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[硕士论文] 赵柯郁
生物工程 内蒙古大学 2017(学位年度)
摘要:乳脂是牛奶中重要的营养成分之一,乳脂含量是衡量牛奶质量的重要指标。乳脂合成受到多种信号通路的调节,其中雷帕霉素靶蛋白(the mechanistictarget of rapamycin,mTOR)信号通路对乳脂合成发挥着重要的调控作用。mTOR是一种丝/苏氨酸激酶,属于磷酸肌醇3(phosphatidylinositol3-kinase-related kinase,PIKK)蛋白激酶家族。mTOR作为核心组分与其他不同蛋白形成两种复合物,mTOR complex1(mTORC1)和mTOR complex2(mTORC2)。mTORC1和mTORC2在胞内发挥不同的作用,mTORC1主要在调控细胞的增殖、代谢及蛋白合成等方面发挥作用;mTORC2则参与调控细胞骨架、细胞迁移及代谢等过程。目前,关于mTORC1在乳脂合成调控方面的研究报道比较多,而mTORC2尚显不足,二者在奶牛乳腺上皮细胞中对乳脂合成的调控作用对比也鲜有报道。本实验利用实验室分离并纯化得到的奶牛乳腺上皮细胞作为研究模型,首先应用ATP竞争性mTOR抑制剂AZD8055处理细胞,同时抑制mTORC1和mTORC2活性,Western blot检测各组mTORC1和mTORC2信号通路活性,同时利用ELISA检测各组细胞培养液中甘油三酯(TG)、软脂酸(PA)、二十二碳六烯酸(DHA)含量;其次,一方面利用mTORC1特异性抑制剂rapamycin处理细胞,抑制mTORC1信号通路活性,并利用RNA干扰技术靶向沉默mTORC1核心组分raptor基因来抑制mTORC1活性;另一方面靶向沉默mTORC2核心组分rictor基因来抑制mTORC2活性。利用Western blot检测各组mTORC1和mTORC2信号通路活性,同时利用ELISA检测各组细胞培养液中甘油三酯(TG)、软脂酸(PA)、二十二碳六烯酸(DHA)含量,再利用质谱检测rapamycin处理组,rictor基因沉默组胞内各类脂肪酸的含量;最后,对比在mTORC1和mTORC2都被抑制的情况下和mTORC1、mTORC2分别被抑制情况下TG、PA、DHA含量变化,对比分析mTORC1和mTORC2在乳脂合成中的作用。
  本研究主要内容包括:⑴用AZD8055处理细胞后,MTT法检测显示100 nMAZD8055处理12h,100nMAZD8055处理24h,200nMAZD8055处理12h和200nMAZD8055处理24 h时均可抑制细胞增殖,其中200nM处理24h组效果最显著(p<0.05); Western blot结果显示,用AZD8055处理细胞后,mTORC1和mTORC2活性均被抑制(p<0.05); ELISA结果显示对照组细胞培养液中的TG、PA和DHA含量分别为19.26±0.85 mmol/L、28.89±1.59 ng/ml和258.75±22.1 pg/ml,100 nM AZD8055处理24 h组细胞培养液中TG、PA和DHA含量分别为16.07±2.05 mmol/L、22.68±3.2 ng/ml和188.63±14.57 pg/ml,200 nM AZD8055处理12 h组细胞培养液中TG、PA和DHA含量分别为14.74±2.61 mmol/L、19.54±1.53 ng/ml和183.82±26.94 pg/ml。和对照组相比,处理组细胞培养液中TG、PA和DHA含量均显著降低(p<0.05);⑵利用rapamycin处理抑制mTORC1活性,对照组细胞培养液中的TG、PA和DHA含量分别为5.42±0.08 mmol/L、2.74±0.13 ng/ml和403.3±11.17 pg/ml,细胞内31种脂肪酸总量3070.54±105.07 mg/kg;100 nM rapamycin处理8h组细胞培养液中TG、PA和DHA含量分别为4.53±0.13 mmol/L、2.74±0.13 ng/ml和297.82±20.8 pg/ml,细胞内31种脂肪酸总量2844.23±282.92 mg/kg。和对照组相比,处理组细胞培养液中TG、PA和DHA含量均显著降低(p<0.05),细胞内31种脂肪酸总量降低,但差异不显著(p>0.05);⑶靶向siRNA沉默Raptor基因,抑制mTORC1活性,对照组细胞培养液中的TG、PA和DHA含量分别为8.54±0.8 mmol/L、15.37±1.85 ng/ml和527.99±32.67 pg/ml,Raptor基因沉默组细胞培养液中的TG、PA和DHA含量分别为6.56±0.42 mmol/L、11.07±1.46ng/ml和331.84±48.02 pg/ml。和对照组相比,处理组细胞培养液中TG、PA和DHA含量均显著降低(p<0.05);⑷靶向siRNA沉默Rictor基因,抑制mTORC2活性,对照组细胞培养液中的TG、PA和DHA含量分别为3.4±0.43 mmol/L、8.91±1.14 ng/ml和109.47±7.46 pg/ml,细胞内31种脂肪酸总量3070.54±105.07mg/kg; Rictor基因沉默组细胞培养液中的TG、PA和DHA含量分别为2.49±0.24mmol/L、6.93±0.14 ng/ml和55.74±6.01 pg/ml,细胞内31种脂肪酸总量3028.66±120.05mg/kg。和对照组相比,处理组细胞培养液中TG、PA和DHA含量均显著降低(p<0.05),细胞内31种脂肪酸总量降低,但差异不显著(p>0.05);⑸三种方法对比mTORC1和mTORC2在TG、PA和DHA合成中的作用。一方面根据TG、PA和DHA抑制率分析,对TG、PA和DHA合成的作用mTORC2> mTORC1;另一方面综合考虑通路活性以及TG、PA和DHA抑制率,对TG和DHA作用 mTORC2>mTORC1,对PA作用 mTORC1>mTORC2。
[硕士论文] 汝文钊
遗传学 西北大学 2017(学位年度)
摘要:人体血清睾酮水平与社会行为的关系研究表明,睾酮能够抑制共情,促进攻击行为。但目前睾酮与利他行为的关系尚未得出确切结论。为了确定睾酮相关基因与利他人格及行为的具体关系,我们选取影响睾酮合成与代谢的芳香化酶基因(CYP19A1)、5-α还原酶2基因(SRD5A2)、雄激素受体基因(AR)和性激素结合球蛋白基因(SHBG),采用社会价值取向问卷、独裁者游戏、分配游戏等实验范式,在734名大学生人群中考察这些基因的5个多态性位点与利他人格和行为之间的关系。
