰实验,TIPE3表达最低的两种细胞系CFPAC-1及AsPC-1进行TIPE3过表达实验。然后通过CCK8实验、Transwell实验、quantitative Real-time PCR技术及western blot实验等四种方法分别进行检验TIPE3对PDAC细胞增值、侵袭及转移在mRNA和蛋白水平上的干扰和过表达效果。本部分结果显示,TIPE3可明显促进PDAC细胞增值、侵袭及转移,进一步丰富了TIPE3的理论知识,并为下一步研究TIPE3调控PDAC细胞恶性生物学行为的分子机制奠定了基础。
  第三部分 TIPE3和MMP-9在PDAC细胞中表达的相关性研究
  目的:
  探讨TIPE3和MMP-9在PDAC细胞中表达相关性,初步探讨TIPE3调控PDAC细胞恶性生物学行为的分子机制。
  方法:
  1.real-time PCR检测在mRNA水平上MMP-2,MMP-3,MMP-9的变化情况;
  2.ELISA检测蛋白质水平细胞培养上清中MMP-2,MMP-3,MMP-9的变化情况。
  结果:
  1、TIPE3在mRNA水平显著上调MMP-9表达。
  在高表达TIPE3的胰腺癌细胞系PANC-1细胞和Capan-1细胞中,干扰TIPE3表达后,real-time PCR检测在mRNA水平上MMP-2,MMP-3,MMP-9的变化情况,结果表明,相比较正常胰腺细胞,干扰TIPE3表达可明显抑制MMP-9的表达水平;在低表达TIPE3的胰腺癌细胞系CFPAC-1细胞和AsPC-1细胞中,过表达TIPE3后,real-time PCR检测在mRNA水平上MMP-2,MMP-3,MMP-9的变化情况,结果表明,与正常胰腺细胞相比较,过表达TIPE3可显著增加MMP-9的表达水平。
  2、TIPE3在蛋白质水平明显上调MMP-9表达。
  在高表达TIPE3胰腺癌细胞系PANC-1细胞和Capan-1细胞中,干扰TIPE3表达后,ELISA检测蛋白质水平细胞培养上清中MMP-2,MMP-3,MMP-9的变化情况,结果表明,与正常胰腺细胞比较,干扰TIPE3表达后,可显著抑制MMP-9蛋白的表达水平;在低表达TIPE3胰腺癌细胞系CFPAC-1细胞和AsPC-1细胞中,过表达TIPE3后,ELISA检测蛋白质水平细胞培养上清中MMP-2,MMP-3,MMP-9的变化情况,结果表明,与正常胰腺细胞比较,过表达TIPE3后,可明显增加MMP-9蛋白的表达水平。
  结论:
  本部分研究认为在胰腺癌细胞中,TIPE3可显著增强MMP-9活性,同时,MMP-9蛋白水解细胞外基质会使TIPE3释放入肿瘤侵入组织的接触点。因此,在胰腺癌细胞中,TIPE3增加MMP-9的活性可能对肿瘤的侵袭形成正反馈。TIPE3也可能通过加强MMP-9活性,增加MMP-9对细胞外基质的降解。TIPE3与MMP-9之间的相互作用可能在胰腺癌细胞分化过程中起着重要的作用。
  本部分研究的结果显示,在胰腺癌细胞中,MMP-9及TIPE3呈高表达,进而促进肿瘤的生长,转移及进展,并且二者之间有相互协同作用。另外,肿瘤组织中TIPE3与MMP-9高表达可能提示疾病临床预后不良。所以,临床上可以将它们作为胰腺癌患者判断预后的一个重要指标。有理由推测,通过检测尿液、血液等体液中的TIPE3和MMP-9含量来监测PDAC的发病或进展也是一个值得继续探究的发展方向。
[硕士论文] 邱夏
外科学 扬州大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  随着肿瘤微环境和肿瘤的免疫调节的研究逐渐深入,调节性T细胞(regulatory Tcell,Tregs)在肿瘤和自身免疫性疾病中的免疫机制成为研究热点。胸腺基质淋巴细胞(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)可以作用于树突状细胞促进Tregs细胞分化成熟。本研究将检测并分析在桥本氏甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis,HT)、甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)以及桥本氏甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌中,Tregs细胞的上游细胞因子TSLP的表达和Tregs细胞浸润相关的FOXP3表达情况,以及在桥本氏甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌中两者的相关性和临床病理意义。临床上桥本氏甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌的发病率逐年增高,它们合并存在的发病机制尚未明确,有研究表明可能与自身免疫调节有一定关系,本研究通过探讨在桥本氏甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌中,TSLP和FOXP3在免疫调节过程中所发挥的作用,为探索甲状腺中自身免疫性疾病合并恶性肿瘤的发病机制、临床诊断和治疗提供新的思路。
  方法:
  收集扬州大学附属苏北人民医院2012-2015年间在甲状腺乳腺外科接受手术治疗的部分甲状腺肿瘤患者189例,包括对照组结节性甲状腺肿25例、桥本氏甲状腺炎54例、甲状腺乳头状癌64例、合并桥本氏甲状腺炎的甲状腺乳头状癌46例。其中结节性甲状腺肿25例为阴性对照。患者术前均未接受甲状腺手术治疗、放射性碘治疗等。将收集的病人肿瘤组织标本按标准制作成石蜡切片,经HE染色和免疫组化SP法检测TSLP和FOXP3的表达情况。
  结果:
  1.TSLP在结节性甲状腺肿、单纯桥本氏甲状腺炎、单纯甲状腺乳头状癌、桥本氏甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌组织中表达的阳性率分别是8%(2/25)、83.3%(45/54)、82.8%(53/64),95.6%(44/46);与结节性甲状腺组相比,单纯HT组、单纯PTC组和HT合并PTC组的TSLP表达阳性率显著增高(x2=40.243,p=0.000; x2=42.620,p=0.000;x2=54.549,p=0.000),差别具有统计学意义。桥本氏甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌组的TSLP表达阳性率显著高于单纯HT组(x2=3.850,p=0.049)和单纯PTC组(x2=4.233,p=0.039),且差别具有统计学意义。
