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调控KIAA0101基因和Stathmin基因的表达治疗胃癌
成果信息
立项支持
  • 公布年份:
    2015
  • 中图分类:
    R735.2, R730.5
  • 关键词:
  • 成果简介:
    胃癌是常见的消化道肿瘤,其发生发展涉及到大量关键基因的表达,其表达水平的高低直接或间接影响肿瘤的发展。stathmin在许多不同的肿瘤中高表达,可能是肿瘤治疗的一种新的分子靶点。KIAA0101基因是通过酵母双杂交技术筛选获得的一种增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)结合因子。高表达的PCNA是临床上细胞增殖的重要特征,尤其与Ki-67/MIB-1一起作为肿瘤预后的分子标记。KIAA0101基因和Stathmin基因的表达与胃癌的治疗有很大关系。该课题应用原位杂交和免疫组织化学SP法检测胃癌组织和正常胃黏膜组织中stathmin mRNA和蛋白的表达,并分析其与临床病理学参数之间的关系。利用脂质体2000转染stathmin siRNA到胃癌SGC-7901细胞,利用半定量RT-PCR和Western blotting检测转染stathmin siRNA后stathmin mRNA和蛋白的表达,利用CCK-8技术研究细胞增殖的变化,利用流式细胞术研究stathmin表达下调对细胞周期及细胞凋亡的影响,并利用Western blotting检测与细胞周期和凋亡相关的蛋白的表达。将SGC-7901细胞(5×107/mL)于裸鼠腋下接种0.1mL细胞悬液,建立人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤模型,将其分为3组:PBS组(PBS治疗),对照siRNA组(接种对照siRNA,终浓度为100nmol/L)和stathmin siRNA组(接种stathmin siRNA,终浓度为100nmol/L),于腹腔注射进行治疗。连续两周观察转染荷瘤裸鼠的生长情况,免疫组织化学方法检测增殖抗原Ki-67的表达,采用TUNEL研究肿瘤组织中细胞的凋亡,Western blotting检测裸鼠肿瘤组织中stathmin、Bcl-2和Bax蛋白的表达。利用Western blotting检测3株胃癌细胞系(MKN-28、SGC-7901和MKN-45)中KIAA0101蛋白的表达。将KIAA0101 siRNA和对照siRNA分别转染胃癌MKN-45细胞,利用CCK-8试剂检测细胞增殖的变化,利用流式细胞术检测细胞周期分布的改变,最后采用Boyden小室检测细胞侵袭的变化。该研究除以技术资料形式提供课题研究的全过程外,并公开发表发表核心期刊发表文章4篇,其中中华系列核心期刊文章3篇。还将有关研究成果应用于更深人的基础和临床研究,为将调控KIAA0101基因和Stathmin基因的表达与胃癌治疗的相关性提供理论依据,为胃癌在基因水平上的治疗提供新的分子靶点,为临床上胃癌的治疗提供新的治疗思路。成果的应用前景很乐观,其经济效益和社会效益都非常理想。
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