  结果显示:(1)AR基因的(CAG)n序列重复数多态与SHBG基因的rs727428位点均显著影响利他人格,AR基因的SS基因型与SHBG基因的rs727428位点的CC基因型个体表现出高的利他人格倾向(p=0.009)。
  (2)在分配游戏中,CYP19A1基因影响了个体分给自己的总点数。GG型个体分配给自己的点数低于A等位基因携带者(p=0.006)。在独裁者游戏中,SRD5A2基因边缘影响个体分给对家的分配额。CC型个体分配给对家的金额高于G等位基因携带者(p=0.056)。
  (3)公正世界信念的强度调节基因对分享行为的影响。在公正世界信念水平较高时,CYP19A1基因的rs700518位点的GG基因型个体和SRD5A2基因的rs523349位点的CC基因型个体表现出更少的分享行为;在公正世界信念水平较低时,这两种基因型个体表现出更多的分享行为。
  本研究证明利他人格和利他行为受睾酮相关基因的影响:AR基因与SHBG基因影响利他人格;CYP19A1基因与SRD5A2基因影响利他行为。该结果为解释睾酮与亲社会行为的关系提供了一定的实验证据。
[硕士论文] 李娅男
微生物与生化药学 北京化工大学 2013(学位年度)
摘要:本研究采用低能乳化法(相转变法和热处理法)制备D-柠檬烯纳米乳,分别从浊度,粒径,稳定性及状态变化等方面分析表面活性剂和油相分别对D-柠檬烯纳米乳制备的影响,并对D-柠檬烯纳米乳的抑菌效果进行研究,对其作用于菌体细胞的机制进行讨论。研究表明,利用相转变法和热处理法制备D-柠檬烯纳米乳,D-柠檬烯乳液的浊度和粒径均会随着表面活性剂浓度的增大而减小。当利用相转变法制备D-柠檬烯纳米乳,S/O为0.5时,首先形成单一的透明层状晶体,然后形成水包油型纳米乳;S/O值为1.5时,首先系统形成晶体、油相和水包油型乳液的混合系统,最后形成水包油型纳米乳。除此之外,研究发现油相的粘度是影响D-柠檬烯纳米乳形成的一个重要因素,在油相中添加橄榄油可提高纳米乳的稳定性,纳米乳在28℃下保存更加稳定,引起其不稳定的主要因素为奥氏熟化。
   同时,实验证明D-柠檬烯纳米乳具有更好的抑菌效果。添加D-柠檬烯纳米乳后,其菌种的生长曲线与对照生长曲线相比发生了明显变化,菌体细胞内离子不断向外游离。当达到某一程度时,菌体就会由于溶胀破裂或代谢紊乱而死亡,达到抑菌效果。
  
[硕士论文] 陈洁
生物化学与分子生物学 北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院中国医学科学院 2013(学位年度)
摘要:血小板在促进血管再生与止血等方面具有重要作用,随着研究的深入,进一步发现其具有促进伤口愈合和组织修复的作用。目前血小板制剂在骨科、皮肤科、牙科及慢性急病的治疗等领域已得到应用,均为自体制备。本研究通过对多人份混合血小板制剂与单人份血小板制剂在生长因子含量及对细胞增殖作用的差异做比较,探讨经病毒灭活、补体灭活过程的多人份血小板生长因子制剂用于细胞培养及组织修复的可能性,同时通过将血小板洗涤后制备无血浆基质的制剂,以初步探索血小板生长因子是否是血小板相关制剂促进细胞增殖的主要物质。
  目的:明确细胞对有机溶剂/去污剂混合物(S/D)试剂的最大耐受浓度;探讨多人份混合血小板制各血小板生长因子用于细胞培养的可行性,初步探索生长因子是否是血小板相关制剂促细胞增殖的主要物质。
  方法:S/D试剂按一定浓度梯度分别加入到含10%胎牛血清的培养基和含10%血小板生长因子溶液的培养基中培养小鼠成纤维细胞,比较细胞增殖的差异;多袋血小板各自及将其混合后,均采用反复冻融法制备获得生长因子,对比生长因子含量和促进细胞增殖的差异;将制备的富含血小板生长因子溶液一分为二,一份进行补体灭活过程(56℃,30min),一份不做处理,对比二者在生长因子含量及促进小鼠成纤维细胞和人成纤维细胞增殖的差异;采用S/D法制取血小板生长因子,通过柱层析纯化,测试生长因子的回收率和促进细胞增殖效果;生理盐水洗涤新鲜血小板浓缩液,获得贫血小板血浆、洗涤血小板、生理盐水上清三组分,与未经处理的浓缩血小板均采用反复冻融法制备生长因子,将获得样品其一分为二,做补体灭活与未灭活处理,测试各样品在促进小鼠成纤维细胞和人成纤维细胞的增殖的差异;
  结果:高浓度S/D对细胞增殖呈明显抑制作用,显微镜下观察到细胞出现变形和破碎,含10%血小板生长因子培养基中S/D浓度降到N-丁基三磷酸(TNBP)5ppm以下对细胞的增殖基本无影响,含10%胎牛血清的培养基中细胞的最大耐受浓度为TNBP10ppm;多袋血小板及其混合后,采用反复冻融法制备生长因子,经ELISA检测其含量无明显差异;富含血小板生长因子溶液在补体灭活前后生长因子含量差异均无统计学差异;S/D法刺激血小板释放生长因子,样品经层析柱纯化,测试各生长因子在纯化前后含量的变化,回收率低于70%,S/D残留量高于国家药典规定的安全浓度,用于细胞培养导致了细胞死亡;生理盐水洗涤血小板获得各组分经反复冻融法制备生长因子,其含量在补体灭活前后无统计学差异,在促细胞增殖方面:对人上皮成纤维细胞,补体灭活前后促增殖作用无统计学差异,且浓缩血小板、洗涤血小板、贫血小板血浆样品促细胞增殖无统计学差异,但均大于生理盐水上清组;对小鼠成纤维细胞,浓缩血小板、贫血小板血浆补体灭活前抑制细胞增殖,补体灭活后促进其增殖,洗涤血小板补体灭活前后均促进细胞增殖,各组分溶液促细胞增殖差异明显;
  结论:混合血小板与单人份血小板制备获得的生长因子含量及促进细胞增殖无明显差异,S/D法能有效的激活血小板释放生长因子,血小板制剂促细胞增殖的主要物质不仅仅是生长因子,而是多因素的共同作用,且可能存在物种间差异。
[硕士论文] 胡秀丽
儿科学 河北医科大学 2011(学位年度)