  2.FOXP3在结节性甲状腺肿、单纯桥本氏甲状腺炎、单纯甲状腺乳头状癌、桥本氏甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌组织中表达的阳性率分别是16%(4/25)、70.3%(38/54),60.9%(39/64),89.1%(41/46)。与结节性甲状腺肿相比,单纯桥本氏甲状腺炎组、单纯甲状腺乳头状癌组、桥本氏甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌组的组织中FOXP3阳性表达率显著增高,且差别具有统计学意义(x2=20.288,p=0.000; x2=13.538,p=0.000; x2=37.322,p=0.000)。HT合并PTC组的FOXP3的表达阳性率显著高于单纯HT组(x2=5.269,p=0.022)和单纯PTC组(x2=4.233,p=0.001),且差别具有统计学意义。
  3.临床资料分析示,桥本氏甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌组中TSLP的表达阳性率与是否有淋巴结转移有关(x2=3.920,p=0.048),且差别具有统计学意义,TSLP表达与性别、年龄、肿瘤大小以及TNM分期无关(x2=1.012,p=0.314; x2=2.971,p=0.085;x2=0.915,p=0.339;22=6.509,p=0.011)。FOXP3的表达阳性率与是否有淋巴结转移(x2=10.518,p=0.001)和临床TNM分期(x2=1.012,p=0.314)相关,且差别具有统计学意义。FOXP3表达阳性率与性别、年龄、肿瘤大小无关(x2=0.139,p=0.709; x2=0.809,p=0.368; x2=2.374,p=0.123)。
  4.在桥本氏甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌中TSLP和FOXP3的阳性表达率呈正相关,且具有统计学意义(r=0.610,p=0.000)。
  结论:
  TSLP和调节性T细胞浸润相关的FOXP3在桥本氏甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌中的表达与淋巴结转移相关,FOXP3的表达还与临床TNM分期相关,与年龄、性别、肿瘤大小无关。TSLP和FOXP3在桥本氏甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌中的表达呈正相关,两者在这一疾病中发挥着协同作用,可能参与了桥本氏甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌的免疫逃逸和免疫抑制过程,并可能对桥本氏甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌的发生、发展和转移有一定影响。
[博士论文] 费徐峰
农业遥感与信息技术 浙江大学 2017(学位年度)
摘要:背景:
  癌症的发生与自然环境的污染和社会环境的变化息息相关。近几十年来,作为内分泌系统中最常见的癌症,甲状腺癌在全世界范围内表现出快速的增长过程,已经成为一个重要的公共卫生问题。相关的医学、公共卫生部门对此开展了大量的研究。然而,几乎没有学者从时空分布和土壤、地理环境的角度来认识和研究这个重要的公共健康问题。由于癌症的致病机理十分复杂,通过怎样的方法和技术手段对癌症和环境数据进行有效的挖掘,从而提取有用的信息,是我们亟待解决的问题。地理信息系统相关方法和技术的发展使我们可以综合利用医学、流行病学、环境地理学、数学、计算机学等多种学科的知识理论来研究癌症的时空分布规律,分析癌症的发生、流行与环境因子的关系。
  方法:
  本研究选取杭州为具体研究区域,包括杭州市全部的8个城区和5个县(包括县级市),共计200个乡镇街道,常住人口约为870万。本研究以杭州地区2008至2012年间所有新发的甲状腺恶性肿瘤(International Classification of Disease10th edition(ICD-10)code: C73)为研究对象,首先在计算年龄标化发病率的基础上,通过卡方检验和泊松回归比较不同地区、人群发病风险的差异。其次,通过全局自相关分析,热点分析,局部聚集性和异常值探测,空间、时空和时空动态扫描统计,来探索发病率在空间和时空上的聚集性、分布规律和变化趋势。然后通过地理探测器分析地形因子和土壤属性对甲状腺恶性肿瘤发病影响的大小,最后,结合社会经济统计数据、工业密度和乳腺癌发病数据,采用基于时空随机场的贝叶斯最大熵预测方法和整合性发病预测准则,定量评价不同风险因子对甲状腺恶性肿瘤发病影响的大小以及这种影响的时空分布模式。
  结果:
  2008-2012年间杭州市甲状腺恶性肿瘤发病率存在极显著的上升趋势,年均增长率为34.47%。女性发病率是男性的3.2倍,城市街道地区人群的发病率显著高于乡镇地区,是小城镇地区人群发病率的1.8倍,是农村地区人群发病率的3.1倍。此外,碘背景正常地区人群发病率最高,为缺碘地区人群的2.7倍,严重缺碘地区人群的2.2倍。甲状腺恶性肿瘤在时空上有明显的聚集性特征,主城区为甲状腺恶性肿瘤的高发地区,西南大部分地区为低发地区;临平街道为空间上的发病异常值,是显著的高低聚集区;城区以北部分地区增长速率明显高于其它地区。地形(海拔和坡度)和土壤因子(土壤母质、有机质和总氮含量)均对发病率的分布存在显著影响,其中土壤母质和海拔高度对甲状腺恶性肿瘤在空间上的分布决定强度(PD)较大,冲积母质与湖沼相母质地区的发病率高于残坡积母质地区的发病率;发病率随着海拔的升高呈现明显的下降趋势。社会经济因子与发病率也存在显著相关性:相对于社会经济条件差的地区,生活在中等地区(相对风险:2.29,95%置信区间:1.99-2.63)和优越地区(相对风险:3.67,95%置信区间:3.22-4.19)人群的甲状腺恶性肿瘤发病风险显著增高。结合贝叶斯最大熵结果来看,社会经济对甲状腺恶性肿瘤的影响不论在总体和局部上都存在正相关,同时最强的社会经济-甲状腺恶性肿瘤联系存在于东部从西南到东北的条带上。研究无论从总体还是局部均未发现工业密度和甲状腺恶性肿瘤之间明确的关系,此外女性乳腺恶性肿瘤和甲状腺恶性肿瘤在研究区内存在很强的时空关联性,说明当人群表现出高的乳腺恶性肿瘤发病率时,其甲状腺恶性肿瘤的发病风险也会较高,反之亦然。
  结论:
  甲状腺恶性肿瘤发病率的快速增长是由过度诊断(over-diagnose)和真实的环境风险因子暴露共同引起的,需要引起学者、公共卫生管理部门和社会的高度重视,在关注过度诊断对其发病率影响的同时加强对其它环境致病因子的研究,制定相应的控制和预防策略。杭州甲状腺恶性肿瘤的发病率在不同人群和地区之间分布的差异极大,在研究其致病机理、发病风险、预防和干预策略时,应更加关注高风险人群和地区,展开目的性更加明确的调查研究。另外,临平街道为空间上的发病异常值,需要引起足够的重视。杭州城区以北部分地区增长速率明显高于其它地区,也需引起足够的重视并探索其高增长的原因。社会经济因子通常用于指示医疗水平的高低,杭州地区社会经济-甲状腺恶性肿瘤之间的联系表明过度诊断至少是当地甲状腺癌高发的一个原因。最强的社会经济-甲状腺恶性肿瘤联系存在于东部从西南到东北的条带上,这块是需要重点关注过度诊断问题的区域。考虑到本研究采用工业密度来表示当地工业污染的暴露水平,缺少具体污染物种类和浓度信息,后续研究需要结合缺失的污染物数据来进一步验证具体污染物与甲状腺癌风险之间的关系。乳腺癌所代表的女性的激素水平、生产生殖因子可能是造成甲状腺恶性肿瘤高发的原因。对于公共卫生管理部门来说,当发现某地甲状腺或者乳腺癌发病率较高时,则更应关注另一种癌症的风险。
[硕士论文] 王尔黎
外科学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  桥本氏甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌的现象越来越多的被人们发现,为了探究桥本氏甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌的临床特点,将其与单纯甲状腺乳头状癌进行比较和分析,从而加深对该疾病的认知,并为更好的诊断、治疗及预后评估提供依据。
  方法:
  回顾性分析山西医科大学附属山西省肿瘤医院2015年11月到2016年11月经头颈外科手术治疗且病理证实为桥本氏甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌57例,分为A组,单纯甲状腺乳头状癌116例,分为B组。对比两组病例在性别、年龄、肿瘤大小、术前TSH水平、微小癌发生率、中央组淋巴结转移率、TNM分期方面的特点。
  结果:
  1、A组中女性患者50例,占该组87.7%,B组中的女性患者为76例,占该组65.5%, P<0.000,差异有统计学意义。
  2、A组患者年龄为42.3±13.6岁,B组患者年龄为45.7±14.5岁,P=0.142,差异无统计学意义。
  3、A组患者肿瘤大小为1.46±0.87cm,B组患者肿瘤大小为2.02±1.21cm,P<0.000,差异有统计学意义。
  4、A组患者术前TSH水平为2.34±2.12mIU/L,B组患者为1.73±1.56 mIU/L, P=0.028,差异有统计学意义。
  5、A组患者微小癌发生率为42.1%,B组为37.1%,P=0.523,差异无统计学意义。
  6、A组患者中央组淋巴结转移率为24.6%,B组患者淋巴结转移率为45.7%, P=0.007,差异有统计学意义。
  7、TNM分期情况为:A组Ⅰ期患者43人,占该组的75.4%,Ⅱ期患者3人,占该组的5.3%,Ⅲ期患者6人,占该组的10.5%,Ⅳ期患者5人,占该组8.8%;B组Ⅰ期患者35人,占该组的30.2%,Ⅱ期患者24人,占该组20.7%,Ⅲ期患者39人,占该组的33.6%,Ⅳ期患者18人,占该组的15.5%。A组Ⅰ/Ⅱ期患者46人,占该组80.7%;B组Ⅰ/Ⅱ期患者59人,占该组50.9%,P<0.000,差异有统计学意义。
  结论:
  桥本氏甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌更好发于女性患者,术前TSH水平明显高于单纯PTC患者,该指标可能协助区分两种疾病,并且具有肿瘤直径更小、中央组淋巴结转移率更低、临床分期更早的特点,提示HT可能起到限制PTC原发灶生长及淋巴结转移的作用。
[硕士论文] 李一可
外科学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  明确B-RAFV600E与p-Erk、Mps1在甲状腺癌及结直肠癌中的相关性及其与患者临床参数和预后的关系。
  方法:
  提取甲状腺癌及结直肠癌患者肿瘤标本DNA进行Sanger测序,统计学分析B-RAFV600E与两种恶性肿瘤临床参数和术后生存的关系;采用免疫组化技术检测B-RAFV600E与B-RAFWT病例中p-Erk与Mps1的蛋白表达水平,分析B-RAFV600E、p-Erk与Mps1三者相关性。
  结果:
  1、甲状腺癌病例中B-RAFV600E突变率为34.1%,与甲状腺癌患者的年龄、肿瘤大小及淋巴结转移显著相关,生存分析发现B-RAFV600E与B-RAFWT患者总体生存率无明显差别。与野生型相比,B-RAFV600E的甲状腺癌中Mps1的表达显著增高,且与p-Erk的表达不具有相关性;
  2、结直肠癌病例中B-RAF突变率为5.2%,B-RAFV600E与结直肠癌分化程度及病理类型有关;p-Erk、Mps1在B-RAFV600E的结直肠癌中阳性率明显高于B-RAFWT结直肠癌病例;p-Erk与Mps1表达具有显著相关性,且与分化水平及病理分型、有无淋巴结转移密切相关,Kaplan-Meier生存分析发现B-RAFV600E比B-RAFWT患者术后总体生存率低。
  结论:
  甲状腺癌中 B-RAFV600E与 Mps1的表达密切相关,但不依赖传统的RAS/RAF/MEK/ERK信号通路,而是可能通过其他信号通路调节 Mps1的表达。结直肠癌中 B-RAFV600E与低分化腺癌,尤其是粘液腺癌相关;相比 B-RAFWT患者,B-RAFV600E患者术后总体生存率降低;B-RAFV600E/p-Erk可作为指导结直肠癌临床治疗和评估预后的相关指标;p-Erk与Mps1的表达在结直肠中成正相关,Mps1可能成为结直肠癌临床治疗的新靶点。有关 Mps1相关的具体分子机制可继续进一步深入研究,为相关癌症的分子治疗提供新的理论基础。
  本课题为国家自然科学基金“Mps1基因在携带 B-RAFV600E突变型恶性肿瘤靶向治疗中的作用(编号:81201956)”。