摘要:目的:颅内感染( Intracranial Infection)在小儿时期以化脓性脑膜炎及病毒性脑炎最常见。严重者可导致永久性中枢神经系统(centralnervous system CNS)后遗症。细菌或病毒使毛细血管内皮损伤,血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)受损开放,脑脊液(cerebrospinal-fluid,CSF)中蛋白质、白细胞等明显增多。CSF检测是中枢神经系统感染的重要手段。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是近几年国内外研究的热点之一。本课题通过测定中枢神经系统感染患儿CSF中的S-100b蛋白基质金属蛋白酶2,9(MMP-2、MMP-9)和C反应蛋白(C-reaction proteinCRP),通过动态观察CNS损伤情况,探讨S-100b蛋白MMP-2、MMP-9和C-反应蛋白在中枢神经系统感染发病过程中水平变化,为临床早期快速诊断与鉴别诊断化脓性脑膜炎及病毒性脑炎及评估预后提供理论依据。
   方法:
   1.实验分组:
   1.1 对照组20例,其中男11例,女9例,年龄6个月~13岁,均有神经系统症状但已除外颅内感染的同期住院患儿。(其中热性惊厥8例,小儿良性癫痫3例,维生素D缺乏性手足搐搦症9例)。
   1.2 化脓性脑膜炎组(简称化脑组)16例,其中男10例,女6例,年龄2个月~12岁,脑脊液培养阳性4例,脑脊液培养阴性临床诊断化脓性脑膜炎12例。
   1.3 病毒性脑炎组(简称病脑组)23例,其中男12例,女11例,年龄5个月~13岁。
   2.检测指标:实验参数包括脑脊液MMP-2,MMP-9,S-100b和C反应蛋白。
   结果:
   1.急性期与对照组S-100b,MMP-2,MMP-9和C反应蛋白脑脊液水平在化脑组、病脑组和对照组指标比较:
   1.1 化脑组、病脑组和对照组脑脊液S-100b水平比较有统计学意义,分别为(0.64±0.15)ng/ml、(0.83±0.21)ng/ml、(0.10±0.02)ng/ml(F=121.10,P=0.00),化脑组与对照组比较有显著差异(q=14.40,P<0.0i),病脑组与对照组比较有显著差异(q=21.55,P<0.0i)化脑组与病脑组比较亦有显著差异(q=5.39,P<0.01)。
   1.2 化脑组、病脑组和对照组脑脊液MMP-2水平比较有统计学意义,分别为(242,99±62.44)ng/ml、(110.28±22.44)ng/ml、(58.30±14.59)ng/ml)(F=120.14,P=0.00),化脑组与对照组比较有显著差异(q=21.47,P<0.01),病脑组与对照组比较有显著差异(q=6.63,P<0.01)化脑组与病脑组比较亦有显著差异(q=15.89,P<0.01)。
   1.3 化脑组、病脑组和对照组脑脊液MMP-9水平比较有统计学意义,分别为(146.934±35.575)ng/ml、(64.925±21.902)ng/ml、(7.187±2.122)ng/ml(F=164.33,P=0.00),化脑组与对照组比较有显著差异(q=25.61,P<0.01),病脑组与对照组比较有显著差异(q=11.61,P<0.01)化脑组与病脑组比较亦有显著差异(q=15.48,P<0.01)。
   1.4 化脑组、病脑组和对照组C反应蛋白水平比较,分别为(12.4±1.89)g/1、(1.27±0.0)g/1、(1.22±0.46)g/1(F=698.84,P=0.00),化脑组与对照组比较有显著差异有统计学意义,(q=46.26,P<0.01),化脑组与病脑组比较亦有显著差异(q=47.47,P<0.0i),病脑组与对照组比较无统计学意义(q=0.21,P>0.05)。
   2.恢复期与对照组S-100b,MMP-2,MMP-9和C反应蛋白脑脊液水平在化脑组恢复期与对照组指标比较:
   2.1 脑脊液S-100b的水平在化脑组恢复期与对照组比较有统计学意义,分别为(0.22±0.09)ng/ml、(0.10±0.02)ng/ml(t=5.62,P=0.00,P<0.05)。
   2.2 脑脊液MMP-2的水平在化脑组恢复期与对照组比较无统计学意义,分别为(68.75±26.32)ng/ml、(58.30±14.59)ng/ml)(t=1.51,P=0.139,P>0.05)。
   2.3 脑脊液MMP9的水平在化脑组恢复期与对照组比较无统计学意义,分别为(13.00±20.03)ng/ml、(7.18±2.12)ng/ml)(t=1.29,P=0.20,P>0.05)。
   2.4 脑脊液C反应蛋白的水平在化脑组恢复期与对照组比较无统计学意义,分别为(1.08±0.26)g/1、(1.223±0.464)g/1(t=1.03,P=0.31,P>0.05)。
   3.急性期与恢复期
   3.1 急性期化脑组脑脊液S-100b水平明显高于恢复期(0.64±0.15)ng/m1、(0.22±0.09))ng/ml(t=7.79,P<0.01),有统计学意义。
   3.2 急性期化脑组脑脊液MMP-2水平明显高于恢复期(242.99±62.44)ng/ml、(68.75±26.32)ng/ml(t=13.86,P<0.0l),有统计学意义。
   3.3 急性期化脑组脑脊液MMP-9水平明显高于恢复期(146.93±35.57)ng/ml、(13.00±20.03)ng/ml(t=17.96,P<0.01),有统计学意义。
   3.4 急性期化脑组脑脊液C反应蛋白水平明显高于恢复期(12.96±1.89)ng/ml、(1.08±0.26)ng/ml,(t=26.35,P<0.01)有统计学意义。
   4.相关性比较:
   4.1 化脑组急性期脑脊液C反应蛋白水平与S-100b,MMP2,MMP9相关性分析,均为正相关性。分别为r=0.90,t=7.76,P<0.05;r=0.93,t=10.30,P<0.05;r=0.88,t=7.18,P<0.05。
   4.2 病脑组脑脊液C反应蛋白水平与S-100b,MMP2,MMP9成无相关,分别为r=0.29,t=1.42,P=0.16,P>0.05;r=0.05,t=0.22,P=0.82,P>0.05;r=0.176,t=0.82,P=0.42,P>0.05。
   结论:
   1.S-100b,MMP-2,MMP-9及C反应蛋白参与了中枢神经系统(CNS)感染脑功能损伤的病理生理过程。
   2.颅内感染患儿脑脊液S-100b、MMP-2、MMP-9水平指数均增高,化脑较病脑高,化脑急性期较恢复期高。
   3.监测脑脊液S-100b,MMP-2,MMP-9及C反应蛋白水平可作为化脓性脑膜炎和病毒性脑炎早期与鉴别诊断,评价预后以及判断CNS损伤程度的参考指标。
  
[硕士论文] 高炳淼
水产养殖(海洋生物技术) 海南大学 2009(学位年度)
摘要:芋螺毒素(conotoxin,conopeptide,CTX)是近年来国际上的研究热点。CTXs是肉食性软体动物芋螺(Conus)分泌出来的能特异性作用于体内各种离子通道及神经受体的生物活性多肽化合物,通常是山10~46个氨基酸残基组成,具有分子量小、结构多样、富含半胱氨酸、作用靶点广泛、功能专一、组织特异性强等特点。目前发现的芋螺毒素超家族主要有A-,T-,O-,M-,P-,I-和S-超家族等,它们既可以作为体内一些具有重要生理功能靶点的探针和“解密器”,也可被直接开发成为药物或作为新药的先导化合物,因此对芋螺毒素的深入研究有着重要的理论和实际意义。
   本实验室从海南产勇士芋螺(Conus miles Linnaeus)中克隆到了一个新的芋螺毒素基因K411。K411编码产生的成熟肽是由28个氨基酸组成的小肽,含有五个半胱氨酸,具有能阻断乙酰胆碱受体的生物活性。人工合成该肽成本高、毒性大、氧化折叠后的异构体产物异常复杂,难以纯化,且得率很低。若采用基因工程方法直接真核分泌表达出具有天然构象的活性肽,则会大大降低成本且无须再考虑氧化折叠以及二硫键配对问题。由于毕赤酵母表达系统是目前较完善的高效异源蛋白表达系统,具有高分泌表达、高稳定整合、易于高密度发酵和产物的下游纯化较易等优点。所以本实验采用该系统对芋螺毒素基因K411进行高效表达研究具有非常重要的意义。
   本研究利用PCR方法从芋螺毒素K411的前体基因中,亚克隆出带有K411本身信号肽序列的、适合与毕赤酵母表达载体连接的目的基因;同时利用化学法合成K411成熟肽基因,分别构建含有芋螺毒素K411本身信号肽和毕赤酵母信号肽序列的目的基因两类酵母表达载体。已经成功构建了K411基因的5个酵母表达载体,分别为B-K4112,B.K4113,αA-K4145,αA-K4167,αA-K4189。将构建好的表达载体线性化后电转化毕赤酵母菌,经Zeocin抗生素筛选和PCR鉴定后获得了高拷贝重组子,并利用甲醇进行了诱导表达研究。初步探索了诱导表达的条件,结果表明,最佳诱导表达时间为72h,培养基选择MGY/MM比BMGY/BMMY诱导表达效果好。表达产物经Tricine-SDS-PAGE电泳分析,在6Kd左右出现一条明显的目的蛋白带。由此可知,K411基因已在毕赤酵母中获得成功表达,有待于下一步分离纯化。利用基因工程方法获得芋螺毒素将为芋螺毒素新药的研发和临床药物的工业化生产奠定坚实的基础。
[硕士论文] 杨英超
生物医学工程 天津大学 2008(学位年度)
摘要:人体血液成分含量是评价人体健康状况的重要信息。为了改变目前广泛采用的血液成分有创测量方法,人们对具有较好应用前景的近红外光谱检测方法投入了大量精力。但测量条件和个体差异的存在是影响该方法走入临床的主要限制。动态光谱法的出现可望解决这一问题。 本文首先从人体血液无创检测的研究现状出发,简要介绍了近红外血液成分无创检测研究成果以及可以消除个体差异和测量条件影响的动态光谱法,并在此基础上进行了数据采集实验研究和信号预处理的研究。本文的主要工作和创新点主要有: 设计了一个动态光谱数据采集系统,初步取得了人体的动态光谱数据,并通过精心设计的实验及其得到的结果、初步验证了动态光谱理论; 分析了动态光谱法噪声的来源及其频谱特性,并从能量的角度审视了动态光谱法的频域处理,提出在动态光谱法频域处理中利用谐波分量,并通过实验选取了合适的谐波分量、结果证明了可提高信号的信噪比; 将独立分量分析引入动态光谱法,分析和确定了合适的优化判据以及算法,在有效降低噪声(提高信噪比)的同时提高了动态光谱的波长灵敏度。
[硕士论文] 赵宏丽
生物化学与分子生物学 西北大学 2008(学位年度)
摘要:目的:研究戊二醛聚合猪血红蛋白分子量对血压的影响,并对其在大鼠失血性休克复苏中的功效进行初步研究。 方法:用浓度分别为90mg/ml,70mg/ml,50 mg/ml的分子内交联的高氧亲和力(P50均小于10mmHg)的64kDa血红蛋白对大鼠进行50%等容量换血,通过血压在换血前后的变化研究其对血压的影响以及在氧载体制品中所允许的安全剂量;并以相同的方法研究平均分子量分别为250kDa,500kDa,800kDa,1100kDa的高氧亲和力的聚合血红蛋白对血压的影响。 以自身全血回输作为阴性对照组;乳酸林格氏液,羟乙基淀粉和不复苏作为阳性对照组;浓度为90mg/ml,平均分子量为300kDa左右的高氧亲和力的聚合血红蛋白为实验组(n=6),对失血性休克的大鼠进行复苏。动态监测大鼠平均动脉血压,心率和心电图,并在大鼠基础、休克末、复苏后30min、60min、120min取动脉血测血气。综合比较各项指标对戊二醛聚合猪血红蛋白的抗休克性能进行评价。 结果:浓度为90mg/ml分子内交联四聚体血红蛋白(64kDa)在50%等容量换血实验中会使大鼠血压在换血过程中增加约20-25mmHg;浓度降低至70mg/ml和50mg/ml时,血压升高的现象基本消失,心率和血气各项指标均没有明显的变化。平均分子量为250kDa、500kDa的聚合血红蛋白在换血过程中以及换血完30min,大鼠血压比较平稳;800kDa和1100kDa的聚合血红蛋白在换血过程中部分大鼠血压出现下降的趋势,分子量越大出现血压下降的动物数量越多。大鼠失血性休克实验表明:戊二醛聚合猪血红蛋白同全血复苏的各项指标接近,MAP,HR,血气值均恢复到休克前的基础值,明显优于不复苏,乳酸林格氏液和羟乙基淀粉复苏的对照组。 结论:聚合血红蛋白的分子量和分子内交联的四聚体血红蛋白(64kDa)的含量均对等容量换血大鼠的血压有影响。浓度为90m咖L的分子内交联的四聚体血红蛋白(64kDa)会使大鼠血压升高,但是当浓度小于50mg/ml时,对大鼠血压基本没有影响;平均分子量在250kDa~500kDa的Poly-pHb对大鼠血压没有影响,较高分子量的Poly-pHb会引起血压的下降。用平均分子量为300kDa的戊二醛聚合猪血红蛋白进行大鼠失血性休克复苏,能够在短时间内有效恢复休克大鼠血容量,心率、血气等各项指标,是一种非常有开发前景的血红蛋白类氧载体制剂。
[博士论文] 栗志民
细胞生物学 中国海洋大学 2008(学位年度)