[硕士论文] 马竞优
临床医学 内蒙古民族大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  检测Notch-1和Numb蛋白在乳头状甲状腺癌和颈部转移淋巴结中的表达并探讨其临床意义;
  方法:
  选取我院2010年11月—2015年11月期间手术切除的69例患者的标本,所有病例临床资料完整,包括69例癌组织、癌旁组织和34例颈部转移淋巴结组织标本,用免疫组织化学SP法检测69例乳头状甲状腺癌患者癌组织、癌旁组织和34例颈部转移淋巴结组织中Notch-1和Numb蛋白的阳性表达情况。应用SPSS21.0统计学软件对实验结果计数资料和相关性进行统计学分析。
  结果:
  1.Notch-1蛋白在乳头状甲状腺癌中的阳性表达率与癌旁组织比较明显降低,差异有统计学意义(p<0.05);与患者的年龄、性别、TNM分期和有无淋巴结转移无关,差异无统计学意义(p>0.05);Notch-1蛋白的阳性表达率与患者的肿瘤大小、有无包膜外侵犯有关,差异有统计学意义(p<0.05)。表明肿瘤直径较大、有包膜外侵犯的肿瘤,Notch-1蛋白的阳性表达更高,差异有统计学意义(p<0.05)。
  2.Numb蛋白在乳头状甲状腺癌组织中的阳性表达率与癌旁组织比较明显升高,差异有统计学意义(p<0.05);与患者的年龄、性别无关,差异无统计学意义(p>0.05);Numb蛋白的阳性表达率与患者的肿瘤大小、有无包膜外侵犯、淋巴结转移有关,差异有统计学意义(p<0.05)。表明直径较大、有肿瘤外侵犯、有淋巴结转移的肿瘤,Numb蛋白的阳性表达更高,差异有统计学意义(p<0.05)。
  3.Notch-1和Numb蛋白在乳头状甲状腺癌组织中表达呈负相关(r=-0.261,p<0.05)。
  4.Notch-1和Numb蛋白转移淋巴结组织中的阳性表达率与癌组织比较,差异无统计学意义(p>0.05)。转移淋巴结组织与癌旁组织比较,Notch-1和Numb蛋白的阳性表达比较,差异有统计学意义(p<0.05)。
  结论:
  Notch-1和Numb蛋白的异常表达可能与乳头状甲状腺癌的发生、发展、侵袭转移有关。Numb和Notch-1蛋白分别在PTC和颈部转移淋巴结两组织之间比较,差异无统计学意义,提示PTC在颈部淋巴结转移过程中恶性程度无明显变化,生物学行为可能保持着相对稳定。
[硕士论文] 李江平
影像医学与核医学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  应用唾液腺动态显像定量评价大剂量131I治疗时,维生素C及氨磷汀对DTC患者唾液腺的保护作用,通过131I Rx-WBS及颈部SPECT/CT检查观察氨磷汀对131I清甲治疗效果的影响。
  方法:
  63例术后拟行131I治疗的DTC患者,年龄20-67岁,随机分为两组,维生素C组(32例):口服131I后2小时起含化维生素C片100mg/2h,600-800mg/d,连用7天。维生素C+氨磷汀联合组(31例):口服131I前静脉滴注氨磷汀400mg,同时予维生素C,用法同上。所有患者于131I治疗前1天和治疗后6月行唾液腺核素动态显像,通过参数UR20、EF、EP、ER对唾液腺功能进行定量评价,按 WHO标准对口干燥症进行分级,评价两种方法对唾液腺功能的保护作用。于131I治疗后第5-7天行131IRx-WBS及颈部SPECT/CT检查,评价氨磷汀对DTC患者131I清甲治疗效果的影响。
  结果:
  1、与131I治疗前相比,治疗后6个月维生素C组患者唾液腺功能参数变化。
  ①腮腺摄取分数、排泌分数分别下降了0.02%(-0.06~0.07%)、-0.80%(-8.38~5.05%),差异均无统计学意义(P>0.05),排泌时间延长了0.65(0.10~2.25)min,排泌率减低了4.10%(0.03~14.33%),差异均有统计学意义(P<0.05)。
  ②颌下腺摄取分数及排泌分数分别下降了-0.01%(-0.05~0.03%)、1.40%(-10.38~13.95%),差异无统计学意义(P>0.05),排泌时间延长了1.4(0.80~2.63)min,排泌率减低了11.45%(5.38~20.98%),差异均有统计学意义(P<0.05)。
  2、维生素C+氨磷汀联合组,与131I治疗前相比,治疗后6个月腮腺及颌下腺功能参数变化。
  ①腮腺ΔUR20、ΔEF分别降低了0.00%(-0.08~0.03%)、-2.95%(-4.53~1.08%),ΔEP延长了-0.05(-0.98~0.93)min、ΔER降低了-1.50%(-6.30~7.35%),差异均无统计学意义(P>0.05)。
  ②颌下腺ΔUR20、ΔEF分别降低了0.01%(0.03~0.0.05%)、-2.05%(-12.53~4.13%),ΔEP延长了-1.00(-2.85~0.00)min、ΔER降低了-8.79%(-19.80~0.55%),差异均无统计学意义(P>0.05)。
  3、两组患者131I治疗前后唾液腺功能参数差值比较,腮腺及颌下腺ΔUR20、ΔEF差异均无统计学意义(P>0.05),而ΔEP及ΔER差别均有统计学意义(P<0.05),可见131I治疗后6个月,两组患者腮腺及颌下腺的摄取功能均无明显差别,而维生素C组腮腺及颌下腺的排泌时间明显延长,排泌率明显减低。
  4、维生素C组及维生素C+氨磷汀联合组患者首次清甲成功率分别为70.00%、78.95%,两组相比差异无统计学意义(P=0.716),可见两组患者131I清甲治疗效果无显著差别。
  结论:
  大剂量131I治疗时维生素C对DTC患者唾液腺摄取功能具有一定的保护作用,氨磷汀联合维生素C对唾液腺损伤中腮腺、颌下腺的排泌功能具有更好的保护作用,氨磷汀对131I首次清甲治疗效果无明显影响。
[硕士论文] 董云伟
外科学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  探讨合并慢性淋巴细胞性甲状腺炎(Chronic Lymphocytic Thyroiditis, CLT)的甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)的临床病理特点,特别是淋巴结转移风险的情况。
  方法:
  连续收集2013年10月至2015年10月期间在北京协和医院行手术治疗、经病理确诊的4265例PTC患者的临床病理资料,分析其临床病理特点,通过单因素分析明确合并CLT的PTC患者独特的临床病理特点;通过单因素、多因素统计分析确定包括CLT在内的各临床病理指标是否是淋巴结转移、大量淋巴结转移的独立危险因素。
  结果:
  4265例PTC患者中,甲状腺微小乳头状癌(papillary thyroid microcarcinoma, PTMC)3059例(71.7%),伴CLT者1010例(23.7%)。合并CLT的PTC患者中,女性909例(90%)、中位年龄43岁、中位肿瘤长径0.8cm、多发灶624例(61.8%),侵犯被膜422例(41.8%),淋巴结转移429例(42.5%),大量淋巴结转移133例(13.2%)。与未合并CLT的PTC患者相比,合并CLT的PTC患者,女性比例多(90.0%vs70.2%,P<0.001);中位年龄低(43岁vs44岁,P=0.001);淋巴结转移率低(42.5%vs50.9%,P<0.001);肿瘤长径、多发灶比例、侵犯被膜率、大量淋巴结转移率并无显明差异(0.8cm vs0.7cm,61.8%vs62.9%,41.8%vs42.1%,13.2%vs14.5%,均P>0.05)。淋巴结转移多因素分析显示:CLT是PTC淋巴结转移的独立保护因素(OR=0.713,95%CI=0.609-0.835,P<0.001),但不是大量淋巴结转移的独立保护因素(OR=0.944,95%CI=0.750-1.188,P=0.621)。发生淋巴结转移的PTC患者中,合并CLT者的淋巴结转移数量与未合并者无差异(3个 vs3个,P=0.300)。
  结论:
  在合并CLT的PTC中,女性更多、更年轻、淋巴结转移率更低;CLT是PTC淋巴结转移的独立保护因素;但是发生转移的患者其淋巴结转移数量并未减少。
[硕士论文] 黄佳琦
内科学 汕头大学 2017(学位年度)
摘要:影响c-Myc的表达。由Lin28A、let-7a、c-Myc三者构成的信号通路可能参与调控甲状腺乳头状癌的生长和恶变等生物学行为。本研究或能为阐明甲状腺乳头状癌的发病机制进而指导个性化治疗途径提供新的思路。
  目的:
  研究Lin28A、let-7a、c-Myc三者在人甲状腺乳头状癌(Papillary Thyroid Carcinoma,PTC)细胞系TPC-1和BCPAP中表达水平的关系,探讨Lin28A-let-7a-c-Myc信号通路在甲状腺乳头状癌发生发展过程中的意义和机制,为临床上甲状腺乳头状癌的治疗提供新思路。
  方法:
  1.在甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1和BCPAP细胞株中采用细胞转染技术沉默Lin28A和过表达let-7a;
  2.采用qRT-PCR和westernblot方法,分别检测转染Lin28A-siRNA或转染let-7a mimic后,TPC-1和BCPAP细胞Lin28A、c-Myc以及let-7a的表达水平;
  3.采用CCK-8方法分别检测沉默Lin28A或过表达let-7a后TPC-1和BCPAP细胞增殖力的变化。
  4.采用Transwell方法分别检测沉默Lin28A或过表达let-7a后TPC-1和BCPAP细胞迁移、侵袭能力的变化。
  结果
  1.PTC细胞系TPC-1和BCPAP细胞沉默Lin28A的表达后,c-Myc RNA和蛋白表达下降,let-7a RNA表达升高。
  2.TPC-1和BCPAP细胞过表达let-7a后,Lin28A和c-Myc RNA以及蛋白表达水平下降。
  3.TPC-1和BCPAP细胞经沉默Lin28A或过表达let-7a后,细胞增殖率显著下降。
  4.TPC-1和BCPAP细胞经沉默Lin28A后,细胞迁移和侵袭能力显著下降。
  5.TPC-1和BCPAP细胞经过表达let-7a后,细胞迁移和侵袭能力显著下降。
  结论:
  在PTC细胞系中,Lin28A和let-7a之间可能形成一个双重负反馈调节通路,并且同时影响c-Myc的表达。由Lin28A、let-7a、c-Myc三者构成的信号通路可能参与调控甲状腺乳头状癌的生长和恶变等生物学行为。本研究或能为阐明甲状腺乳头状癌的发病机制进而指导个性化治疗途径提供新的思路。
[硕士论文] 周临娜
中医内科学(内分泌与代谢病研究) 南京中医药大学 2017(学位年度)
摘要:目的:探讨莪术油对阿霉素诱导耐药的人甲状腺未分化癌细胞株HTh74Rdox增殖和耐药性的影响及机制。
  方法:用不同浓度莪术油(0、60、90、120mg/L)处理HTh74Rdox24小时后,于倒置显微镜下观察细胞形态;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测莪术油对HTh74Rdox细胞增殖的抑制作用;细胞流式术(Flow cytomety,FCM)检测HTh74Rdox细胞周期变化和凋亡;蛋白质印迹法(Western Blot,WB)检测抑凋亡蛋白(Bcl-2)和促凋亡蛋白(Bax)的表达;荧光定量(Quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测多药耐药性基因1(Multi-drugresistance gene1,MDR1)和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ATP-binding cassette superfamilyG member2,ABCG2)信使核糖核酸(Messenger RNA,mRNA)的变化。
  结果:用不同浓度莪术油(0、60、90、120mg/L)处理HTh74Rdox24小时后,倒置显微镜下观察细胞形态可见,从莪术油浓度为60mg/L起有部分细胞脱离培养皿;随着莪术油处理浓度的增加,细胞密度系数降低,贴壁细胞数量减少,细胞形状由梭形变为碎片、颗粒,待莪术油浓度增加至120mg/L,细胞几乎全部脱离培养皿,细胞形状完全变为不规则形状,死亡的细胞凝结成团,细胞液可见浑浊。MTT结果显示:随着莪术油刺激浓度的升高,莪术油抑制HTh74Rdox细胞增殖的作用越来越强,具有时间依赖性(P<0.05)。流式结果显示:莪术油可诱导细胞凋亡,细胞表现为早期凋亡(P<0.01);Western Blot结果显示:莪术油可以增加Bax蛋白表达,可以抑制Bcl-2蛋白表达,使Bax/Bcl-2比值增加(P<0.05);qPCR:莪术油可使MDR1和ABCG2的mRNA表达减少。用单药莪术油、单药阿霉素或联合用药刺激HTh74Rdox细胞24小时后,MTT法分析示,2.0mg/L阿霉素+90ml/L莪术油组与2.0mg/L阿霉素+0ml/L莪术油组比较,均具有统计学差异(P<0.05),提示阿霉素与莪术油联用后,可增强阿霉素的细胞毒作用;当阿霉素用药浓度减少至1.0mg/L的时候,加入低浓度(45ml/L)莪术油后,与1.5mg/L阿霉素+45mg/L莪术油组比较,其细胞毒作用没有统计学意义(P>0.05),提示加入低浓度莪术油可减少阿霉素的用量,由此可见,莪术油对阿霉素具有明显的联合协同作用。