摘要:补体的系统发育进化是当今免疫学研究热点之一。比较免疫学研究表明脊椎动物和无脊椎动物补体系统有着共同的祖先。在过去10年里,在无脊椎动物后口类、甚至原口类中,结构和功能相似的一些重要补体组分如C3和B因子已经得到了鉴定,但有关这些动物补体功能的研究相当有限。文昌鱼(Amphioxus)是介于无脊椎动物和脊椎动物之间的过渡类型,是研究脊椎动物进化的珍贵材料。本文选择了在系统演化上占据重要地位的文昌鱼,对其体液补体介导弧菌溶菌活性进行研究,并对弧菌逃避补体攻击机制进行探讨。 本文首次将测定脊椎动物血清补体溶茵活性的标准方法运用到文昌鱼体液免疫研究中,对文昌鱼体液补体的溶菌活性进行研究。通过文昌鱼体液与弧菌相作用,文昌鱼体液能够在体外抑制溶藻胶弧菌HW284(Vibrio alginolyticus HW284)、副溶血弧菌HW458(Vibrio parahaemolyticus HW458)、哈维氏弧菌SF-1(Vibrio harvey SF-1)的生长,存活率分别为42%,28%和59%。这样的数据在无脊椎动物的后口类尚属首次。扫描电镜观察表明正常文昌鱼体液存在溶菌活性,例如,能溶解溶藻胶弧菌HW284,而经灭活的体液及无菌过滤海水处理的溶藻胶弧菌HW284表面光滑,细胞完整。用热灭活的兔抗人C3血清处理文昌鱼体液后,再与溶藻胶弧菌HW284相作用,体液溶菌活性明显降低,而经免疫前的兔血清或PBS处理的体液,溶菌活性不受影响,此外,体液经热处理(45℃,30 min)和反复冻融处理后,文昌鱼体液抑制溶藻胶弧菌HW284生长的活性明显降低,其存活率分别为89%和81%,而正常体液(对照组)作用后,弧菌的生长不受影响。这些结果表明补体作用可能是抑制弧菌生长的主要因素。40 mMEGTA(包含4mM MgCl2)处理的文昌鱼体液没有影响溶菌活性,与正常体液(对照组)相比,具有相似的溶菌活性,其存活率分别为42%和44%,在EGTA处理组中添加10mM CaCl2,没有增强体液的溶菌活性,相反,用40mM EDTA处理文昌鱼体液,体液的溶菌活性消失,其存活率为86%,在EDTA处理中添加4 mM MgCl2,恢复了体液的溶菌活性,这些实验结果表明文昌鱼体液补体介导的溶菌活性依赖Mg2+,而不依赖Ca2+。另外,用补体替代途径的选择性激活剂-酵母聚糖A处理后的文昌鱼体液,再与溶藻胶弧菌HW284相作用,体液溶菌活性明显降低,与未处理的体液相比,在2倍稀释的体液中,其存活率分别为82%和43%,这些实验结果强烈暗示着补体替代途径的激活与文昌鱼体液的溶菌活性相关。 值得注意的是,7种弧菌中,其中4种弧菌-河弧菌HW293(Vibrio furnissi HW293)、辛辛那提弧菌HW287(Hbrio cincinnatiensis HW287)、鳗弧菌W-1(Vibrio anguillarum W-1)和哈维氏弧菌Z3G2(Vibrio harveyi Z3G2)能够抵制文昌鱼体液补体介导的溶菌作用。本文首次将脊椎动物血清补体消耗标准测定方法运用到文昌鱼溶菌功能研究中,使用蛋白酶K消化法分别提取辛辛那提弧菌HW287和溶藻胶弧菌HW284的LPS,经12%SDS-PAGE电泳、银染色后,发现辛辛那提弧菌HW287 LPS既有高分子量的O-抗原又有低分子量的O-抗原的梯状带结构,而溶藻胶弧菌HW284几乎没有高分子量的O-抗原带。高分子量的o-抗原缺乏是与溶藻胶弧菌HW284对文昌鱼体液敏感相一致的。而辛辛那提弧菌HW287具有许多高分子量的O-抗原呈现出补体抵制,表明O-抗原的大小与体液抵制之间是正相关的。此外,用辛辛那提弧菌HW287或溶藻胶弧菌HW284处理后的文昌鱼体液,然后与兔红细胞相作用,结果表明2种弧菌对补体都有消耗,但是与辛辛那提弧菌HW287相比,溶藻胶弧菌HW284对补体消耗显著高的水平。所有这些结果都表明高分子量的O-抗原似乎具有双重的作用:它既能够避免激活补体,又能够阻止结合到细菌表面上的补体损伤细菌细胞膜。由此保护了包括辛辛那提弧菌HW287在内的对文昌鱼体液的杀伤产生抵制作用的弧菌。
[硕士论文] 林芳
微生物学 西北大学 2008(学位年度)
摘要:人血浆中的高丰度蛋白,有很强的遮盖作用,影响血浆中一些低丰度蛋白(ng/ml。或pg/mL)的检出,而这些被遮盖的低丰度蛋白很可能是信号传导和调控的关键蛋白或某些重大疾病的关键指示分子,对疾病的早期诊断和疗效检测具有重要意义。因此建立特异地去除血浆高丰度蛋白的方法,提高血浆中低丰度蛋白检测的灵敏度具有重要的意义。 目的:研究针对人血浆中部分高丰度蛋白的特异性鸡卵黄抗体的制备方法和条件,及其对人血浆高丰度蛋白去除的方法及条件,为血浆蛋白组学前期研究提供技术参考。 方法:用HSA、IgG以及混合成分和人全血浆分别作免疫原免疫产蛋前(100 d)Roman母鸡和产蛋后(150 d)Roman母鸡;以间接EL,ISA法和免疫扩散法检测其免疫后的血清效价。采用水溶解法、饱和硫酸铵梯度沉淀及阴离子交换柱分离制备出抗HSA、IgG和抗人全血浆鸡卵黄抗体IgY,并将其偶联于金磁微粒载体上,进行血浆高丰度蛋白去除研究。 结果:产蛋前被免疫的鸡,免疫60~150d,血清抗体效价可达1:10 000~1:25 000, 建立了IgY提取工艺路线:卵黄液与去离子水(体积比1:9,pH=5.2左右)混合4℃搅拌9 h,离心。上清过滤,两次饱和硫酸铵分别沉淀至终浓度30%、19%,离心、透析后经DEAE-fast-flow阴离子交换柱纯化。其IgY抗体纯度达98%以上。以金磁微粒载体固定的IgY,可对血浆中的HSA,IgG进行特异性的去除、抗人全血浆IgY对人全血浆中的高分子量(>83K)蛋白可有效地去除;免疫电泳分析,抗人全血浆IgY至少对人血浆中4种蛋白成分产生免疫特异性。 结论:人血浆中的高丰度蛋白成分LISA、IgG及人全血浆免疫产蛋母鸡后,可从鸡卵黄中分离提取到高效价、高纯度的卵黄抗体IgY;可特异性的去除人血浆中部分高丰度蛋白,为血浆蛋白质组学研究提供了一种新方法,有较好的应用前景。
[硕士论文] 夏萍
神经病学 浙江大学医学部;浙江大学;浙江大学医学院 2008(学位年度)