  结论:莪术油可以抑制HTh74Rdox细胞的生长、诱导其凋亡并改善其耐药作用,其机制可能分别与提高Bax/Bcl-2比值和降低MDR1、ABCG2 mRNA表达有关。
[硕士论文] 倪静
中西医结合临床医学 湖北中医药大学 2017(学位年度)
摘要:第一章高糖对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖及PI3K/Akt/Nrf2信号通路的影响
  研究目的:
  观察不同浓度葡萄糖对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖的促进作用;初步探讨高糖对甲状腺乳头状癌K1细胞核因子-E2相关因子2(nuclear factor erythroid2-related factor2, Nrf2)蛋白表达及核转位的影响并研究其可能的上游信号通路。
  研究方法:
  1.以不同浓度葡萄糖(5.5、10、25、50)mmol/L干预K1细胞,分别于12、24、36、48h采用MTT比色分析法检测各组K1细胞增殖率,同时设相同渗透压组作为对照。
  2.根据MTT结果,将甲状腺乳头状癌K1细胞分为正糖组(5.5mmol/L葡萄糖)、高糖组(25mmol/L葡萄糖)和高渗组(25mmol/L甘露醇),各组均分别于0、12、24、48h提取细胞,采用Western Blot法检测Nrf2、磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide3-kinase, PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)和磷酸化Akt(phosphorylated-Akt, p-Akt)表达水平;采用细胞免疫荧光法分析各组Nrf2在细胞内的分布情况;使用Spearman相关性分析法检测高糖作用下K1细胞增殖分别与Nrf2、PI3K蛋白和p-Akt/Akt的相关性。
  研究结果:
  1.随葡萄糖浓度升高,K1细胞增殖率改变,25mmol/L葡萄糖浓度下K1细胞增殖达到峰值(148.76±5.19)%,50mmol/l葡萄糖浓度时K1细胞增殖率下降(84.72±3.26)%,与5.5mmol/l葡萄糖浓度时K1细胞增殖率比较均有统计学差异(p<0.01)。
  2.同一葡萄糖浓度作用下随时间延长K1细胞增殖率发生改变,12h明显升高,24h达峰,随后下降。
  3.25mmol/L葡萄糖干预K1细胞24h时,K1细胞内Nrf2、PI3K和p-Akt/Akt表达及Nrf2在细胞核分布的比例(Nrf2:0.869±0.075、PI3K:0.783±0.020、p-Akt/Akt:0.480±0.048、Nrf2细胞核比例:91.2%,260/285)均达峰值,并且它们随时间的变化均与K1细胞增殖率变化同步。
  4. Spearman相关性分析表明高糖组Nrf2、PI3K及p-Akt/Akt表达均与K1细胞增殖率呈正相关,相关系数r分别为0.908、0.910、0.916, p<0.01。
  5.渗透压升高对K1细胞增殖及Nrf2、PI3K蛋白表达、p-Akt/Akt等均无明显影响(p>0.05)。
  研究结论:
  1.甲状腺乳头状癌K1细胞增殖率随葡萄糖浓度和作用时间的变化而改变,25mmo/l葡萄糖浓度作用24h时,K1细胞增殖率达高峰。
  2.高糖可能通过促进Nrf2表达及核转位,从而促进甲状腺乳头状癌K1细胞增殖,这可能与高糖上调K1细胞内PI3K/Akt信号通路有关。
  第二章小檗碱抑制高糖诱导的甲状腺乳头状癌K1细胞增殖及可能的机制
  研究目的:
  观察小檗碱对高糖诱导的甲状腺乳头状癌K1细胞增殖的抑制作用;探讨小檗碱对高糖诱导的甲状腺乳头状癌K1细胞Nrf2蛋白表达及核转位的影响,并初步探究其发挥作用的可能信号通路,以期为早期防治糖尿病合并甲状腺乳头状癌治疗提供新的思路和方法。
  研究方法:
  1.高糖(25mmol/L)加入不同浓度的小檗碱(0、10、40、80)μmol/L共同干预K1细胞24h时,采用MTT比色分析法检测各组K1细胞增殖情况,设正糖(5.5mmol/L)作为对照。
  2.采用Western blot检测各组Nrf2、PI3K、Akt、p-Akt表达水平,细胞免疫荧光法分析各组Nrf2在细胞内的分布,设正糖(5.5mmol/L)作为对照。
  研究结果:
  1.与正糖组比较,高糖组K1细胞增殖率、PI3K、p-Akt/Akt、Nrf2表达及Nrf2在细胞核分布的比例均显著升高(增殖率:(126.64±5.41)%vs(87.31±3.67)%; PI3K:(0.425±0.019)vs(0.272±0.039);p-Akt/Akt:(0.446±0.021)vs(0.168±0.035); Nrf2:(0.597±0.014)vs(0.308±0.026); Nrf2细胞核比例:(93.0%,265/285) vs(23.1%,45/195), p<0.01)。
  2.与高糖组比较,高糖加入10、40、80μmol/L小檗碱后各组K1细胞增殖率((111.76±4.10)%、(70.03±2.18)%、(32.41±3.76)%)均下降(p<0.05),80μmol/L小檗碱组增殖抑制作用最强,同时40μmol/L小檗碱组增殖抑制作用高于10μmol/L小檗碱组。
  3.高糖加入不同浓度小檗碱后各组PI3K、p-Akt/Akt、Nrf2表达及Nrf2在细胞核分布的比例,与高糖组比较均下调(p<0.05),且其变化均随小檗碱的浓度升高而更加显著。
  研究结论:
  小檗碱呈浓度依赖性抑制高糖诱导的K1细胞增殖,这可能与小檗碱抑制高糖诱导的PI3K/Akt信号通路过度激活从而下调Nrf2蛋白表达及核转位有关。
[博士论文] 于岁
内科学(内分泌与代谢病) 山东大学 2017(学位年度)
摘要:论文Ⅰ循环microRNA在甲状腺乳头状癌中的表达及诊断价值
  研究背景:
  在近几十年里,甲状腺结节的发生率有着明显的增加,主要归功于甲状腺超声检查应用的广泛普及。但是甲状腺良性结节占甲状腺结节的绝大部分,仅有极少数为恶性结节,需要行手术治疗。甲状腺恶性肿瘤中最常见的是甲状腺乳头状癌(PTC)。故而,甲状腺乳头状癌与甲状腺良性结节的鉴别是非常重要的,可以避免不必要的手术治疗。目前,甲状腺细针穿刺细胞学检查(FNAC)是鉴别甲状腺结节良恶性的金标准。但是,仍然有一小部分甲状腺结节因为各种原因不能通过FNAC明确病理诊断,可能会导致相对盲目的治疗和不必要的甲状腺手术。因此,提高鉴别甲状腺结节的准确性是急需解决的问题。
  MicroRNAs(miRNAs)是一类长约22nt的单链、非蛋白编码RNA,其广泛存在于真核细胞中,对基因具有调控功能。MicroRNA参与大多数的细胞过程,包括细胞的生长、分化、凋亡和粘附。越来越多的研究表明,miRNA在多种恶性肿瘤中表达异常,包括甲状腺乳头状癌。肿瘤细胞内的miRNA可以释放入循环中,并可以逃避降解被稳定获得。很多的研究已经显示出循环miRNA作为非侵入性的生物分子标志物在肿瘤诊断以及术后监测中的价值。然而,到目前为止,关于循环miRNA在甲状腺乳头状癌中表达情况的研究还很少,而且研究结果的一致性也较差。
  基于以上两点,我们考虑需要进行更多的研究来阐明甲状腺乳头状癌病人循环中miRNA的表达情况,并探讨其作为一种无创性的生物分子标志物在甲状腺结节术前鉴别诊断及乳头状癌术后监测中的价值。
  研究目的:
  1、明确甲状腺乳头状癌患者血液循环中miRNA的表达情况;
  2、筛选出可用于协助鉴别诊断甲状腺结节性质的循环miRNA指标;
  3、评估筛选出的循环miRNA在监测甲状腺乳头状癌复发方面的作用。
  研究方法:
  1、研究对象为在烟台毓璜顶医院甲状腺外科行甲状腺手术治疗的甲状腺结节病人,按照术后病理结果分为甲状腺乳头状癌组和甲状腺良性结节组(各组n=50)。正常对照组为在烟台毓璜顶医院查体中心选取的无甲状腺结节及甲状腺相关疾病的正常人(n=50)。
  2、标本采集:
  ①所有参与者的血浆样本;
  ②组织标本包括:部分PTC病人的癌组织样本、癌旁正常甲状腺组织样本及良性结节病人的甲状腺良性结节组织样本(各组n=27)。
  ③部分PTC病人术后4周的血浆样本(n=24)。
  3、提取血浆样本和组织样本的总RNA。
  4、对PTC组、甲状腺良性结节组及正常对照组血浆样本(每组n=3)中的miRNA表达谱采用miRNA芯片技术进行分析,并筛选出PTC循环血中异常表达的miRNA。
  5、对筛选出的异常表达的miRNA应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术在PTC组、良性结节组以及正常对照组血浆样本中进行进一步验证(每组n=50),并评估这些指标在甲状腺结节中的诊断价值。
  6、分析PTC临床病理特征(性别、年龄、肿瘤大小、是否有淋巴结转移、瘤体外浸润,肿瘤多灶性、肿瘤单侧或双侧、肿瘤分期及BRAF基因突变情况)与经上述验证在PTC循环中异常表达的miRNA的相关性。
  7、对于经过验证在PTC循环中异常表达的miRNA,通过qRT-PCR检测癌组织及癌旁正常甲状腺组织、良性结节组织中上述miRNA的水平(每组n=27),评估这些miRNA在组织中的表达与在血浆中的表达是否一致。
  8、随访行甲状腺癌全切术后的患者(n=24),通过qRT-PCR检测患者术后4周血浆中经上述验证在PTC循环血中表达明显上调的miRNA的水平,与患者术前血浆中miRNA水平进行比较,评估这些miRNA对判断PTC复发的价值。
  研究结果:
  1、应用microRNA芯片技术筛选出的在甲状腺乳头状癌组异常表达的miRNA应用miRCURYTM LNA Array(Exiqon)芯片检测PTC组、良性结节组及正常对照组中血循环中miRNA的表达水平。结果显示,957个miRNA在三组样本中均有表达。对这些miRNA进行进一步数据分析发现,与正常对照组和良性结节组相比,miR-124-3p,miR-9-3p,miR-5691在PTC组中表达均显著增高,而miR-4701-3p,miR-196b-5p表达则显著降低(P<0.05)。
  2、经qRT-PCR验证的在甲状腺乳头状癌中表达异常的miRNA
  对各组标本进行qRT-PCR检测进一步验证上述miRNA的表达水平,结果发现, PTC组中miR-124-3p和miR-9-3p表达显著高于正常对照组和良性结节组(P<0.05),该两项指标在良性结节组和正常对照组中表达水平无统计学差异。miRNA-5691虽然在PTC组样本中呈表达上调,但是其在血浆中含量非常低,会导致较差的特异性和敏感性,故未进行验证。miR-4701-3p在三组中的表达水平无统计学差异;miR-196b-5p在良性结节组中的表达水平明显高于其他两组(P<0.05),而在PTC组和正常对照组间表达水平无统计学差异。
  3、循环miRNA对甲状腺结节的鉴别诊断价值
  应用ROC分析了miR-124-3p,miR-9-3p和miR-196b-5p的诊断价值,
  ①我们比较了miR-124-3p在PTC组与良性结节组中的表达,显示出ROC曲线下面积为0.831[其95%可信区间为0.747-0.915],以2.04为截断点时显示出88%的敏感性和76%的特异性。
  ②miR-9-3p在PTC组与良性结节组中的表达,显示出ROC曲线下面积为0.753[其95%可信区间为0.657-0.849],以2.09为截断点时显示出70%的敏感性和64%的特异性。
  ③在良性结节患者与PTC患者的分析比较中,miR-196b-5p显示出ROC曲线下面积为0.781[其95%可信区间为0.690-0.872],以1.545为截断点时显示出74%的敏感性和66%的特异性。
  4、循环miRNA的表达与临床病理特点之间的关系
  根据年龄、性别、肿瘤相关病理特点和BRAF基因突变对研究对象进行亚组分组,进一步分析miR-124-3p,miR-9-3p和miR-196b-5p在不同亚组中的表达水平。结果显示,miR-124-3p在年轻患者(年龄小于45岁)和肿瘤直径大于2cm的患者中呈高表达。miR-9-3p在年轻患者中也表现出明显的表达增高。miR-196b-5p与肿瘤临床病理特点无相关性。
  5、miR-124-3p,miR-9-3p和miR-196b-5p在甲状腺组织中的表达