摘要:背景: 脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)常规细胞计数和细胞学检查都是脑脊液基本的检查方法。脑脊液细胞学是对脑脊液细胞的形态学研究,相当于对蛛网膜下腔的组织活检。常规脑脊液细胞计数是在暗视野下观察1微升脑脊液,依据细胞核的形态分类并计数。先前的研究表明脑脊液细胞学计数的异常发现率比常规高,在临床工作中,我们也会遇到脑脊液常规计数结果与细胞学诊断矛盾的情况,“究竟哪个结果的临床符合率更高?两者为何会产生差异?”这些我们临床医生关注的问题在之前的文献中未见有系统的报导。 目的: 结合临床分析脑脊液常规细胞计数和细胞学的结果并探讨两者间产生差异的原因。 方法: 254例脑脊液采用细胞沉淀室法收集细胞,经迈-格-姬(MGG)染色后在显微镜下观察,同时行脑脊液常规细胞计数,并结合临床进行比较。 结果: ①白细胞总数:CSF细胞学正常结果152例,异常结果102例(40.1%);常规计数正常182例,异常72例(28.3%)。152例细胞学结果正常的脑脊液标本相对应的常规计数151例正常,1例异常(该例确诊为Fisher综合征)。102例细胞学结果异常的脑脊液标本相对应的常规计数71例异常,31例正常(包括隐球菌脑膜炎3例、病毒性脑膜炎2例、结核性脑膜炎1例、病毒性脑炎3例、脑膜癌病或脑膜白血病12例、多发性硬化3例、癫痫2例、中枢神经系统血管炎如SLE、白塞氏病4例、SAHl例)。 ②有核细胞分类:临床拟诊脑膜肿瘤21例,细胞学检查发现异形细胞13例,而脑脊液常规仅发现1例;2例脑寄生虫病患者的脑脊液细胞学以嗜酸性细胞为主,比例分别为70%和75%,而常规为淋巴细胞各占94%和99%;5例多发性硬化患者的细胞学计数正常,但细胞成分中发现浆细胞。 ③细胞学检查发现红细胞9例,脑脊液常规发现红细胞90例。 结论: 通过本研究发现,细胞学在白细胞计数,肿瘤细胞等有核细胞分类及红细胞的出现率等方面的判断均比常规计数准确,临床符合率普遍高于常规计数。考虑原因如下: ①两者取样体积相差500倍,细胞学取样体积大,样本误差小: ②常规计数在Neubaure计数板上进行,白细胞在计数板内成泊松分布,在细胞数轻度增高时误差更大; ③常规法因方法学常导致白细胞自溶,计数减少,并间接使红细胞计数增多; ④细胞学应用MGG染色擅长细胞分类,常规细胞计数通过对细胞核折光的观察,一般只能区分单个核和多核细胞。
[硕士论文] 钱冬明
生物化工 陕西科技大学 2007(学位年度)
摘要:猪血富含多种生物活性成分,是宝贵的生物资源,蕴藏着巨大的开发潜力和利用价值。本论文以提高猪血的综合利用价值为目的,对猪血浆中纤维蛋白原、凝血酶、白蛋白、免疫球蛋白的连续分离工艺以及对猪血红细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和血红素的同步分离工艺进行了研究,主要实验内容如下: 1.猪血的抗凝处理、红细胞和血浆的分离条件。收集经检验合格的新鲜猪血,用3.8%的柠檬酸钠溶液与血液按体积比1:9混合抗凝;抗凝血在转速4000 r/min下,离心10min,收集血浆和红细胞分别进行处理。 2.研究了血浆中纤维蛋白原、凝血酶、免疫球蛋白、白蛋白的提取方法和条件。利用血浆中纤维蛋白原的冷沉淀性质,先对血浆进行冻融处理,分离纤维蛋白原(凝血酶的作用底物),再选用专一吸附剂柠檬酸钡吸附凝血酶原,最后以盐析法分离免疫球蛋白和白蛋白。优化后条件如下: (1)抗凝血桨在-20℃下冷冻12h,4℃下解冻,2500r/min转速下离心5min,收集沉淀和上清液。沉淀的主要成分为纤维蛋白原,经检测样品中纤维蛋白原含量82.6%,纤维蛋白原提取率为91.0%。 (2)上述上清液中按体积比加入血浆体积8%1mol/L的氯化钡,离心收集上清(提取白蛋白和免疫球蛋白)和沉淀。沉淀用0.2mol/L pH8.0:EDTA解析得凝血酶原。凝血酶原中加入2mol/LCaCl<,2>,使Ca<'2+>终浓度为0.1mol/L,25℃下激活2h。经离子交换纯化后,凝血酶的比活达到604.4U/mg,回收率为74.3%,纯化倍数为15.7。再经Sephadex G-75进一步纯化,用0.05mol/L,、pn7.2的Tris-HCl缓冲液上样、洗脱,得到凝血酶电泳单点纯,比活为1072.8U/mg,回收率为69.7%,纯化倍数为27.9。 (3)在上清液中加入终浓度为50%饱和硫酸铵,调节溶液pH值为7.2,4℃下静置2h,在4℃、10000r/min转速下离心20min,上清液经透析,浓缩得白蛋白粗品。沉淀主要含有免疫球蛋白。检测白蛋白的量为31.41g/L血浆,样品中白蛋白纯度为93.1%,白蛋白提取率为90.5%。免疫球蛋白的量为13.86g/L血浆,样品中免疫球蛋白纯度约为80.3%,提取率为91.8%。 3.对红细胞中SOD和血红素的同步提取工艺进行了研究。工艺参数如下: (1)红细胞的超声波破碎条件为:加入红细胞体积1/5的去离子水,超声波功率200W,破碎时间为15min,得到红细胞溶解液。 (2)SOD提取条件为:在红细胞溶解液中加入0.25倍的预冷乙醇和0.15倍预冷氯仿,使血红蛋白变性沉淀。上清中加入2倍体积的冷丙酮沉淀SOD,把沉淀溶于磷酸缓冲液后,再经Cu<'2+>热变性等操作提取SOD。所得SOD粗品比活为1650.9U/mg,回收率为83.3%。 (3)血红素提取条件:向血红蛋白沉淀中加入红细胞体积5倍的丙酮,调其pH值为2.2。此条件下血红素溶于酸性丙酮中,而珠蛋白沉淀,收集提取液;利用鞣酸法从提取液中沉淀血红素。利用本工艺每L猪血可以获得血红素3.0克左右,纯度达到91%左右,提取率为71%左右。 本实验通过猪血中众多活性成分提取分离的工艺研究,对猪血进行了开发利用,使猪血的综合利用程度和附加值都得到提高,为综合利用猪血探索了新的思路和方法。
[博后论文] 周海涛
蛋白质学 中山大学 2007(学位年度)
摘要:蛋白质组学(Proteomics)是在人类基因组计划(Human Genome Project,HGP)研究发展的基础上形成的交叉学科。蛋白质是生命现象的主要执行者,是一切生命活动的直接基础。人类血浆中含有机体组织分泌、渗漏、脱落至血中的多种低丰度蛋白。其中不乏信号传导和调控的关键蛋白,其蛋白水平的变化与多种疾病有关。从临床观点看,血浆取材容易,血浆蛋白质组的研究具有重要的临床意义和应用价值。但血浆蛋白质组学研究的技术难点也很多,特别是高丰度蛋白质,如白蛋白、免疫球蛋白和蛋白质水解酶对低丰度蛋白遮蔽作用,干扰整体分析。海洛因是中国人接触的主要毒品。吸食海洛因成瘾造成十分庞大的社会和经济损失。反复吸食海洛因,是医学难题,需要多方面研究。本研究意图建立适合本实验室条件血浆蛋白质组学技术平台,并将该技术平台应用于寻找研究海洛因成瘾相关血浆蛋白研究。 首先通过抑制剂使用与否,血浆保存条件的变化以及生理性盐成分和小分子物质的排出效果分析,并比较不剔出高丰度蛋白、剔出白蛋白来以及同时剔出白蛋白与IgG双向电泳的结果,优化血浆样品制备条件。