  为观察甲状腺组织中miRNAs表达水平是否与循环miRNA表达变化一致,进一步分析了PTC组织、癌旁正常甲状腺组织和甲状腺良性结节组织中miR-124-3p,miR-9-3p和miR-196b-5p的表达水平。检测结果表明:与甲状腺良性结节组织及正常甲状腺组织相比,miR-124-3p和miR-9-3p在PTC组织中的表达水平明显增高。miR-196b-5p在良性甲状腺结节组织中的表达水平呈明显升高。结果与在血浆中的表达情况一致。
  6、miR-124-3p和miR-9-3p在甲状腺癌术后表达情况
  为评估PTC中表达异常增高的miR-124-3p和miR-9-3p在监测肿瘤复发中的价值,进一步检测了PTC患者甲状腺全切除术后4周的循环miR-124-3p和miR-9-3p表达水平。结果显示:循环miR-124-3p和miR-9-3p在术后4周均较术前明显下降,分别下降为术前水平的36%和24%(P<0.05)。
  结论:
  1、循环中miR-124-3p和miR-9-3p表达水平在甲状腺乳头状癌患者中增高,与肿瘤组织中表达水平呈一致性变化,在鉴别甲状腺结节的良恶性中有较高的诊断价值;
  2、循环miR-196b-5p在甲状腺良性结节患者中的表达水平明显高于甲状腺乳头状癌和正常对照者,在鉴别甲状腺结节良恶性中也有较好的诊断价值;
  3、miR-124-3p和miR-9-3p或许可以作为甲状腺乳头状癌患者甲状腺全切术后肿瘤复发的监测指标
  关键词:甲状腺乳头状癌;循环miRNA; miR-124-3p; miR-9-3p; miR-196b-5p
  论文Ⅱ血清TK1在中国东部沿海地区甲状腺乳头状癌诊断以及术后监测中的潜在作用
  研究背景:
  癌症已经成为现代人类生活中的主要疾病之一,也是导致人类死亡的主要疾病。调查显示癌症的发生率在逐年上升。甲状腺恶性肿瘤中最常见的是甲状腺乳头状癌(PTC),近年PTC的发生率也在显著升高。因此,早期发现和早期诊断甲状腺乳头状癌是非常重要的,可以避免治疗的延误以及不必要的甲状腺切除手术。随着甲状腺超声及甲状腺细针穿刺细胞学检查(FNAC)的广泛应用,甲状腺乳头状癌的诊断准确率明显升高,但仍有一小部分甲状腺乳头状癌与甲状腺良性结节难以区分,以至于被漏诊或误诊。因此,近年来很多的研究者专注于与甲状腺乳头状癌相关的分子生物标志物的研究,期待通过这些生物标志物的辅助来早期发现、诊断及监测甲状腺乳头状癌。
  胸苷激酶1(TK1)存在于细胞质中,是嘧啶代谢途径中的关键酶之一。TK1与细胞异常增殖有关,很多的研究已经发现血清TK1在健康人群中可以作为恶性肿瘤风险筛查的一种稳定的生物标志物。也有很多的研究证实血清TK1在多种类型恶性肿瘤中的水平呈明显升高。然而,到目前为止,仅有两项关于血清TK1与甲状腺恶性肿瘤的研究,均显示与正常人相比血清TK1在甲状腺癌中的水平明显升高,但这两项研究均没有阐明血清TK1在甲状腺良性结节中的水平。
  基于以上两点,我们考虑需要进行更多的研究来探讨血清TK1作为一种无创性的生物标志物在甲状腺乳头状癌早期发现、早期诊断及术后监测中的价值。
  研究目的:
  1、检测甲状腺乳头状癌病人及甲状腺良性结节病人血清TK1的水平
  2、评估血清TK1在甲状腺乳头状癌早期发现、早期诊断及术后监测中的价值。
  研究方法:
  1、研究对象为在烟台毓璜顶医院甲状腺外科行甲状腺手术治疗的甲状腺结节病人,按照术后病理结果分为甲状腺乳头状癌组(n=385)和良性结节组(n=384)。正常对照组为在烟台毓璜项医院查体中心选取的无甲状腺结节及甲状腺相关疾病的正常人(n=100)。
  2、标本采集:
  ①所有参与者的血清样本
  ②部分甲状腺乳头状癌病人(n=123)术后4周的血清样本
  ③部分PTC病人的癌组织样本(n=300)
  3、应用酶免疫点印迹化学发光法检测甲状腺乳头状癌组、良性结节组及正常对照组血清样本中的人细胞质胸苷激酶1浓度,分析血清TK1在三组中的浓度差异。并评估血清TK1在甲状腺乳头状癌诊断中的价值
  4、应用qRT-PCR检测甲状腺癌组织(n=300)中的BRAFV600E基因突变情况。
  5、分析甲状腺乳头状癌的临床病理特征(年龄、性别、肿瘤的大小、是否有瘤体外浸润、淋巴结转移,肿瘤多灶性、肿瘤单侧或双侧、肿瘤分期及BRAF基因突变情况)与血清TK1的相关性。
  6、分析甲状腺乳头状癌病理类型与血清TK1的相关性。
  7、随访行甲状腺癌切除术后的患者(n=123),检测患者术后4周血清TK1的水平,与患者术前血清TK1水平进行比较,评估血清TK1对判断甲状腺乳头状癌复发的价值。
  研究结果:
  1、三组入选者临床特点
  甲状腺乳头状癌组病人血清TSH水平高于良性结节组病人,而血清FT3水平低于良性结节组病人但高于正常对照者。三组入选者其他临床特点无明显差异。
  2、甲状腺乳头状癌组、良性结节组及正常对照组中血清TK1的水平
  经检测,血清TK1浓度在甲状腺乳头状癌组中明显高于甲状腺良性结节组和正常对照组,差异具有统计学意义。而且,甲状腺良性结节组中的血清TK1浓度也明显高于正常对照组。
  3、血清TK1对甲状腺乳头状癌的诊断价值
  应用ROC分析了血清TK1的诊断价值,血清TK1在甲状腺乳头状癌病人与正常对照者的鉴别诊断中表现出高度敏感性和特异性,而且在鉴别甲状腺良性结节病人与正常对照者中也表现出较好的敏感性和特异性。但无法鉴别甲状腺乳头状癌与甲状腺良性结节病人。
  4、血清TK1的水平与甲状腺乳头状癌临床病理特点之间的关系
  分析了不同亚组中血清TK1的浓度,这些亚组是根据年龄、性别、肿瘤相关病理特点和BRAF基因突变进行的分组。血清TK1浓度在有淋巴结转移的PTC亚组中呈明显增高。
  5、血清TK1水平与甲状腺乳头状癌的病理类型之间的关系
  分析了不同病理类型甲状腺乳头状癌病人血清TK1的浓度,发现其无明显差异。
  6、甲状腺乳头状癌病人术后血清TK1浓度变化
  检测了甲状腺乳头状癌病人术后4周血清TK1的水平,结果呈明显下降。
  结论:
  1、甲状腺乳头状癌病人血清TK1浓度明显高于甲状腺良性结节病人和正常对照者。且甲状腺术后,血清TK1水平明显下降。
  2、血清TK1浓度在甲状腺乳头状癌与正常对照者的鉴别中有较高的诊断价值,敏感性和特异性均较高。但无法鉴别甲状腺良恶性结节。
  3、血清TK1或许可以作为中国东部沿海地区病人甲状腺乳头状癌早期发现、早期诊断及术后监测的潜在辅助工具。
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