结果建立了抑制蛋白酶,去除高丰度蛋白,低温浓缩,简单除盐提高分离效果,通过胶体考马斯亮蓝染色获得稳定的、更好展示中低风度血浆蛋白的双向电泳技术平台。其次本研究还优化Mini ZOOMR IPG Runner系统双向电泳条件,并评价了该系统在蛋白质组学研究中的意义。 应用该技术平台,研究者对海洛因成瘾者血浆进行了蛋白质组学研究。采集海洛因成瘾者(n=5)和正常对照者(n=5)血浆,剔除白蛋白和免疫球蛋白IgG后,进行蛋白双向电泳。图像分析软件ImageMaster Elit 5.0分析蛋白质2-DE图谱。利用MALDI-TOF-MS/MS串联质谱鉴定组间相差1.5倍以上差异点。结果获得5个蛋白点在两组图谱中差异1.5倍以上,鉴定结果分别为γ纤维蛋白原(fibrinogen gamma),人a-1B糖蛋白(a-1-B-glycoprotein-human),a-抗胰蛋白酶原(uncMaved a-1-Antitrypsin),视黄醇结合蛋白载体蛋白四聚体单体(Chain ofTransthyretin),铜蓝蛋白1(CP protein)。随后对视黄醇结合蛋白载体蛋白进行的蛋白质免疫印迹分析也发现,该蛋白在海洛因成瘾者血浆中显著低于对照组。该研究证明海洛因成瘾者血浆与正常人血浆对比存在蛋白质组差异。 本项工作在国内首次利用血浆蛋白质组学手段研究海洛因成瘾问题。比较鉴定海洛因成瘾者和正常人血浆蛋白质组差异,目前国内外均未见相关研究报告。本项工作在国内外率先从血液蛋白质总体变化角度探究了海路因成瘾相关蛋白并首次报告海洛因成瘾者血浆丫纤维蛋白原蛋白(平均上调5倍)、a-1B糖蛋白(平均下调1.8倍)、a-抗胰蛋白酶原(平均上调2.5倍)、视黄醇结合蛋白载体蛋(下调2.0倍)、铜蓝蛋白(上调6.6倍)表达量异常,为阐明药物滥用的机制以及寻找海洛因成瘾标志物提供了新的线索。 本研究获得国家自然科学基金(No.30472252)广东省自然科学基金(No.06301434)资助,并得到深圳市重点学科经费支持。
[硕士论文] 吴进
生物化学与分子生物学 上海交通大学 2007(学位年度)
摘要:移动化学反应界面(Moving Chemical Reaction Boundary, MCRB)理论可以用于对两性电解质进行在线富集,已有的实验也证明,MCRB理论可以对高盐样品进行有效的物质富集,而不受其中高浓度盐分的影响,这对于众多生物样品如尿液等来说是十分适用的。另一方面,由MCRB理论推导出的判别式可以判断界面移动方向,为等电聚焦动力学的研究提供了新的视角。
  本文的主要研究内容是移动化学反应界面理论的应用研究。一方面,利用移动化学反应界面理论并结合毛细管电泳快速、高效、简便、经济和易于自动化的特点,进行了尿液指纹分析的研究。快速、灵敏的尿液指纹分析对发现新的生物标志物和进行临床检测具有重要意义。根据MCRB理论,以Gly-HCl作为样品缓冲液、Gly-NaOH作背景电解质的缓冲液,分别对缓冲液的pH值、浓度、工作电压等实验条件进行了优化。实验结果证明该方法大大提高了尿液指纹分析的灵敏度和数据的容量,与常规方法只能获得10个峰相比,MCRB方法大大改善了尿液指纹分析的灵敏度:观测到了超过90个的富集峰,达到了20倍以上的富集效果。表明MCRB介导的富集方法对尿液分析具有巨大潜在价值。另一方面,对大量文献材料中报道的有关等电聚焦中pH梯度不稳定性的实验(包括计算机模拟实验),采用MCRB理论衍生得到的判别式Rr进行分析和预测,并与实际的结果相对照。结果表明,在阴极漂移中,Rr均大于零,即阳极液中氢离子的迁移数大于阴极液中氢氧根离子的迁移数;而在阳极漂移中,Rr均小于零,即阴极液中氢氧根离子的迁移数大于阳极液中质子的迁移数。实验结果与MCRB的理论是完全一致的,从而揭示出MCRB理论在揭示等电聚焦中pH梯度不稳定现象的动力学方面的正确性和价值。这一结果对提高等电聚焦电泳的稳定性意义重大,而等电聚焦正是双向电泳和蛋白质组学研究中的重要工具。
  本文的最后一部分,选用硼砂作为缓冲液,以α-萘胺及NaBH3CN作为衍生化试剂,探索了采用场放大进样方法,用毛细管电泳对葡萄糖和果糖进行分离和富集的实验条件,最优的实验条件为60 mM,pH11.0硼砂缓冲液,1.0 psi压力进样90s,和常规方法相比,葡萄糖的检测灵敏度提高了20多倍,果糖提高了近60倍。
[硕士论文] 刘振军
动物营养与饲料加工 四川农业大学 2006(学位年度)
摘要:本试验研究饲粮中添加γ-氨基丁酸(GABA),对21日龄仔猪在断奶后第14天和第28天生长性能的影响,并通过考察与采食量相关的内分泌激素以探讨GABA对断奶仔猪的作用机理。试验选取21日龄断奶杜长大仔猪40头,随机区组分成4组,每组设10个重复,每个重复1头。对照组饲喂基础饲粮,试验组饲粮在基础饲粮中分别添加50mg/kg(处理一),100mg/kg(处理二),150mg/kg(处理三)GABA。实验结果如下: 1.与对照组相比,饲粮中GABA的添加量为50mg/kg时,前期(实验前两周)、后期(试验后两周)及全期的日采食量和日增重分别提高了11.2%、13.2%、12.6%和5.6%、18.9%、15.2%。添加量为100mg/kg时,分别提高了5.4%、4.4%、4.7%和8.6%、4.3%、5.4%。添加量为150mg/kg时降低了前期、后期、全期的采食量和日增重分别达10.1%、6.4%、7.5%和20%、1.6%、6.6%。处理组间相比,随着GABA添加量的提高,断奶仔猪的前期、后期和全期采食量和日增重逐渐降低。从后期和全期看,处理一组仔猪的日采食量显著高于处理三(P<0.05)。添加GABA不影响后期和全期饲料转化效率;且消化试验表明,添加GABA对没有影响粗蛋白的表观消化率。 2.与对照组相比,饲粮中添加50mg/kgGABA能够抑制仔猪CCK分泌;150mg/kg刺激了仔猪CCK分泌。而添加100mg/kgGABA对仔猪CCK分泌有较弱的抑制作用。 3.各试验组采食后NPY的浓度较采食前均有升高的趋势;并且GABA添加量越高,采食后血液中NPY的浓度提高幅度越大。 4.与对照组相比,处理组第14天,28天各采食前血液中α-MSH浓度均有升高的趋势;第14天,100mg/kg和150mg/kg组采食后血液中α-MSH浓度高于对照组(P>0.05);而50mg/kg组采食后血液中α-MSH浓度要低于对照组(P>0.05)。 结论:本研究结果表明,饲粮中添加适量水平的GABA能够促进断奶仔猪的生产性能。其中,50mg/kg的GABA提高了采食量和日增重;而100mg/kg的GABA对采食量和日增重的改善程度较低;150mg/kg的GABA却降低了采食量和日增重。另外,GABA并没有影响饲料利用率。通过对采食相关的内分泌激素研究表明,低剂量GABA促采食的原因可能与此时GABA降低了机体CCK分泌,提高NPY分泌,抑制α-MSH分泌有关。
[硕士论文] 武元春
生物化工 浙江大学 2006(学位年度)
摘要:扩张床吸附技术是一项新型生化分离技术,集成了固液分离、浓缩和初步纯化于一个操作单元中,可以从含有固体微粒的料液中直接捕获目标物,提高分离效率,减少分离成本,适合于大规模的分离纯化过程。特殊设计的吸附剂是扩张床吸附得以顺利实现的关键之一,混合模式扩张床吸附剂兼有静电相互作用和疏水相互作用配基,显示出高吸附容量、耐盐等独特性能性。本文选用GEHealthcare公司开发的新型混合模式扩张床吸附剂StreamlineDirectCST-1,实现从牛乳清中直接分离乳铁蛋白等乳清蛋白。 考察了新型介质的扩张床膨胀特性和流体混合性能,确定合适的操作流速,选定膨胀率为2,可以满足高处理量和床层稳定性的要求。通过静态吸附实验,考察了pH和离子强度对乳铁蛋白吸附的影响。结果表明,该介质对乳铁蛋白的饱和吸附容量较大,达到110mg/g介质,且具有一定的耐盐特性。改变离子强度不能实现有效解吸,改变pH是合适的途径。乳清蛋白的饱和吸附容量(60mg/g介质)低于乳铁蛋白,可以适当增加乳清上样体积,以提高介质的利用率。 考察了乳清蛋白的穿透曲线,确定了合适的上样体积。考察了pH和离子强度对洗脱过程的影响,利用凝胶电泳图象分析系统确定洗脱峰中各种乳清蛋白的相对含量,优化了洗脱过程。进行了扩张床吸附分离,采用pH阶跃洗脱,直接从牛乳清中分离得到不同乳清分离蛋白。对于乳铁蛋白,20mMNaOH洗脱可以得到纯度约90%的乳铁蛋白。收率87.8%,纯化因子达10.5。该分离过程充分体现了扩张床吸附的集成化优势和新型混合模式扩张床吸附剂的优良性能。
[博士论文] 邱艳
生物化学与分子生物学 解放军军事医学科学院;中国人民解放军军事医学科学院 2005(学位年度)
摘要:对Rh血型不同表现型的比例、不同表型RhD抗原数量的多少、目前部分城市RhD(-)血液供应情况以及临床疑难配血产生的原因进行了调查分析和研究。采用不同分子量的七种甲氧基聚乙二醇(mPEG)衍生物修饰红细胞Rh抗原,比较不同的mPEG衍生物遮蔽红细胞Rh抗原的效果,建立Rh血型抗原的化学修饰工艺,以期解决我国稀有Rh血型的血液供应问题。对化学材料修饰后的红细胞各项体外指标进行了检测,探讨mPEG修饰对红细胞膜的结构功能是否产生影响,结合影响红细胞保存质量的因素研究结果,初步确定mPEG修饰红细胞的保存期。对mPEG与红细胞膜Rh抗原结合后是否稳定,进入人体后是否会脱落以及mPEG修饰红细胞的机理问题进行了初步的研究,为今后mPEG修饰红细胞临床应用打下基础。采用小鼠和猕猴为实验模型,用异硫氰酸荧光素标记法来确定mPEG-SPA修饰对输入体内后红细胞寿命和对受者安全性的影响,探索建立评价mPEG修饰后人红细胞的寿命和体内存活率的动物模型。利用mPEG-SPA修饰的红细胞与临床上收集的疑难配血病人的血清进行配血实验,一方面对目前临床上使用的不同输血前交叉配血方法是否可以直接应用于mPEG-SPA修饰红细胞的配血进行验证,另一方面从临床使用的角度观察修饰后的红细胞是否能供这些病人使用。
生物化学与分子生物学 四川大学 2005(学位年度)
摘要:血红蛋白是多亚基蛋白,它的生理作用与其特殊构造关系密切。它确保将氧气运输到所有器官和身体各个部位,同时充当组织器官血液中的缓冲剂。金属离子与蛋白质的结合是生化分析研究中很重要的一个课题。已有一些研究报道了血红蛋白和金属离子之间的相互作用。此外,当金属离子进入生物体内以后,它可与蛋白质相互作用而改变蛋白质结构和功能。本文通过紫外光谱、荧光光谱和圆色谱的分析方法研究了牛血红蛋白与过渡金属(Co2+、Hg2+和Ag+)的相互作用。 紫外吸收光谱显示,Co2+有显著的LMCT带,而Hg2+和Ag+的LMCT带并不明显。这个结果表明,Co2+与蛋白结合会导致蛋白三级结构的缓慢变构,进一步为Co2+提供结合位点。而Hg2+和Ag+与Hb的结合反应很快,导致蛋白构象迅速变化,从原始的状态(在没有Hg2+或Ag+离子时)达到最后的构象(束缚与Hg2+或Ag+离子),并立即达到平衡状态,。蛋白内源荧光光谱表明,Co2+,Hg2+和Ag+的结合会影响蛋白三级和四级结构,这点可以从近紫外圆二色谱和Soret圆二色谱数据得到证实。远紫外圆二色谱和软件计算蛋白二级结构表明,Co2+和Ag+会引起蛋白α-螺旋含量增加,但Hg2+处理会导致蛋白的α-螺旋含量减少。 以上实验结果表明,三种金属离子都会影响Hb的二级,三级和四级结构;并且各种金属离子与Hb相互作用的光谱学差异说明三种金属离子与Hb相互作用的机制并不相同。
[硕士论文] 赵静
原子与分子物理 四川大学 2005(学位年度)
摘要:本文系统地论述了光子相关谱法测量纳米分散体系粒径分布和Zeta电位的原理,研究了酸、碱催化下聚二甲基硅油(PDMS)乳液乳粒的生长规律,利用碱催化下的“无种核”体系成功制备出了单分散性的PDMS乳液;通过研究非离子表面活性剂TritonX-100、TritonX-405对此硅油乳液Zeta电位和稳定性的影响,研究了两者的相互作用.
[博士论文] 王永欣
高分子化学与物理 北京化工大学 2005(学位年度)
摘要: 本文在乳液,微乳液聚合方法引入到表面光接枝聚合研究中,一方面,利用乳液,微乳液光聚合将通用聚合物材料,如甲基丙烯酸甲酯(MMA),N-乙烯基吡咯烷酮(NVP)等构筑成各种结构基元(building blocks),如纳米乳胶粒子,并通过这些粒子的组装形成更为复杂的二级或多级结构;另一方面,利用紫外光辐照引发的表面接枝聚合反应,同步的将以上结构基元或由其组成的高级结构固定到聚合物材料的表面,从而达到对聚合物材料表面形貌改性的目的。此接枝体系的开发,首先为聚合物材料表面接枝改性增添了一种新的方法:次之,为聚合物表面形貌改性开辟了一条值得探讨的思路(表面组装接枝);再之,也为乳液,微乳液在受限条件下的光聚合反应做了一些有意义的探讨。
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